VEGF、Survivin和COX-2在膀胱癌組織中表達(dá)及臨床意義

金光虎，夏海波，高志明，包國昌，李海峰

（赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

VEGF、Survivin和COX-2在膀胱癌組織中表達(dá)及臨床意義

金光虎，夏海波，高志明，包國昌，李海峰

（赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

目的:觀察VEGF、Survivin和COX-2在膀胱癌中的表達(dá)，并探討其與臨床病理特征的關(guān)系.方法:應(yīng)用免疫組化SP法檢測85份膀胱癌組織標(biāo)本(其中初發(fā)患者標(biāo)本52份，復(fù)發(fā)患者標(biāo)本33份)和13份正常膀胱組織標(biāo)本VEGF、Survivin和COX-2的表達(dá)，并分析其與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系.結(jié)果:膀胱癌組織中VEGF、Survivin和COX-2的表達(dá)明顯高于正常膀胱組織(P＜0.01).VEGF、Survivin和COX-2陽性表達(dá)率在不同年齡、性別、腫瘤大小及數(shù)目的患者之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05),三者在膀胱癌復(fù)發(fā)患者與初發(fā)患者中的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05).在膀胱癌組織中VEGF、Survivin和COX-2蛋白表達(dá)具有正相關(guān)性.結(jié)論:VEGF、Survivin和COX-2在膀胱癌組織中出現(xiàn)特異性表達(dá)上調(diào)，三個指標(biāo)聯(lián)合檢測更有助于膀胱移行細(xì)胞癌臨床分期的判斷及指導(dǎo)預(yù)后.

膀胱癌；VEGF；Survivin；COX-2；免疫組織化學(xué)

膀胱癌是泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率呈逐漸上漲趨勢，其生物學(xué)行為變化多端，術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)率高，因此努力尋找對膀胱癌診斷敏感性高、特異性強(qiáng)的腫瘤標(biāo)記物是當(dāng)前研究的重要方向.近幾年來對膀胱癌發(fā)生機(jī)制、進(jìn)展的研究發(fā)現(xiàn)，其與基因突變、新生血管形成等密切相關(guān).本研究采用免疫組化方法檢測膀胱癌組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、生存素（Survivin）和環(huán)氧化酶－2（COX-2）的表達(dá)，并結(jié)合膀胱癌病理分級、臨床分期，分析它們之間的相關(guān)性及其臨床意義，現(xiàn)報告如下.

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科2012年12月-2015年12月手術(shù)切除并經(jīng)病理證實、資料完整的85份膀胱癌患者的組織標(biāo)本和13份正常膀胱組織標(biāo)本，患者男58例、女27例，年齡24-81歲、平均61.3歲.臨床分期根據(jù)國際抗癌協(xié)會標(biāo)準(zhǔn):Ta-T1期為非肌層浸潤型，T2-T4期為浸潤型.病理分級根據(jù)世界衛(wèi)生組織分類標(biāo)準(zhǔn):低分級癌（I-II）33例，高分級癌（III）52例.正常膀胱標(biāo)本，8份取自男性TURP時的患者正常膀胱黏膜，5例取自女性經(jīng)尿道膀胱頸電切術(shù)時的正常膀胱黏膜.

1.2 試劑與方法

采用免疫組織化學(xué)染色的方法，對患者的病理切片進(jìn)行VEGF、Survivin和COX-2化學(xué)染色，VEGF鼠抗人多克隆抗體購自美國Zymed公司，兔抗人Survivin多克隆抗體購置美國Santa Cruz公司，COX-2兔抗人單克隆抗體購自美國Spring公司.取膀胱癌標(biāo)本和正常膀胱粘膜組織標(biāo)本進(jìn)行固定，經(jīng)70%乙醇30 min、80%乙醇30min、90%乙醇30min 2次、95%乙醇30min 2次、100%乙醇30min 2次、二甲苯透明30min 2次、55℃石蠟中30min 2次后用銅制模具包埋組織塊.此后按說明書步驟操作.選擇實驗組和對照組的陽性和陰性組織進(jìn)行100×和400×的顯微照相.結(jié)果判定以細(xì)胞核／質(zhì)呈清晰棕黃色或紫色染色為陽性.根據(jù)陽性細(xì)胞比例分為以下4級：陽性細(xì)胞數(shù)＜10%（-），陽性細(xì)胞數(shù)10%～25%（+），陽性細(xì)胞數(shù)26%～50%（++），陽性細(xì)胞數(shù)＞51%（+++）.選擇典型部位，隨意取5個高倍視野，計數(shù)100個細(xì)胞，以平均數(shù)作為最終判定[1].

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料之間的比較采用χ2檢驗；計量資料以x±s表示，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義.

2 結(jié)果

2.1 不同組織 VEGF、Survivin和 COX-2的表達(dá)比較VEGF、Survivin和COX-2在13例正常膀胱組織中表達(dá)分別為8.24%(7/85)、5.89%(5/85)和7.06%(6/85)，85例膀胱癌組織中表達(dá)分別為90.59%（77/85）、71.76%(61/85)和89.41%（76/85），正常膀胱組織與膀胱癌組織的三指標(biāo)比較，P值均＜0.01.

