蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)及其在藥物成癮研究中的應(yīng)用

朱貝貝，李翔宇，陳歡，張森，侯宏衛(wèi)，胡清源

國(guó)家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，河南 鄭州 450001

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)及其在藥物成癮研究中的應(yīng)用

朱貝貝，李翔宇，陳歡，張森，侯宏衛(wèi)，胡清源

國(guó)家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，河南 鄭州 450001

概述了蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)中分離、鑒定和定量方法及其在致癮性藥物（如酒精、煙堿、嗎啡、可卡因和安非他命）研究中的應(yīng)用。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)是繼后基因組學(xué)技術(shù)的一大重要突破。隨著蛋白質(zhì)分離、鑒定及定量技術(shù)的進(jìn)步，尤其是覆蓋范圍廣、分離效率高的液相色譜技術(shù)和高靈敏度質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展，使得蛋白質(zhì)組學(xué)越來(lái)越廣泛地應(yīng)用于藥物成癮研究，將有助于了解藥物依賴(lài)過(guò)程中蛋白質(zhì)的變化及其參與的生物過(guò)程和相關(guān)通路，理解藥物成癮的分子機(jī)制。

蛋白質(zhì)組學(xué)；分離鑒定；定量蛋白質(zhì)組學(xué)；藥物成癮

蛋白質(zhì)組（proteome）的概念是由澳大利亞科學(xué)家Wilkins和Williams在1994年意大利科學(xué)會(huì)議上首次提出的，指基因組表達(dá)的所有相應(yīng)蛋白質(zhì)，即細(xì)胞、組織或機(jī)體存在的全部蛋白質(zhì)及其活動(dòng)形式[1]。蛋白質(zhì)組學(xué)能夠從整體角度動(dòng)態(tài)分析細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的組成、表達(dá)水平、修飾狀態(tài)、生物功能及參與的生物過(guò)程和蛋白質(zhì)之間的相互作用與聯(lián)系規(guī)律。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)各個(gè)領(lǐng)域。藥物成癮是一種不正常的強(qiáng)迫性行為，盡管使用者知道這類(lèi)藥物的嚴(yán)重后果，但仍不能控制這些藥物的使用。研究表明，反復(fù)接觸致癮性藥物（如酒精、煙堿、嗎啡和可卡因等）可以改變腦部特定區(qū)域蛋白質(zhì)的表達(dá)水平和表達(dá)類(lèi)型，這種表達(dá)的改變將介導(dǎo)個(gè)體神經(jīng)元及其相關(guān)的神經(jīng)通路，并由此可能產(chǎn)生與成癮相關(guān)的異常行為[2]。因此，鑒定形成和維持成癮相關(guān)的蛋白質(zhì)是理解成癮潛在分子機(jī)制的關(guān)鍵。蛋白質(zhì)組學(xué)能夠整體衡量藥物成癮過(guò)程中蛋白質(zhì)組的動(dòng)態(tài)變化（圖1）。后續(xù)的生物信息學(xué)分析如基因本體注釋?zhuān)℅O）、京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路注釋使得藥物成癮過(guò)程中蛋白質(zhì)參與的生物學(xué)過(guò)程和相關(guān)通路更加清晰，因此可以增加對(duì)藥物成癮過(guò)程的理解，普遍適用于藥物成癮的研究。

圖1 藥物成癮中蛋白質(zhì)組學(xué)研究的技術(shù)路線

早期蛋白質(zhì)組學(xué)（proteomics）是指采用雙向凝膠電泳和質(zhì)譜等技術(shù)分離和鑒定蛋白質(zhì)，并用生物信息學(xué)的方法建立相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)研究某一基因組表達(dá)的所有蛋白質(zhì)及蛋白質(zhì)之間的相互作用[3]。隨著自下而上鑒定蛋白質(zhì)裂解產(chǎn)物技術(shù)的發(fā)展，液相色譜分離技術(shù)和質(zhì)譜鑒定技術(shù)逐漸應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)的研究。蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展有賴(lài)于分離、鑒定及定量技術(shù)的進(jìn)步，尤其是覆蓋范圍廣、分離效率高的液相色譜技術(shù)和高靈敏度的質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展[4]。

1 蛋白質(zhì)樣品的分離

復(fù)雜的蛋白質(zhì)樣品需要經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的分離，蛋白質(zhì)樣品分離的主要技術(shù)包括凝膠電泳和非凝膠液相色譜兩大類(lèi)，2種分離技術(shù)已廣泛應(yīng)用于藥物成癮蛋白質(zhì)組學(xué)的研究（表1）。

