檸檬果皮精油主要組分抑菌及抗氧化活性研究

章 斌 侯小楨 - 秦 軼 丁 心 鄧其海 - 黃林潔 -

(1. 韓山師范學(xué)院食品工程與生物科技學(xué)院，廣東 潮州 521041；2. 廣東中興綠豐發(fā)展有限公司，廣東 河源 517000)

檸檬果皮精油(lemon peel essential oil，LEO)是從檸檬果皮中提取的一種揮發(fā)性油狀液體物質(zhì)，富含dl-檸檬烯、γ-萜品烯、α-松油醇、E-檸檬醛等成分，具有良好的抗氧化、抑菌、降血脂等功效；適用于食品、化妝品、香精香料等行業(yè)[1-3]。受產(chǎn)地、品種、生態(tài)地理?xiàng)l件、植物年齡和采收期、提取方法與提取部位、提取溶劑種類(lèi)等因素影響，植物揮發(fā)性精油的化學(xué)成分與含量差異較大，因而其功能活性存在一定差異的同時(shí)也表現(xiàn)出一定的波動(dòng)性；另一方面，構(gòu)成精油的醇類(lèi)、醛類(lèi)、烯類(lèi)等化學(xué)組分因其含量和理化特性的差異，對(duì)精油特定生理活性的貢獻(xiàn)度也存有較大差異：如檸檬烯有較好的抗菌[4-5]、促傷口愈合[6]等功效，萜品烯可有效殺除伊氏錐蟲(chóng)[7]和氧化皮膚過(guò)敏原[8]，松油醇可通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[9]。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)包括檸檬精油在內(nèi)的多種植物揮發(fā)性精油的抗氧化與抑菌作用已有較多報(bào)道[3]，不同植物精油復(fù)配后的抗氧化與抑菌作用也有一定報(bào)道[10-11]；但有關(guān)精油主要組分的抗氧化與抑菌研究較少，且現(xiàn)有的研究[10]均是側(cè)重于單一組分開(kāi)展；而有關(guān)栽培面積最廣的尤力克(Eureka)品種檸檬的LEO主要組分的抗氧化與抑菌研究未見(jiàn)報(bào)道，且有關(guān)精油主要組分在抗氧化與抑菌方面的復(fù)配協(xié)同效應(yīng)亦未見(jiàn)報(bào)道。因此，針對(duì)LEO良好的抗氧化與抑菌作用，在前期采用GC-MS法檢測(cè)尤力克檸檬(產(chǎn)地河源)果皮精油的化學(xué)組成基礎(chǔ)上[3]，著重探討LEO中dl-檸檬烯、γ-萜品烯、α-松油醇3個(gè)主要成分及其復(fù)配物的抗氧化與抑菌作用，以期為更好地開(kāi)發(fā)利用LEO提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

dl-檸檬烯、γ-萜品烯、α-松油醇：西隴化工股份有限公司；

卵磷脂、PBS、TCA、FeSO4、H2O2、丙酮、冰乙酸、二甲胺、檸檬酸、磷酸氫二鈉、瓊脂、牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉等：分析純，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；

大腸桿菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)：韓山師范學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供；

LEO：前期測(cè)得其dl-檸檬烯、γ-萜品烯和α-松油醇含量分別為42.93%，8.41%，6.39%，廣東中興綠豐農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司；

電熱恒溫水浴鍋：HWS-12型，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；

電子分析天平：JA2003型，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；

無(wú)菌操作臺(tái)：BOXUN型，廣州嘉東實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司；

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：UFJ-7200型，上海尤尼科儀器有限公司；

精密量具電子數(shù)顯游標(biāo)卡尺：SYNTEK型，0～150 mm，太欣半導(dǎo)體股份有限公司；

數(shù)顯恒溫生化培養(yǎng)箱：BS-4G型，常州市凱航儀器有限公司；

立式電熱壓力蒸汽滅菌鍋：LD2X-30KA型，上海申安醫(yī)療器械廠(chǎng)；

電熱恒溫培養(yǎng)箱：DHP-9162型，上海捷呈實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 抗氧化活性試驗(yàn)

(1) DPPH自由基清除能力的測(cè)定：根據(jù)文獻(xiàn)[3]所述方法進(jìn)行測(cè)定，并按式(1)計(jì)算清除率。

(1)

