高效液相色譜法測定吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑

龔會琴，趙亞洲，陳迎麗

(貴州省分析測試研究院，貴陽 550002)

高效液相色譜法測定吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑

龔會琴，趙亞洲，陳迎麗

(貴州省分析測試研究院，貴陽 550002)

建立高效液相色譜儀同時檢測吡蟲啉、氟酰脲的分析方法。以甲醇-水為流動相，使用ZORBAX SB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）和DAD檢測器，在254 nm波長下對18%吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑進行分離和定量分析。該方法檢測吡蟲啉、氟酰脲的線性相關(guān)系數(shù)均為0.999 7，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.66%，2.86%（n=5），平均回收率分別為103.8%，101.0%。該分析方法操作簡便、快速，分離效果好，準(zhǔn)確度和精確度高，適于吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑可雙組分的同時測定。

吡蟲啉；氟酰脲；懸浮劑；高效液相色譜

吡蟲啉是煙堿類超高效殺蟲劑，于20世紀(jì)90年代投產(chǎn)推廣，具有內(nèi)吸、喂毒與觸殺作用［1］。其殺蟲機制主要是選擇性抵制昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)煙堿型乙酰膽堿受體，阻斷昆蟲中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常傳導(dǎo)，導(dǎo)致昆蟲麻痹進而死亡［2］，具有廣譜，高效，低毒，低殘留，害蟲不易產(chǎn)生抗性，對人、畜、植物和天敵安全等特點［3-4］。氟酰脲，又名雙苯氟脲，是美國道農(nóng)科公司開發(fā)的苯甲酰脲類殺蟲劑，通過抑制幾丁質(zhì)的合成，破壞白蟻和其它節(jié)肢動物的獨有酶系統(tǒng)而達到殺蟲的效果［5］，具有較高環(huán)境安全性，對鱗翅目昆蟲極佳的殺蟲活性，易于人工合成等優(yōu)點［6-7］。懸浮劑(SC)［8］能夠與表面活性劑等助劑發(fā)生物理作用，使不溶或難溶原藥顆粒分散入水體，形成穩(wěn)定的懸浮體系，有流動性好、潤濕性好、無粉塵等優(yōu)點，是很熱門的農(nóng)藥劑型。

目前吡蟲啉的應(yīng)用和檢測研究較多［2，9-12］，關(guān)于氟酰脲的研究主要側(cè)重于合成［13-14］，檢測方法研究較少［15-16］。吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑作為新藥，其分析方法暫無報道。筆者采用反相高效液相色譜法，優(yōu)化設(shè)計分離、分析吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑的色譜條件，并對18%吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑進行定量分析，以期達到操作簡便、快速、準(zhǔn)確，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度高的定量分析要求，為產(chǎn)品質(zhì)量控制及應(yīng)用研究提供幫助。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1260型，配DAD檢測器，美國安捷倫科技有限公司；

濾膜：孔徑0.45μm；

甲醇：HPLC級；

吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)樣品：純度為99.1%，農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所；

氟酰脲標(biāo)準(zhǔn)樣品：純度為99.0%，農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所；

吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑：含吡蟲啉15.5%，氟酰脲2.5%，以色列安道麥馬克西姆有限公司；

實驗用水為超純水，電阻率為18.2 MΩ·cm。

1.2 溶液的配制

吡蟲啉-氟酰脲混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液：稱取吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)樣品0.02 g（精確至0.000 2 g）和氟酰脲標(biāo)準(zhǔn)樣品0.02 g（精確至0.000 2 g），置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至標(biāo)線，搖勻。

吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑試樣溶液：稱取18%吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑0.01 g(精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至標(biāo)線，搖勻。

1.3 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm，美國安捷倫科技公司)；流動相：甲醇-水，流量為1 m L ／min；梯度洗脫程序：0～4 min甲醇-水體積比為50∶50，4～12 min甲醇-水體積比為82∶18，16 min時甲醇-水體積比為50∶50；柱溫：30℃；進樣體積：20.0 μL。

1.4 實驗步驟

1.4.1 測定

在1.3色譜條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針吡蟲啉-氟酰脲混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，直至相鄰兩針吡蟲啉-氟酰脲混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的響應(yīng)值相對變化小于1.5%，按照吡蟲啉-氟酰脲混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液、吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑試樣溶液、吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑試樣溶液、吡蟲啉-氟酰脲混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的順序進行測定。

1.4.2 結(jié)果計算

將測得的2針吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑試樣溶液及相鄰前后2針吡蟲啉-氟酰脲混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液中吡蟲啉、氟酰脲的色譜峰面積分別進行平均，然后利用外標(biāo)法進行定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收波長的確定

吡蟲啉、氟酰脲紫外吸收圖譜分別見圖1和圖2。由圖1和圖2可知，吡蟲啉在250～280 nm之間有較強的吸收，在269 nm處吸收最強；氟酰脲在252 nm處吸收最強。為了避免吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑試樣溶液中其它雜質(zhì)的干擾，同時保證吡蟲啉、氟酰脲有較高的響應(yīng)，選擇檢測波長為254 nm。

