華南木姜子的1個(gè)新苯乙烯二聚體衍生物

王亞男+王玲燕+曲郁虹+姜明+武玉卓+李瑞+邱博琳+王素娟+林生

[摘要]通過(guò)正相硅膠、Sephadex LH-20和反相HPLC色譜分離方法相結(jié)合，從華南木姜子樹(shù)枝乙醇提取物的乙酸乙酯部位中分離得到1個(gè)新苯乙烯二聚體衍生物（1），經(jīng)IR，UV， MS和NMR（1D和2D NMR）波譜學(xué)方法鑒定為（E）-2，4-雙（對(duì)-羥基苯基）-2-丁烯醇[（E）-2，4-bis（p-hydroxyphenyl）-2-butenol]，命名為木姜子醇（listeanol）。在1×10^-5mol · L^-1濃度下，它在腫瘤細(xì)胞毒（MTT法，HCT-8，Bel-7402，BGC-823，A549，A2780細(xì)胞株）、抗氧化（Fe^2+_Cys誘導(dǎo)大鼠肝微粒體脂質(zhì)過(guò)氧化模型）、神經(jīng)保護(hù)（去血清和谷氨酸損傷模型）和抗糖尿?。≒TPIB酶抑制模型）體外模型上均未顯示出顯著藥理活性。

[關(guān)鍵詞] 華南木姜子； 化學(xué)成分； 苯乙烯二聚體衍生物

[Abstract] A new styrene dimer derivative has been isolated from the branch of Litsea greenmaniana by column chromatography over silica gel and Sephadex LH-20， as well as semi-preparative HPLC. Its structure was identified by spectroscopic data analysis （MS， UV， IR， 1D and 2D NMR） as （E）-2，4-bis（p-hydroxyphenyl）-2-butenol， named as listeanol. At a concentration of 1×10^-5 mol·L^-1， compound 1 was inactive in the assays， including cytotoxicity against human tumor cell lines （HCT-8， Bel-7402， BGC-823， A549 and A2780）， antioxidant activity in Fe²⁺-cystine-induced rat liver microsomal lipid peroxidation， neuroprotective activity against serum deprivation or glutamate induced neurotoxicity in cultures of PC12 cells， and the inhibitory activity against protein tyrosine phosphatase 1B （PTP1B）.

[Key words] Litsea greenmaniana； chemical constituents； styrene dimer derivative

樟科Lauraceae木姜子Litsea屬植物全世界約有200余種，在我國(guó)約有72種18變種和3變型，是我國(guó)樟科中種類較多，分布較廣的屬之一^[1]。本屬植物入藥的達(dá)17種，如山雞椒L. cubeba的果實(shí)和枝葉具有溫中散寒、消腫化瘀、行氣止痛的功效，其干燥成熟果實(shí)又稱畢澄茄，收載于2015年版《中國(guó)藥典》^[2]；楊葉木姜子L. populifoliu民間用于胃寒腹痛、食滯飽脹的治療；木姜子L. pungens和宜昌木姜子L. ichangensis均用于風(fēng)寒濕痛、跌打腫痛和食積氣滯的治療，外用于瘡毒腫痛；豺皮樟L. rotundifolia對(duì)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腰腿疼、痛經(jīng)和消化不良有療效^[3]。華南木姜子L. greenmaniana多生于山谷雜木林中，海拔1 200 m以下，在我國(guó)的廣東、廣西、福建分布較廣^[4]。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)未見(jiàn)華南木姜子藥理活性和化學(xué)成分的研究報(bào)道。為了深入研究華南木姜子中的活性成分，作者前期已對(duì)華南木姜子的木脂素、多巴胺和阿樸菲生物堿類成分進(jìn)行了研究^[5-6]，本文報(bào)道從華南木姜子95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位中分離得到的1個(gè)新的苯乙烯二聚體衍生物，（E）-2，4-雙（對(duì)-羥基苯基）-2-丁烯醇（1），命名為木姜子醇（listeanol）。

1 材料

Micromass Auto spc-Ultima ETOF質(zhì)譜儀（美國(guó)Micromass公司），Nicolet 5700 FT-IR紅外光譜儀（溴化鉀壓片），Inova-500型核磁共振光譜儀（美國(guó)Varian公司），Agilent HP1100型高效液相色譜儀，Rp C₁₈ （10 mm×250 mm，5 μm）半制備型HPLC色譜柱 （Agilent公司），羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20 （Amersham Biosciences），色譜用硅膠和硅膠預(yù)制板（青島海洋化工集團(tuán)公司）。所用試劑若無(wú)特別說(shuō)明均購(gòu)自北京化工廠，級(jí)別為分析純或色譜純。

華南木姜子枝于2006年8月采自廣西大瑤山，由廣西林業(yè)局龍光日工程師鑒定為華南木姜子L. greenmaniana，標(biāo)本現(xiàn)存于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所植物標(biāo)本室（YG06010）。

