二甲雙胍對快速老化模型SAMP8小鼠體重及血液學(xué)參數(shù)的影響

田 楓 , 張 穎 ， 李文婷 ， 周淑佩

(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，北京海淀100191)

二甲雙胍對快速老化模型SAMP8小鼠體重及血液學(xué)參數(shù)的影響

田 楓 , 張 穎 ， 李文婷 ， 周淑佩

(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，北京海淀100191)

為探討二甲雙胍對SAMP8小鼠體重及血液學(xué)參數(shù)的影響，將40只雄性SAMP8小鼠分為二甲雙胍低劑量(50 mg/kg體重)、中劑量(100 mg/kg體重)、高劑量(200 mg/kg體重)實(shí)驗(yàn)組及空白對照組，實(shí)驗(yàn)組每日按小鼠體重灌胃不同劑量的二甲雙胍，空白對照組每日灌胃生理鹽水，觀察小鼠的體重及血液細(xì)胞學(xué)和血清生化指標(biāo)。結(jié)果顯示，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組與空白對照組相比，僅低劑量組和中劑量組小鼠AST 較空白對照組顯著降低(P<0.05)，小鼠體重、血液學(xué)細(xì)胞學(xué)指標(biāo)和其他血清生化指標(biāo)均與正常對照組相比無顯著性差異。試驗(yàn)結(jié)果表明，二甲雙胍對SAMP8小鼠體重及血液學(xué)參數(shù)影響較小。

二甲雙胍 ； SAMP8小鼠 ； 體重 ； 血液學(xué)

醫(yī)藥界經(jīng)過50年的臨床驗(yàn)證，二甲雙胍作為一種經(jīng)濟(jì)、安全有效的藥物不僅在糖尿病治療領(lǐng)域發(fā)揮獨(dú)特的作用，并且其在抗衰老、減肥、治療非酒精性脂肪肝等方面亦都顯示出一定的療效[1-2]。二甲雙胍作為抗衰老藥物使用時(shí)，是否會(huì)對機(jī)體的血糖、體重、肝功、腎功、血脂等指標(biāo)產(chǎn)生影響，是本文關(guān)注的重點(diǎn)。試驗(yàn)以目前公認(rèn)的比較理想的自然衰老癡呆模型SAMP8小鼠作為研究對象，觀察二甲雙胍對SAMP8小鼠體重及血液學(xué)參數(shù)的影響，為二甲雙胍作為抗衰老藥物的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級SAMP8小鼠，40只，雄性，26～28w，26～32g，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供，合格證號：SCXK(京)2011-0012。飼養(yǎng)于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部屏障環(huán)境中，合格證號：SYXK(京)2011-0039。飼喂全價(jià)SPF 級大、小鼠繁殖飼料，由北京科澳協(xié)力飼料有限公司生產(chǎn)，許可證號為SCXK(京) 2014-0010。

1.2 試驗(yàn)藥品 鹽酸二甲雙胍，美侖生物，Lot:A0830A。0.9%氯化鈉注射液，石家莊四藥有限公司，批號為141231425。血清生化指標(biāo)測定試劑盒，均購自Mindray公司。

1.3 試驗(yàn)分組及給藥方法 SAMP8小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只小鼠，即二甲雙胍低劑量組(50 mg/kg體重)、二甲雙胍中劑量組(100 mg/kg體重)、二甲雙胍高劑量組(200 mg/kg體重)及空白對照組。實(shí)驗(yàn)組共30只小鼠，每日上午固定時(shí)間按照體重灌胃不同劑量的藥物，空白對照組灌胃等體積的生理鹽水連續(xù)灌胃30 d。試驗(yàn)操作過程中按照動(dòng)物福利的原則給予人道的關(guān)懷。

