臍血CD64在新生兒早期敗血癥中的診斷價(jià)值*

鐘元枝，肖體海，劉 玲，程旺松，范倩倩，羅科兵，劉華艷

（廣東省深圳市龍華新區(qū)中心醫(yī)院 新生兒科，廣東 深圳 518110）

臍血CD64在新生兒早期敗血癥中的診斷價(jià)值*

鐘元枝，肖體海，劉 玲，程旺松，范倩倩，羅科兵，劉華艷

（廣東省深圳市龍華新區(qū)中心醫(yī)院 新生兒科，廣東 深圳 518110）

目的 探討中性粒細(xì)胞CD64在新生兒早期敗血癥中的臨床診斷價(jià)值。方法 選取2015年6～11月于深圳市龍華新區(qū)中心醫(yī)院產(chǎn)科產(chǎn)檢并分娩的50例新生兒，分為感染組（n=18）和對照組（n=32），檢測兩組出生時(shí)臍靜脈血、0～12 h外周靜脈血CD64水平和血培養(yǎng)，并通過分析兩組相同或不同時(shí)間CD64的變化，探討其對新生兒早發(fā)型敗血癥的診斷價(jià)值。結(jié)果 感染組臍靜脈血CD64水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-3.15，P=0.010）；感染組0～12 h外周血CD64較對照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-3.35，P=0.004）；感染組臍血與0～12 h外周靜脈血之間CD64比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-0.507，P=0.623）。結(jié)論 中性粒細(xì)胞CD64對新生兒敗血癥的早期診斷具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值，臍血中性粒細(xì)胞CD64可作為宮內(nèi)細(xì)菌感染、早發(fā)型敗血癥的診斷指標(biāo)。

中性粒細(xì)胞CD64；新生兒；早發(fā)型敗血癥

新生兒敗血癥是指細(xì)菌或真菌嚴(yán)重感染導(dǎo)致的新生兒膿毒癥，國外常根據(jù)發(fā)病時(shí)間（出生后48和72 h或7 d等）將新生兒敗血癥分為早發(fā)型（earlyonset sepsis，EOS）和晚發(fā)型（late-onset sepsis，LOS）。新生兒敗血癥起病急，早期臨床表現(xiàn)不典型，缺乏特異性，常導(dǎo)致患兒治療不及時(shí)和治療效果不佳，并且敗血癥也是導(dǎo)致新生兒顱內(nèi)感染的主要來源。有報(bào)道認(rèn)為即使感染未波及神經(jīng)系統(tǒng)，仍將增加腦白質(zhì)損傷和終身殘疾的機(jī)會(huì)[1]，故新生兒敗血癥成為其病死率、致殘率的主要疾病之一，也是導(dǎo)致其生存質(zhì)量下降的重要原因。目前，國際上仍把血培養(yǎng)作為診斷新生兒敗血癥的金標(biāo)準(zhǔn)，但其需血量大、耗時(shí)長、陽性率低、不利于快速診斷。因此，探討早期、敏感性、特異性強(qiáng)、可操作性強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)是診斷新生兒敗血癥長期關(guān)注的問題。臍血來源豐富，與傳統(tǒng)外周血采集相比無創(chuàng)、安全，可避免對新生兒的有創(chuàng)刺激及醫(yī)源性失血。通過對新生兒臍血、0～12h外周血中性粒細(xì)胞CD64進(jìn)行監(jiān)測，探討臍血中性粒細(xì)胞CD64對新生兒的早發(fā)型敗血癥診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2015年6～11月于深圳市龍華新區(qū)中心醫(yī)院產(chǎn)科體檢，孕產(chǎn)婦無嚴(yán)重內(nèi)科疾病及產(chǎn)科并發(fā)癥，產(chǎn)檢胎兒無明顯的先天缺陷、家族中無先天遺傳代謝病史，孕周≥36周的新生兒共50例為研究對象，按其是否有或高度懷疑有宮內(nèi)感染分為感染組和對照組，符合以下條件之一者為感染組：①孕產(chǎn)婦心動(dòng)過速≥100次/min；②胎兒心動(dòng)過速≥160次/min；③母親發(fā)熱≥38.0℃；④子宮激惹、壓痛；⑤羊水惡臭；⑥白細(xì)胞計(jì)數(shù)≥15×109個(gè)/L或中性細(xì)胞所占比率≥90%；⑦胎膜早破≥24 h，其余為對照組，感染組18例，對照組32例。

1.2 研究方法

1.2.1 診斷標(biāo)準(zhǔn) 新生兒敗血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)2003年中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)新生兒學(xué)組制定的新生兒敗血癥診療方案[2]。

1.2.2 標(biāo)本采集 所有研究對象均在出生2 min內(nèi)及出生0～12 h內(nèi)各抽取臍靜脈血及外周靜脈血1份（抗凝管1 ml血標(biāo)本），常溫下24 h內(nèi)及時(shí)送檢中性粒細(xì)胞CD64測定。感染組患兒出生后均已收入NICU病房觀察，同時(shí)常規(guī)送檢血常規(guī)、C-反應(yīng)蛋白（CRP）、降鈣素原（PCT）、血培養(yǎng)等檢測項(xiàng)目，并于48～72 h復(fù)查，監(jiān)測患兒體溫、呼吸、心率和血氧飽和度等。

