中國-東盟進(jìn)出口水果中殺蟲雙殘留量測定

凌經(jīng)昌，譚 靈，蔣新英，劉曉松，吳玉杰

（1.憑祥出入境檢驗檢疫局，廣西憑祥 532600；2.廣西出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心，廣西南寧 530028）

中國-東盟進(jìn)出口水果中殺蟲雙殘留量測定

凌經(jīng)昌1，譚 靈1，蔣新英1，劉曉松2，吳玉杰2

（1.憑祥出入境檢驗檢疫局，廣西憑祥 532600；2.廣西出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心，廣西南寧 530028）

殺蟲雙是一種沙蠶毒素類殺蟲劑。為建立一種適合中國-東盟進(jìn)出口水果殺蟲雙殘留量測定的方法，試驗樣品經(jīng)鹽酸溶液提取、硫化鈉溶液衍生化、萃取凈化，采用氣相色譜法（GC-FPD，S濾光片）測定殺蟲雙殘留量，并通過氣相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行驗證。結(jié)果表明，在0.01～0.05 mg/kg添加水平范圍內(nèi)，殺蟲雙的平均添加回收率為73.4%～103.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%～5.7%，最小檢出量（MDL）為0.001 mg/L。該方法的雜質(zhì)干擾少，準(zhǔn)確性和靈敏度均滿足水果中殺蟲雙殘留量測定的要求。

殺蟲雙；中國-東盟；水果

0 引言

殺蟲雙是我國自行開發(fā)的一個農(nóng)藥新品種，是沙蠶毒素衍生物[1]，于1976年被貴州化工研究所等單位開發(fā)[2]。該類農(nóng)藥具有高效、低毒、安全和有一定選擇殺蟲作用等許多優(yōu)點，經(jīng)過20多個省、市的大田藥效試驗，證明殺蟲雙對水稻、麥類、蔬菜、果樹等多種農(nóng)作物主要害蟲均有良好的防治作用[3]。目前，殺蟲雙的檢測方法主要有非水滴定法、薄層-溴化法[4]、高效液相色譜法[5-6]、化學(xué)反應(yīng)-氣相色譜法[7-8]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[9-10]、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[11]。相對而言，與其他農(nóng)藥殘留的研究相比，關(guān)于殺蟲雙在水果等作物中殘留量研究檢測方面文獻(xiàn)報道較少。

殺蟲雙是一種雙鈉鹽，在水溶液中的溶解度很大，易溶于甲醇和熱乙醇[11]，因此農(nóng)產(chǎn)品中殘留的殺蟲雙難以提取到有機溶劑中，難以提取濃縮和檢測。試驗選擇化學(xué)反應(yīng)-氣相色譜法對殺蟲雙含量進(jìn)行檢測，將樣品中的殺蟲雙在堿性條件下轉(zhuǎn)化為沙蠶毒素[13]，通過氣相色譜（GC-FPD，S濾光片） 進(jìn)行檢測，測定進(jìn)出口水果樣品中的殺蟲雙殘留量，用氣相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行驗證試驗。對殺蟲雙在水果上前處理條件和色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，使測定的平行性好，縮短了分析時間，此方法操作簡單、定量準(zhǔn)確，為殺蟲雙在水果上的殘留檢測提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

儀器：GC-2014型氣相色譜儀、帶硫磷檢測器（FPD）、Rtx-1701型30 m×0.25 mm×0.25 μm石英毛細(xì)管柱、恒溫水浴鍋、組織搗碎機、離心機、混勻器、恒溫水浴鍋等。

驗證試驗采用儀器：安捷倫7890A-5795型質(zhì)譜儀（MSD），安捷倫HP-5型色譜柱。

試劑：乙酸乙酯，色譜純；甲醇、鹽酸為優(yōu)級純；氫氧化鈉、硫化鈉，分析純。經(jīng)空白試驗氣相色譜檢驗無被測組分。

殺蟲雙標(biāo)樣：質(zhì)量濃度為100 μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所研制。

1.2 樣品前處理

1.2.1 提取

稱取5.0 g試樣（精確到0.001 g） 于15 mL具塞離心管中，加入約10 mL 0.1 mol/L的鹽酸溶液，在振蕩器上振蕩提取30 min后，以轉(zhuǎn)速3 500 r/min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)入50 mL離心管。殘渣再按上述步驟提取2次，合并提取液。

1.2.2 衍生化

用0.1 mol/L的鹽酸溶液和0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)上述濾液的pH值至8.5～9.0，加入2 mL 0.1 mol/L硫化鈉溶液（新配），在70℃水浴中保溫2 h（或放置過夜）。此步操作，標(biāo)準(zhǔn)系列與樣品提取液同時進(jìn)行。