1.4 體重測定 各組小鼠自試驗(yàn)開始，每周上午固定時(shí)間測定體重1次，直至小鼠12月齡時(shí)試驗(yàn)結(jié)束。1.5 血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)的測定 停藥2周后進(jìn)行血液細(xì)胞學(xué)檢測。小鼠眼眶靜脈叢取全血20 μL 加入3 mL血球稀釋液中應(yīng)用NIKON自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀進(jìn)行白細(xì)胞總數(shù)(WBC) 、紅細(xì)胞數(shù)(RBC) 、血紅蛋白(HGB) 、血細(xì)胞比容(HCT) 、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均血紅蛋白量(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞體積 (RDW)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)、血小板比積(PCT)、平均血小板體積(MPV)、血小板平均分布寬度 (PDW)、淋巴細(xì)胞數(shù)(LYM)、中間細(xì)胞數(shù)(MID)、嗜中性粒細(xì)胞數(shù) (GRN)、淋巴細(xì)胞百分比(LYM%)、中間細(xì)胞百分比(MID%)、嗜中性粒細(xì)胞百分比(GRN%)的測定。1.6 血液生化指標(biāo)的測定 停藥2周后進(jìn)行血清生化指標(biāo)的檢測。小鼠禁食12 h，眼眶靜脈叢取血，離心分離血清，應(yīng)用Mindray BS-180全自動(dòng)生化分析儀測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，，總膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，肌酐(CREA)，尿素氮(UA)，葡萄糖(GLU)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)分析采用GraphPad Prism 5統(tǒng)計(jì)軟件，結(jié)果x±s表示，組間差異采用雙尾Student'st檢驗(yàn)，P<0.05為組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 二甲雙胍對SAMP8小鼠體重的影響 試驗(yàn)結(jié)果顯示，自SAMP8小鼠6月齡試驗(yàn)開始時(shí)，3組試驗(yàn)小鼠給藥過程中及停藥后直至小鼠12月齡試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，其體重與空白對照組相比均無顯著變化(見中插彩版圖1)。

2.2 二甲雙胍對SAMP8小鼠血液細(xì)胞學(xué)參數(shù)的影響 試驗(yàn)結(jié)果顯示，各實(shí)驗(yàn)組各項(xiàng)血液細(xì)胞學(xué)參數(shù)與空白對照組相比均無顯著性差異，見表1。

表1 二甲雙胍對SAMP8小鼠血液細(xì)胞學(xué)參數(shù)變化 (n=10)

(續(xù)表1)

組別MCHpgMCHCg/LRDW/%PLT×109/LPCT/%空白對照組17．0±0．6363．0±11．015．0±1．4834．0±167．30．4±0．1低劑量組16．9±1．6356．3±18．515．1±3．1568．5±64．30．2±0．1中劑量組16．0±0．5349．6±19．515．2±0．7841．7±150．10．3±0．1高劑量組16．8±0．6358．7±6．414．6±1．3829．0±144．50．4±0．1

(續(xù)表1)

組別MPV/%PDW/%LYM×109/LMID×109/LGRN×109/L空白對照組4．3±0．214．8±0．16．9±4．31．9±1．05．2±1．4低劑量組4．1±0．115．0±0．45．4±2．62．4±1．85．9±1．9中劑量組3．9±0．114．2±0．63．6±1．50．9±0．34．8±2．3高劑量組4．4±0．214．9±0．76．2±2．23．1±1．87．0±3．1

(續(xù)表1)

組別LYM/%MID/%GRN/%空白對照組46．0±12．513．8±3．640．1±14．7低劑量組44．9±12．315．7±7．339．4±6．6中劑量組36．5±20．010．0±1．253．5±19．4高劑量組37．4±11．213．5±4．843．6±21．2

2.3 二甲雙胍對SAMP8小鼠血清生化指標(biāo)的影響 結(jié)果顯示，除低劑量組和中劑量組的AST與空白對照組相比顯著降低(P<0.05)外，二甲雙胍對SAMP8小鼠其他各項(xiàng)血清生化指標(biāo)均無顯著影響，結(jié)果見表2。

表2 二甲雙胍對SAMP8小鼠小鼠血清生化指標(biāo) (n=10)

續(xù)表2

組別LDL?Cμmol/LUAμmol/LCREAμmol/LGLUμmol/L空白對照組0．6±0．19．7±0．452．5±1．34．6±0．6低劑量組0．7±0．110．8±1．454．3±3．54．6±1．5中劑量組0．6±0．19．2±2．755．2±5．24．5±1．8高劑量組0．7±0．110．4±2．657．7±3．64．5±0．9

*：P<0.05，與空白對照組相比

3 討論

關(guān)于二甲雙胍可延長壽命的研究，在線蟲、小鼠乃至人類的試驗(yàn)中均有報(bào)道[3-4]，在應(yīng)用快速老化模型SAMP8小鼠的抗衰老的研究中，我們的試驗(yàn)結(jié)果亦顯示，二甲雙胍確實(shí)對延長SAMP8小鼠的壽命有作用(另文報(bào)道)。二甲雙胍是一種被普遍認(rèn)可的降糖藥物，那么二甲雙胍在用于抗衰老藥物時(shí)，其是否有副作用，是否會(huì)對體重正常的小鼠有降低體重的作用，對血液學(xué)指標(biāo)方面有無影響，其作為抗衰老藥物的安全性如何是需要探討的問題。