1.1 雙向凝膠電泳分離技術(shù)

蛋白質(zhì)分離的傳統(tǒng)技術(shù)主要是凝膠電泳，其原理是蛋白質(zhì)在高壓電場(chǎng)作用下首先根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)進(jìn)行第一向等電聚焦分離，然后根據(jù)蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量進(jìn)行第二向聚丙烯酰胺凝膠分離。Song[10]等利用凝膠電泳分離技術(shù)研究了嗎啡耐受性大鼠脊髓中蛋白激酶C（PKC）相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)，結(jié)果顯示嗎啡耐受性大鼠和未基因敲降PKC正常大鼠脊髓中存在13種差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，第一次發(fā)現(xiàn)肌成束蛋白（FSCN）參與嗎啡耐受性的調(diào)控。Saeideh[11]等基于此分離技術(shù)研究了嗎啡依賴(lài)大鼠海馬組織中蛋白質(zhì)的表達(dá)，結(jié)果顯示鑒定出的差異蛋白質(zhì)可能通過(guò)調(diào)節(jié)海馬神經(jīng)元可塑性，誘導(dǎo)記憶障礙和嗎啡依賴(lài)。用凝膠電泳分離技術(shù)分析鑒定的蛋白質(zhì)并未充分涉及藥物成癮調(diào)控中發(fā)揮重要作用的關(guān)鍵蛋白質(zhì)，如成癮藥物與神經(jīng)相互作用的神經(jīng)受體如乙酰膽堿受體，阿片肽受體和大麻素受體及調(diào)控遞質(zhì)釋放的多巴胺、谷氨酰胺和氨基丁酸受體[12-13]?？赡苁且?yàn)樵谒幬锍砂a過(guò)程中這類(lèi)蛋白質(zhì)屬于低豐度蛋白質(zhì)，易被高豐度蛋白質(zhì)掩蓋，而凝膠電泳分離技術(shù)不易分離這類(lèi)蛋白質(zhì)。

表1 蛋白質(zhì)分離技術(shù)的比較

1.2 非凝膠液相色譜分離技術(shù)

1.2.1 一維液相色譜分離技術(shù) 液相色譜分離效率高、分析速度快且重現(xiàn)性好，易于實(shí)現(xiàn)與質(zhì)譜的自動(dòng)聯(lián)用[14]。對(duì)于簡(jiǎn)單的樣品體系，單維色譜因其操作簡(jiǎn)單，易于自動(dòng)化，在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中發(fā)揮了重要作用[15]。在實(shí)際操作中，由于色譜系統(tǒng)反壓過(guò)高，限制了超高壓液相色譜在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的廣泛應(yīng)用。許多蛋白質(zhì)和肽的含量極低，需要高靈敏度的質(zhì)譜儀才能檢測(cè)，穩(wěn)定高效的液相色譜分離技術(shù)將支持此微量樣品的檢測(cè)[16]。Bosch[6]基于納升液相色譜分離技術(shù)鑒定出安非他明誘導(dǎo)的大鼠紋狀體突觸區(qū)雙載蛋白、內(nèi)吞蛋白B2、過(guò)渡ER腺苷三磷酸酶、B亞組V型質(zhì)子腺苷三磷酸酶差異表達(dá)，這些差異表達(dá)的蛋白質(zhì)在囊泡產(chǎn)生、激活和運(yùn)輸中具有重要作用。Wearne[17]等基于此技術(shù)鑒定出安非他明誘導(dǎo)敏化大鼠前額皮質(zhì)區(qū)γ-氨基丁酸A型受體（GABAA）、多巴胺D2受體相關(guān)的橋尾蛋白（GPHN）、脂肪酸結(jié)合蛋白3（FABP3）、鈣離子水平相關(guān)的人視錐蛋白1（VSNL1）和鈣調(diào)磷酸酶（PPP3R1）差異表達(dá)，研究表明多巴胺D2受體可能通過(guò)下游調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子的水平，進(jìn)而影響動(dòng)物體的能量代謝、信號(hào)傳導(dǎo)和多巴胺合成，導(dǎo)致生物體產(chǎn)生長(zhǎng)期沮喪和認(rèn)知功能紊亂。用一維分離技術(shù)鑒定出一些與成癮藥物作用受體相關(guān)的蛋白質(zhì)[16-17]，但一維色譜由于其分辨率和峰容量有限，對(duì)復(fù)雜的蛋白質(zhì)樣品仍難以實(shí)現(xiàn)完全分離。

