熱敏灸對過敏性鼻炎大鼠血清IgE、IL-4含量的影響*

陳盼碧，宣 錦，史林威，李俊君，程 聰，康弸澤，林子鈺，楊孝芳

熱敏灸對過敏性鼻炎大鼠血清IgE、IL-4含量的影響*

陳盼碧，宣 錦，史林威，李俊君，程 聰，康弸澤，林子鈺，楊孝芳

（貴陽中醫(yī)學(xué)院針灸推拿學(xué)院，貴州 貴陽 550002）

目的 探討熱敏灸對過敏性鼻炎大鼠血清中IgE、IL-4含量的影響。方法 Wistar雄性大鼠50只，隨機分為5組：正常組、模型組、鹽酸西替利嗪組、艾灸組和熱敏灸組，每組10只。采用卵白蛋白全身致敏與局部攻擊相結(jié)合的方法復(fù)制過敏性鼻炎大鼠模型，觀察各組間癥狀積分的差異，采用ELISA法定量檢測各組大鼠血清IgE、IL-4的含量。結(jié)果 模型組的癥狀積分與正常組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），各治療組癥狀積分明顯低于模型組（P＜0.05)，鹽酸西替利嗪組、熱敏灸組及艾灸組間比較，鹽酸西替利嗪組與熱敏灸組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），鹽酸西替利嗪組、熱敏灸組優(yōu)于艾灸組（P＜0.05）；模型組血清中IgE、IL-4的含量明顯升高，與正常組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；熱敏灸組血清中IgE、IL-4含量明顯降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 熱敏灸可降低過敏性鼻炎大鼠血清中IgE、IL-4含量，減輕鼻黏膜變應(yīng)性炎癥。

熱敏灸；過敏性鼻炎；IgE；IL-4

過敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是特異性個體接觸過敏原后，由免疫球蛋白E（Immunoglobulin E，IgE）介導(dǎo)的發(fā)生在鼻黏膜的I型變態(tài)反應(yīng)性疾病，多種炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子參與AR的發(fā)病過程[1]，臨床上以鼻塞、鼻癢、噴嚏、流清涕為主要癥狀。研究表明，在美國每年用于此病的相關(guān)費用約為63～79億美元，而全球平均發(fā)病率為10%～25%[2]，西方國家的發(fā)病率一般約為10%～20%[3]，而在中國發(fā)病率竟高達(dá)37.74%[4]。目前多采用西藥治療AR，雖然在改善癥狀方面取得一定療效，但不良反應(yīng)明顯且不能從根本上治療AR[5]。因此尋找療效確切，不良反應(yīng)少的治療方法已成為治療AR的關(guān)鍵。針灸對AR的防治由來已久，方法多樣，各具特色，且療效肯定，副反應(yīng)少。熱敏灸屬懸灸的一種，是江西省中醫(yī)院灸療醫(yī)院成功推廣的一種新型灸療方法，它根據(jù)穴位在疾病狀態(tài)下的敏化特性，對熱敏化腧穴施以飽和灸量，從而能大幅度提高艾灸療效，使灸效達(dá)到最大化。研究表明，艾灸熱敏化穴可以調(diào)節(jié)和維持體內(nèi)神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫平衡，增強機體抗病能力[6]。臨床上AR等難以處理的疾病，采用熱敏灸治療時會有意想不到的療效[7]。那么，熱敏灸治療AR的機制是什么呢？是否是通過增強機體的免疫功能減少IgE的合成，從而降低白細(xì)胞介素4（Interleukin，IL-4）的含量達(dá)到治療目的？本研究旨在通過熱敏灸治療后，檢測AR大鼠血清IgE、IL-4含量的變化，進(jìn)一步研究熱敏灸治療疾病的作用機制，也為臨床更好地推廣運用熱敏灸提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

