金銀花與山銀花現(xiàn)代鑒別方法研究概況

伍婷　杜家會(huì)　李振斌　姚天月　李茂凱　崔玉發(fā)

【摘 要】 目的：對(duì)金銀花與山銀花的現(xiàn)代鑒別方法進(jìn)行概括，為金銀花與山銀花藥材粉末、提取物和制劑的鑒別提供參考。方法：通過(guò)查閱近些年關(guān)于金銀花與山銀花鑒別的文獻(xiàn)，整理出比較合理、高效、快捷鑒別金銀花與山銀花的方法。結(jié)果：金銀花與山銀花的化學(xué)成分和含量存在顯著差異，是區(qū)分二者重要指標(biāo)，可通過(guò)薄層色譜、高相液相色譜、核磁共振氫譜、紅外光譜、高光譜成像技術(shù)等檢測(cè)手段鑒別金銀花與山銀花。結(jié)論：現(xiàn)代鑒別方法可用于金銀花與山銀花藥材粉末、提取物和制劑的鑒別，為臨床合理用藥提供技術(shù)支持。

【關(guān)鍵詞】

金銀花;山銀花;現(xiàn)代鑒別方法

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2022）15-0061-04

Research Progress of Lonicerae Japonicae Flos and Lonicerae Flos's Modern Identification Methods

WU Ting DU Jiahui LI Zhenbin YAO Tianyue LI Maokai CUI Yufa

Southwest Vocational and Technical College for Nationalities， Xingyi 562400，China

Abstract：Objective By summarizing the modern identification methods of Lonicerae Japonicae Flos and Lonicerae Flos，it provides reference for the identification of Lonicerae Japonicae Flos and Lonicerae Flos powders， extracts and preparations. Methods By referring to the literature on the identification of Lonicerae Japonicae Flos and Lonicerae Flos in recent years， it sorted out a more reasonable， efficient and fast identification method of Lonicerae Japonicae Flos and Lonicerae Flos.Results There are significant differences in chemical composition and content between Lonicerae Japonicae Flos and Lonicerae Flos， which is an important index to distinguish Lonicerae Japonicae Flos and Lonicerae Flos by TLC， HPLC，¹H-NMR， IR and hyperspectral imaging. Conclusion Modern identification methods can be used for the identification of Lonicerae Japonicae Flos and Lonicerae Flos powders， extracts and preparations， providing technical support for for clinical rational drug use.

Key words：Lonicerae Japonicae Flos;Lonicerae Flos;Modern Identification Methods

金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonicaThunb.的干燥花蕾或帶初開的花，主產(chǎn)于河南、山東等北方省份。藥理研究^[1]表明金銀花具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、抗生育、抗氧化、保肝利膽等多種藥理作用。含有金銀花的中成藥連花清瘟膠囊、金花清感顆粒在新冠肺炎治療中發(fā)揮積極效果。Zhou Likun等^[2]研究發(fā)現(xiàn)金銀花湯劑中的植物MIR2911能夠抑制SARS-CoV-2的復(fù)制，加速新冠感染患者的痊愈。

山銀花為忍冬科植物灰氈毛忍冬Lonicera macranthoidesHand.-Mazz.、紅腺忍冬Lonicera hypoglaucaMiq.、華南忍冬Lonicera confusaDC.或黃褐毛忍冬Lonicera fulvoto- mentosaHsu et S.C.Cheng的干燥花蕾或帶初開的花，主要產(chǎn)于湖南、四川、貴州、云南等南方省份。金銀花與山銀花均來(lái)源于忍冬科植物，二者在外觀性狀等方面有一定的相似性，2020版《中國(guó)藥典》記載二者均具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功能，主要用于治療癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風(fēng)熱感冒、溫病發(fā)熱等疾病^[3]。在價(jià)格方面山銀花明顯比金銀花低，許多商家為獲取更大經(jīng)濟(jì)利益，常在金銀花藥材及藥物制劑投料中摻偽山銀花。通過(guò)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)二者在化學(xué)成分與含量存在顯著差異，化學(xué)成分的不同將會(huì)影響金銀花與山銀花在藥效上存在偏重。山銀花中的綠原酸含量遠(yuǎn)高于金銀花^[4-6]，抗菌、抗炎、抗氧化、利膽等藥理作用均與綠原酸有關(guān)^[7]。研究^[8-9]表明，金銀花中綠原酸等酚酸成分含量越高，抗氧化活性越好。木犀草苷是金銀花的標(biāo)志性活性成分之一，具有較強(qiáng)的抗菌、抗病毒和保肝等作用，而山銀花中的木犀草苷含量卻很低甚至幾乎檢測(cè)不出^[10-11]，2020版《中國(guó)藥典》規(guī)定金銀花（忍冬）中木犀草苷含量不少于0.050%，而對(duì)于山銀花未做要求^[3]。三萜皂苷類成分山銀花比金銀花多，Chai等^[12]發(fā)現(xiàn)灰氈毛皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙在山銀花中含量較高，而金銀花中未檢測(cè)到這兩種皂苷成分，若中藥注射制劑中存在大量皂苷成分，很可能引起溶血等安全隱患^[13]。此外，李文沛等^[14]用金銀花和山銀花水提物進(jìn)行小鼠體內(nèi)過(guò)敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)山銀花水提物會(huì)引起小鼠過(guò)敏反應(yīng)，而金銀花并未出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng);金銀花和山銀花均具有解熱抗炎作用，且作用相當(dāng)，但金銀花的解熱抗炎作用時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)^[15]。因此，在臨床用藥過(guò)程中，必須關(guān)注金銀花與山銀花內(nèi)在化學(xué)成分的差異和藥理作用的不同，并加以鑒別金銀花與山銀花，使藥物對(duì)癥治療疾病，減少藥害事件的發(fā)生，保護(hù)公眾用藥的安全性。

