天津地區(qū)發(fā)生禽心包積液-肝炎綜合征及其病毒分離鑒定

王 菁 ， 張文生 ， 劉 蕊 ， 李富桂

(1.天津農(nóng)學(xué)院動物科學(xué)與動物醫(yī)學(xué)學(xué)院 ， 天津西青300384 ； 2. 天津職業(yè)大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院 ， 天津北辰300402)

天津地區(qū)發(fā)生禽心包積液-肝炎綜合征及其病毒分離鑒定

王 菁1， 張文生2， 劉 蕊1， 李富桂1

(1.天津農(nóng)學(xué)院動物科學(xué)與動物醫(yī)學(xué)學(xué)院 ， 天津西青300384 ； 2. 天津職業(yè)大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院 ， 天津北辰300402)

為探究禽心包積液-肝炎綜合征的發(fā)病原因。對2016年7月天津市某家禽養(yǎng)殖場的病死雞進行了大體病變檢查、組織病理學(xué)檢查、細(xì)菌學(xué)檢驗及其病毒的分離鑒定和回歸試驗等。結(jié)果顯示，剖檢以大量心包積液和肝臟腫大為主；組織切片H.E.染色觀察到肝臟淤血、水腫，肝細(xì)胞變性、壞死且含有大量嗜堿性核內(nèi)包涵體；細(xì)菌培養(yǎng)均為陰性；PCR檢測禽腺病毒-4型(FAdV-4)呈現(xiàn)陽性；回歸試驗的結(jié)果與臨床病例一致。最終診斷為禽心包積液-肝炎綜合征，與I群4型禽腺病毒相關(guān)。病毒的致病性研究正在進行中。

心包積液-肝炎綜合征 ； 禽 ； I群4型禽腺病毒 ； 診斷 ； 分離鑒定

自2015年以來，河南、遼寧、吉林、山東、河北等地雞場相繼發(fā)現(xiàn)以心包積液、肝臟腫大為主要癥狀的禽傳染性疾病[1]。2016年7月天津市武清某養(yǎng)殖場肉雞也出現(xiàn)類似病癥。該病主要多發(fā)于20～30日齡的肉雞，發(fā)病迅速，發(fā)病后4～8 d死亡率升高[2]。隨著發(fā)病區(qū)域不斷擴大，對我國的養(yǎng)雞業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。天津地區(qū)目前還沒有該病的報道。為進一步了解此次發(fā)病的原因，本文對被檢雞進行了臨床病理及其病原研究，該病毒的致病性研究正在進行中。

1 材料與方法

病料來源于2016年7月18日天津市某養(yǎng)殖場病雞。對15只病死雞進行剖檢，采集多組織用于細(xì)菌學(xué)檢查、組織病理學(xué)檢查以及病毒分離。無菌采集肝脾，勻漿取上清，接種10日齡SPF雞胚，收集尿囊液進行病毒基因組提取。根據(jù)GenBank發(fā)表的FAdV-4的hexon基因(EU177544)保守序列設(shè)計1對引物。上游引物：5′AATGACGGTCACGAAGAAGG 3′下游引物：5′AAGTTGGCCATGAGGTTCAC 3′片段大小為665 bp，用于病毒基因組RT-PCR擴增，測序分析同源性、遺傳進化；同時，接種25只1日齡SPF雛雞進行回歸試驗。

2 結(jié)果

2.1 剖檢及細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果 15只雞均可見大量淡黃色心包積液呈膠胨樣，肝臟不同程度壞死、腫大并伴有針尖狀出血點。其中8只腎臟腫脹，偶有花斑腎；7只腔上囊黏膜水腫，囊內(nèi)有黃綠色黏液；6只肺淤血、水腫；2只腺胃乳頭出血；2只有少量尿酸鹽沉積；1只心肌出血；1只腺胃與肌胃交界處出血。心包積液，肝臟、脾臟的細(xì)菌培養(yǎng)均為陰性。2.2 組織病理學(xué)檢查 肝臟中央靜脈、竇狀隙內(nèi)充滿血液(見中插彩版圖1)，部分肝臟呈淤血性水腫，肝細(xì)胞出現(xiàn)變性、壞死且有大量嗜堿性核內(nèi)包涵體(見中插彩版圖2)；心肌纖維變性、間質(zhì)水腫、充血及少量炎性細(xì)胞浸潤；肺泡壁毛細(xì)血管擴張充滿血液；腔上囊濾泡和假復(fù)層上皮萎縮、變性；其他組織無明顯組織病理學(xué)變化。

2.3 分子生物學(xué)PCR檢查結(jié)果 電泳結(jié)果顯示，從雞胚尿囊液獲取的病毒液中提取基因組DNA，通過RT-PCR擴增出1條665 bp的預(yù)期目的條帶(圖3)。