式中：

R1——DPPH自由基清除率，%；

A——樣液與DPPH液反應(yīng)后的吸光度值；

A0——樣液與95%乙醇反應(yīng)后的吸光度值；

A1——95%乙醇與DPPH液反應(yīng)后的吸光度值。

(2) 羥自由基清除能力測(cè)定：根據(jù)文獻(xiàn)[3]所述方法進(jìn)行測(cè)定，并按式(2)計(jì)算清除率。

(2)

式中：

R2——羥自由基清除率，%；

A——結(jié)晶紫溶液、FeSO4溶液與H2O2溶液反應(yīng)后的吸光度值；

A0——結(jié)晶紫溶液與FeSO4溶液反應(yīng)后的吸光度值；

A1——樣液與結(jié)晶紫溶液、FeSO4溶、H2O2溶液反應(yīng)后的吸光度值。

1.2.2 抑菌試驗(yàn)

(1) 抑菌圈大小的測(cè)定：制備濃度為106CFU/mL的菌懸液并取0.1 mL加入裝有培養(yǎng)基的平皿中，待混勻凝固后，在培養(yǎng)基表面垂直放置3個(gè)牛津杯并分別加入純LEO、α-松油醇、γ-萜品烯、dl-檸檬烯和3種單體成分的復(fù)配物各50 μL，于37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h后測(cè)量抑菌圈大小。抑菌圈試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)[12]：極敏，直徑>20 mm；高敏，15～20 mm；中敏，10～15 mm；低敏，7～9 mm；不敏感，直徑<7 mm；“-”表示未測(cè)出抑菌圈。

(2) 最低抑菌濃度(MIC)的測(cè)定：用丙酮配制一定濃度的LEO、α-松油醇、γ-萜品烯、dl-檸檬烯和3種單體成分的復(fù)配物溶液，使其在混勻后的培養(yǎng)基中濃度分別為250.0，125.0，62.5，31.25，15.6，7.8，3.9，2.0，1.0 μL/mL，然后進(jìn)行平板劃線(xiàn)并于37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，以能明顯抑制供試菌生長(zhǎng)的最低濃度為3種單體物質(zhì)的MIC。

(3) 單體成分復(fù)配的抑菌試驗(yàn)：將濃度為1 μL/mL的dl-檸檬烯、γ-萜品烯和α-松油醇按一定體積比復(fù)配，再按1.2.2(1)和1.2.2(2)進(jìn)行抑菌試驗(yàn)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差SD表示，進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，并用Excel和SAS 8.1統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗氧化活性

2.1.1 對(duì)羥自由基(OH·)的清除作用 萜烯類(lèi)化合物含有2個(gè)或2個(gè)以上的雙鍵，具有較強(qiáng)的反應(yīng)活性，可與OH·結(jié)合加成為二級(jí)基團(tuán)，從而具有一定的OH·清除作用。

由圖1可知，試驗(yàn)濃度下的LEO對(duì)OH·清除率為98.08%～99.63%，清除效果良好且遠(yuǎn)強(qiáng)于其主要組分dl-檸檬烯、γ-萜品烯、α-松油醇的；陳思佳等[13]研究LEO、檸檬烯清除OH·的結(jié)果表明：LEO的OH·清除能力(IC50為0.013 mg/mL)強(qiáng)于檸檬烯(IC50為0.004 mg/mL)的，與本試驗(yàn)的研究結(jié)論一致。這說(shuō)明精油中還有酚類(lèi)、酮類(lèi)、醛類(lèi)等成分同樣具有抗氧化活性[14]31-32[15]，如Mário等[16]的研究證實(shí)除單萜外，某些非揮發(fā)性化合物可能有助于增強(qiáng)檸檬烯及其生物轉(zhuǎn)化提取物等揮發(fā)性成分的抗氧化活性，從而使精油的抗氧化性能高于單體物質(zhì)。

同時(shí)，圖1表明dl-檸檬烯、γ-萜品烯、α-松油醇對(duì)OH·的清除率較為接近，并均隨濃度增大而快速上升，且單體物質(zhì)的濃度超過(guò)4 mg/mL后，α-松油醇相比γ-萜品烯和dl-檸檬烯對(duì)OH·的清除效果更佳。由此，可初步推斷三者對(duì)LEO清除OH·的作用有著大小接近的貢獻(xiàn)度，且α-松油醇在高濃度下的貢獻(xiàn)權(quán)重可能更大。