1.2.2 多維液相色譜分離技術(shù) 多維液相色譜分離技術(shù)是將2種或多種分離技術(shù)聯(lián)合起來(lái)構(gòu)建的分離平臺(tái)，整個(gè)分離系統(tǒng)分離容量顯著提高。理論上如果每一維的分離機(jī)理完全不同，即具有正交的分離機(jī)理，則系統(tǒng)可獲得最大的峰容量n= ninj...[18]。Stockton[7]等基于二維分離技術(shù)研究了嗎啡暴露組和對(duì)照組大鼠紋狀體突觸密集區(qū)蛋白質(zhì)表達(dá)的變化，結(jié)果顯示G蛋白偶聯(lián)受體、蛋白降解和泛素化修飾等相關(guān)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)可能在阿片類(lèi)藥物成癮中發(fā)揮重要作用。Oever[8]等基于二維液相色譜分離技術(shù)研究了海洛因復(fù)吸大鼠前額皮質(zhì)蛋白質(zhì)的表達(dá)，鑒定出與復(fù)吸易感性相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)分泌蛋白和基質(zhì)膜蛋白差異表達(dá)，基質(zhì)膜蛋白凝聚在氨基丁酸圍繞的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)上，此改變可能激活氨基丁酸神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)一步影響海洛因的復(fù)吸?；诟咄慷嗑S液相分離技術(shù)在藥物成癮蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中鑒定到神經(jīng)遞質(zhì)釋放、氨基丁酸相關(guān)蛋白質(zhì)，進(jìn)一步推動(dòng)了藥物成癮蛋白質(zhì)組學(xué)的研究。但多維液相色譜分離技術(shù)分析樣品的速度較慢，盡管已有超高壓液相色譜，但總體來(lái)說(shuō)分離速度受到限制[19]。

1.2.3 高通量多維陣列液相色譜分離技術(shù) 多維陣列液相色譜是將多維色譜做成陣列式，“陣列”代表著多通道和同時(shí)分離，可以縮短多維液相色譜的分離時(shí)間。多維陣列式液相色譜技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)高通量、高效率的分析，已逐漸應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)的研究。Huang[9]等基于此技術(shù)研究了人的血漿樣品，將分析時(shí)間由原來(lái)的1周縮短到4 h，鑒定蛋白質(zhì)的濃度范圍達(dá)9個(gè)數(shù)量級(jí)。高通量、高效率的多維陣列分離技術(shù)也將逐漸應(yīng)用于藥物成癮蛋白質(zhì)組學(xué)的研究。

表2 質(zhì)譜鑒定技術(shù)比較

2 蛋白質(zhì)樣品的鑒定

質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展為蛋白質(zhì)鑒定提供了快速、準(zhǔn)確的分析方法。質(zhì)譜鑒定技術(shù)的進(jìn)步之一是軟電離技術(shù)的發(fā)現(xiàn)，這大大方便了生物樣品中蛋白質(zhì)和肽的鑒定。軟電離技術(shù)主要包括2種基質(zhì)輔助激光解吸電離（MALDI）[20]和電噴霧離子源（ESI）電離[21]。在藥物成癮應(yīng)用中MALDI通常與飛行時(shí)間質(zhì)譜（TOF）結(jié)合使用，ESI電離技術(shù)通常與軌道離子阱（Orbitrap）、離子阱（IT）、四級(jí)桿（Q）和傅里葉變換離子回旋加速（FT-ICR）結(jié)合使用（表2）。

2.1 MALDI-TOF鑒定技術(shù)

飛行時(shí)間質(zhì)譜是較早時(shí)期能夠高精度測(cè)試質(zhì)量的手段之一，MALDI通常與TOF質(zhì)量檢測(cè)器結(jié)合使用，主要應(yīng)用于自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)。TOF以脈沖的模式實(shí)現(xiàn)離子的分離，通過(guò)測(cè)量每個(gè)離子在真空管中的飛行時(shí)間推導(dǎo)分析物的質(zhì)量。Gorinic[23]基于MALDI-TOF和MALDI-TOF/ TOF技術(shù)研究慢性酒精戒斷小鼠大腦皮質(zhì)蛋白質(zhì)表達(dá)的變化，鑒定到內(nèi)吞和能量相關(guān)的肌動(dòng)蛋白1差異表達(dá)，結(jié)果表明藥物成癮可能導(dǎo)致腦部適應(yīng)性的變化和腦部重塑。MALDI-TOF廣泛應(yīng)用于藥物成癮蛋白質(zhì)組學(xué)的研究，但此技術(shù)與上游兼容的技術(shù)聯(lián)合使用很難鑒定成癮中低豐度和極性蛋白質(zhì)，且重復(fù)性差。

