硒缺乏對雛雞空腸黏膜中SOD活性和MDA含量的影響

梁建斌 ， 楊顆粒 ， 張義爽 ， 徐丹丹 ， 孫志鵬 ， 曲艷鵬 ， 武 瑞

(黑龍江八一農墾大學動物科技學院 ， 黑龍江大慶163319)

硒缺乏對雛雞空腸黏膜中SOD活性和MDA含量的影響

梁建斌 ， 楊顆粒 ， 張義爽 ， 徐丹丹 ， 孫志鵬 ， 曲艷鵬 ， 武 瑞

(黑龍江八一農墾大學動物科技學院 ， 黑龍江大慶163319)

將40只1日齡雛雞隨機分為兩組(n=20)，對照組，飼料硒含量為0.40 mg/kg，試驗組，飼料硒含量為0.01 mg/kg。分別與試驗的第7天、21天、35天處死雛雞并取空腸黏膜(各時間點均為6只),測定其中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。結果表明，與對照組相比，第7天試驗組空腸黏膜中SOD活性顯著低于對照組(P<0.05)，MDA含量無明顯變化。第21天試驗組空腸黏膜中SOD活性極顯著高于對照組(P<0.01)，MDA含量顯著高于對照組(P<0.05)。第35天試驗組空腸黏膜中SOD活性極顯著低于對照組(P<0.01)，MDA含量極顯著高于對照組(P<0.01)。這表明，硒缺乏會降低雛雞空腸黏膜中SOD的活性和提高MDA的含量。

雛雞 ； 空腸黏膜 ； 硒缺乏 ； 超氧化物歧化酶 ； 丙二醛

硒(Selenium)，于1817年首次發(fā)現，初期硒被認為是有毒元素，在1957年首次發(fā)現硒具有生物學作用，直到1996年，在首屆微量元素研討會上，硒被認可為生物體必需的微量元素。在1988年，中國營養(yǎng)學會將硒列為人體必需的微量元素[1-2]。硒的生物學作用之一就是維持機體氧化還原狀態(tài)的平衡[3]。硒能抑制膜脂質過氧化反應,從而起消除有害自由基,分解過氧化物和修復分子損傷的作用。硒缺乏會造成各組織的損傷。心功能不全、運動障礙，長期消化紊亂和嚴重腹瀉是畜禽硒缺乏的主要臨床體征。病初,動物的生長發(fā)育受阻,生產性能和繁殖力下降。隨著病情的發(fā)展,可造成畜禽死亡。動物硒缺乏時,谷胱甘肽過氧化物酶活性降低,使各組織器官的生物膜遭受過氧化物的損害,從而引發(fā)細胞凋亡或細胞的變性壞死,消化系統的各部分也不例外,致使胃腸道平滑肌變性,胰腺發(fā)育不全、變性、分泌功能減弱,肝實質營養(yǎng)不良、壞死,功能不全[4]。超氧化物歧化酶(SOD)是生物體內重要的抗氧化酶，是生物體內清除自由基的首要物質，SOD在生物體內活性的高低，直觀反映出機體對氧自由基清除的能力。丙二醛(MDA)是不飽和脂肪酸受到自由基攻擊而被氧化所產生的脂類過氧化物的主要分解產物，會引起蛋白質和核酸等生命大分子的交聯聚合，且具有細胞毒性。測定MDA的含量可以反映機體內脂質過氧化的程度，間接反映出細胞或膜系統受損的程度[5]。本試驗測定硒缺乏狀態(tài)下的雛雞空腸黏膜中SOD活性和MDA含量的變化，為進一步探討硒缺乏對空腸黏膜脂質過氧化的影響提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 1日齡健康SPF艾維茵白羽肉用雛雞40只，雌雄各半，購自中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所實驗動物中心。

1.2 藥品與試劑 試驗組飼料(自配，硒缺乏玉米，購自黑龍江省龍江縣)，對照組飼料，購自黑龍江省大慶禾豐有限公司。SOD活性檢測試劑盒(NBT法)，產品編號S0109，脂質氧化(MDA)檢測試劑盒，產品編號S0131，購自碧云天生物技術公司。

1.3 儀器 KHB ST-360免疫檢測酶標儀(上?？迫A生物工程股份有限公司)。

1.4 分組與處理 雛雞采用單因素完全隨機分為兩組，每組20只，Ι組為試驗組，飼喂自配的硒缺乏飼料，飼料中硒含量為0.01 mg/kg。Ⅱ組為對照組，飼喂正常飼料，飼料中硒含量為0.40 mg/kg。飼喂采用自由飲水與采食。