1.2.3 凈化

在反應(yīng)管中加入適量氯化鈉，搖勻，加等量試樣溶液體積的乙酸乙酯，振搖使萃取完全，靜置分層，將乙酸乙酯層經(jīng)無水硫酸鈉濾入旋轉(zhuǎn)濃縮瓶中。再用乙酸乙酯萃取試樣溶液2次，同樣經(jīng)無水硫酸鈉濾入旋轉(zhuǎn)濃縮瓶中。

1.2.4 濃縮

于45℃水浴上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙酸乙酯，直至瓶中剩余少許時立即取出，殘渣用甲醇溶解并定容至1 mL，過0.22 μm濾膜后裝瓶，供GC-FPD測定（S濾光片）和氣相色譜-質(zhì)譜儀使用。

1.3 色譜條件

1.3.1 氣相色譜條件

進(jìn)樣體積1 μL，無分流，島津Rtx-1701型30 m× 0.25 mm×0.25 μm石英毛細(xì)管色譜柱，初始溫度80℃，保留1 min，以30℃/min升至140℃，保留1 min，再以20℃/min升至230℃，保留5 min，程序總時間13.5 min，進(jìn)樣口溫度220℃，檢測器（FPD，S濾光片）溫度250℃。在此色譜條件下，沙蠶毒素的保留時間為11.631 min。

殺蟲雙標(biāo)準(zhǔn)品（10 μg/L）衍生化成沙蠶毒素的色譜圖見圖1。

1.3.2 氣相色譜-質(zhì)譜儀條件

儀器：安捷倫7890A-5795型質(zhì)譜儀，安捷倫HP-5型色譜柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm），進(jìn)樣量1μL，無分流，溶劑延遲4 min，進(jìn)樣口溫度250℃，MSD接口溫度280℃，離子源溫度230℃；升溫程序為初始溫度70℃，保留2 min，以20℃/min升至230℃，保持7 min。在此色譜條件下，沙蠶毒素的保留時間為9.256 min。選擇離子監(jiān)測：殺蠶毒素的分子量為149，選擇149為定量離子和104，223為定性離子。

殺蟲雙標(biāo)準(zhǔn)品（10 μg/L）衍生化成沙蠶毒素的質(zhì)譜圖見圖2，殺蟲雙標(biāo)準(zhǔn)品衍生化成沙蠶毒素的離子譜圖見圖3。

圖1 殺蟲雙標(biāo)準(zhǔn)品（10 μg/L）衍生化成沙蠶毒素的色譜圖

圖2 殺蟲雙標(biāo)準(zhǔn)品（10 μg/L）衍生化成沙蠶毒素的質(zhì)譜圖

圖3 殺蟲雙標(biāo)準(zhǔn)品衍生化成沙蠶毒素的離子譜圖

1.4 線性關(guān)系與檢出限

（1）線性相關(guān)性。提取的樣品溶液為溶劑，配置殺蟲雙系列標(biāo)準(zhǔn)溶液：0，10，20，30，40，50 μg/L，以所得響應(yīng)值（峰面積）Y的對數(shù)與質(zhì)量濃度X進(jìn)行回歸分析。得到的回歸曲線為lgY=0.004 4X+6.675 7，線性相關(guān)系數(shù)為0.996 8，線性關(guān)系良好。

殺蟲雙標(biāo)準(zhǔn)系列峰面積及對數(shù)見表1，沙蠶毒標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖4。

（2）關(guān)于檢出限的確定。以噪音信號的10倍確定方法的定量下限，結(jié)合樣品的稱樣量和最終定容體積，殺蟲雙在水果中的檢出限為1 μg/kg。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理方法的選擇

（1）提取劑的選擇。依反應(yīng)方程計算，為充分提取，5.0 g水果樣品中加入了10 mL不同濃度（0.1，0.2，0.5 mol/L）的鹽酸溶液提取2次，加標(biāo)回收率都在75%～103%，表明鹽酸溶液的濃度對水果提取回收率的影響不大，因而選擇0.1 mol/L的鹽酸溶液作為提取劑。

表1 殺蟲雙標(biāo)準(zhǔn)系列峰面積及對數(shù)

圖4 沙蠶毒標(biāo)準(zhǔn)曲線

（2）萃取劑的選擇。根據(jù)文獻(xiàn)分別使用了石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷作為萃取劑[7]，比較萃取效果。試驗結(jié)果表明，3種溶劑提取回收率均在90%以上。石油醚提取分析譜圖出現(xiàn)少量雜峰，三氯甲烷和乙酸乙酯的萃取效果較好且能得到更為理想的峰形，考慮到三氯甲烷屬易制毒試劑，購買時需要嚴(yán)格審批，故最終選擇乙酸乙酯作為萃取試劑，用甲醇置換。