2.2 VEGF、Survivin和COX-2的陽性表達(dá)率與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系（見表1）.

3 討論

近幾年隨著對腫瘤分子機(jī)制認(rèn)識的加深，用于預(yù)測膀胱惡性腫瘤的生物學(xué)行為的許多腫瘤標(biāo)記物相繼被發(fā)現(xiàn). VEGF是一種重要的血管生成調(diào)控因子，其與受體結(jié)合后會導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂、增殖和遷移，促進(jìn)腫瘤新生血管形成，其過度表達(dá)往往與腫瘤細(xì)胞的生長活躍程度密切相關(guān)[2、3].本研究結(jié)果顯示肌層浸潤性膀胱癌中VEGF的表達(dá)率比非肌層浸潤性高，在Ⅰ～Ⅱ級和Ⅲ級膀胱癌中的表達(dá)率亦有顯著差異，有統(tǒng)計學(xué)意義；我們發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞侵犯脈管的膀胱癌組織中VEGF表達(dá)率顯著高于脈管未侵犯，具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示VEGF在腫瘤的發(fā)展、浸潤、遷移中起著重要作用.P53與VEGF表達(dá)強(qiáng)度的相關(guān)性分析顯示兩者呈正相關(guān)，這可能與p53基因突變可以上調(diào)促進(jìn)血管增生的內(nèi)皮生長因子，從而調(diào)控腫瘤血管生長有關(guān)[4、5].

表1 VEGF、Survivin和COX-2的表達(dá)與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系［例（%）］

survivin是凋亡抑制蛋白家族成員之一，其能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞的凋亡，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的抑制因子，隨著大家對他了解的深入，survivin被作為一種惡性腫瘤診斷的標(biāo)志物，并且其在多種惡性腫瘤中的高表達(dá)已成為生存期較短的獨(dú)立的預(yù)后因子[6]，生存素因其在人類惡性腫瘤中過表達(dá)、高選擇性分布、特殊的抗凋亡作用等特性，特別是在腫瘤治療方面的潛在價值使其倍受關(guān)注.本研究采用免疫組化SP法檢測85份膀胱癌和13份正常膀胱組織中的Survivin的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其在膀胱癌組織中的表達(dá)明顯高于正常膀胱組織，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異.Survivin的表達(dá)與膀胱癌患者的性別、年齡及腫瘤的大小、數(shù)目無明顯相關(guān).但隨著臨床分級及病理分級的增加，Survivin蛋白表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度均增加，Survivin 蛋白在初發(fā)者中的異常表達(dá)率低于復(fù)發(fā)者.提示Survivin高表達(dá)是非肌層浸潤性膀胱癌復(fù)發(fā)的高危因素，可以作為判斷膀胱癌進(jìn)展的指標(biāo).

COX-2是前列腺COX-2素生物合成中的限速酶，多種因子可刺激COX-2的表達(dá)，其對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用.多數(shù)研究認(rèn)為COX-2和VEGF的表達(dá)存在密切聯(lián)系，其可上調(diào)VEGF-C的表達(dá)從而促腫瘤新生血管生成[7]，我們的結(jié)果亦提示COX-2與VEGF的表達(dá)強(qiáng)度呈高度正相關(guān).本研究結(jié)果顯示肌層浸潤性膀胱癌中COX-2的表達(dá)率比非肌層浸潤性高，在Ⅲ級膀胱癌中的表達(dá)率比Ⅰ～Ⅱ級表達(dá)率高，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異；我們發(fā)現(xiàn)膀胱癌組織中COX-2的表達(dá)率隨著腫瘤分期、分級的升高而升高，但是無統(tǒng)計學(xué)差異.

綜上所述，VEGF、Survivin和COX-2在膀胱癌組織中出現(xiàn)特異性表達(dá)上調(diào)，三者的過度表達(dá)對膀胱癌生長、浸潤起著協(xié)同作用，三個指標(biāo)聯(lián)合檢測更有助于膀胱移行細(xì)胞癌臨床分期的判斷及指導(dǎo)預(yù)后.

〔1〕郭雪濤,崔明玉.P53、P16、TGF、EGFR、VEGF在膀胱移形細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義 [J].現(xiàn)代泌尿外科雜志，2007,12(4):225-228.

〔2〕Perrot-applanat M,VEGF is forms[J].Cell Adh Migr, 2012.6(6):526-527.

〔3〕Biselli-chicote PM,Oliveira AR,Pavarino ec,et al.VEGF gene alternative splicing;pro and anti-angiogenic isoforms in cancer[J].Cancer Res Clin Oncol,2012,138(3);363-370.

〔4〕Rennel E,Waine E,Guan H,et al.the endogenous antiangiogenic VEGF isoform,VEGF isoform,VEGF 165b inhibits human tumour growth in mice[J].Br J cancer, 2008,98(7):1250-1257.

〔5〕Bates Do,Cui TG,Doughty JM,et al.VEGF 165b,an inhibitory splice variantofvascularendothelialgrowth factoris down-regulated in renal cell carcinoma[J].Cancer Res,2002,62(14);4123-4131.

〔6〕Schultz IJ,Kiemeney LA,Witjes JA,et al.Survivin mRNA expression is elevated in malignant urothelial cell carcinomas and predicts time to recurrence[J].AnticancerRes, 2003.23(4):3327-3331.

〔7〕Leagh KM,Ornberg RL,Wang Y,et al.Cyclooxygenase-2 inhibition by celecoxib reduces proliferation and induces apotosis in angiogenic endotherlial cells in vivo[J].Cancer Res,2002,62(3):625-631.

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A

1673-260X（2017）02-0082-02

2016-12-23

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