1.5 樣品采集與處理 分別于試驗的第7天、21天、35天每組隨機選取6只雛雞剖殺，用滅菌后預冷的PBS洗凈腸管，無菌采取空腸黏膜，于液氮中凍存過夜，保存于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.6 SOD活性檢測 將凍存的腸黏膜樣品按照說明書要求進行勻漿及后續(xù)步驟，最后用酶標儀按照說明書要求進行檢測。

1.7 MDA含量檢測 將凍存的腸黏膜樣品按照說明書要求進行勻漿及后續(xù)步驟，最后用酶標儀按照說明書要求進行檢測。

2 結果

2.1 空腸黏膜中SOD活性的變化 在試驗第7天，對照組雛雞空腸黏膜中超氧化物歧化酶(SOD)活性顯著高于試驗組(P<0.05)，在第21天，對照組雛雞空腸黏膜中SOD活性極顯著高于試驗組(P<0.01)，在第35天，對照組雛雞空腸黏膜中SOD活性極顯著高于試驗組(P<0.01)。見表1。

表1 不同日齡空腸黏膜中SOD活性 n=6.(nmol/mg)

注：同列比較，小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)，下表同

2.2 空腸黏膜中MDA含量的變化 在試驗第7天，對照組雛雞空腸黏膜中丙二醛(MDA)含量與試驗組無顯著差異。在試驗第21天，試驗組雛雞空腸黏膜中MDA含量顯著性低于對照組(P<0.05)。在試驗第35天，試驗組雛雞空腸黏膜中MDA含量極顯著性低于對照組(P<0.01).詳見表2。

表2 不同日齡空腸黏膜中MDA含量 n=6.(nmol/mg)

3 討論

動物機體在正常的情況下，會不斷產生氧自由基，同時這些氧自由基又會不斷的在機體的抗氧化防御體系下被清除，使動物機體內的氧自由基的生產和清除時刻處于平衡狀態(tài)，任何增強氧化作用和減弱抗氧化能力的因素，都會破壞這一平衡，導致動物機體內氧自由基的增多[6]。機體內的氧自由基增多，會使生物膜中的多不飽和脂肪酸發(fā)生脂質過氧化反應，生成MDA、羥基、氫過氧基或內過氧基等，使細胞膜受到破壞，導致細胞損傷，膜通透性增加，出現蛋白質以及DNA的變性[7]。SOD廣泛存在于動物機體之中，是生物體內防御氧化損傷的一類生物酶，能將超氧陰離子自由基歧化為過氧化氫和氧氣，起到消除超氧陰離子自由基的作用，因此具有增強機體抗輻射損傷的能力、抗衰老、增強機體對外界環(huán)境的適應能力、減輕腫瘤患者在治療過程中出現的嚴重毒副作用等[8]。MDA為脂類過氧化的最終產物之一，可以反映出脂類的過氧化程度，間接反映體內自由基變化的程度[9]。硒的生物學作用之一就是與SOD等抗氧化酶清除機體內的脂質過氧化物，共同維持生物膜系統的完整性。大量的研究表明，硒缺乏會影響動物機體的抗氧化能力。張世珍在1997年進行硒與動物自由基內在關系的研究，其以小鼠為試驗動物，試驗結果顯示，硒缺乏可導致小鼠肝臟自由基代謝紊亂，表現出脂質過氧化產物及相關組織內的自由基水平升高，自由基代謝紊亂狀態(tài)隨著硒缺乏狀態(tài)的延續(xù)而加劇[10]。仝宗喜以雛雞為試驗動物，對硒缺乏癥的分子機理進行研究，研究結果表明，硒缺乏可以導致雛雞組織器官中總氧化能力(T-AOC)下降，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性降低，MDA含量升高，使機體處于氧化應激狀態(tài)，使免疫細胞的膜系統受到損傷，免疫細胞結構和功能受到損害，造成機體免疫功能下降[11]。劉風民在2004年以壽隱雜交雞，在日糧中添加有機硒和維生素E可明顯降低肝臟、腎臟以及血清中MDA的含量，提高GSH-Px活性，增強機體的抗氧化能力，提高了試驗雞對熱應激的抗性[12]。