清潔級Wistar健康成年雄性大鼠50只，體重200～250 g，由貴陽中醫(yī)學(xué)院實驗動物研究中心提供。標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料飼養(yǎng)，自由飲水，飼養(yǎng)溫度20～25℃，相對濕度50%～70%，適應(yīng)性喂養(yǎng)2周，然后隨機分為正常組（10只）、模型組（10只）、鹽酸西替利嗪組（10只）、治療組（20只）；根據(jù)“肺俞”“腎俞”“風(fēng)池”“迎香”穴是否被熱敏化將治療組自動分為艾灸組（未熱敏化）和熱敏灸組（熱敏化）。

1.2 主要藥品及試劑

鹽酸西替利嗪膠片（產(chǎn)品批號：B1420004693，珠海安生鳳凰制藥有限公司），卵白蛋白（GradeⅡ，美國 Sigma公司），氫氧化鋁（批號：20000307，貴陽市化學(xué)試劑廠），生理鹽水、特制精艾絨艾條（規(guī)格：直徑22 mm×長度120 mm，江西省中醫(yī)院生產(chǎn)，材料為二級精艾絨），清艾條、IgE ELISA試劑盒（上海博士德生物有限公司），IL-4 ELISA試劑盒（上海博士德生物有限公司）。

1.3 主要實驗儀器

Olymplus顯微鏡（日本Olymplus光學(xué)儀器有限公司），AR2140型電子分析天平（美國奧豪斯有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 過敏性鼻炎大鼠模型復(fù)制 參照文獻(xiàn)[8]OVA 10 mg+A1（OH）3粉末30 mg+生理鹽水1 ml制成混懸液，除正常組外其余各組大鼠行腹腔內(nèi)注射，隔日1次，共7次，作為基礎(chǔ)致敏。第15天進(jìn)行加強免疫，給予5%OVA 50μl滴鼻/（側(cè)·日）和1%OVA噴霧吸入5 min，連續(xù)7 d。正常組大鼠予等量生理鹽水代替進(jìn)行腹腔注射、滴鼻及噴霧吸入刺激，方法同上。

1.4.2 穴位熱敏化標(biāo)準(zhǔn) 用固定夾將大鼠固定后，選取治療組大鼠“肺俞”“腎俞”“風(fēng)池”“迎香”穴，定位取穴按照參考文獻(xiàn)[9]進(jìn)行。用艾條懸于“肺俞”“腎俞”“風(fēng)池”“迎香”穴上約2 mm處先回旋灸2 min預(yù)熱局部皮膚，再固定于“肺俞”“腎俞”“風(fēng)池”“迎香”穴施行溫和灸。艾灸“肺俞”“腎俞”“風(fēng)池”“迎香”穴10 min后，對大鼠進(jìn)行紅外熱像檢測，紅外熱成像產(chǎn)生沿穴位縱向擴散或橫向擴散的紅外輻射增強區(qū)域（溫度升高0.5℃以上）長徑≥3 cm被視為腧穴的熱敏化陽性[10]。

1.4.3 治療方法 造模成功后，開始介入治療。熱敏灸組：取大鼠雙側(cè)“肺俞”“腎俞”“風(fēng)池”“迎香”穴，選用特制精艾絨艾條，距穴位2 cm左右溫和灸大鼠，40 min/次，1次/d，共14 d。艾灸組：施灸方法同熱敏灸組，艾條選用清艾條。鹽酸西替利嗪組：鹽酸西替利嗪溶液，鹽酸西替利嗪人的常用劑量是10 mg/d，換算成大鼠的用藥劑量為每日每鼠0.18 mg。將西藥配成0.18 mg/ml的溶液。1 ml/（只·d），灌胃治療，1次/d，共14 d。模型組：給予生理鹽水1 ml/（只·d），灌胃治療，1次/d，共14 d?？瞻讓φ战M：不作處理，正常飼養(yǎng)。

