正交設(shè)計(jì)法探討黑木耳多糖的提取

張星和+符翠麗

（保山學(xué)院 云南 保山 678000）

摘 要：探討了利用酶解法從黑木耳中提取多糖的不同因素的影響，通過(guò)正交試驗(yàn)確立了酶法提取多糖的最佳條件為：酶解時(shí)間60min，溫度50 ℃，pH為5.0，料液比1：：80，反復(fù)提取三次，多糖提取率達(dá)到15.64%。

關(guān)鍵詞：酶法；黑木耳；正交設(shè)計(jì)

黑木耳是我國(guó)著名的藥用和食用的膠質(zhì)真菌，是木耳系真菌類擔(dān)子菌綱。經(jīng)常食用木耳， 可益氣養(yǎng)神、滋陰潤(rùn)燥，增強(qiáng)抵抗力。多糖是一類具有廣泛活性的生物大分子，又叫多聚糖。多糖不僅僅是人體生命必需的成分，也存在于一切細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)中，參與多種生命活動(dòng)。木耳多糖是黑木耳的活性成分之一，其生物活性越來(lái)越受到重視[1]。多糖的提取方法有很多種。水浸提法操作簡(jiǎn)單，可是耗能多，耗時(shí)長(zhǎng)，提取效率較低[2]。本文通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)黑木耳多糖酶法提取的條件進(jìn)行了優(yōu)化。

1.材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

黑木耳購(gòu)于保山金方超市；纖維素酶（BR，30U/mg，上海博奧生物科技有限公司）；其他試劑均為分析純。

HH-S26s數(shù)顯恒溫水浴鍋；GUO HUA 800低數(shù)離心機(jī)； JH-14-07 A-14-07-161型可見(jiàn)分光光度計(jì)；DFT-200型手提式高速萬(wàn)能粉碎機(jī)；DHG-9075A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱等。

1.2 多糖含量的測(cè)定

目前，多糖的測(cè)定方法主要有蒽酮硫酸法和苯酚-硫酸法[3-4]，本實(shí)驗(yàn)采用第二種方法，以干燥至恒重的葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品。

1.3 木耳多糖的制備

準(zhǔn)確稱取過(guò)60目篩的木耳粉末若干于圓底燒瓶中，加少量蒸餾水浸泡24h，加入一定量的酶溶液并調(diào)pH值，放入恒溫水浴鍋中酶解一段時(shí)間后取出，離心得上清液。再將剩余沉淀重復(fù)酶解兩次，合并上清液。放入90℃的水浴鍋中滅活10min，冷卻。用80%乙醇沉淀，離心得粗多糖，待顯色后于490nm出測(cè)定吸光度A。

1.4 粗多糖提取率計(jì)算

多糖得率（%）=（多糖含量/原料重量）×100%

1.5 酶法提取的正交實(shí)驗(yàn)

影響多糖提取率的因素很多，如酶的添加量，反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)溫度及其pH值。針對(duì)這些因素，采用四因素三水平的正交實(shí)驗(yàn)確定木耳多糖酶解法提取的最佳條件，具體參數(shù)見(jiàn)表1。

2. 結(jié)果與討論

2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

由實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)（x），吸光度（y）為縱坐標(biāo)繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=0.5021x+0.0163，R2=0.994，線性關(guān)系良好。

2.2 酶法提取條件的優(yōu)化

取樣品每份0.200g，按照L9（34）分9組實(shí)驗(yàn)，得到的數(shù)據(jù)如表2所示。

由直觀分析可知，RB>RC>RD>RA，四個(gè)影響多糖提取率的因素主次順序，分別是B>C>D>A，即酶的添加量>酶解溫度>pH>酶解時(shí)間，最佳參數(shù)為A1B3C3D3，即以料液比1：80，在pH為5.0的緩沖溶液中，回流提取60min，提取溫度定為50℃，反復(fù)提取三次，多糖提取率最高。按照最佳反應(yīng)條件進(jìn)行三次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果木耳多糖的提取率為15.64%，較最高3號(hào)樣14.51%高。

3. 結(jié)論

本文采用纖維素酶解新方法提取木耳多糖，該工藝通過(guò)酶水解破壞植物細(xì)胞壁的作用，可以使細(xì)胞內(nèi)的多糖物質(zhì)充分溶出，從而顯著提高了橘皮多糖提取率。

為進(jìn)一步優(yōu)化酶解法提取多糖實(shí)驗(yàn)條件，本實(shí)驗(yàn)用L9（34）正交表考察了酶添加量（液料比）、酶解溫度、酶解時(shí)間以及pH4個(gè)因素對(duì)提取率的影響。在最佳條件下，纖維素酶法提取木耳多糖的提取率為15.64%。

參考文獻(xiàn)

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