圖3 PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果

M:DL-2 000 DNA Marker 1:待檢樣品； 2:待檢樣品

2.4 序列分析結(jié)果 將臨床分離株命名為TJ1607。用MegAlign進行同源性分析，結(jié)果表明，TJ1607與GenBank公布的FAdV-4對比，同源性為98.3%～97.3%。其中與中國分離株同源性為98.3%，與印度分離株同源性為97.9%，與加拿大分離株同源性為97.3%。與FAdV-10同源性93.3%。與腺病毒其他血清型同源性為48.4%～73.2%。

用MegAlign進行遺傳進化分析，結(jié)果見圖4。結(jié)果表明，分離株與FAdV-4親緣關(guān)系最近。結(jié)合發(fā)病情況和病理變化將該病診斷為I群4型禽腺病毒感染。

圖4 基于腺病毒hexon基因的遺傳進化分析

2.5 回歸試驗結(jié)果 接種第3天試驗組開始死亡，對照組未見死亡。發(fā)病死亡雞的臨床癥狀、病理變化和病毒分離結(jié)果均與臨床病例一致。

3 討論

3.1 序列分析 通過基因序列比對分析確定此次疫病是由TJ1607引起，因此禽心包積液-肝炎綜合征在天津地區(qū)為首次報道。臨床分離株(TJ1607)與 GenBank 中公布的FAdV-4進行比對,同源性為 98.3%～97.3%；其中與我國的分離毒株JSJ13同源關(guān)系較近為98.3%，比較核酸序列發(fā)現(xiàn)部分堿基發(fā)生突變，可能將影響致病性的強弱。在回歸試驗中，攻毒組死亡率約為36%，可推測本試驗的分離株為高致病性變異株，毒株的致病性等試驗正在進行中。

3.2 病原分析 禽腺病毒(FAdV)是一種無囊膜的雙鏈DNA病毒，是家禽常見的傳染病源。根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)不同分為Ⅰ、Ⅱ群和Ⅲ群。Ⅰ群主要是傳統(tǒng)的禽腺病毒，具有共同的特異性抗原，從中分離出了12個血清型(FAdV1-12)[3]。

心包積液-綜合征首次發(fā)生于1987年的巴基斯坦[4]，由于疫情主要發(fā)生在安卡拉地區(qū),所以也稱之為安卡拉病[5]，在此之前我國的相關(guān)報道較少。自2015年以來我國陸續(xù)出現(xiàn)類似的疾病，報道中常見以安卡拉病、心包積液綜合征、心包積液肝炎綜合征、雞包涵體肝炎等名稱命名該病。本次試驗遺傳進化分析結(jié)果表明，TJ1607與FAdV-4親緣關(guān)系最近，該病主要是由I群4型腺病毒(FAdV-4)引起，這與部分報道[6-7]FAdV-4本身可引起發(fā)病的結(jié)論是一致的。為進一步研究FAdV-4的發(fā)病機理奠定了良好的基礎(chǔ)。

3.3 防治措施 目前，對該病尚無有效的治療和免疫措施，但強化飼養(yǎng)管理，可提高機體抵抗力。做好雞舍的衛(wèi)生管理，加強通風(fēng)，合理消毒以防止糞便中的病毒經(jīng)其排泄物傳播。傳染性腔上囊病病毒(IBDV)和傳染性貧血病毒(CIAV)都會增加腺病毒的致病性，所以要嚴(yán)格執(zhí)行衛(wèi)生防疫措施并做好免疫。在治療過程中，建議減少抗生素類藥物的使用，同時使用保肝護腎的藥品以減輕對肝腎的損傷。

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Hydropericardium Syndrome-Inclusion Body Hepatitis in Tianjin Area and Virus Isolation & Identification

WANG Jing1, ZHANG Wen-sheng2, LIU Rui1, LI Fu-gui1

(1.College of animal science and veterinary medicine, Tianjin AgriculturalUniversity,Tianjin 300384，China; 2.Institute of Biology and Environment Engineering,Tianjin Vocational Institute,Tianjin 300402，China)

In order to explore the causes of hydropericardium syndrome-inclusion body hepatitis, experiments using the methods of symptom examination, gross lesion& histopathological observation，bacteriologic tests，virus isolation and artificial infection were applied on a chicken farms in Tianjin in July 2016. The results showed that pericardial enlarged hydropericardium and hepatomegaly were the main changes grossly. Congestion and edema in liver, hepatocytic degeneration and necrosis with many intranucleic basophilic inclusion bodies in tissue sections stained with H.E.were observed under microscope. Bacterial cultures were negative and FAdV-4 was positive by PCR. Artificial infection case was the same as clinical case. These results suggest that hydropericardium syndrome-inclusion body hepatitis is caused by FAdV-4 infection. The virus pathogenicity studies are ongoing.

Hydropericardium Syndrome-Inclusion Body Hepatitis; Fowl; Fowl adenovirus 4; Diagnosis; Isolation & Identification Corresponding author：LI Fu-gui

2016-11-15

天津市科技計劃項目(15ZXBFNC00210)

王菁(1990-)，女，碩士生，主要研究方向為小動物疾病，E-mail:wangjingtn2014@126.com

李富桂，E-mail:lifugui2008163@163.com

S831.7

A

0529-6005(2017)03-0016-02