1.4.4 鼻部癥狀評分 最后1次滴鼻后30 min，觀察動物的鼻癢、噴嚏、清涕的輕重程度并逐項評分，逐項評分用疊加法計算總分[11]。鼻癢：輕擦鼻1、2次為1分，擦鼻多次為2分，抓撓鼻、面不止，到處擦磨為3分；噴嚏：1～5個為1分，5～10個為2分，11個以上為3分；流涕：留至鼻孔處為1分，過鼻孔為2分，流涕滿面為3分。行為學(xué)總分超過5分即為造模成功。

1.4.5 大鼠血清IgE、IL-4檢測 末次治療結(jié)束后將所有大鼠乙醚麻醉，股動脈取血并處死。采血5ml，室溫自然凝固10～20 min，3 000 r/min離心10 min，收集上清液，置入-20℃冰箱冷凍保存待檢。大鼠血清IgE、IL-4采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測。

1.4.6 鼻黏膜取材及形態(tài)學(xué)觀察 取血后的大鼠，將之?dāng)囝^，分離上、下頜，取出鼻中隔黏膜，固定于10%的甲醛溶液中，石蠟包埋、切片，片厚約3μm，HE染色，光鏡下觀察鼻黏膜形態(tài)學(xué)變化。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較用t檢驗；多組間比較，方差齊者用單因素方差分析，組間用LSD-t檢驗；方差不齊者用Tamhane’sT2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠鼻部癥狀積分

模型組大鼠的鼻部癥狀積分＞5分（5.52±0.51），高于正常組（0.90±0.35），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明模型成功；經(jīng)鹽酸西替利嗪（2.53±0.37）、熱敏灸（2.88±0.40）及艾灸（3.67±0.50）干預(yù)后，各組大鼠癥狀積分均低于模型組（5.52±0.51），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；熱敏灸組與鹽酸西替利嗪組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；艾灸組與熱敏灸組、鹽酸西替利嗪組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 各組大鼠鼻黏膜組織的病理形態(tài)學(xué)變化

各組大鼠鼻黏膜HE染色后光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，正常組大鼠鼻黏膜組織結(jié)構(gòu)完整，無充血、水腫；模型組大鼠鼻黏膜明顯充血、水腫，有大量炎癥細(xì)胞浸潤，鼻黏膜表面纖毛破壞嚴(yán)重，腺體增生明顯。經(jīng)治療后，鹽酸西替利嗪組鼻黏膜輕度充血、水腫，少量炎癥細(xì)胞浸潤，鼻黏膜表面纖毛破壞輕；熱敏灸組鼻黏膜無明顯水腫，僅局部見輕度充血，有少量炎癥細(xì)胞浸潤，腺體增生輕，艾灸組大鼠鼻黏膜明顯充血、水腫，并且大量炎癥細(xì)胞浸潤，腺體增生明顯。見附圖。

2.3 各組大鼠血清IgE、IL-4含量變化

附圖 各組大鼠鼻黏膜組織病理形態(tài)學(xué)變化 （×200）

各組干預(yù)前大鼠血清IgE含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與本組造模前比較，模型組干預(yù)前后大鼠血清IgE、IL-4含量均升高（P＜0.05）。與本組干預(yù)前比較，各治療組干預(yù)后大鼠血清IgE、IL-4含量均降低（P＜0.05）。與正常組比較，模型組干預(yù)前后大鼠血清IgE、IL-4含量升高（P＜0.05）；經(jīng)治療后大鼠血清IgE、IL-4含量均降低。各組大鼠血清IgE含量與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），3個治療組中尤以鹽酸西替利嗪組降低最為明顯，與熱敏灸組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與艾灸組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；大鼠血清IL-4含量，鹽酸西替利嗪組、熱敏灸組與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），艾灸組與模型組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），3個治療組中尤以鹽酸西替利嗪組降低最為明顯，與熱敏組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與艾灸組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1、2。