圖1 dl-檸檬烯、γ-萜品烯、α-松油醇和 LEO清除·OH能力Figure 1 Ability of dl-limonene, γ-terpinene, α-terpineol and LEO to remove ·OH

2.1.2 對(duì)DPPH自由基的清除作用 植物揮發(fā)性精油中的酚類(lèi)、烯類(lèi)、醇類(lèi)化合物[17]可阻斷氧化反應(yīng)的自由基鏈，一定程度上可清除DPPH自由基：如γ-萜品烯含有的非共軛二烯可直接清除DPPH自由基[18]。由圖2可知，α-松油醇、γ-萜品烯、dl-檸檬烯對(duì)DPPH自由基的清除作用均隨濃度增大而有較平緩的增強(qiáng)，且三者的清除作用強(qiáng)弱順序表現(xiàn)為dl-檸檬烯>α-松油醇>γ-萜品烯，γ-萜品烯在2 mg/mL濃度下的清除率最低為31.68%；LEO則對(duì)DPPH自由基的清除作用隨濃度增大而有較大幅度的增強(qiáng)，且在高濃度的試驗(yàn)條件下，LEO的DPPH自由基清除作用逐漸接近其主要組分的單體物質(zhì)。黃娜娜[14]53研究發(fā)現(xiàn)柑橘精油中的γ-萜品烯在100 μL/mL濃度下的DPPH自由基清除率達(dá)75.8%，遠(yuǎn)高于同濃度的檸檬烯(DPPH自由基清除率9.7%)、α-松油醇(DPPH自由基清除率4.1%)等其它成分。Choi H等[15]測(cè)得γ-萜品烯(濃度為227.9 mg equiv. Trolox/mL)的DPPH自由基清除率為84.7%，高于d-檸檬烯和α-松油醇的8.8%～16.5%清除率，并測(cè)得尤力克檸檬、里斯本檸檬、塔提希島酸橙等34種柑橘類(lèi)精油的DPPH自由基清除率為17.7%～64.0%，低于同濃度的γ-萜品烯，卻高于同濃度的d-檸檬烯和α-松油醇；且其研究還表明含γ-萜品烯越多的精油有越強(qiáng)的DPPH自由基清除作用。陳思佳等[13]測(cè)得6 mg/mL 檸檬烯對(duì)DPPH自由基清除率僅為56.08%，遠(yuǎn)低于2.25 mg/mL檸檬精油99.47%的DPPH自由基清除率，說(shuō)明檸檬精油中存在其它具有清除自由基作用的成分，且這些成分對(duì)精油的抗氧化活性可能存在相互促進(jìn)或抑制的內(nèi)在關(guān)系。因此，鑒于本試驗(yàn)結(jié)論與上述研究結(jié)論的異同，對(duì)植物精油和其組分間的抗氧化活性比較，還需進(jìn)一步從單體純度、單體結(jié)構(gòu)(如檸檬烯有d-檸檬烯、l-檸檬烯、dl-檸檬烯3種不同結(jié)構(gòu)形式)、單體相互間的作用等方面進(jìn)行多因素探討。

圖2 α-松油醇、γ-萜品烯、dl-檸檬烯和LEO 清除DPPH自由基能力

Figure 2 Ability ofα-terpineol、γ-terpinene、dl-limonene and LEO scavenging DPPH

2.2 抑菌活性

醇類(lèi)、酚類(lèi)、萜烯類(lèi)、酮類(lèi)及其衍生物等是揮發(fā)性精油的主要抑菌成分[19]，但因其在結(jié)構(gòu)上的差異，對(duì)微生物的抑菌作用有較大差別[20-21]。

2.2.1 單體成分的抑菌效果 細(xì)胞壁干擾和破壞細(xì)胞膜完整性的建議性機(jī)制表明：檸檬烯刺激基因表達(dá)與細(xì)胞壁完整性信號(hào)通路有關(guān)；因此，d-檸檬烯可改變細(xì)胞壁特性和干擾隔膜形成，引起細(xì)胞分裂，從而起到抑菌或殺菌的作用[22]。α-松油醇也可通過(guò)破壞細(xì)胞壁、抑制細(xì)菌酶活性、抑制某些調(diào)節(jié)基因產(chǎn)物的翻譯而發(fā)揮抗菌作用[23]?？傮w來(lái)說(shuō)，精油不同單體成分的抑菌活性會(huì)因抑菌條件、微生物類(lèi)型[如細(xì)菌(致病菌、非致病菌)、酵母、霉菌]等因素影響而表現(xiàn)出千差萬(wàn)別。

