強力感冒片指紋圖譜的初步研究

魚光強，高曄珩

榆林市食品藥品檢驗所，陜西榆林719000

強力感冒片指紋圖譜的初步研究

魚光強，高曄珩△

榆林市食品藥品檢驗所，陜西榆林719000

目的：研究強力感冒片的HLPC指紋圖譜。方法：采用HLPC方法測定，色譜柱：KromasilODS-2 C18(250mm×4.6mm,5μm)；檢測波長：327 nm；流速：1.0mL/min;柱溫：25℃；乙腈-0.4%的磷酸水溶液(12:88)為流動相。結(jié)果：確定了7個共有峰，5批樣品每批處理兩份，10份樣品指紋圖譜的相似度均在0.9以上，綠原酸的線性范圍為0.03～0.33μg/mL,加樣回收率為101.27%。結(jié)論：所建立的HLPC簡便可靠，可用于強力感冒片的質(zhì)量控制。

強力感冒片；綠原酸；高效液相色譜法；指紋圖譜

中藥指紋圖譜的建立能比較全面地反映中藥所含化學(xué)成分的數(shù)量及種類，在現(xiàn)階段多數(shù)中藥有效成分沒有明確的情況下，指紋圖譜能有效表明中藥質(zhì)量，很大程度上提高中藥質(zhì)量檢測水平［1］。強力感冒片為常用感冒藥，主要由桔梗粉末以及金銀花、連翹等中藥提取物和對乙酰氨基酚按一定比例壓制而成，其標(biāo)準(zhǔn)為《部頒標(biāo)準(zhǔn)二十冊》［2］中收載的中西復(fù)方制劑，標(biāo)準(zhǔn)只對對乙酰氨基酚應(yīng)用紫外分光光度法進(jìn)行了定性、定量鑒別，作為復(fù)方制劑，中藥組分按中醫(yī)理論君、臣、佐、使配伍而成，中藥成分同樣起重要作用，由于成分過多，過去單一的質(zhì)量檢測控制，難以做到全面控制［3-5］。本研究采用高效液相色譜法，建立了5批強力感冒片樣品，每批處理兩份，建立了10份指紋圖譜，比較了不同批次強力感冒片的相似度，以期提高強力感冒片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀(島津LC-20AD)；紫外檢測器(島津SPD-2A)；高效液相色譜工作站(CBM-102)；電子分析天平(BSA224S賽多利斯)；超純水儀(重慶力德高端水處理設(shè)備有限公司，型號：LHP-18-Z)；甲醇(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司)；乙腈(色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司)；磷酸(色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司)。

1.2 對照品與樣品 綠原酸(中國藥物生物制品檢驗所，批號：110753-200413)；5批強力感冒片(榆林市食品藥品檢驗所抽檢科提供，批號：110700、110701、110705、110707、110709)。

1.3 方法與結(jié)果

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Kromasi lODS-2 C18(250mm×4.6mm，5μm)；檢測波長：327 nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；乙腈-0.4%的磷酸水溶液(12∶88)為流動相。

1.3.2 對照品溶液的制備 綠原酸對照品溶液制備：精密稱定0.003 0 g，放置100mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，完全溶解，即得。

1.3.3 供試品溶液的制備 取強力感冒片5片，去除薄膜衣，研細(xì)，精密稱取0.499 5 g，置100mL量瓶中，加50%甲醇適量，超聲30分鐘使溶解，放至室溫，定容搖勻，濾膜(0.45μm)即得。

1.3.4 參照峰選擇 綠原酸是該處方有效成分之一，在HLPC出峰時間適中穩(wěn)定，圖譜中峰面積大，所以選擇綠原酸為參照峰［6］。

1.3.5 方法學(xué)考察

1.3.5.1 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液1、3、5、7、9、11μL注入液相色譜儀，以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，得綠原酸線性范圍為0.03～0.33μg，回歸方程為Y=12312X+1129.2(r=0.9999)。

1.3.5.2 精密度實驗 精密吸取同一供試品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜峰。以綠原酸峰為參照峰，各共有色譜峰保留時間的RSD值均在0.5%以下，各共有峰相對峰面積間的RSD值均在5.0%以下，根據(jù)峰面積計算，綠原酸的RSD為 0.7%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

1.3.5.3 穩(wěn)定性實驗 精密吸取同一供試品溶液10μL，每間隔1小時進(jìn)樣1次，進(jìn)樣5次，記錄色譜峰。以綠原酸峰為參照峰，各共有色譜峰保留時間的RSD值均在0.5%以下，各共有峰相對峰面積的RSD值均在5.0%以下，根據(jù)峰面積計算，綠原酸的RSD為1.3%，結(jié)果表明穩(wěn)定性良好。

1.3.5.4 重復(fù)性實驗 取同一批樣品6份(批號：110700)，按供試品制備方法，記錄指紋圖譜。結(jié)果各共有色譜峰保留時間的RSD值均在0.5%以下，各共有峰相對峰面積的RSD值均在5.0%以下，根據(jù)峰面積計算，綠原酸的RSD為0.0%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