2.2 ESI-Orbitrap鑒定技術(shù)

軌道阱質(zhì)譜是利用離子在特定靜電場(chǎng)中運(yùn)動(dòng)頻率的不同對(duì)離子進(jìn)行質(zhì)量分析，此技術(shù)不僅可以獲得更好的數(shù)據(jù)質(zhì)量，而且峰容量增加，從而可以檢測(cè)更多低分辨率的信號(hào)[30]。Uys[26]等基于此鑒定技術(shù)研究了酒精誘導(dǎo)小鼠伏隔核突觸密集區(qū)蛋白質(zhì)表達(dá)的變化，結(jié)果表明59種差異表達(dá)的蛋白質(zhì)中大多數(shù)蛋白質(zhì)主要參與細(xì)胞形態(tài)的調(diào)節(jié)。Orbitrap能夠提供蛋白質(zhì)翻譯后的信息，但相對(duì)于離子回旋質(zhì)譜其分辨率略低。

2.3 ESI-TQ鑒定技術(shù)

離子阱是離子源產(chǎn)生的離子以脈沖的形式進(jìn)入離子阱，從而實(shí)現(xiàn)高通量質(zhì)量分析[27]。Lai[28]基于此質(zhì)譜技術(shù)鑒定了酒精戒斷者血液中潛在的生物標(biāo)志物，結(jié)果標(biāo)明女性中載脂蛋白C1和D及男性中載脂蛋白M和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶等可做為酒精成癮戒斷者潛在的生物標(biāo)志物。然而它的分辨率、離子捕獲能力低和質(zhì)量測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性相對(duì)有限。

2.4 ESI-Q鑒定技術(shù)

四級(jí)桿具有高靈敏度和廣泛的檢測(cè)范圍，通常與其他質(zhì)譜串聯(lián)用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究。Mi?chalski[29]基于Q-Orbitrap在90 min梯度時(shí)間內(nèi)鑒定了胰蛋白酶消化的哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物中超過(guò)2500個(gè)蛋白質(zhì)。據(jù)了解，此技術(shù)尚未應(yīng)用于藥物成癮蛋白質(zhì)組學(xué)的研究。

2.5 ESI-FT-ICR鑒定技術(shù)

FT-ICR的分辨率和精確度是質(zhì)譜技術(shù)的重要突破，在蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中可精確鑒定一些低豐度的蛋白質(zhì)及蛋白質(zhì)翻譯后的修飾。傅里葉變換回旋加速須在較高的磁場(chǎng)下進(jìn)行，儀器操作復(fù)雜且費(fèi)用較高[30]。此技術(shù)憑借其高的分辨率和精確度將有助于藥物成癮蛋白質(zhì)的鑒定。

3 定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)

精確、可重復(fù)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法能夠揭示蛋白質(zhì)水平上相對(duì)小的變化，這些微小變化可能導(dǎo)致細(xì)胞表型或細(xì)胞信號(hào)的重大變化[31]。用于蛋白質(zhì)定量的非凝膠方法包括非標(biāo)定量法（lable-free）、同位素代謝標(biāo)記（SILAC）、同位素親和標(biāo)簽法（ICAI）、重同位素標(biāo)簽標(biāo)記定量法（iTRAQ）[32]，如表3。

表3 蛋白組學(xué)定量方法的比較

3.1 非標(biāo)定量技術(shù)

