TLR4在晚發(fā)型新生兒敗血癥患兒群體中的表達(dá)與監(jiān)測(cè)價(jià)值

路芳，鄔進(jìn)輝

(荊門(mén)市第二人民醫(yī)院兒科，湖北 荊門(mén) 448000)

TLR4在晚發(fā)型新生兒敗血癥患兒群體中的表達(dá)與監(jiān)測(cè)價(jià)值

路芳，鄔進(jìn)輝

(荊門(mén)市第二人民醫(yī)院兒科，湖北 荊門(mén) 448000)

目的 研究Toll樣受體4(TLR4)在晚發(fā)型新生兒敗血癥患兒群體中的表達(dá)作用與監(jiān)測(cè)價(jià)值。方法回顧性分析2015年1月至2016年2月于我院收治的33例晚發(fā)型新生兒敗血癥患者(觀察組)的臨床資料，另取同期33例健康體檢兒作為對(duì)照組。觀察組患兒根據(jù)感染病原體不同分為革蘭氏陽(yáng)性菌感染組(陽(yáng)性組20例)，革蘭氏陰性菌感染組(陰性組13例)。分別對(duì)比三組受檢者的TLR4 mRNA含量以及C反應(yīng)蛋白(CRP)水平，并用Spearman法作TLR4 mRNA與CRP的相關(guān)性分析。結(jié)果觀察組新生兒TLR4 mRNA表達(dá)為(1.83±0.25)，明顯高于對(duì)照組的(0.31±0.08)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；陽(yáng)性組新生兒TLR4 mRNA表達(dá)為(1.74±0.25)，明顯低于陰性組的(1.95± 0.26)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；陽(yáng)性組和陰性組CRP水平分別為(53.42±23.11)mg/L及(46.87±18.56)mg/L，均明顯高于對(duì)照組的(2.79±1.94)mg/L，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；TLR4 mRNA含量與CPR水平呈顯著正相關(guān)(r= 0.832，P=0.000)。結(jié)論臨床中通過(guò)監(jiān)測(cè)TLR4有利于早期診斷晚發(fā)型新生兒敗血癥，特別是在診斷革蘭陰性菌感染所致的敗血癥中具有更高的臨床診斷價(jià)值。

Toll樣受體4；晚發(fā)型；新生兒敗血癥；表達(dá)；監(jiān)測(cè)

臨床上，由于新生兒免疫功能相對(duì)不成熟，加上自身多種易感因素的存在，易發(fā)生細(xì)菌感染，而在細(xì)菌感染后因?yàn)橹委熛鄬?duì)困難，從而可能會(huì)導(dǎo)致敗血癥的發(fā)生[1-2]。新生兒敗血癥具有早期臨床表現(xiàn)不典型，病情發(fā)展快速的特點(diǎn)，是導(dǎo)致新生兒死亡的重要原因之一[3]。因此，尋找一種具有較高敏感性、特異性的治療對(duì)新生兒敗血癥進(jìn)行早期有效診斷具有極其重要的臨床意義。鑒于此，本文通過(guò)研究TLR4在晚發(fā)型新生兒敗血癥患兒群體中的表達(dá)作用與監(jiān)測(cè)價(jià)值并進(jìn)行分析，旨在為臨床診斷及治療提供新型監(jiān)測(cè)指標(biāo)，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月至2016年2月我院收治的晚發(fā)型新生兒敗血癥33例作為觀察組，另取同期33例健康體檢兒作為對(duì)照組。觀察組中男性20例，女性13例；胎齡37～42周，平均(39.3±2.6)周；年齡8～28 d，平均(18.7±3.4)d。對(duì)觀察組患兒另根據(jù)感染病原體不同分為革蘭氏陽(yáng)性菌感染組(陽(yáng)性組，20例)，革蘭氏陰性菌感染組(陰性組，13例)。對(duì)照組中男性19例，女性14例；胎齡37～42周，平均(39.4±2.6)周；年齡9～28 d，平均(18.9±3.5)d。兩組新生兒在年齡、性別、胎齡等基本資料方面比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 檢測(cè)方法[4]所有患兒均于清晨空腹收集2 mL靜脈血，隨后取0.5 mL進(jìn)行C反應(yīng)蛋白(CRP)水平檢測(cè)，選用邁瑞公司生產(chǎn)的BECKMAN生化儀以及免疫投射比濁法進(jìn)行。剩余1.5 mL靜脈血加入Ficoll分離液(購(gòu)自上海普飛生物技術(shù)有限公司)，應(yīng)用密度梯度離心法，在3 500 r/min下進(jìn)行離心20 min，成功分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞，然后加入Trizol(MRI公司生產(chǎn))提取總RNA，置于-70℃冰箱保存。采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)TLR4 mRNA含量，其中PT-PCR試劑盒購(gòu)自TaKaRa公司，具體方法嚴(yán)格按照TaKaRa試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3 觀察指標(biāo) 比較三組新生兒的TLR4 mRNA含量和CPR水平，并分析TLR4 mRNA與CRP相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)，多組間的計(jì)量數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，應(yīng)用Spearman法分析相關(guān)性，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 觀察組與對(duì)照組新生兒的TLR4 mRNA含量比較 觀察組新生兒的TLR4 mRNA表達(dá)水平為(1.83±0.25)，顯著高于對(duì)照組的(0.31±0.08)，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=33.265，P＜0.01)。