（3）衍生化條件的選擇。根據(jù)文獻(xiàn)[8]對比了不同pH值、加入的衍生化試劑硫化鈉溶液的濃度和用量，以及衍生化反應(yīng)所需要的時間對衍生化反應(yīng)的影響。試驗表明，水果樣品衍生化在溶液的pH值為8.5～9.0時，加入衍生化試劑2 mL 0.2 mol/L的硫化鈉溶液，放置8 h以上，衍生化產(chǎn)物和穩(wěn)定性可以滿足要求，考慮到試驗的統(tǒng)籌安排，選擇靜置過夜（8～12 h）。

2.2 回收率和精密度試驗

以火龍果、西瓜、葡萄、毛荔枝、柑橘、柿子、龍眼、哈密瓜為樣品，用以上討論試驗方法分別進(jìn)行殺蟲雙加標(biāo)回收試驗及空白基質(zhì)加標(biāo)試驗。室內(nèi)回收率試驗選擇包括測定低限和最高殘留限量在內(nèi)的3個不同水平，每個水平測定6次。

回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果（n=6）見表2。

從以上的試驗可以看出線性范圍良好，從表2中可看出，當(dāng)樣品中殺蟲雙添加水平為0.01～0.05 mg/kg時，在8種進(jìn)出口水果中的回收率為73.4%～103.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%～5.7%。在上述儀器條件下，殺蟲雙最小檢出量為1.2×10-9g。

表2 回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果（n=6）

3 結(jié)論

建立了一種用鹽酸溶液提取、加入硫化鈉溶液衍生化測定中國-東盟進(jìn)出口水果中殺蟲雙殘留量的方法，此方法操作簡單，準(zhǔn)確性及靈敏度均滿足農(nóng)藥殘留檢測的要求。

[1]唐太斌.沙蠶毒系新型殺蟲劑：殺蟲雙的研究 [J].農(nóng)藥，1980（4）：12-16．

[2]唐太斌．沙蠶毒系農(nóng)藥研究與應(yīng)用展望 [J].貴州化工，1984（1）：40-49．

[3]劉乾開，朱國念．新編農(nóng)藥使用手冊 [M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：453-454.

[4]陳夏嬌，許加文.殺蟲雙水劑3種分析方法的比較 [J].廣西植保，2002，15（1）：3-5.

[5]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB/T 14929.8—1994大米中殺蟲雙殘留量測定方法 [S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，1994.

[6]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.GB 8200—2001殺蟲雙水劑 [S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2001.

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[8]李曉娜，李雄，劉龍騰，等.氣相色譜法測定水稻上的殺蟲雙 [J].廣州化工，2012（23）：105-106，154.

[9]張曉波．氣相色譜－質(zhì)譜法分析鑒定魚體內(nèi)殺蟲雙 [J].理化檢驗-化學(xué)分冊，2005，41（9）：633-635．

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[11]黃健祥，路大海，丁晨紅，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定甘蔗中殺蟲雙殘留量 [J].食品科學(xué)，2015（16）：253-255.

[12]蔡馬，姜建國，賀立紅，等.殺蟲雙對杜氏鹽藻生長和生理生化的影響 [J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2013（1）：73-77.

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Determination of Dimehypo in the Fruit Trade of Import and Export from China-ASEAN

LING Jingchang1，TAN Ling1，JIANG Xinying1，LIU Xiaosong2，WU Yujie2
（1.Pingxiang Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau，Pingxiang，Guangxi 532600，China；2.Technology Center of Guangxi Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau，Nanning，Guangxi 530028，China）

Dimehypo is a kind of pesticide belongs to nereistoxin.A suitable method for determination of dimehypo residues in the fruit trade of import and export from China-ASEAN is established.The samples are extracted by hydrochloric acid solution，after derivatization by sodium sulfide solution，extraction and purification，then determined by gas chromatography（GCFPD，S filter），and confirmed by GC-MS.The results show that the average recovery rate is 73.4%～103.3%and the relative standard deviation is 1.1%～5.7%in the range of 0.01～0.05 mg/kg.MDL of the method is 0.001 mg/L.The accuracy and sensitivity of the method are satisfied with determination of dimehypo residues in fruits.

dimehypo；China-ASEAN；fruit

TS255.7

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.01.054

1671-9646（2017）01b-0056-03

2016-11-16

質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項項目（201410080）；廣西檢驗檢疫科技項目（2012GXCIQ004）。

凌經(jīng)昌（1974— ），男，碩士，工程師，研究方向為進(jìn)出口食品安全檢測。