非標(biāo)定量方法包括頻譜計(jì)數(shù)和提取離子色譜圖（XIC）2種。頻譜計(jì)數(shù)依賴(lài)于所有蛋白質(zhì)相應(yīng)肽段的測(cè)序次數(shù)，蛋白質(zhì)的豐度越高，較多數(shù)量的肽可用于測(cè)序，從而形成更多的MS/MS數(shù)。提取離子色譜圖根據(jù)三圍空間中肽離子的強(qiáng)度、m/z和色譜保留時(shí)間來(lái)定量。XIC的準(zhǔn)確度高，更適合于中等豐度蛋白質(zhì)的定量[37]。Sari[33]等基于非標(biāo)定量技術(shù)研究了酒精誘導(dǎo)小鼠大腦蛋白質(zhì)表達(dá)的變化，鑒定到對(duì)腦發(fā)育具有重要作用的抑制素和神經(jīng)元遷移蛋白質(zhì)顯著下調(diào)。Bosch[6]等也基于此技術(shù)研究了安非他明誘導(dǎo)大鼠紋狀體蛋白質(zhì)的表達(dá)。非標(biāo)定量蛋白質(zhì)組學(xué)具有相對(duì)寬的動(dòng)態(tài)范圍，而且可以定量多個(gè)樣品，但其精確度低、可重復(fù)性差，很難檢測(cè)到低豐度蛋白質(zhì)，且對(duì)儀器的精密度要求較高[41]。

3.2 SILAC定量技術(shù)

SILAC原理很簡(jiǎn)單：2組細(xì)胞同時(shí)培養(yǎng)時(shí)，A組在包含正常氨基酸（light）的培養(yǎng)基中，B組則在含有“重型（heavy）”氨基酸的培養(yǎng)基中，即穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸。細(xì)胞傳若干代后，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸完全摻入蛋白質(zhì)中，取代了原有的氨基酸。這樣，2個(gè)蛋白質(zhì)之間就存在分子量的改變，而其化學(xué)性質(zhì)無(wú)變化。SILAC定量方法簡(jiǎn)單，但僅適用于活體研究，且周期較長(zhǎng)[39]。據(jù)了解在藥物成癮中沒(méi)有應(yīng)用。

3.3 ICAI定量技術(shù)

ICAT對(duì)含有L2半胱氨酸的巰基蛋白質(zhì)或肽段樣品分別予以輕、重標(biāo)記。由于ICAT在化學(xué)結(jié)構(gòu)上相同且在相對(duì)分子質(zhì)量上相差8個(gè)中子，所以用MS檢測(cè)時(shí)相對(duì)定量的可信性有所提高[40]。Morón[34]等基于ICAT研究了嗎啡誘導(dǎo)組和正常組小鼠海馬突觸后密集區(qū)蛋白質(zhì)表達(dá)的差異，結(jié)果顯示差異表達(dá)的蛋白質(zhì)可能通過(guò)調(diào)節(jié)突觸上內(nèi)吞蛋白的重組，進(jìn)而誘導(dǎo)海馬谷氨酸受體突觸可塑性。Prokai[35]等也基于此技術(shù)鑒定了嗎啡誘導(dǎo)大鼠前額皮質(zhì)突觸膜蛋白的變化。近期藥物成癮蛋白質(zhì)組學(xué)的研究很少使用此技術(shù)進(jìn)行定量分析。ICAT標(biāo)記的效率具有時(shí)間依賴(lài)性，且只能標(biāo)記半胱氨酸或其巰基被修飾的蛋白質(zhì)，標(biāo)記效率很少能達(dá)到80%以上，輕、重試劑標(biāo)記的多肽有可能在不同的時(shí)間洗脫，所以其相對(duì)定量結(jié)果可能出現(xiàn)假陽(yáng)性[41]。

3.4 iTRAQ定量技術(shù)

iTRAQ定量技術(shù)通過(guò)4個(gè)或8個(gè)來(lái)源不同的相同蛋白質(zhì)樣品在一級(jí)質(zhì)譜上表現(xiàn)相同，平衡基團(tuán)在二級(jí)質(zhì)譜中發(fā)生中性丟失，報(bào)告基團(tuán)在二級(jí)質(zhì)譜中產(chǎn)生4個(gè)或8個(gè)報(bào)告離子，分析報(bào)告離子峰的比值強(qiáng)度，及同一個(gè)蛋白質(zhì)在不同樣品間表達(dá)量的比值。該技術(shù)分析能力強(qiáng)、范圍廣，可用于低豐度、強(qiáng)堿性、相對(duì)分子質(zhì)量小于10×103或大于200×103的蛋白質(zhì)的檢測(cè)，定量分析可靠[42]。Reissner[36]等基于此定量技術(shù)鑒定了可卡因誘導(dǎo)大鼠伏隔核突觸后密集區(qū)蛋白質(zhì)表達(dá)的變化，結(jié)果表明突觸上的α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑丙酸（AMPA）谷氨酸受體表面的GluR1差異表達(dá)，這些差異表達(dá)的蛋白質(zhì)可能通過(guò)增加NAC上的AMPA受體的表達(dá)誘導(dǎo)可卡因的復(fù)吸。但iTRAQ技術(shù)樣品預(yù)處理和酶解過(guò)程可能引起平行樣品之間的差別，造成結(jié)果偏差，且成本較高。