金銀花和山銀花為近緣植物，而藥材在外觀性狀和顯微特征上具有一定差異，這對(duì)于金銀花與山銀花的鑒別具有重要意義^[16]。但在實(shí)際中藥生產(chǎn)過(guò)程更多是將中藥材制成粉末、提取物或制劑，經(jīng)典的鑒別方法很難區(qū)分投料的藥材來(lái)源，為避免金銀花與山銀花盲目混用，保證用藥的安全、穩(wěn)定、確切、可控，新的鑒定方法尤為重要。本文將從現(xiàn)代鑒別方法方面對(duì)金銀花與山銀花的鑒別進(jìn)行概述。

1 薄層色譜（TLC）法

薄層色譜法是利用不同化合物在同一固定相中吸附能力不同，在移動(dòng)相作用下，化合物在固定相中存在連續(xù)吸附、解吸附、再吸附、再解吸附過(guò)程而實(shí)現(xiàn)分離，可用于混合物的分離、鑒別和定量分析，檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、快速、高效。2020版《中國(guó)藥典》關(guān)于金銀花和山銀花的理化鑒別中均以綠原酸為對(duì)照品采用薄層色譜法進(jìn)行鑒別^[3]，金銀花和山銀花均含有綠原酸，而山銀花中含量較高，可根據(jù)薄層板上斑點(diǎn)大小鑒別二者，但該方法缺乏專屬性。高珊等^[17]采用薄層色譜方法，以分灰氈毛忍冬皂苷乙為對(duì)照品，鑒別金銀花和山銀花，結(jié)果發(fā)現(xiàn)可在山銀花中檢測(cè)出灰氈毛忍冬皂苷乙，而金銀花中未檢測(cè)出該物質(zhì)，因此可根據(jù)薄層色譜中是否檢測(cè)出灰氈毛忍冬皂苷乙來(lái)鑒別金銀花和山銀花。王立偉等^[18]研究發(fā)現(xiàn)在薄層色譜上山銀花的主斑點(diǎn)為灰氈毛忍冬皂苷乙，而金銀花中灰氈毛忍冬皂苷乙斑點(diǎn)，并發(fā)現(xiàn)山銀花摻偽量達(dá)到2% 時(shí)即可檢測(cè)出灰氈毛忍冬皂苷乙斑點(diǎn)，該方法可用于檢測(cè)金銀花藥物制劑是否摻偽山銀花藥材。陸順瑤等^[19]采用金銀花對(duì)照提取物直接對(duì)比金銀花和與山銀花的異同點(diǎn)的方法，通過(guò)建立薄層色譜指紋圖譜法鑒別二者，發(fā)現(xiàn)金銀花提取物與不同產(chǎn)地的金銀花藥材的薄層圖譜整體上基本一致，而山銀花藥材與金銀花提取物相比薄層色譜差異較大，除此之外，還發(fā)現(xiàn)金銀花中斷馬錢子酸斑點(diǎn)明亮，而山銀花中幾乎無(wú)此斑點(diǎn)，因此可通過(guò)對(duì)比薄層指紋圖或是否有馬錢子酸斑點(diǎn)從而高效、準(zhǔn)確地鑒別金銀花與山銀花。