LEO主要成分單體物質(zhì)的抑菌效果見(jiàn)表1。由表1可知，純LEO對(duì)3種供試菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，相比其3種主要組分的單體物質(zhì)有更好的抑菌效果，與Hong L[24]、Antonio B[25]等的研究結(jié)論一致，說(shuō)明植物精油中具抑菌效果的化學(xué)組分種類(lèi)較多，需對(duì)不同成分間的相互影響開(kāi)展深入探討。就LEO單體物質(zhì)而言，α-松油醇較dl-檸檬烯和γ-萜品烯對(duì)3種供試菌有更佳的抑菌效果，且其抑制作用的強(qiáng)弱次序?yàn)榇竽c桿菌>枯草芽胞桿菌>金黃色葡萄球菌；dl-檸檬烯對(duì)枯草芽孢桿菌的抑制作用最佳，其次為金黃色葡萄球菌；γ-萜品烯在試驗(yàn)條件下僅對(duì)枯草芽孢桿菌表現(xiàn)出一定的抑菌作用。但也有研究[26]表明，5 mg/m3濃度的松油醇(由α-松油醇65%+β-松油醇10%+γ-松油醇20%組成)可使空氣中的細(xì)菌數(shù)量減少68%，高于γ-萜品烯的40%滅菌率。

表1 α-松油醇、dl-檸檬烯、γ-萜品烯和LEO的抑菌效果

2.2.2 單體成分復(fù)配的抑菌效果 精油單體成分在一定條件下的抑菌作用會(huì)受到其它單體成分的影響，并表現(xiàn)出協(xié)同或弱化2種截然相反的作用：如百里香精油具有廣譜抗真菌活性可能是因其所含的35.7%α-松油醇所致，也可能是α-松油醇與其所含的其它成分協(xié)同作用的結(jié)果[27]；而柚子精油和甜橙精油中的某些成分會(huì)降低dl-檸檬烯抑制黃曲霉的能力[28]。在前期單體復(fù)配物的抑菌試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取濃度為1 μL/mL 的α-松油醇、dl-檸檬烯和γ-萜品烯按一定體積比復(fù)配后的抑菌效果分別見(jiàn)表2～4。

表2復(fù)配物對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌效果

Table 2 Antimicrobial effects of compound combined withα-terpineol,dl-limonene andγ-terpinene onBacillussubtilis

復(fù)配形式抑菌圈直徑/mmγ?萜品烯+α?松油醇13．34±0．93γ?萜品烯+dl?檸檬烯11．34±0．60α?松油醇+dl?檸檬烯12．58±0．28γ?萜品烯+α?松油醇+dl?檸檬烯11．04±0．11

表3復(fù)配物對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果

Table 3 Antimicrobial effects of compound combined withα-terpineol,dl-limonene andγ-terpinene onStaphylococcusaureus

復(fù)配形式抑菌圈直徑/mmγ?萜品烯+α?松油醇8．06±0．30γ?萜品烯+2dl?檸檬烯9．48±0．19α?松油醇+2dl?檸檬烯9．54±0．20γ?萜品烯+α?松油醇+2dl?檸檬烯9．63±0．06

表4復(fù)配物對(duì)大腸桿菌的抑菌效果

Table 4 Antimicrobial effects of compound combined withα-terpineol,dl-limonene andγ-terpinene onE.coli

復(fù)配形式抑菌圈直徑/mmγ?萜品烯+2dl?檸檬烯9．40±0．34γ?萜品烯+3α?松油醇13．86±0．402dl?檸檬烯+3α?松油醇13．98±0．23γ?萜品烯+2dl?檸檬烯+3α?松油醇14．00±0．21