表1 各組大鼠血清IgE含量變化 （n=10，μg/ml，x±s）

表2 各組大鼠血清IL-4含量變化 （n=10，pg/ml，x±s）

3 討論

IgE在AR發(fā)病機制中的作用已成定論：變應(yīng)原進(jìn)入機體后，被抗原呈遞細(xì)胞吞噬并激活B淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致變應(yīng)原特異性IgE的產(chǎn)生，IgE附著于肥大細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞表面，當(dāng)再次接觸變應(yīng)原后，IgE與受體結(jié)合交聯(lián)，激活肥大細(xì)胞、EOS釋放組胺和白三烯等炎癥遞質(zhì)，進(jìn)而刺激鼻黏膜引發(fā)鼻癢、噴嚏、流涕等癥狀[12]。IL-4主要是由抗原或絲裂原刺激的CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生，活化的肥大細(xì)胞亦可產(chǎn)生IL-4[13]。目前比較明確的是：IL-4是一個Ig類轉(zhuǎn)換因子，為B細(xì)胞提供了活化信號，使B細(xì)胞由產(chǎn)生IgM轉(zhuǎn)換成產(chǎn)生IgE抗體，促進(jìn)IgE的產(chǎn)生[14]。因此，IL-4為IgE的正性調(diào)節(jié)因子，是AR患者血清中IgE合成過多的原因，而研究表明[15]表明IL-4、IgE均參與AR的免疫發(fā)病機制，所以降低IL-4含量，減少IgE合成是防治AR的重要途徑之一[16]。

研究表明[10]，艾灸可通過調(diào)節(jié)機體免疫功能來改善肺通氣功能，尤其適用于變態(tài)反應(yīng)性疾病等。熱敏灸療法通過對熱敏化腧穴施以飽和灸量后能使灸效達(dá)到最大化。因此本實驗以O(shè)VA致敏和激發(fā)復(fù)制AR大鼠模型，選取“迎香”“風(fēng)池”“肺俞”“腎俞”[17]穴位進(jìn)行熱敏灸等治療，觀察AR大鼠鼻部癥狀積分、鼻黏膜病理組織學(xué)變化及檢測大鼠血清中IgE、IL-4含量變化。

李佳峰[18]、趙秀杰等[11]根據(jù)實驗動物的行為學(xué)表現(xiàn)建立了一套完整的評分系統(tǒng)，即噴嚏、抓鼻、鼻涕行為學(xué)表現(xiàn)量化，以疊加法記錄總分，行為學(xué)總分超過5分為造模成功。該方法在一定程度上簡化AR模型的評判過程，客觀上也能反映AR模型建立情況。從本實驗大鼠鼻部癥狀積分看，模型組鼻部癥狀積分＞5分，表明模型成功。而灸法及鹽酸西替利嗪均可減輕AR的發(fā)病癥狀，鹽酸西替利嗪組、熱敏灸組及艾灸組大鼠鼻部癥狀積分均＜5分，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，從鹽酸西替利嗪組大鼠鼻部癥狀積分看，熱敏灸組2種干預(yù)方法療效相當(dāng)，艾灸組與熱敏灸組、鹽酸西替利嗪組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，鹽酸西替利嗪和熱敏灸對減輕AR的發(fā)病癥狀比艾灸效果更為顯著。從AR大鼠鼻黏膜組織病理形態(tài)學(xué)看，鹽酸西替利嗪、熱敏灸干預(yù)后的效果也好于艾灸治療，均能夠抑制組織形態(tài)學(xué)改變，明顯減輕大鼠鼻黏膜充血、水腫癥狀，減少炎癥細(xì)胞浸潤及腺體增生，而艾灸后大鼠鼻黏膜還可見明顯充血、水腫，并且大量炎癥細(xì)胞浸潤，腺體增生明顯。從大鼠血清中的IgE、IL-4含量看，模型組較正常組升高，說明IgE、IL-4在AR發(fā)病機制中扮演著重要角色，這也與已發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)研究一致[12-16]。經(jīng)過鹽酸西替利嗪、熱敏灸及艾灸治療干預(yù)后，可以使異常升高的IL-4下降，從而使IgE的合成明顯下降，3組大鼠血清IgE含量與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，鹽酸西替利嗪組、熱敏灸組與模型組大鼠血清IL-4含量比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，艾灸組與模型組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。比較3種干預(yù)手段，鹽酸西替利嗪降低IgE、IL-4含量的效果最好，血清IgE含量與熱敏灸組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與艾灸組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義；血清IL-4含量與熱敏組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與艾灸組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