2.2 陽(yáng)性組與陰性組新生兒的TLR4 mRNA含量比較 陽(yáng)性組新生兒TLR4 mRNA表達(dá)水平為(1.74±0.25)，明顯低于對(duì)照組的(1.95±0.26)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.321，P＜0.05)。

2.3 陽(yáng)性組、陰性組和對(duì)照組新生兒的CRP水平比較 陽(yáng)性組和陰性組CRP水平均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 陽(yáng)性組、陰性組和對(duì)照組新生兒的CRP水平比較(mg/L，±s)

表1 陽(yáng)性組、陰性組和對(duì)照組新生兒的CRP水平比較(mg/L，±s)

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05。

組別陽(yáng)性組陰性組對(duì)照組CRP 53.42±23.11a46.87±18.56a2.79±1.94例數(shù)20 13 33 F值P值12.483 0.000

2.4 TLR4 mRNA與CRP相關(guān)性 TLR4 mRNA含量與CPR水平呈顯著正相關(guān)(r=0.832，P=0.000)。

3 討 論

新生兒敗血癥發(fā)病早期無(wú)典型臨床表現(xiàn)，患兒多表現(xiàn)為不哭、不動(dòng)、嗜睡、反應(yīng)力較低等，較易增加臨床及時(shí)診斷的難度。傳統(tǒng)的血培養(yǎng)是臨床上確診敗血癥的金標(biāo)準(zhǔn)，但此法的陽(yáng)性率較低，且至少在2 d后才能得到結(jié)果，通常無(wú)法進(jìn)行早期診斷[5-6]。因此，尋找一種準(zhǔn)確而又快速的診斷新生兒敗血癥的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)成為了臨床醫(yī)師所關(guān)注的問(wèn)題。CRP是目前臨床上應(yīng)用較為廣泛的新生兒敗血癥經(jīng)典指標(biāo)之一，可在新生兒發(fā)生感染后6 h內(nèi)迅速增加，48 h內(nèi)達(dá)峰，且高峰值是正常值的100～1 000倍[7]。但其在腫瘤、其他免疫性疾病中亦會(huì)迅速升高，因此具有特異性偏低的缺點(diǎn)。此外，有研究報(bào)道表明，CPR的表達(dá)在革蘭氏陽(yáng)性菌感染與革蘭氏陰性菌感染之間無(wú)明顯差異，這可能會(huì)導(dǎo)致我們?cè)谂R床區(qū)分病原菌感染以及抗生素的選擇中造成一定困難[8]。