對(duì)比表1中各單體物的抑菌圈測(cè)定結(jié)果，表2～4的測(cè)定結(jié)果表明單體復(fù)配物較單體本身對(duì)各供試菌的抑菌效果總體上更佳。尤其是試驗(yàn)條件下對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌不具抑制作用的γ-萜品烯與dl-檸檬烯和α-松油醇復(fù)配后，能進(jìn)一步增強(qiáng)dl-檸檬烯和α-松油醇的抑制效果。另一方面，3種單體物質(zhì)按一定比例兩兩復(fù)配后對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用弱于三者復(fù)配的；而兩兩復(fù)配的單體物質(zhì)對(duì)枯草芽孢桿菌的抑制作用則明顯強(qiáng)于三者復(fù)配的。

3 結(jié)論

(1)α-松油醇、γ-萜品烯、dl-檸檬烯與LEO對(duì)OH·的清除效果較為接近，但這3種單體成分較LEO有更強(qiáng)的DPPH自由基清除作用；由此可推斷精油化學(xué)成分間某些形式和某種程度的組合會(huì)在一定程度上降低精油本身的抗氧化活性，這需要今后進(jìn)一步研究證實(shí)。

(2)α-松油醇、γ-萜品烯和dl-檸檬烯對(duì)枯草芽胞桿菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制強(qiáng)弱次序不一，且對(duì)這3種測(cè)試菌的抑制效果均弱于LEO；而三者間的組合物較其單體的抑菌作用更佳。對(duì)于這3種單體物質(zhì)更大范圍比例組合后的抑菌效果，以及與其它精油組分復(fù)配后的抑菌效果、作用方式、作用機(jī)制等，則需更深入地探討研究，以更好地闡釋不同精油成分間的內(nèi)在關(guān)聯(lián)，為更精準(zhǔn)地篩選精油具抗氧化、抑菌等生理活性的主要目標(biāo)成分提供更好的試驗(yàn)參考和理論依據(jù)。

[1] YAGHMAEI P, PARIVAR K, SAVAR M H. Investigation on the effect of lemon peel essential oil in blood level lipids number of differential leukocytes of Wistar rats[J]. Journal of the Neurological Sciences, 2009, 283(1/2): 297-297.

[2] FISHER K, PHILLIPS C A. The effect of lemon, orange and bergamot essential oils and their components on the survival of Campylobacter jejuni,EscherichiacoliO157, Listeria monocytogenes, Bacillus cereus and Staphylococcus aureus in vitro and in food systems[J]. Journal of Applied Microbiology, 2006, 101(6): 1 232-1 240.

[3] 章斌, 侯小楨, 秦軼, 等. 檸檬果皮精油的化學(xué)組成、抗氧化及抑菌活性研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2015, 36(5): 126-131.

[4] ZAHI R Z, HATTAB M.E., LIANG Hao, et al. Enhancing the antimicrobial activity ofd-limonene nanoemulsion with the inclusion ofε-polylysine[J]. Food Chemistry, 2017, 221: 18-23.

[5] LOKU U A, BECERRA N, KOHLI P, et al. Antimicrobial efficacy of liposomes containingd-limonene and its effect on the storage life of blueberries[J]. Postharvest Biology and Technology, 2017, 128: 130-137.

[6] KESKIN I, GUNAL Y, AYLA S, et al. Effects of Foeniculum vulgare essential oil compounds, fenchone and limonene, on experimental wound healing[J].Biotechnic and Histochemistry, 2017, 92(4): 274-282.

[7] MATHEUS D Baldissera, THIRSSA H Grando, CARINE F Souza, et al. Invitro and invivo action of terpinen-4-ol,γ-terpinene, andα-terpinene against Trypanosoma evansi[J]. Experimental Parasitology, 2016, 162: 43-48.

[8] RUDBUCK J, BERGSTRM M A, BURJE A, et al.α-Terpinene, an antioxidant in tea tree oil, autoxidizes rapidly to skin allergens on air exposure[J]. Chemical Research in Toxicology, 2012, 25(3): 713-721.

[9] WU Zi-li, YIN Zhong-qiong, DU Yong-hua, et al.γ-terpineol inhibits cell growth and induces apoptosis in human liver cancer BEL-7402 cells in vitro[J]. International Journal of Clinical and Experimental Pathology, 2015, 17(22): 5 686-5 689.

