高效液相色譜法測定阿莫西林顆粒中的高分子雜質(zhì)

張樂樂

（黑龍江省濟(jì)仁藥業(yè)有限公司）摘 要：目的：采用高效液相色譜法去測定阿莫西林顆粒中高分子雜質(zhì)的方法。方法：在測定的過程中采用的是高效液相色譜的方法。色譜柱是當(dāng)前比較常見的凝膠柱，流動(dòng)相A是濃度為0.1mol/L，PH值為7.0的磷酸鹽緩沖液。流動(dòng)相B為水，流動(dòng)相的流速為0.6-0.9ml/min，在測定中檢測的波長為254nm。結(jié)果：阿莫西林顆粒中的雜質(zhì)含量在0.1%以內(nèi)。結(jié)論：高效液相色譜法在測定阿莫西林中雜質(zhì)含量使具有靈活性高，準(zhǔn)確性強(qiáng)和操作簡便等多項(xiàng)優(yōu)勢，這種方法也值得大力的推廣和應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；阿莫西林顆粒；高分子雜質(zhì)、

阿莫西林顆粒也被叫做羥氨芐青霉素顆粒，是一種半合成光譜青霉素，阿莫西林顆粒有著抗菌譜廣、耐酸性強(qiáng)?？诜蘸谩熜Т_切等特點(diǎn)，基于這一特點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)中被廣泛的應(yīng)用，已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用到臨床中。相對(duì)于其他的青霉素類的抗生素來說，阿莫西林顆粒的國民反應(yīng)較大，國民反應(yīng)在臨床研究中是極為重要的，已經(jīng)有許多的學(xué)者進(jìn)行了阿莫西林的過敏反應(yīng)分析，發(fā)現(xiàn)引起阿莫西林國民反應(yīng)的主要因素就是阿莫西林顆粒中含有較多的高分子雜質(zhì)，要想降低阿莫西林顆粒的過敏性，就要減少顆粒中高分子雜質(zhì)的含量。本文就是對(duì)高效液相色譜法對(duì)阿莫西林顆粒中的高分子雜質(zhì)進(jìn)行分析，為相關(guān)的研究提供借鑒。

1 儀器與試藥

儀器：WatersH1LC儀（美國Waters），1525泵，2487UV檢測器，色譜工作站（WatersBeeze）。

試藥：阿莫西林對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，含量為86。2010）；水為重蒸餾水；阿莫西林顆粒（商品名為再林，批號(hào)為031202、031203、031204，海南先聲藥業(yè)有限公司）；藍(lán)色葡聚糖2000（Pharmacia公司）：其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱使用的是SephadexG-10凝膠柱，這一凝膠柱使用的是不銹鋼色譜柱，具體的規(guī)格是300mmxl0mm，而且內(nèi)部填的是SephadexG-10凝膠，本文測定試驗(yàn)中使用的凝膠是俺媽西亞生物技術(shù)有限公司提供的。流動(dòng)相要以pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液，并且是0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液，具體的制備是分別取21.85g和6.08g的一二水磷酸氫二鈉和二水磷酸二氫鈉溶液在水中溶解，這樣就會(huì)制成磷酸溶液和氫氧化鈉，而且其pH值在（7.0±0.1）。而流動(dòng)相B是重蒸餾水，按照下滑書的具體要求來進(jìn)行試驗(yàn)測定：流速要在0.6-0.9mL/min之間，檢測的波長為254nm，而且進(jìn)樣量是20μ。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

使用藍(lán)色葡聚糖2000溶液，這一溶液的規(guī)格是1mg/ml，使用這一溶液來進(jìn)行色譜柱的拖尾因子和理論塔板數(shù)，將流動(dòng)相A當(dāng)做是流動(dòng)相，檢測的過程中，檢測的波長是254nm，流速是0.6-0.9ml/min，拖尾因子是0.86，理論塔板數(shù)是1695，，在此基礎(chǔ)上，取標(biāo)準(zhǔn)品阿莫西林兩份，阿莫西林要適量，將這兩份阿莫西林分別的放置在50ml的量瓶中，之后量瓶中加入重蒸餾水，將其進(jìn)行溶解，在這樣的情況下，就可以將其當(dāng)做是對(duì)照品溶液，之后按照相應(yīng)的方法將。流動(dòng)相B當(dāng)做是流動(dòng)相，將一份連續(xù)的重復(fù)的進(jìn)樣3次，而且峰面積的偏差也要達(dá)到0.38%，在此基礎(chǔ)上，對(duì)兩份都另外進(jìn)樣一針，這時(shí)得到的峰面積的相對(duì)偏差是0.26%。