1.2.3 CD64檢測 采用美國BD公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀（型號(hào)：FACS CantoⅡ，機(jī)身號(hào)：V33947300179）進(jìn)行檢測，試劑使用美國超聲診斷公司生產(chǎn)的Leuko 64試劑專用盒，數(shù)據(jù)分析使用美國BD FACS Diva software自動(dòng)分析，單位為Index，結(jié)果分析≥1為輕度感染，≥2中度感染，≥3重度感染。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用例數(shù)和率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料一般情況

符合納入標(biāo)準(zhǔn)的新生兒共50例，胎齡范圍36～41周，其中足月兒47例，早產(chǎn)兒3例；男32例，女28例。感染組18例，對照組32例。各組患兒在性別、胎齡、出生體重和分娩方式等方面兩組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 細(xì)菌感染培養(yǎng)情況

感染組中診斷新生兒敗血癥11例，陽性率（11/ 18）61.1%，其中血培養(yǎng)陽性8例,陽性率（8/18）44.4%，包括臍靜脈血陽性2例和（或）外周靜脈血培養(yǎng)陽性6例；細(xì)菌譜見表2。臨床診斷新生兒早發(fā)型敗血癥3例，結(jié)合臨床表現(xiàn)及出生后6～8 h及48～72 h內(nèi)外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性細(xì)胞比率及CRP、PCT結(jié)果聯(lián)合診斷，對照組無1例診斷為新生兒早發(fā)型敗血癥，均在72 h內(nèi)復(fù)查外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞比率、CRP和PCT，正常后解除觀察。

表1 各組患兒一般資料比較

表2 臍血及外周血血培養(yǎng)細(xì)菌譜

2.3 兩組臍靜脈血和0～12 h內(nèi)外周靜脈血CD64比較

兩組臍靜脈血和0～12 h內(nèi)外周靜脈血CD64比較，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

2.4 感染組臍血與0～12 h外周靜脈血CD64比較

感染組臍血CD64（2.3±1.38）與0～12 h外周靜脈血CD64（2.13±1.64）比較，經(jīng)t檢驗(yàn)（t=-0.507，P=0.623），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表3 兩組臍靜脈血及0～12 h外周靜脈血CD64比較 （x±s）

3 討論

新生兒敗血癥尤其是早期敗血癥癥狀和體征都是非特異性的，早期診斷和及時(shí)治療是一個(gè)挑戰(zhàn)。大量的研究表明諸如急性期反應(yīng)物、C-反應(yīng)蛋白、降鈣素、細(xì)胞因子、細(xì)胞表面標(biāo)志、16SrRNA基因聚合酶鏈反應(yīng)（PCR），DNA探針等分子生物技術(shù)在早期診斷新生兒敗血癥上各有優(yōu)劣，然而，進(jìn)一步的研究需要確定診斷具有較高的準(zhǔn)確性和有效性的生物標(biāo)志物，SHAH等[3]認(rèn)為，一些新的標(biāo)志物如間接α抑制蛋白（IAIP）已顯示出可喜的結(jié)果，從而有可能幫助新生兒敗血癥早期檢測。對降低長時(shí)間非必需廣譜抗生素使用率及提高早期診斷新生兒敗血癥至關(guān)重要。且有些實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)如16SrRNA基因檢測，張芳等[4]報(bào)道雖其敏感性、特異性及診斷指數(shù)分別為82.93%、96.92%和179.85，優(yōu)于血培養(yǎng)等，但該標(biāo)志物由于實(shí)驗(yàn)室條件、技術(shù)難道等要求較高，且成本高，在科研中應(yīng)用價(jià)值較大，目前臨床無法廣泛開展，實(shí)用價(jià)值不大。

CD64即Fcγ-RⅠ，是IgG的Fc段受體，屬免疫球蛋白超家族的成員，正常情況下CD64在外周血中中性粒細(xì)胞表面低水平表達(dá)。在細(xì)菌感染后4～6 h，CD64在中性粒細(xì)胞表面大量表達(dá)，在新生兒細(xì)菌感染時(shí)CD64的表達(dá)顯著增高[5]，在全身細(xì)菌感染時(shí)升高尤為明顯[6]。ALLEN等[7]指出，非感染性炎癥反應(yīng)和病毒感染均不會(huì)引起CD64在中性粒細(xì)胞的表達(dá)增加。CD64的高表達(dá)在感染早期就會(huì)出現(xiàn)，此項(xiàng)指標(biāo)在早產(chǎn)兒、足月兒、年長兒及成人之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[8-9]。汪盈等[10]報(bào)道CD64對診斷新生兒敗血癥診斷的敏感性和特異性分別為91.4%和90.0%，與郝玲等[11]報(bào)道相似。新生兒感染時(shí)CD64表達(dá)升高隨著感染程度不同表達(dá)水平有所不同，敗血癥時(shí)CD64表達(dá)更為明顯，恢復(fù)期CD64下降，表明其隨著感染控制、病情穩(wěn)定而下降。郝麗紅等[6]報(bào)道CD64表達(dá)增高在革蘭陽性菌和革蘭陰性菌感染之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CD64不僅有助于早期診斷，同時(shí)也有助于判定感染的程度，并可作為新生兒敗血癥早期診斷及病情預(yù)后的指標(biāo)[12]。如果CD64顯著或持續(xù)升高，可能提示預(yù)后不良[13]，因此中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)不僅能反映疾病情況的嚴(yán)重程度，也能觀察療效，指導(dǎo)臨床用藥[5]。梁紅英等[14]認(rèn)為CD64與CRP相比較而言，CD64是診斷新生兒敗血癥的更為敏感的特異性指標(biāo)，且與CHOO等[15]研究結(jié)果相符。

