淺析妊娠流產(chǎn)患者與染色體異常關(guān)系的研究

吳亞敏

【摘要】 目的 探析輔助生殖技術(shù)致妊娠的早期流產(chǎn)患者絨毛染色體異常情況。方法 400例孕早期流產(chǎn)患者， 其中320例自然妊娠孕早期自然流產(chǎn)患者作為對(duì)照組， 80例因輔助生殖技術(shù)致妊娠的孕早期自然流產(chǎn)患者作為觀察組。對(duì)兩組患者的絨毛細(xì)胞進(jìn)行分離、染色體分析， 觀察兩組的對(duì)比結(jié)果。結(jié)果 觀察組患者中 <40歲的患者染色體正常例數(shù)為41例， ≥40歲的患者染色體正常例數(shù)為4例， 共45例， 染色體正常例數(shù)為35例；對(duì)照組患者中<40歲的患者染色體正常例數(shù)為181例， ≥40歲的患者染色體正常例數(shù)為11例， 共192例， 染色體正常例數(shù)為128例；兩組患者在不同年齡段（以40歲為界）染色體異常率對(duì)比， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）。結(jié)論 輔助生殖技術(shù)致妊娠早期流產(chǎn)與自然流產(chǎn)的發(fā)生率無(wú)明顯差異， 但絨毛細(xì)胞染色體異常與育齡婦女的年齡有明顯的關(guān)系， 年紀(jì)≥40歲的患者采用輔助生殖技術(shù)妊娠更容易導(dǎo)致妊娠早期流產(chǎn)。

【關(guān)鍵詞】 輔助生殖技術(shù)；妊娠早期；染色體異常

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.04.042

近年來(lái)， 助生殖技術(shù)（assisted reproductive technology， ART）廣泛用于治療不孕問(wèn)題， 相關(guān)研究顯示[1]， 發(fā)達(dá)國(guó)家每年有≥3%的輔助生殖技術(shù)出生兒， 輔助生殖技術(shù)為不孕家庭帶來(lái)了福音。自然流產(chǎn)是一種人類(lèi)優(yōu)勝劣汰的自然選擇結(jié)果， 發(fā)生自然流產(chǎn)的幾率為15%， 在全部流產(chǎn)中占75%的比例， 導(dǎo)致自然流產(chǎn)的主要原因是染色體異常（夫妻染色體異常與胚胎染色體異常）。近30年來(lái)， 輔助生殖技術(shù)得到了高速發(fā)展， 但有相關(guān)報(bào)道指出[2， 3]， 輔助生殖技術(shù)致早期妊娠流產(chǎn)率較高， 為此， 本院對(duì)400例流產(chǎn)患者進(jìn)行了絨毛細(xì)胞分離和染色體分析， 現(xiàn)做如下報(bào)告。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2015年1月～2016年1月本院收治的孕早期流產(chǎn)患者400例， 將其中320例自然妊娠孕早期自然流產(chǎn)患者作為對(duì)照組， 80例因輔助生殖技術(shù)致妊娠的孕早期自然流產(chǎn)患者作為觀察組。觀察組患者年齡22～43歲， 平均年齡（33.6±3.3）歲， 孕周7～12周；對(duì)照組患者年齡25～44歲， 平均年齡（31.2±5.2）歲， 孕周7～12周。兩組患者一般資料比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。在告知兩組患者實(shí)驗(yàn)過(guò)程及目的后， 均表示愿意參加實(shí)驗(yàn)并簽署知情同意書(shū)， 實(shí)驗(yàn)獲得了醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

1. 2 方法 先提取絨毛細(xì)胞， 對(duì)流產(chǎn)的患者進(jìn)行子宮清宮術(shù)， 備好負(fù)壓吸引管， 清宮時(shí)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程， 采用負(fù)壓吸引管利用負(fù)壓原理， 吸附絨毛組織5～20 mg。將這5～20 mg絨毛組織作為標(biāo)本， 放入生理鹽水中浸泡， 并立即送入中心實(shí)驗(yàn)室備檢。標(biāo)本送達(dá)后， 立對(duì)絨毛組織標(biāo)本進(jìn)行分離培養(yǎng)， 采用雙抗清洗法清洗標(biāo)本， 去污物（血塊、蛻膜組織）， 保留典型的絨毛組織約10 mg， 將清洗后的標(biāo)本放入離心管置入離心機(jī)進(jìn)行離心操作， 離心結(jié)束后觀察管內(nèi)分層， 去除上層的液體， 在下層滴入生物酶（膠原酶、胰酶）， 將標(biāo)本放入保溫箱， 仔細(xì)觀察并記錄， 待出現(xiàn)絨毛散開(kāi)現(xiàn)象時(shí)， 立即滴入母牛血清， 采用電子顯微鏡觀察絨毛細(xì)胞形態(tài)。當(dāng)視野中出現(xiàn)成片狀細(xì)胞， 將標(biāo)本放入新鮮的培養(yǎng)液中并滴入生物堿（秋水仙素）， 再次放置在保溫箱內(nèi)， 放置時(shí)間為4 h， 然后去掉上層清夜， 將標(biāo)本置入水浴箱， 2 h后取出， 將標(biāo)本放入離心機(jī)再次離心， 將離心后的標(biāo)本去上清液制成懸液， 通過(guò)萊卡顯微鏡進(jìn)行觀察， 選擇兩名醫(yī)生同時(shí)讀標(biāo)本玻片， 每例計(jì)算20個(gè)分裂象， 分析2個(gè)核型（嵌合體加倍計(jì)數(shù)）。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組患者中 <40歲的患者染色體正常例數(shù)為41例， ≥40歲的患者染色體正常例數(shù)為4例， 共45例， 染色體正常例數(shù)為35例；對(duì)照組患者中<40歲的患者染色體正常例數(shù)為181例， ≥40歲的患者染色體正常例數(shù)為11例， 共192例， 染色體正常例數(shù)為128例；兩組患者在不同年齡段（以40歲為界）染色體異常率對(duì)比， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）。見(jiàn)表1。