本文通過(guò)研究后發(fā)現(xiàn)，觀察組新生兒TLR4 mRNA含量顯著高于對(duì)照組。這提示了TLR4在新生兒敗血癥中具有較高的表達(dá)，可能可作為臨床早期診斷新生兒敗血癥的指標(biāo)之一。分析原因，TLR4屬于天然免疫與獲得性免疫連接的橋梁，可通過(guò)與病原識(shí)別模式分子結(jié)合，同時(shí)經(jīng)由介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)而使炎癥因子釋放，從而有效識(shí)別病原微生物，并啟動(dòng)相應(yīng)的炎癥應(yīng)答[9-10]。此外，陽(yáng)性組新生兒TLR4 mRNA含量顯著低于陰性組，且陽(yáng)性組以及陰性組CRP水平均顯著高于對(duì)照組。這充分說(shuō)明了TLR4可作為診斷新生兒敗血癥的指標(biāo)[11-12]。究其原因，筆者認(rèn)為其主要機(jī)制可能與TLR4具有識(shí)別脂多糖等革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁成分有關(guān)，這一結(jié)果同時(shí)也提示了在對(duì)可疑新生兒敗血癥患兒進(jìn)行早期檢測(cè)CRP的同時(shí)，測(cè)定TLR4水平可作為判斷敗血癥感染的指標(biāo)，且對(duì)革蘭氏陰性菌感染的診斷價(jià)值更高[13-15]。此外，本文結(jié)果還顯示了TLR4 mRNA含量與CPR水平呈顯著正相關(guān)。這也再次證實(shí)了在敗血癥新生兒的檢測(cè)中，TLR4可作為CRP的補(bǔ)充指標(biāo)[16]。

綜上所述，TLR4可作為臨床上早期診斷晚發(fā)型新生兒敗血癥的新指標(biāo)，特別是對(duì)識(shí)別革蘭陰性菌感染具有更高的價(jià)值。臨床可通過(guò)研究TLR4信號(hào)傳導(dǎo)途徑，進(jìn)一步探討是否可通過(guò)抑制其活化，從而達(dá)到有效控制炎癥瀑布反應(yīng)的發(fā)生，最終為臨床治療新生兒敗血癥帶來(lái)新的思路以及理論依據(jù)。

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Expression and monitoring value of TLR4 in the group of children with late-onset neonatal sepsis.

LU Fang,WU Jin-hui.Department of Pediatrics,Jingmen Second People's Hospital,Jingmen 448000,Hubei,CHINA

ObjectiveTo study the expression of Toll like receptor 4(TLR4)in children with late-onset neonatal sepsis.MethodsA retrospective analysis was performed in 33 cases of late-onset neonatal septicemia(the observation group)and 33 cases of healthy children(the control group)from January 2015 to February 2016 in our hospital.The children of the observation group were further divided into leather of Gram-positive bacteria infection group(positive group,20 cases)and Gram-negative bacteria infection group(negative group,13 cases)according to different pathogens. The levels of TLR4 mRNA and C reactive protein(CRP)were compared among the three groups,and correlation between TLR4 mRNA and CRP was analyzed with Spearman's rank correlation.ResultsThe TLR4 mRNA levels in the observation group was(1.83±0.25),which was significantly higher than(0.31±0.08)in the control group,P＜0.05.The TLR4 mRNA levels in positive group was(1.74±0.25),significantly lower than(1.95±0.26)in the negative group,P＜0.05.CRP level was(53.42±23.11)mg/L in positive group and(46.87±18.56)mg/L in negative group,which were significantly higher than(2.79±1.94)mg/L in the control group,with statistically significant differences(P＜0.05).TLR4 mRNA and CPR level were positively correlated(r=0.832,P=0.000).ConclusionClinical monitoring of TLR4 is beneficial to the diagnosis of late-onset neonatal sepsis,especially in the diagnosis of sepsis with Gram-negative bacteria infection.

Toll like receptor 4;Late-onset;Neonatal sepsis;Expression;Monitoring

R722.13+1

A

1003—6350（2017）03—0421—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.03.025

2016-08-24)

湖北省荊門(mén)市科技局科技引導(dǎo)計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：2009YDS35）

路芳。E-mail：15908660622@139.com