[10] PRIYANKA S, RAVINDRA S, BHANU P, et al. Chemical profile, antifungal, antiaflatoxigenic and antioxidant activity of Citrus maxima Burm. andCitrussinensis(L.) Osbeck essential oils and their cyclic monoterpene,dl-limonene[J]. Food and Chemical Toxicology, 2010, 48(6): 1 734-1 740.

[11] MARTUCCI J F, GENDE L B, NEIRA L M, et al. Oregano and lavender essential oils as antioxidant and antimicrobial additives of biogenic gelatin films[J]. Industrial Crops and Prod-ucts, 2015, 71: 205-213.

[12] 李?lèi)? 侯濱濱, 趙婧. 柑橘類(lèi)精油抗菌活性的研究[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā), 2011, 32(6): 190-192.

[13] 陳思佳, 劉雅麗, 張晨, 等. 檸檬精油抗氧化活性的研究[J]. 實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志, 2015, 31(3): 343-346.

[14] 黃娜娜. 柑橘精油抗氧化特性及對(duì)皮膚細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究[D]. 武漢: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2016.

[15] CHOI H, HEE S, HIROYUKI U, et al. Radical-scavenging activities ofcitrusessentialoils and their components: Detection using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2000, 48(9): 4 156-4 161.

[17] YONATHAN A, IKUKO T, SAYURI I, et al. Volatile aroma components and antioxidant activities of the flavedo peel extract of unripe shiikuwasha (Citrus depressa hayata)[J]. Journal of Food Science, 2012, 77(4): C469-C475.

[18] LI Guo-xiang, LIU Zai-qun. Unusual antioxidant behavior ofα-andγ-terpinene in protecting methyl linoleate, DNA, and erythrocyte[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2009, 57(9): 3 943-3 948.

[19] PIETRO L C, VELLASAMY S, NICOLA S I. Antibacterial activity of essential oil components and their potential use in seed disinfection[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2009, 57(20): 9 454-9 461.

[20] üNAL Mustafa ümit, U?AN Filiz,ENER Aysun, et al. Research on antifungal and inhibitory effects of DL-limonene on some yeasts[J].Turkish Journal of Agriculture and Forestry, 2012, 36(5): 576-582.

[21] MARINA D S, DEJAN D B, ANA M D, et al. Chemical composition and antifungal activity of Salvia desoleana Atzei & Picci essential oil and its major components[J]. Flavour and Fragrance Journal, 2009, 24(2): 83-87.

[22] AROSHA U, NATHALIE B, PUNIT K, et al. Antimicrobial efficacy of liposomes containingd-limonene and its effect on the storage life of blueberries[J]. Postharvest Biology and Technology, 2017, 128: 130-137.

[23] PARK S N, LIM Y K, FREIRE M O, et al. Antimicrobial effect of linalool andα-terpineol against periodontopathic and cariogenic bacteria[J]. Anaerobe, 2012, 18(3): 369-372.

[24] LI Hong, YANG Tian, LI Fei-yan, et al. Antibacterial activity and mechanism of action of Monarda punctata essential oil and its main components against common bacterial pathogens in respiratory tract[J]. International Journal of Clinical and Experimental Pathology, 2014, 7(11): 7 389-7 398.

[25] ANTONIO B, MARIA R, MILENA S. In vitro evaluation of the antimicrobial activity of eugenol, limonene, and citrus extract against bacteria and yeasts, representative of the spoiling microflora of fruit juices[J]. Journal of Food Protection, 2010, 73(5): 888-894.

[26] KEI S, SABINE K, GERHARD B. Antimicrobial effect of vapours of geraniol, linalool, terpineol,γ-terpinene and 1,8-cineole on airborne microbes using an airwasher[J]. Flavour and Fragrance Journal, 2007, 22(5): 435-437.

[27] EUGéNIA P, MARIA G, PAULA P, et al. Activity of Thymus caespititius essential oil andα-terpineol against yeasts and filamentous fungi[J]. Industrial Crops & Products, 2014, 62: 107-112.

[28] PRIYANKA S, RAVINDRA S, BHANU P, et al. Chemical profile, antifungal, antiaflatoxigenic and antioxidant activity of Citrus maxima Burm. andCitrussinensis(L.) Osbeck essential oils and their cyclic monoterpene,dl-limonene[J]. Food and Chemical Toxicology, 2010, 48(6): 1 734-1 740.