3 討論

輔助生殖技術(shù)是治療不孕不育的一種手段， 有體外受精-胚胎移植（IVF-ET）、卵子體外成熟（IVM）、人工受精（AI） 等形式[4]。根據(jù)WTO的相關(guān)數(shù)據(jù)顯示[5-9]， 我國(guó)的不孕癥發(fā)病率高達(dá)15%， 傳統(tǒng)的治療遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足日益增長(zhǎng)的不孕不育患者的治療需要。

自然流產(chǎn)是妊娠過(guò)程中常見(jiàn)的并發(fā)癥， 而染色體異常則是自然流產(chǎn)的主要原因之一， 包括夫妻染色體異常和胚胎染色體異常[10-12]。夫婦染色體異常常見(jiàn)的有平衡易位和羅伯遜易位， 胚胎染色體異常常見(jiàn)的有三倍體、多倍體及染色體平衡易位、嵌合體等。與自然流產(chǎn)相比， 輔助生殖技術(shù)妊娠不增加妊娠早期流產(chǎn)率， 但是與流產(chǎn)孕婦的年齡存在著一定的關(guān)系。本研究通過(guò)對(duì)流產(chǎn)的患者進(jìn)行子宮清宮術(shù)， 清宮時(shí)采用負(fù)壓吸引管利用負(fù)壓原理， 取出絨毛組織5～20 mg作為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本， 將其放入生理鹽水中浸泡， 然后對(duì)絨毛組織標(biāo)本進(jìn)行分離培養(yǎng)， 采用雙抗清洗法清洗標(biāo)本， 去除血塊及蛻膜組織， 保留典型的絨毛組織， 進(jìn)行離心操作， 觀察標(biāo)本現(xiàn)象。發(fā)現(xiàn)自然妊娠孕早期自然流產(chǎn)患者的絨毛細(xì)胞染色體異常率與輔助生殖技術(shù)致妊娠早期自然流產(chǎn)患者的絨毛細(xì)胞染色體異常率無(wú)明顯差異（P>0.05）， 但是不同年齡間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

相關(guān)研究顯示[2]， 輔助生殖技術(shù)能影響表觀遺傳（印記基因）的調(diào)控， 影響胚胎植入和胎兒生長(zhǎng)等， 表觀遺傳學(xué)方面的異常能使胚胎停育， 基因印記缺陷會(huì)導(dǎo)致早期妊娠的不穩(wěn)定易發(fā)生流產(chǎn)[1]?？刂菩哉写倥怕堰^(guò)程中， 大劑量促性腺激素的使用， 可能是引起配子及胚

胎印記異常， 輔助生殖技術(shù)實(shí)施時(shí)間正處于印跡重建的窗口期， 運(yùn)用于當(dāng)中的操作會(huì)對(duì)配子及胚胎的甲基化狀態(tài)發(fā)生一定的影響。

本文研究結(jié)果顯示， 觀察組患者中 <40歲的患者染色體正常例數(shù)為41例， ≥40歲的患者染色體正常例數(shù)為4例， 共45例， 染色體正常例數(shù)為35例；對(duì)照組患者中<40歲的患者染色體正常例數(shù)為181例， ≥40歲的患者染色體正常例數(shù)為11例， 共192例， 染色體正常例數(shù)為128例；兩組患者在不同年齡段（以40歲為界）染色體異常率對(duì)比， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其中觀察組和對(duì)照組流產(chǎn)孕婦中年齡越大其染色體異常率明顯越高， 這是一種母齡效應(yīng)， 首先高齡本身就是一種妊娠高危因素， 不論是自然妊娠還是輔助生殖技術(shù)妊娠， 都增加流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。隨著年齡的增長(zhǎng)， 機(jī)體生理功能也發(fā)生一定程度的退化， 女性尤其體現(xiàn)在生殖系統(tǒng)方面， 卵子發(fā)生衰老， 衰老的卵子影響染色體間的相互關(guān)系和分裂行動(dòng)， 導(dǎo)致染色體融合。卵巢功能退化， 可能導(dǎo)致雌激素水平下降， 會(huì)促使卵泡紡錘體老化， 影響有絲分裂的正常進(jìn)行。自然妊娠和輔助生殖技術(shù)獲得妊娠， 胚胎染色體異常都是早期妊娠流產(chǎn)的主要原因[13-16]， 因此， 對(duì)發(fā)生了自然流產(chǎn)患者進(jìn)行流產(chǎn)染色體遺傳學(xué)檢查有重要意義。