4 結(jié)語(yǔ)

蛋白質(zhì)組學(xué)能夠動(dòng)態(tài)分析細(xì)胞內(nèi)變化蛋白質(zhì)的組成、表達(dá)水平和生物功能，及參與的生物過(guò)程、蛋白質(zhì)之間的相互作用和聯(lián)系規(guī)律。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域如腫瘤、癌癥和致癮性藥物等研究中。反復(fù)接觸致癮性藥物可以改變腦部特定區(qū)域蛋白質(zhì)的表達(dá)水平或表達(dá)類(lèi)型，新的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)將逐漸應(yīng)用于藥物成癮的研究。

從凝膠電泳到多維液相色譜的分離技術(shù)已應(yīng)用于藥物成癮蛋白質(zhì)組學(xué)的研究，鑒定出能量代謝、細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)、信號(hào)傳導(dǎo)、突觸和受體等相關(guān)的蛋白質(zhì)。但實(shí)現(xiàn)神經(jīng)組織中復(fù)雜全蛋白質(zhì)樣品的分離仍是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。高通量的多維液相色譜分離技術(shù)可以進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)對(duì)全蛋白質(zhì)的深入分析。

分離技術(shù)的進(jìn)步推動(dòng)了質(zhì)譜技術(shù)的快速發(fā)展，多標(biāo)記、蛋白質(zhì)覆蓋率全的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，也加快了新的質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展。由傅立葉變換程序的計(jì)算機(jī)和磁場(chǎng)捕獲離子的分析室組成的傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀具有很高的分辨率（可達(dá)100萬(wàn)以上）和靈敏度。

高效快速的分離技術(shù)、多標(biāo)記和覆蓋率全的蛋白質(zhì)定量技術(shù)結(jié)合高分辨率和靈敏度的質(zhì)譜技術(shù)，有望提高藥物成癮蛋白質(zhì)樣品檢測(cè)的通量、靈敏度及分辨率。篩選出調(diào)控成癮的重要蛋白質(zhì)，構(gòu)建藥物成癮相關(guān)蛋白質(zhì)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，對(duì)于理解藥物成癮的機(jī)制及尋找治療藥物成癮的靶標(biāo)具有重要的研究?jī)r(jià)值和實(shí)際意義。

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Application of Proteome Techniques in Drug Addiction Re?search

ZHU Bei-Bei,Li Xiang-Yu,CHEN Huan, ZHANG Sen,HOU Hong-Wei*,HU Qing-Yuan*
China National Tobacco Quality Supervision&Test Centre,Zhengzhou 450001,China

This paper briefly outlined the separation,identification and quantification proteomics technology and its application in research of addictive drugs like alcohol,nicotine,morphine,cocaine and methamphetamine.Pro?teomics is one of the powerful tools in the post-genomic era.With the development of protein separation,identifi?cation and quantitative technology,especially the liquid chromatography with wide application range and good sepa?ration efficiency and the mass spectrometry with high sensitivity,proteomics has been applied to drug addiction re?search more extensively,and will promote the understand of protein changes during the drug dependence formation and its participation in the biological process and related pathways,which will help to highlight molecular mecha?nisms underlying addiction.

proteomics;peparation and identification;quantitative proteomics;drug addiction

R964

A

1009-0002（2017）02-0207-07

10.3969/j.issn.1009-0002.2017.02.028

2016-08-25

國(guó)家煙草專(zhuān)賣(mài)局重點(diǎn)項(xiàng)目（110201402037）

朱貝貝（1991-），女，碩士研究生

侯宏衛(wèi)，（E-mail）qsfctc@163.com；胡清源，（E-mail）huqy1965@163.com

*Co-corresponding anthors,HOU Hong-Wei,E-mail:qsfctc@163.com;HU Qing-Yuan，E-mail:huqy1965@163.com