本試驗發(fā)現，試驗組雛雞空腸黏膜中SOD活性在試驗第7天出現顯著性降低，說明此時試驗組雛雞空腸黏膜的抗氧化能力已經顯著性低于對照組雛雞。隨著雛雞日齡的增加，在試驗第21天，第35天，試驗組雛雞空腸黏膜中SOD活性呈現極顯著性低于對照組雛雞，且試驗組雛雞空腸黏膜中SOD活性呈現逐漸減弱的趨勢，說明硒缺乏對雛雞空腸黏膜中SOD活性的影響是隨時間的延長而累積的。本試驗中，試驗組雛雞空腸黏膜中MDA含量在第7天與對照組相比，未出現顯著性變化，在試驗第21天，試驗組雛雞空腸黏膜中MDA含量顯著性高于對照組，在第35天試驗組雛雞空腸黏膜中MDA含量極顯著性高于對照組。SOD活性及MDA含量在硒缺乏雛雞空腸黏膜中的變化均與前人對硒與抗氧化的關系的研究結果一致。綜上所述，本試驗結果表明，硒缺乏會降低雛雞空腸黏膜中SOD活性，使組織的抗氧化能力降低，組織中脂質過氧化反應加劇，繼而使組織中MDA含量增高。

[1] Schwarz K.Biological potency of organic selenium compounds.I.Aliphatic monoseleno and diselenodicarboxylic acids[J].J Biol Chem，1969，244(8):2103-2110.

[2] Surai P F.Effect of selenium and vitaminE content of the maternal diet on the antioxidant system of the yolk and the developing chick[J].Br Poult Sci,2000，41(2):235-243.

[3] Brigelius-Flohé R,Flohé L.Is there a role of glutathione peroxidases in signaling and differentiation [J].Biofaetors,2003,17:93-102.

[4] 林玉才．硒缺乏對雛雞腸道黏膜免疫影響的研究[D].大慶：黑龍江八一農墾大學,2010:4-5.

[5] 王艷萍，祁克宗，涂鍵，等．內毒素對仔雞血漿SOD活性及MDA水平的影響[J].動物醫(yī)學進展，2006,27(5)：63-65.

[6] Grisham M B，Granger D N，Lefer D J.Modulation of leukocyte-endothelial interactions by reactive metabolites of oxygen and nitrogen:relevance to ischemic heart disease [J].Free Radic Biol Med,1998,25(4-5):404-433.

[7] 鄭艷華，胡薛英，程國富，等．感染新型鴨肝炎病毒雛鴨的SOD活性和MDA含量變化[J].中國獸醫(yī)科技，2004,34(12)：6-9.

[8] Kanner J，German J B，Kinsella J E.Initiationof lipid peroxidationin biological systems [J].CRC Crit Rev Food Sci Nutr,1987,25:317-325.

[9] Leibovitz B E，Siegel B V.Aspects of free radical reactions in biological systems:Ageing [J].Gerontol,1980,35(1):45-46.

[10] 張世珍．硒與動物自由基代謝內在關系的試驗研究[J].中國獸醫(yī)科技，1997,27(4):31-33.

[11] 仝宗喜．雞硒缺乏癥分子機理的研究[D].哈爾濱：東北農業(yè)大學，2004.

[12] 劉風民．有機硒和維生素E對地方雜交雞抗氧化和抗熱應激性能的影響[D].泰安：山東農業(yè)大學，2004.

Effects of SOD Activities and MDA Level about Selenium Deficiency in jejunum tunica mucosa of Chickens

LIANG Jian-bin ， YANG Ke-li ， ZHANG Yi-shuang ， XU Dan-dan ， SUN Zhi-peng ， QU Yan-peng ， WU Rui

(College Of Animal Science And Veterinary Medicine ， Heilongjiang Bayi Agricultural University ，Daqing 163319 ， China)

A total of forty 1-day-old chicks were randomly divided into two groups(n=20):the control group，fed with selenium content of 0.40mg / kg，and the experimental group，fed with selenium content of 0.01mg / kg.Six chickens were slaughtered in 7d,21d and 35d.The activity of SOD and the content of MDA in jejunum tunica mucosa were analyzed.The results demonstrated as follows:Compared with the control group，the experimental group at 7 day in ejunum tunica mucosa the SOD activity was significantly lower than the control group(P<0.05)，and the MDA was no significant change for the two groups.At 21 day,the SOD activity of the test group in ejunum tunica mucosa was significantly lower than that of the control group(P<0.01),and the MDA levels were significantly higher than that of the control group(P<0.01).At 35 day the test group jejunal mucosal SOD activity was significantly lower than that of the control group(P<0.01)，and the MDA content was significantly higher than that of the control group(P<0.01).Our finding suggest that the selenium deficiency can significantly reduce the activity of SOD，and increase the content of MDA in jejunum tunica mucosa of chickens.

chicken ejunum tunica mucosa ; Selenium Deficiency ; Superxide dismutase(SOD); Malondialdehyde(MDA) Corresponding author:WU Rui

2015-11-05

國家自然科學基金(2041340004)

梁建斌(1990- )，男，碩士，從事臨床獸醫(yī)學研究，E-mail：564738394@qq.com

武瑞，E-mail：fuhewu@126.com

S858.31

A

0529-6005(2017)03-0029-03