圖1 吡蟲啉的紫外吸收光譜

圖2 氟酰脲的紫外吸收光譜

2.2 流動相的選擇

試驗結(jié)果表明，用甲醇-水（50∶50）作為流動相時，吡蟲啉在4 min內(nèi)可以被完全洗脫，保留時間約為3.7 min，但氟酰脲在20 min內(nèi)不能出峰，分析時間太長。本試驗采用梯度洗脫的方式，在吡蟲啉出峰后逐漸改變流動相的組成，使氟酰脲被快速洗脫。梯度洗脫的程序：自4 min開始，到6 min時將流動相中甲醇與水的體積比由50∶50逐漸調(diào)整為82∶18，并保持到12 min，這樣可以將氟酰脲的洗脫時間提前到約10.6 min，此條件下吡蟲啉、氟酰脲的色譜峰與雜質(zhì)的色譜峰可以完全分離。

在梯度洗脫條件下對流動相流量進行優(yōu)化。分別設(shè)置流動相流量為0.6，0.8，1.0，1.2 mL／min進行試驗，結(jié)果表明流動相流量為0.6，0.8，1.0 mL／min時吡蟲啉與氟酰脲均分離良好。當(dāng)流動相流量較小時兩組分出峰時間延長；當(dāng)流量為1.2 mL／min時，兩組分出峰時間均提前，但吡蟲啉與雜質(zhì)峰不能很好地分離，氟酰脲的色譜基線也不夠平穩(wěn)。為了保證吡蟲啉和氟酰脲均能在較短的時間內(nèi)出峰，又能達到較好的分離效果，最終確定流動相最佳流量為1.0 mL／min。

吡蟲啉-氟酰脲混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液及吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑試樣溶液的高效液相色譜圖分別見圖3、圖4。

圖3 吡蟲啉、氟酰脲標(biāo)準(zhǔn)樣品的液相色譜圖

圖4 18%吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑的液相色譜圖

2.3 線性關(guān)系和檢出限

將200.0 mg／L的吡蟲啉-氟酰脲混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液分別稀釋成0.50，1.0，2.0，5.0，10.0 mg／L系列混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，按1.3色譜條件進行分析，分別以吡蟲啉、氟酰脲的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得吡蟲啉線性方程為y=53.85x+2.85，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 7；氟酰脲線性方程為y=39.19x+2.45，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 7。結(jié)果表明，在0.5～10 mg／L之間，吡蟲啉和氟酰脲的質(zhì)量濃度與色譜峰面積線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗

測定5份吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑試樣溶液中吡蟲啉、氟酰脲的含量，測定結(jié)果見表1。由表1可知，吡蟲啉、氟酰脲含量測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.66%，2.86%(n=5)，表明該方法精密度良好。

表1 精密度試驗結(jié)果 %

2.5 加標(biāo)回收試驗

向已知含量的吡蟲啉·氟酰脲懸浮劑試樣溶液中分別加入吡蟲啉和氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)樣品，在1.3色譜條件下進樣測定吡蟲啉、氟酰脲的含量，測定結(jié)果見表2。

表2 加標(biāo)回收試驗結(jié)果

由表2可知，吡蟲啉、氟酰脲的加標(biāo)回收率分別為102.0%～105.0%，96.0%～103.0%，表明本法測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

3 結(jié)語

目前對混配制劑中有效成分的定量檢測方法十分繁瑣，不同的成分通常采用不同的檢測方法進行分析，影響檢測效率。筆者選擇具有共同吸收又不受雜質(zhì)干擾的分析波長，采取梯度淋洗方式將兩種組分完全分離，建立了一種高效液相色譜法，可同時簡便、快速、準(zhǔn)確地測定混配制劑中的吡蟲啉和氟酰脲的含量。

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Analysis of Imidacloprid·Fluazine Ureide Suspending Agent by HPLC

Gong Huiqin, Zhao Yazhou, Chen Yingli
(Guizhou Academy of Testing and Analysis, Guiyang 550002, China)

HPLC method was established for the simultaneous determination of imidacloprid and fluorine ureide in suspending agent. The sample was analyzed with ZORBAX SB-C18stainless steel column and DAD at 254 nm， while the mixture solution of methyl alcohol and ultrapure water was used as the mobile phase. The results showed that the linear correlation coefficients of imidacloprid and fluorine ureide were both 0.999 7. The relative standard deviation of the test results was 1.66%, 2.86%(n=5), and the average recovery rate was 103.8%, 101.0%, for imidacloprid and fluoride ureide, respectively. The method has the advantages of fast speed, good separation, high precision and accuracy, and it is suitable for simultaneous determination of imidacloprid and fluorine ureide in suspending agent.

imidacloprid; fluorine ureide; suspending agent; HPLC

O657.7

:A

:1008-6145(2017)02-0073-03

10.3969／j.issn.1008-6145.2017.02.019

聯(lián)系人：龔會琴；E-mail： gonghuiqin@gzata.cn

2016-12-24