2 高效液相色譜（HPLC）法

高效液相色譜法是現(xiàn)代成分分析檢測(cè)的重要手段之一，具有高效、高靈敏度、高選擇性等特點(diǎn)。中藥材及其制劑多以整體性產(chǎn)生協(xié)同作用達(dá)到治療疾病的效果，分析單一成分來(lái)評(píng)價(jià)中藥的質(zhì)量及其藥效極為不全面，HPLC指紋圖譜對(duì)于研究中藥質(zhì)量控制和化學(xué)成分整體性研究尤為重要，是指紋圖譜研究應(yīng)用最廣泛的手段之一^[20]。熊艷等^[21]建立金銀花與山銀花HPLC指紋圖譜進(jìn)行對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)金銀花圖譜相較為相似，而山銀花相似度較低，另外對(duì)比研究二者的化學(xué)成分，發(fā)現(xiàn)成分和含量均存在顯著差異，山銀花中綠原酸含量明顯高于金銀花，山銀花中幾乎檢測(cè)不出木犀草苷和蘆丁，這三種物質(zhì)可作為指標(biāo)物質(zhì)鑒別金銀花與山銀花。林永強(qiáng)等^[22]建立了高校液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法（HPLC-ELSD）對(duì)金銀花和山銀花進(jìn)行定性鑒別，發(fā)現(xiàn)不同批次的山銀花及提取物和制劑中均可檢測(cè)出灰氈毛忍冬皂苷乙，而金銀花及提取物和制劑中均未檢出，表明灰氈毛忍冬皂苷乙可作為區(qū)別金銀花與山銀花的特征成分，且在藥物提取和制備成產(chǎn)過(guò)程該成分較為穩(wěn)定，對(duì)于制劑藥源檢測(cè)具有重要意義。劉亞楠等^[23]在檢測(cè)波長(zhǎng)350nm條件下分別建立了金銀花與山銀花HPLC指紋圖譜，并通過(guò)屏蔽峰面積占比較大的綠原酸和異綠原酸情況下，分別計(jì)算二者指紋圖譜相似性，發(fā)現(xiàn)不同批次金銀花HPLC色譜圖相似度均在0.95以上，而山銀花相似度低于0.8，與金銀花指紋圖譜差異較大，扣除大峰面積計(jì)算方式能全面而準(zhǔn)確地反應(yīng)出金銀花與山銀花與化學(xué)成分之間的細(xì)微差異，更有利于鑒別金銀花與山銀花。以往采用HPLC法鑒別金銀花與山銀花一般檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，且耗費(fèi)溶劑較多。王浩冰等^[24]采用UHPLC測(cè)定20批次不同的金銀花與山銀花中化學(xué)成分差異，結(jié)果顯示灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙可作為山銀花的特征成分，而金銀花中均未檢測(cè)出這兩種成分，且該分析方法僅需8 min即可快速鑒別金銀花與山銀花。

3 核磁共振氫譜（¹H-NMR）法

核磁共振氫譜是將化合物中1H核磁共振效應(yīng)體現(xiàn)于核磁共振波譜法中，不同的化合物具有不同的氫譜特征，是鑒定有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)的強(qiáng)有力手段之一，同時(shí)還可根據(jù)圖譜中信號(hào)相對(duì)強(qiáng)弱來(lái)反映各個(gè)組分的含量。每種中藥都有特征的化學(xué)成分，這些特征成分的相對(duì)含量比例基本固定，從使得每種藥材的¹H-NMR指紋圖譜具有特征性，猶如人的指紋與藥材品種存在嚴(yán)格的對(duì)應(yīng)關(guān)系^[25]，且¹H-NMR指紋圖譜鑒別法操作簡(jiǎn)單、測(cè)試時(shí)間短、不損壞樣品。盧鳳來(lái)等^[26]采用¹H-NMR指紋圖譜對(duì)金銀花與山銀花兩種中藥材的化學(xué)成分進(jìn)行表征，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地金銀花與山銀花樣品的¹H-NMR指紋圖譜各自具有較好的一致性，但兩者的化學(xué)成分組成和含量均有顯著差異，主要體現(xiàn)在高場(chǎng)區(qū)（δ 0.5～3.0）山銀花信號(hào)明顯強(qiáng)于金銀花，而在δ 3.0～5.5區(qū)域金銀花信號(hào)強(qiáng)于山銀花，兩者¹H-NMR指紋圖這一顯著差異為金銀花與山銀花的鑒別提供可靠保證。