二甲雙胍目前己經(jīng)被證實(shí)可以降低血糖、減輕體重、改善血脂，主要是改善TG 、 LDL-C及TC水平[5]。那么我們的試驗(yàn)結(jié)果是否與之一致呢？

血清學(xué)檢測試驗(yàn)結(jié)果顯示，對于血糖正常、血脂正常的SAMP8小鼠，在給予1個(gè)月的二甲雙胍藥物后，無論低、中、高實(shí)驗(yàn)組的小鼠與空白對照組相比均無顯著變化，提示二甲雙胍并不會(huì)對不患有糖尿病及高血脂癥小鼠的血糖、血脂有降低的作用。

在對肝功能指標(biāo)AST、AST檢測后發(fā)現(xiàn)，低劑量組和中劑量組的AST與空白對照組相比顯著降低(P<0.05)，但仍在正常范圍值之內(nèi)，由此提示二甲雙胍對小鼠的肝功指標(biāo)亦無不良影響。有文獻(xiàn)報(bào)道，二甲雙胍在治療非酒精性脂肪肝患者時(shí)可顯著降低血清轉(zhuǎn)氨酶的水平，有50%患者恢復(fù)正常，同時(shí)胰島素敏感性提高，肝臟的體積減少約20%，相似的結(jié)果在動(dòng)物研究中也得到了證實(shí)[5]。，但這是指對血清轉(zhuǎn)氨酶升高情況下降低作用而言的。另外在臨床上雖然有服用鹽酸二甲雙胍致肝損害的個(gè)例報(bào)道，但應(yīng)該屬于個(gè)例現(xiàn)象[6-7]。

在對腎功能指標(biāo)CREA、UA 檢測后發(fā)現(xiàn)，3個(gè)試驗(yàn)組與空白對照組相比兩個(gè)參數(shù)均無顯著變化，由此推斷二甲雙胍亦不會(huì)對小鼠腎功能產(chǎn)生負(fù)面作用。而且有文獻(xiàn)報(bào)道，二甲雙胍對糖尿病腎病小鼠的腎臟還具有保護(hù)作用[8]。

至于二甲雙胍在減肥中的應(yīng)用，本試驗(yàn)觀察了SAMP8小鼠 從6月齡到12月齡的體重情況，包括服用1個(gè)月二甲雙胍期及停藥后的后續(xù)5個(gè)月的情況，發(fā)現(xiàn)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組與空白對照組相比體重均無顯著變化。盡管灌胃二甲雙胍后，可能是二甲雙胍在胃內(nèi)快速溶解后高濃度附著在消化道黏膜上，從而產(chǎn)生了刺激作用，實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)了胃腸道反應(yīng)的不良現(xiàn)象，但實(shí)驗(yàn)組小鼠體重并未顯著降低，對于二甲雙胍用于減肥的研究，還有待進(jìn)一步探討。

在對SAMP8小鼠血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)觀察比較后發(fā)現(xiàn)，各實(shí)驗(yàn)組與空白對照組在各項(xiàng)參數(shù)上均無顯著差異，表明二甲雙胍對小鼠的血液細(xì)胞學(xué)的指標(biāo)亦無明顯影響。

4 結(jié)論

綜上所述，二甲雙胍在作為抗衰老的藥物時(shí)，對血糖正常、體重正常、血脂、腎功等指標(biāo)正常的小鼠并無顯著影響，說明其安全性較好，副作用較小，可能是一種適宜長期使用的抗衰老藥物。

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Effects of Metforminon on Body weight, Hematology Indexes in SAMP8 Mice

TIAN Feng ， ZHANG Ying ， LI Wen-ting ， ZHOU Shu-pei

(Department of Laboratory Animal Science, Peking University Health Center，Beijing 100191,China)

The experiment was designed to investigate the effects of metforminon on body weights, and hematology indexes in SAMP8 mice, Forty male SAMP8 mice were randomly divided into three experimental groups according to different doses and blank control group. Ten experimental mice in each group were administrated by means of intragastric administration with 50mg/kg, 100mg/kg, 200mg/kg metformin in accordance with the body weight daily, respectively.At the same time the control mice were treated with saline.Results showed that AST of 50mg/kg and 100mg/kg experimental group was higher than that of control group. However, the three doses had no significant effect on body weights and other hematology indexes in SAMP8 mice.

Metformin ; SAMP8 mice ; Body weight;Hematology indexes

ZHOU Shu-pei

2016-12-05

北京高等學(xué)校青年英才計(jì)劃項(xiàng)目(YETP0057)

田楓(1973-)， 女，副主任技師，博士，主要從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究工作，E-mail:fengtian_38@163.com

周淑佩，E-mail:13521690926@163.com

S853

A

0529-6005(2017)03-0100-03