本研究顯示，感染組即分娩前提示宮內(nèi)感染或高度懷疑宮內(nèi)感染者臍靜脈血中性粒細(xì)胞CD64高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且確診新生兒早期敗血癥的11例患兒臍血 CD64與 0～12 h外周血CD64比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這表明在感染早期CD64即有明顯升高，這與相關(guān)報(bào)道[8－9]類似。同時(shí)也提示筆者是否可以用患兒出生時(shí)臍血CD64檢測可以代替其出生0～12 h內(nèi)的CD64檢測？這樣既可以早期發(fā)現(xiàn)感染存在者，又可減少患兒痛苦和醫(yī)源性失血，但由于目前樣本量偏少，有待進(jìn)一步大樣本的研究。另感染組0～12 h外周血CD64較對照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步驗(yàn)證CD64可以作為嚴(yán)重細(xì)菌感染指標(biāo)應(yīng)用于敗血癥臨床診斷中來。由于本實(shí)驗(yàn)對照組為同期健康新生兒，監(jiān)測指標(biāo)時(shí)標(biāo)本的取材有一定的難度，故未常規(guī)于24～48 h復(fù)查。而是統(tǒng)一在72 h后再復(fù)查外周血CD64，故沒法比較24～48 h CD64的敏感性是否優(yōu)于0～12 h檢測結(jié)果。徐朝江等[16]的Meta分析認(rèn)為，在新生兒敗血癥的診斷中，24～48 h CD64檢測的敏感性優(yōu)于0～12 h檢測；0～12 h CD64檢測的敏感性優(yōu)于0～12 h CRP和24～48 h CRP。當(dāng)然，一個(gè)疾病的診斷不能靠某個(gè)單一的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，往往結(jié)合其他的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)聯(lián)合判斷更準(zhǔn)確。但是在沒有辦法采集更多的血液標(biāo)本的情況下，單一的靈敏度高的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)對病情的判斷是至關(guān)重要的。

CD64檢測目前多使用流式細(xì)胞術(shù)檢測，所需標(biāo)本量少（0.5 ml），操作簡便易行，用時(shí)短（1～2 h）。因此，中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)對早期診斷新生兒敗血癥，判斷病情，評價(jià)預(yù)后具有很高的臨床價(jià)值。臍血中性粒細(xì)胞CD64在早期細(xì)菌感染的篩查及早期新生兒敗血癥的診斷和治療上可作為很有價(jià)值的標(biāo)志物。

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（張西倩 編輯）

Value of neutrophil CD64 of umbilical cord blood in early diagnosis of neonatal septicemia*

Yuan-zhi Zhong,Ti-hai Xiao,Ling Liu,Wang-song Cheng,Qian-qian Fan, Ke-bing Luo,Hua-yan Liu
(Department of Neonatology,Central Hospital of Longhua New District in Shenzhen,Shenzhen, Guangdong 518110,China)

Objective To explore the clinical significance of neutrophil CD64 in early diagnosis and evaluation of disease condition of neonatal septicemia.Methods This case-control study included 18 neonates with suspected septicemia(septicemia group)and 32 neonates without infection(non-infection group)in our hospital from June 2015 to November 2015.The umbilical venous blood at birth and peripheral venous blood at 0-12 h were collected from all the cases for blood culture and detection of CD64 level.The septicemia group was given recheck of CD64 at 48-72 h,and the non-infection group was given recheck of CD64 at 72 h,and the levels of CD64 were compared. Results The CD64 levels of both umbilical venous blood and peripheral blood in the septicemia group were significantly higher than those in the non-infection group(t=-3.15 and-3.35,P=0.010 and 0.004).However,the CD64 level of umbilical venous blood had no significant change from that of peripheral blood at 0-12 h in the septicemia group(t=-0.507,P=0.623).Conclusions Neutrophil CD64 has certain clinical application value in early diagnosis of neonatal septicemia.Neutrophil CD64 of umbilical cord blood can be used as a credible marker for the diagnosis of intrauterine bacterial infection and early onset of septicemia.

neutrophil CD64;neonate;early onset of septicemia

R272.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.04.012

1005-8982（2017）04-0059-04

2016-04-18

深圳市科技創(chuàng)新委員會(huì)基礎(chǔ)研究項(xiàng)目（No：JCYJ20150402140827354）