4 紅外光譜法

紅外光譜是分子中的基團(tuán)選擇性吸收某頻率的紅外線，通過(guò)檢測(cè)紅外線被吸收的情況可得到化合物的紅外吸收光譜，不同的化學(xué)鍵或官能團(tuán)吸收頻率不同，呈現(xiàn)不同的吸收峰型和吸收位置，從而判斷化合物可能存在的化學(xué)鍵及官能團(tuán)類型。由于紅外光譜分析法操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、專屬性強(qiáng)，且無(wú)需對(duì)樣品做過(guò)多處理，又能較為全面反應(yīng)樣品化學(xué)成分信息，符合中藥整體用藥的思想，在中藥材分析與鑒定中發(fā)揮著重要作用^[27-29]。劉燕等^[30]采用傅立葉變換紅外光譜法檢測(cè)金銀花與山銀花的揮發(fā)油，并對(duì)基線趨勢(shì)去除和曲線平滑處理去除基線變化和噪音造成的干擾，發(fā)現(xiàn)在1800～850 cm^-1范圍內(nèi)光譜數(shù)據(jù)特征性較強(qiáng)，對(duì)該波段進(jìn)行聚類分析，結(jié)果顯示金銀花樣品聚為一類，非金銀花樣品聚為另一類，表明該方法可將金銀花與山銀花區(qū)分開，在實(shí)際生產(chǎn)中可將金銀花與山銀花樣品測(cè)定結(jié)果建立數(shù)據(jù)庫(kù)，將待測(cè)樣品與數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類分析，若待測(cè)樣品與數(shù)據(jù)庫(kù)金銀花數(shù)據(jù)聚類則為正品。劉征輝等^[31]采用近紅外光譜技術(shù)鑒別金銀花與山銀花，通過(guò)對(duì)近紅外光譜5300～5550 cm^-1、6900～7500 cm^-1、8200～12000 cm^-1波段處進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，在主成分分析的聚類基礎(chǔ)上采用多元變量統(tǒng)計(jì)分析軟件模式分別建立金銀花與山銀花類模型，發(fā)現(xiàn)模型圖中金銀花樣本集中性高，山銀花樣品集中性較低，能很好地識(shí)別金銀花與山銀花，為金銀花與山銀花的鑒別提供了新的方法和思路。鄒婧等^[32]通過(guò)采用傅立葉變換紅外光譜結(jié)合二階導(dǎo)數(shù)光譜法鑒別金銀花與山銀花，結(jié)果顯示不同產(chǎn)地不同批次的金銀花紅外光譜基本相似，但與山銀花相比具有明顯差異，首先在原始紅外光譜1800～1000 cm^-1范圍內(nèi)山銀花的吸收峰比金銀花多且強(qiáng);其次二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜也有一定差異，主要表現(xiàn)為在1528 cm^-1、1443 cm^-1處山銀花的吸收比金銀花強(qiáng)，而在1670 cm^-1、1426 cm^-1、1190 cm^-1處金銀花吸收強(qiáng)度高，山銀花幾乎無(wú)明顯吸收。

5 高光譜成像技術(shù)法

高光譜成像技術(shù)是指將成像技術(shù)與光譜技術(shù)融合在一起的一種檢測(cè)方法，可同時(shí)獲取研究樣本內(nèi)、外部品質(zhì)特征的光譜信息和空間信息，檢測(cè)快速、準(zhǔn)確、無(wú)損，被廣泛應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品、藥品的真?zhèn)舞b別與品質(zhì)評(píng)價(jià)^[33-36]。馮潔等^[37]利用高光譜成像技術(shù)，對(duì)光譜經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)變量變換（SNV）預(yù)處理，應(yīng)用連續(xù)投影算法（SPA）提取特征波長(zhǎng)并建立最小二乘支持向量機(jī)（LS-SVM）判別分析模型作為金銀花與山銀花最優(yōu)判別模型，所建模型對(duì)金銀花與山銀花的識(shí)別率高達(dá)100%，解決了常規(guī)性狀鑒別識(shí)別度不高、主觀性強(qiáng)及理化檢驗(yàn)繁瑣等缺點(diǎn)。

6 小結(jié)與展望

本文主要概述了金銀花與山銀花現(xiàn)代鑒別方法的研究進(jìn)展?，F(xiàn)代分析檢測(cè)手段的迅猛發(fā)展豐富了金銀花與山銀花的鑒別方法，打破了經(jīng)典鑒別識(shí)別度不高、主觀性強(qiáng)等局限性，為金銀花與山銀花的藥材粉末、提取物和制劑的鑒別提供了更多有效的檢測(cè)手段，為金銀花與山銀花藥材的規(guī)范應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。以期將金銀花與山銀花的分析鑒別方法推廣到其他中藥材和農(nóng)產(chǎn)品的摻偽鑒定中，促進(jìn)中藥材產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

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（收稿日期：2021-12-06 編輯：陶希睿）