綜合分析實驗結(jié)果，對于AR的治療效果，鹽酸西替利嗪組是最好的，熱敏灸組總體療效雖然不如鹽酸西替利嗪組，但從AR大鼠的鼻部癥狀積分降低情況及鼻黏膜組織病變的控制效果來看均與鹽酸西替利嗪組相似，從總體治療效果看，較艾灸組更好。

綜上所述，熱敏灸治療AR大鼠的機制可能是通過降低IL-4的含量，從而降低IgE的水平達(dá)到治療目的。從AR大鼠發(fā)病癥狀等的改善效果看，熱敏灸明顯優(yōu)于艾灸，雖然熱敏灸總體療效較鹽酸西替利嗪稍差，但可避免因長期藥物治療引起的一系列不良反應(yīng)，因此治療意義仍非常重大。臨床上熱敏灸作為一種操作簡單、安全有效、綠色經(jīng)濟(jì)的治療方法，值得更好地研究發(fā)展與推廣。

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（張西倩 編輯）

Effects of heat-sensitive moxibustion on serum IgE and IL-4 content in rat with allergic rhinitis*

Pan-bi Chen,Jin Xuan,Lin-wei Shi,Jun-jun Li,Cong Cheng, Peng-ze Kang,Zi-yu Lin,Xiao-fang Yang
(College of Acupuncture and Massage,Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang,Guizhou 550002,China)

Objective To explore the effect of heat-sensitive moxibustion on serum IgE and IL-4 levels in rats with allergic rhinitis.Methods Fifty Wistar male rats were randomly divided into 5 groups with 10 rats in each group,i.e.normal group,model group,Cetirizine group,moxibustion group and heat-sensitive moxibustion group. The rat model of allergic rhinitis was established by egg-albumin systemic sensitization combined with local attacks. The symptoms in different groups were observed and the scores were calculated.The serum IgE and IL-4 levels were determined by ELISA.Results Compared with the normal group the symptom scores of the model group were significantly high(P＜0.05).The symptom scores of the treatment groups were significantly lower than those of the model group(P＜0.05).There were no significant differences in the symptom scores between the heat-sensitive moxibustion group and the Cetirizine group(P＞0.05).The Cetirizine group and the heat-sensitive moxibustion group were better than the moxibustion group(P＜0.05).Compared with the normal group,the levels of IgE and IL-4 in the model group were significantly increased (P＜0.05);however,the heat-sensitive moxibustion evidently decreased the levels of IgE and IL-4(P＜0.05).Conclusions Heat-sensitive moxibustion can reduce the serum content of IgE and IL-4 in AR rat,and reduce allergic inflammation of nasal mucosa.

heat-sensitive moxibustion;allergic rhinitis;IgE;interleukin-4

R-332

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.04.004

1005-8982（2017）04-0017-05

2016-06-13

2014年地方高校國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目[No：201410662002；貴中醫(yī)大學(xué)創(chuàng)合字（2014）02]；2014年貴陽中醫(yī)學(xué)院院內(nèi)科研基金項目[No：貴中醫(yī)科院內(nèi)（2014）63]；貴州省普通高等學(xué)校中醫(yī)絡(luò)病學(xué)基礎(chǔ)研究與臨床新技術(shù)開發(fā)創(chuàng)新人才團(tuán)隊[No：黔教合人才團(tuán)隊字（2014）63]

楊孝芳，E-mail：363110152@qq.com；Tel：13984096366