綜上所述， 輔助生殖技術(shù)并不增加妊娠早期流產(chǎn)胚胎染色體異常的發(fā)生率， 但絨毛細(xì)胞染色體異常與育齡婦女的年齡有明顯的關(guān)系， 年紀(jì)≥40歲的患者采用輔助生殖技術(shù)妊娠更容易導(dǎo)致妊娠早期流產(chǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1] 孔舒， 賴煒強(qiáng)， 衛(wèi)冠輝， 等. 輔助生殖技術(shù)致妊娠的早期流產(chǎn)絨毛染色體異常分析. 廣東醫(yī)學(xué)， 2015， 36（17）：2722-2724.

[2] 段程穎， 李紅， 劉敏娟， 等. 輔助生殖技術(shù)治療后自然流產(chǎn)胚胎的遺傳學(xué)分析及其臨床效應(yīng). 國(guó)際生殖健康/計(jì)劃生育雜志， 2014（3）：162-164.

[3] 李躍萍， 徐雯， 黎明紅， 等. 輔助生殖技術(shù)治療后孕早期自然流產(chǎn)的絨毛細(xì)胞染色體分析. 昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2011， 32（5）：50-53.

[4] 李躍萍， 金松， 胡春霞. 自然妊娠與ART妊娠孕早期自然流產(chǎn)的絨毛細(xì)胞染色體分析. 中國(guó)婦幼保健， 2013， 28（23）：3819-3822.

[5] 董毅飛， 張征， 彭海英， 等. 3505例不育癥患者細(xì)胞遺傳學(xué)分析及其與輔助生殖技術(shù)臨床結(jié)局的關(guān)系.武漢大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2012， 33（5）：742-745.

[6] 孔舒， 賴煒強(qiáng)， 衛(wèi)冠輝， 等. 輔助生殖技術(shù)致妊娠早期流產(chǎn)的絨毛細(xì)胞遺傳學(xué)分析. 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志， 2015（11）：48-50.

[7] 董自江， 盧守蓮， 孫麗洲， 等. 輔助生殖妊娠流產(chǎn)與自然妊娠流產(chǎn)絨毛核型分析比較. 山東醫(yī)藥， 2013， 53（41）：78-80.

[8] 邵小光， 熊曙康， 馮麗云， 等. 輔助生殖技術(shù)中的早期流產(chǎn)胚胎染色體分析. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展， 2002， 11（4）：274-276.

[9] 吳彤華， 尹彪， 朱元昌， 等. 輔助生殖和自然妊娠中早期自然流產(chǎn)胚胎染色體數(shù)目異常的研究. 生殖與避孕， 2013， 33（10）： 658-664.

[10] 郭楠， 劉雨生， 周桂香， 等. 129例自然妊娠與ART術(shù)后妊娠早期流產(chǎn)胎兒絨毛染色體核型分析. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2013， 48（2）：163-166.

[11] 張燕， 張鳳， 周亞?wèn)|， 等. 自然妊娠和ART妊娠早期流產(chǎn)絨毛細(xì)胞遺傳學(xué)檢查的臨床應(yīng)用價(jià)值. 南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2012（7）：937-941.

[12] 王磊， 邵小光， 李曉霞， 等. ICSI妊娠后流產(chǎn)與自然妊娠流產(chǎn)的絨毛染色體分析. 中國(guó)婦幼保健， 2008， 23（30）：4275-4276.

[13] 高瑞花， 陳雷寧， 倪郝， 等. ART中自然流產(chǎn)后胚胎染色體異常的初步研究. 廣東醫(yī)學(xué)， 2010， 31（19）：2486-2488.

[14] 胡曉東， 尹彪， 朱元昌， 等. 女性年齡與早期自然流產(chǎn)胚胎染色體數(shù)目異常的關(guān)系. 生殖與避孕， 2014， 34（9）：735-741.

[15] 潘麗華， 韓華， 賈艷敏， 等. 自然妊娠和輔助生殖技術(shù)妊娠孕婦胚胎停育絨毛染色體異常的研究. 寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2014， 36（12）：1353-1355.

[16] 王厚照， 馬芳芳. ART術(shù)后妊娠與自然妊娠自然流產(chǎn)的絨毛細(xì)胞染色體分析. 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志， 2015（2）：23-24.