2.3 溶液的制備

溶液在制備的過程中，主要包括供試品溶液對(duì)對(duì)照品溶液。供試品溶液在制備的過程中，需要取本品4袋，將這4袋藥品研細(xì)，之后進(jìn)行精密量取，在量取的過程中，要相當(dāng)于阿莫西林500mg，之后將其放在50ml的容量瓶中，向里面加入流動(dòng)相A，大約為30ml，進(jìn)行超聲溶解，在全部溶解之后稀釋到相應(yīng)的刻度就要搖勻處理，通過0.45μm的濾膜就能夠進(jìn)行過濾，最終形成供試品溶液。對(duì)照品溶液在制備的過程中，需要稱取阿莫西林對(duì)照品大約20mg，一定要進(jìn)行精密稱定，將其放置在50ml的容量瓶中，使用流動(dòng)相B來進(jìn)行溶解，還要對(duì)其進(jìn)行稀釋到相應(yīng)的刻度，這樣就形成了對(duì)照品溶液。

2.4 測定的方法

吸取供試品溶液20μl，將著2μl的供試品溶液注入到色譜儀中，將流動(dòng)相A當(dāng)做流動(dòng)相，之后在取20μl的對(duì)照品溶液，將其注入到色譜儀中，將流動(dòng)相B來當(dāng)做流動(dòng)相來進(jìn)行測定，在測定的過程中，還要記錄色譜圖。根據(jù)規(guī)定，保留時(shí)間是小于阿莫西林主峰和大于藍(lán)色葡聚糖2000的雜質(zhì)全部都是高分子雜質(zhì)，按照外標(biāo)法來進(jìn)行供試品中高分子雜質(zhì)的含量的計(jì)算。

2.5 阿莫西林顆粒的高分子雜質(zhì)的測定

按照上述闡述的色譜條件來對(duì)三個(gè)批號(hào)的阿莫西林顆粒的高分子含量進(jìn)行了科學(xué)的測定，在測定的過程中，主要是選擇阿莫西林作為整個(gè)試驗(yàn)的對(duì)照品，按照主成分對(duì)照法來對(duì)物質(zhì)的具體含量進(jìn)行測定，測定的結(jié)果是供試品溶液中含有的雜質(zhì)含量全部都小于0.25，具體的就結(jié)果如表1所示：

3 討論

在樣品中加入了碳酸鈉溶液，其碳酸鈉溶液占10%，這樣就使得阿莫西林溶液極容易產(chǎn)生聚合，將其自然的放置了3個(gè)小時(shí)之后，就會(huì)發(fā)現(xiàn)高分子雜質(zhì)已經(jīng)增加了一倍，因此，在樣品溶解之后，必須要立即的進(jìn)行進(jìn)樣處理，除此之外，還要注意的是，在每一次溶解之后，樣品僅僅能夠進(jìn)一針，而且加入的碳酸鈉溶液也要盡可能的減少，可以將超聲的時(shí)間增加，便于溶解。在對(duì)照品溶液進(jìn)樣的過程中，應(yīng)該將水當(dāng)成流動(dòng)相，進(jìn)樣品溶液的過程中應(yīng)該將磷酸鹽緩沖液當(dāng)成流動(dòng)相，這樣也就可以充分的保證對(duì)照品主峰的保留時(shí)間和樣品的高分子雜質(zhì)保留的時(shí)間具有高度的一致性。到目前為止，阿莫西林及青霉素類抗生素的高分子雜質(zhì)尚無標(biāo)準(zhǔn)品。以HPLC分析相關(guān)物質(zhì)，在沒有雜質(zhì)對(duì)照品的情況下，《中國藥典》采用主成分對(duì)照法評(píng)價(jià)相關(guān)物質(zhì)的含量，故在參照相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，研究采用對(duì)照法進(jìn)行了測定，結(jié)果表明本法簡便、易行，能有效地檢測到阿莫西林顆粒中的雜質(zhì)含量。隨著免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，目前對(duì)阿莫西林過敏機(jī)制有了較明確的認(rèn)識(shí)。阿莫西林木身沒有抗原性，不直接引發(fā)過敏反應(yīng)，引起過敏反應(yīng)的是制劑中高分子聚合物雜質(zhì)。對(duì)于口服阿莫西林，原料藥中高分子雜質(zhì)0.1%、制劑中高分子雜質(zhì)O.2%時(shí)，一般不會(huì)產(chǎn)生青霉素過敏應(yīng)。上最優(yōu)質(zhì)的阿莫西林原料（西班牙Biochemie公司）和先進(jìn)的生產(chǎn)工藝，成功地將成品中的雜質(zhì)控制在0.1%以下，從而確保了該制劑的療效和安全性。

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