花蕾期延長(zhǎng)型金銀花揮發(fā)性成分研究

張靜茹 +白根本++李衛(wèi)東 張忠爽

[摘要]以傳統(tǒng)金銀花品種大毛花為對(duì)照，采用頂空固相微萃取氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，分析比較花蕾期延長(zhǎng)型北花1號(hào)品種金銀花的揮發(fā)性成分。采用面積歸一化法測(cè)定其揮發(fā)性成分相對(duì)含量，共鑒定出52種揮發(fā)性成分，其中北花1號(hào)39種，大毛花33種，二者共有成分20種。北花1號(hào)在醇類、烴類含量上顯著高于大毛花，而在酮類含量上顯著低于大毛花，其中煙酸甲酯，棕櫚酸甲酯，苯乙酮，己酸等20種化合物只在北花1號(hào)品種檢測(cè)到。

[關(guān)鍵詞]花蕾期延長(zhǎng)； 金銀花； 揮發(fā)性； 頂空固相微萃取

Study on volatile components of Lonicerae Japonicae

Flos in bud stage extended type

ZHANG Jingru1，2， BAI Genben1，2， LI Weidong1，2*， ZHANG Zhongshuang1，2， GU Jinrui1，2， ZHANG Caiqiao1，2

（1 School of Chinese Materia Medica， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100102， China；

2 Engineering Research Center of Good Agricultural Practice for Chinese Crude Drugs of Education Ministry，

Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100102， China）

[Abstract]Volatile components of Lonicerae Japonicae Flos in bud stage extended type Beihua 1 were determined by the headspace solidphase microextraction， compared with traditional cultivar Damaohua There are fiftytwo volatile compounds were identified and the relative content of the volatiles was calculated by the area normalization method Thirtynine compounds were found in Beihua 1， whereas thirtythree components in Damaohua Total twenty identical compounds existed in Beihua 1 and Damaohua The contents of alcohols and hydrocarbons of Beihua 1 were higher significantly than that of Damaohua， while significantly lower than that of Damaohua in ketones content Besides， twenty components were only detected in Beihua 1， such as methyl nicotinate， hexadecanoic acid， methyl ester，acetophenone， nonanoic acid

[Key words]bud stage extended； Lonicerae Japonicae Flos； volatile； HSSPME

doi：10.4268/cjcmm20162308

金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb的干燥花蕾或帶初開的花，具有清熱解毒，疏散風(fēng)熱的功能[1]。作為大宗藥材，也是重要的“藥食同源”藥材的金銀花，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健品、食品、日化用品等領(lǐng)域，特別是在抗擊“非典”、“甲流”、“禽流感”等溫病中發(fā)揮了巨大作用。但是，金銀花是忍冬的干燥花蕾，開放前花蕾的采摘費(fèi)時(shí)費(fèi)工，已成為制約金銀花產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重大問題。

山東平邑是金銀花的道地產(chǎn)區(qū)，以農(nóng)家品種大毛花栽培為主，在采摘期該品種每天都要搶收，否則大白針花蕾很快開放則失去了藥用價(jià)值。2012年在大毛花品種中選育出一株花蕾期持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)的自然變異類型（定名北花1號(hào)，正在申報(bào)品種審定），目前經(jīng)大田種植試驗(yàn)表明，北花1號(hào)農(nóng)藝性狀已穩(wěn)定，花開放前的大白針花蕾持續(xù)時(shí)間達(dá)10～14 d，不用每天去搶收，能夠做到集中采摘，大大提高了工效?；ɡ倨诔掷m(xù)時(shí)間長(zhǎng)的優(yōu)良品種的培育解決了金銀花產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸，為金銀花產(chǎn)業(yè)升級(jí)奠定了基礎(chǔ)。

本課題組研究表明，北花1號(hào)與大毛花品種間的HPLC指紋圖譜整體相似度高達(dá)097以上，認(rèn)為二者在化學(xué)組分方面相一致[2]。本研究以傳統(tǒng)品種大毛花為對(duì)照，采用頂空固相微萃取氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（HSSPMEGC/MS）的方法，分析北花1號(hào)金銀花的揮發(fā)油成分，并鑒定比較揮發(fā)性成分的組成含量差異。

1材料

金銀花品種為北花1號(hào)，以農(nóng)家品種大毛花為對(duì)照，試驗(yàn)地點(diǎn)在山東省平邑縣鄭城鎮(zhèn)，試驗(yàn)田采用統(tǒng)一管理，管理水平中等。大毛花金銀花花蕾為大白針采摘，北花1號(hào)在大白針花蕾持續(xù)7 d時(shí)采摘，二者干燥方法均為曬干，樣品重復(fù)3次，于-20 ℃條件儲(chǔ)存。樣品由北京中醫(yī)藥大學(xué)李衛(wèi)東研究員鑒定為忍冬科植物忍冬L japonica的干燥花蕾。

Agilent 7980 A 配置5975 C 四級(jí)桿質(zhì)譜儀 （美國(guó)Agilent 公司），色譜柱：DB17MS 毛細(xì)管柱 （025 μm×025 mm×30 m；J&W，F(xiàn)olsom，CA），SPME裝置：二乙烯碳分子篩聚二甲基硅氧烷萃取頭（DVB/CAR/PDMS 50/30 μm）（美國(guó)Supelco公司）