1.3.5.5 回收率實驗 取已知含量的樣品(批號：110700)約0.25 g，精密稱定，分別加入適量綠原酸，按“1.3.3”供試品溶液的制備方法操作，結(jié)果綠原酸平均加樣回收率為101.27%，RSD為0.20%，結(jié)果表明本方法回收率良好，見表1。

1.3.5.6 綠原酸含量 綠原酸含量的測定按照“1.3.3”供試品溶液的制備方法制備并測定，見表2。

表1 加樣回收率測定結(jié)果

表2 綠原酸含量測定結(jié)果

1.3.5.7 指紋圖譜的建立 將各供試品(批號：110700、110701、110705、110707、110709)按供試品溶液制備方法，每批處理兩份，注入液相色譜儀，測定各樣品的HLPC指紋圖譜，經(jīng)比較分析，確定7個色譜峰為強力感冒片的共有峰，通過與對照色譜(110700-1)對照，峰高最高者為綠原酸，見圖1。

圖1 供試品指紋圖譜

1.3.5.8 指紋圖譜相似度計算 本研究采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價》軟件(中國藥典委員會出版2.0A版)，5批樣品經(jīng)該軟件進(jìn)行相似度評價。以110700-1圖譜為參照圖譜，中位數(shù)法，時間窗0.5，多點校正后自動匹配，生成對照圖譜，5批樣品處理的10份供試品溶液的相似度均在0.9以上，結(jié)果見表3、圖2。

表3 指紋圖譜相似度

圖2 指紋圖譜相似度

2 討論

2.1 色譜條件的選擇 本研究以乙腈-水、乙腈-0.2mol/L磷酸水溶液及乙腈-0.4mol/L磷酸水溶液為流動相進(jìn)行實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加磷酸的峰

形較好，以0.4%的出峰分離度較好，所以選擇乙腈-0.4mol/L磷酸水溶液的流動相。樣品溶液在不同波長240、280、327 nm檢測，發(fā)現(xiàn)327nm有較強吸收，而且在此波長下，峰形較好，出峰數(shù)目適中，各峰的分離度較好，所以檢測波長為327 nm。

2.2 特征色譜峰的選擇 由于組方中金銀花的主要有效成分為綠原酸，具有較好的清熱、解毒、抗菌、抗病毒作用［7］，所以采用綠原酸作為控制強力感冒片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的特征色譜峰。

［1］ 江俊.中藥質(zhì)量評價新方法——中藥指紋圖譜［J］.湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2001，3(4)：11.

［2］ 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中藥成方制劑：第20冊［M］.北京：中華人民共和國衛(wèi)生部，1998：346.

［3］ 曹玲，王志剛，王連芝.色譜法在中藥指紋圖譜研究中的應(yīng)用［J］.中國當(dāng)代醫(yī)藥，2012，19(1)：16-17.

［4］ 王薇，康云鷹.論中藥指紋圖譜利弊及其應(yīng)用前景［J］.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2009，29(2)：70-72.

［5］ 魏雪芳，陳杰，李卓明.復(fù)方金銀花顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中成藥，2004，26(11)：900-904.

［6］ 張春玲，楊華.金銀花中總黃酮的提?。跩］.美中國際創(chuàng)傷雜志，2005，4(2):51-52.

［7］ 侯媛芳.鼻炎片中升麻苷、歐前胡素的含量測定及防風(fēng)藥材指紋圖譜的研究［D］.廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2011.

Prelim inary Study on Fingerprintsof QiangLi GanMao Tablets

YU Guangqiang,GAO Yeheng△
Yulin Institute of Food and Drug Control,Yulin 719000,China

Objective:To investigate the fingerprints of QiangLi GanMao tablets by HPLC.Methods:The HPLCmethod wasadopted to detectw ith the conditionsof chromatographic column being KromasilODS-2 C18(250 mm×4.6mm,5μm),detection wavelength 327 nm,flow speed 1.0 m L/m in,column temperature 25℃aswell as mobile phase being CH3CN-0.4%H3PO4(12/88).Results:Seven common peaks consisted in the fingerprintsof five batches of sampleswhich were divided into two groups.Finally,the sim ilarity of ten fingerprintswas over 0.9,the linear rangeof chlorogenic acid was from 0.03 ug to 0.33μg/m L and the recovery of chlorogenic acid was101.27%. Conclusion:The HPLCmethod applied is simple,convenientand reliable and can be used to control the quality of QiangLiGanMao tablets.

QiangLiGanMao tablets;Chlorogenic acid;HPLC;fingerprint

R284.11

A

1004-6852(2015)01-0023-03

2013-12-29

魚光強(1986—)，男，碩士學(xué)位，藥師。研究方向：中藥提取。

△通訊作者：高曄珩(1962—)，女，主任藥師。研究方向：中藥鑒定。