2 提取分離

華南木姜子枝1.5 kg 用95%乙醇回流提取3次，每次3 h，提取液減壓濃縮得浸膏94.4 g。將浸膏分散于500 mL水中，用乙酸乙酯（1∶1）萃取5次，萃取液合并濃縮，得乙酸乙酯相（49.0 g）和水相（12.3 g）。乙酸乙酯相拌樣，經(jīng)硅膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇（100∶1～1∶1）梯度洗脫，洗脫液經(jīng)薄層色譜檢測(cè)，合并相同組分，回收溶劑得到A～K共12個(gè)組分。E組分經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，氯仿-甲醇（1∶1）洗脫，洗脫液經(jīng)薄層色譜檢測(cè)，合并相同組分，回收溶劑得E1-E5。E3經(jīng)反相HPLC半制備色譜純化分離（甲醇-水70∶30，2 mL·min^-1），得化合物1（12 mg，tR =16.8 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 黃色油狀物，UV （MeOH） λ_max （logε） nm： 205，227，277 （sh）； IR （KBr） ν_max 3 404，3 231，3 026，2 893，1 609，1 597，1 514，1 452，1 363，1 248，1 175，1 001，938，843，783 cm^-1。表明結(jié)構(gòu)中存在有羥基和芳環(huán)基團(tuán)。（-）-ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z 255 [M-H]^-和511 [2M-H]^-，高分辨（-）-ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子的精確質(zhì)核比為m/z 255.102 4 [M-H]^-（計(jì)算值255.102 7，分子式為C₁₆H₁₅O₃），提示1的分子組成為C₁₆H₁₆O₃，不飽和度為9。化合物1 的1H-NMR （Me₂CO-D₆，500 MHz） 譜顯示可歸屬于2組AA′BB′偶合的苯環(huán)質(zhì)子共振信號(hào)δ_H 6.97 （2H，d，J=9.0 Hz，H-6，10），6.72 （2H，d，J=9.0 Hz，H-7，9），7.10 （2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′）和6.82 （2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′），1個(gè)三取代烯烴質(zhì)子信號(hào)δ_H 5.81 （1H，t，J=8.0 Hz，H-3），2個(gè)亞甲基質(zhì)子信號(hào)δ_H 4.23 （2H，d，J=6.5 Hz，H-1）和3.24 （2H，d，J=8.0 Hz，H-4），以及2個(gè)酚羥基和1個(gè)醇羥基活潑氫質(zhì)子信號(hào)δ_H 8.28，8.04 （each 1H，s，4′，8-OH），δ_H 3.84 （1H，t，J=6.0 Hz，1-OH）。由以上數(shù)據(jù)結(jié)合其¹³C-NMR數(shù)據(jù)推斷化合物1為含有2個(gè)對(duì)羥基取代苯基，1個(gè)三取代雙鍵，1個(gè)連氧亞甲基和1個(gè)非連氧亞甲基片段，見(jiàn)表1。

通過(guò)HSQC對(duì)化合物1的¹H和¹³C-NMR進(jìn)行準(zhǔn)確歸屬后，其結(jié)構(gòu)通過(guò)HMBC進(jìn)行確證，見(jiàn)圖1。在化合物1的HMBC譜中，δ_H8.04 （1H，s，8-OH）與δ_C156.4 （C-8）、116.0 （C-7，9）存在相關(guān)；δ_H8.28 （1H，s，4′-OH）與δ_C157.3 （C-4′）、115.7 （C-3′，5′）存在相關(guān)，同時(shí)結(jié)合他們的化學(xué)位移，證實(shí)了2個(gè)對(duì)羥基取代苯基的存在。烯烴質(zhì)子H-3與C-1和C-4、C-5和C-1′存在相關(guān)；H-1與C-1′、C-3存在相關(guān)；H-4與C-2，C-3和C-6（C-10）存在相關(guān)；H-2′（H-6′）與C-2的相關(guān)，以及1-OH與C-1和C-2的相關(guān)，結(jié)合這些質(zhì)子和碳的化學(xué)位移以及質(zhì)子的偶合方式，確定化合物1的結(jié)構(gòu)為2，4-雙（4-羥基苯）-2-丁烯醇。其雙鍵的構(gòu)型進(jìn)一步通過(guò)一維NOE差譜進(jìn)行確定，見(jiàn)圖1。當(dāng)照射烯烴質(zhì)子H-3，顯示H₂-1有增益；照射H-4，顯示H-2′和H-6′分別存在增益，說(shuō)明烯氫（H-3）與連氧亞甲基（H-1）處于雙鍵同側(cè)，而非連氧亞甲基（H-4）與對(duì)羥基苯基處于雙鍵的另一側(cè)。綜上所述，化合物確定為（E）-2，4-雙（對(duì)-羥基苯基）-2-丁烯醇[（E）-2，4-bis（p-hydroxyphenyl）-2-butenol]，命名為木姜子醇（listeanol）。

化合物1分別進(jìn)行了抗腫瘤（MTT法，HCT-8，Bel-7402，BGC-823，A549，A2780細(xì)胞株）^[7]、抗氧化（Fe²⁺-Cys誘導(dǎo)大鼠肝微粒體脂質(zhì)過(guò)氧化模型）^[8]、神經(jīng)保護(hù)（去血清和谷氨酸模型）^[9-10]和抗糖尿?。≒TPIB酶抑制模型）^[11]藥理活性的篩選，在1×10^-5 mol · L^-1濃度下，均未顯示出活性。

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[責(zé)任編輯 丁廣治]