2方法

21SPME取樣樣品粉碎后過篩，稱取100 mg樣品粉末于15 mL的頂空瓶中，于70 ℃，500 r·min-1攪拌平衡30 min，萃取50 min，250 ℃解吸附4 min，進(jìn)樣。

22色譜條件色譜柱初始溫度50 ℃（保持1 min），以1 ℃·min-1升溫至75 ℃（保持1 min），以3 ℃·min-1升溫至120 ℃·min-1（保持1 min），再以4 ℃·min-1升溫至200 ℃（保持1 min），最后以8 ℃·min-1升溫至250 ℃（保持5 min）。He載氣流速1 mL·min-1，分流進(jìn)樣，分流比為5∶1。

23質(zhì)譜條件EI離子源70 eV，離子源溫度為230 ℃，傳輸線溫度280 ℃。質(zhì)譜掃描范圍m/z 30～300。

24保留指數(shù)精密移取C7C30的正構(gòu)烷烴對(duì)照品10 μL用來(lái)測(cè)定保留指數(shù)，按照2.2項(xiàng)下分析，記錄保留時(shí)間，運(yùn)用線性升溫公式來(lái)計(jì)算組分的KI值，tx，tn，tn+1分別是待測(cè)組分和C原子數(shù)目處于n和n+1之間的組分的保留時(shí)間。

KI=100n+100（tx-tn）tn+1-tn

3結(jié)果

利用峰面積歸一化法確定各組分的相對(duì)含量，經(jīng)過質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)NIST98和Wiley 6檢索選取匹配度大于80的化合物，并結(jié)合保留指數(shù)和已有的報(bào)道結(jié)果進(jìn)行定性分析，分析揮發(fā)性成分，共鑒定出52種化合物成分，總離子流圖見圖1，結(jié)果見表1。

北花1號(hào)金銀花鑒定出39種揮發(fā)性成分，其中醇、烴類和酯類是主要成分，含量較高的化合物有棕櫚酸乙酯（5%）、1辛醇（39%）、苯乙醇（43%）、十六烷（45%）。大毛花金銀花有33種揮發(fā)性成分，醇、酮、烴和酯類是主要成分，含量高的主要成分有苯乙醇（93%）、反式3，5辛二烯酮（43%）、4氫吡喃酮2，3二氫3，5二羥基6甲基（40%），二者共有成分20種。二者的差異主要體現(xiàn)在以下幾方面：①在醇類化合物中，二者所含的化合物種類差別不大，但北花1號(hào)所含的醇類化合物含量

（3258×107）是大毛花金銀花醇類化合物（1746×107）約2倍。醇類中的雪松醇有鎮(zhèn)靜、抗菌的作用[3]，但雪松醇在北花1號(hào)品種中未檢測(cè)到。②在醛類化合物中，北花1號(hào)只檢測(cè)到1種化合物，但醛類化合物在二者中均不是主要成分。③大毛花金銀花中酮類化合物的含量（951×107）是北花1號(hào)金銀花酮類化合物含量（331×107）的3倍。酮類中的β紫羅酮能夠抑制癌細(xì)胞[4]，北花1號(hào)中β紫羅酮含量（247×107）是大毛花（066×107）的4倍多。④烴類化合物是二者的主要成分，北花1號(hào)的烴類相對(duì)含量為4690×107，大毛花金銀花中相對(duì)含量為1170×107，二者間達(dá)到顯著差異。北花1號(hào)中檢測(cè)到的烴類物質(zhì)種類比大毛花金銀花中多，多出的揮發(fā)性成分包括壬基環(huán)丙烷，d蓽澄茄烯，2，6，10，14四甲基十五烷，環(huán)十六烷，十七烷。⑤北花1號(hào)和大毛花金銀花中所含的酸類物質(zhì)均占少量，分別為03%，04%，其中大毛花中不含己酸。⑥酯類化合物含量在北花1號(hào)與大毛花品種間無(wú)顯著差異。但煙酸甲酯、酞酸二乙酯、棕櫚酸甲酯、苯甲酸卞酯、苯甲酸（Z）3己烯酯、鄰苯二甲酸異丁基壬酯只在北花1號(hào)中檢測(cè)到。棕櫚酸甲酯可以作為表面活性劑及其他精細(xì)化工產(chǎn)品的重要原料和中間體[5]，還可以用于開發(fā)新型農(nóng)藥[6]。⑦其他類的化合物中，主要是苯及其化合物，北花1號(hào)與大毛花在含量上無(wú)顯著差異。萘、甲氧基苯肟、苯并噻唑、2，6二甲基萘、1，4，5三甲基萘、二乙甲苯酰胺、2，2′，5，5′，四甲基聯(lián)苯在大毛花中未檢測(cè)到，見圖2。

4結(jié)論

北花1號(hào)揮發(fā)性成分39種，比大毛花品種多出6種，二者共有成分20種。與傳統(tǒng)金銀花品種大毛花相比，北花1號(hào)的揮發(fā)性成分差異較大，特別是在醇類、烴類含量上顯著高于大毛花，而在酮類含量上顯著低于大毛花。北花1號(hào)金銀花的藥理藥效及毒理、其臨床療效等問題有待深入研究。

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[責(zé)任編輯呂冬梅]