桑白皮中摩魯新L的含量測(cè)定方法研究

薛天樂(lè)，丁 銳

亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，亳州，236800

桑白皮中摩魯新L的含量測(cè)定方法研究

薛天樂(lè)，丁 銳

亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，亳州，236800

為探索桑白皮中摩魯新L含量的測(cè)定方法，利用高效液相色譜法對(duì)桑白皮中摩魯新L含量進(jìn)行了測(cè)定(色譜條件：Alltima C18色譜柱：4.6 mm×250 mm,5μm，流動(dòng)相乙腈:水:乙酸=50∶50∶0.1，檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm)，結(jié)果表明：摩魯新 L在3.6～18 μg/mL之間線性良好(R2= 0.9993)，平均回收率為100.2%，RSD=1.1%。

桑白皮；摩魯新L；高效液相色譜法

桑白皮是?？浦参锷?MorusalbaL.)的干燥根皮，是常用的中藥材之一，有利水消腫、瀉肺平喘的功效。近年來(lái)，有研究表明桑白皮還具有降血糖、降血壓、降血脂、抗病毒、抗炎、止咳平喘等多種藥理活性[1-6]，極具開(kāi)發(fā)潛力。但是，2015年版的中國(guó)藥典中還未給出桑白皮中有效成分含量的測(cè)定方法，限制了其應(yīng)用。桑白皮中黃酮類化合物含量豐富，其中摩魯新L的含量較大且和多種藥理活性有關(guān)[7-8]，因此，本文擬建立桑白皮中摩魯新L的含量測(cè)定方法，希望能為桑白皮的二次開(kāi)發(fā)提供參考。

1 儀器與試劑

Agilent1100液相色譜儀(美國(guó)Agilent)，KQ2200超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司)，摩魯新L(自制，經(jīng)多種方法檢測(cè)均為單體，高效液相色譜歸一化法檢測(cè)其純度達(dá)到99.76%)，桑白皮飲片(亳州同仁堂飲片廠)，乙腈(色譜純)，實(shí)驗(yàn)室用水為雙蒸水，乙酸(色譜純)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 確定提取溶劑

分別采用氯仿，乙酸乙酯，40%、80%和無(wú)水甲醇等溶劑超聲處理40min，結(jié)果顯示氯仿和乙酸乙酯的提取效率差，而40%、80%及無(wú)水甲醇提取效率相當(dāng)。無(wú)水甲醇無(wú)需配置，且提取物水溶性雜質(zhì)小，因此以無(wú)水甲醇作為提取溶劑。

2.2 確定提取方法與時(shí)間

將桑白皮粉碎成粗粉，取6份，每份1.0g，分別加入無(wú)水甲醇50.0mL，用超聲提取法和加熱回流提取法分別提取20、40和60min，結(jié)果顯示兩種提取方法效率相當(dāng)，均為處理60min提取率最高。與回流法相比，超聲提取法具有不加熱、有效成分損失少的優(yōu)點(diǎn)，因此以超聲提取60min作為制備方法。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取經(jīng)105℃干燥至恒量的摩魯新L4.5mg，置于容量瓶中，用無(wú)水甲醇定容至25.0mL, 搖勻得0.18mg/mL對(duì)照品溶液，微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，備用。

2.4 供試品溶液的制備

將桑白皮飲片粉碎成粗粉，精密稱取1.0g，加無(wú)水甲醇50.0mL，超聲提取60min，提取液濃縮，置于容量瓶中，再用無(wú)水甲醇定容至25.0mL，作為供試品溶液。

2.5 色譜條件

AlltimaC18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)，流動(dòng)相乙腈-水-乙酸(50∶50∶0.1);檢測(cè)波長(zhǎng)270nm，柱溫室溫，流速1.0mL·min-1。在此條件下摩魯新L與其他組分均能達(dá)到基線分離(圖1、2、3)。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取摩魯新L對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分別置于10.0mL容量瓶中，以無(wú)水甲醇定容至刻度線，按“2.5”的色譜條件，進(jìn)樣量為20μL，以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果顯示摩魯新L在3.6～18μg/mL濃度之間線性良好，曲線方程為：y=112193x+26335，R2=0.9993。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取濃度為7.2 μg/mL對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果如表1。

圖1 摩魯新L的色譜圖

圖2 桑白皮藥材的色譜圖

圖3 兩者的對(duì)照色譜圖

表1 精密度試驗(yàn)

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取質(zhì)量濃度為18 μg/mL的對(duì)照品溶液，分別在1、4、8、12、24、36、48 h進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.9 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取同一批樣品各5份,每份1.0 g，分別按照“2.4”方法制備供試品溶液，各進(jìn)樣20 μL進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如表3。

表3 重現(xiàn)性試驗(yàn)

2.10 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精確取已知含量的桑白皮粗粉9份，每份各1.0 g，分別加入等量的對(duì)照品，按“2.4”條件制備，然后按“2.5”色譜柱條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量為20 μL，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算摩魯新L的含量，再根據(jù)加入量和樣品含量計(jì)算平均回收率，結(jié)果如表4。

表4 回收率實(shí)驗(yàn)

2.11 不同批號(hào)桑白皮中摩魯新L的含量測(cè)定

取5批桑白皮飲片樣品，按“2.4項(xiàng)”條件制備，然后按“2.5”色譜柱條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量為20 μL，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算摩魯新L的百分含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 不同批號(hào)桑白皮中摩魯新L的含量測(cè)定

3 結(jié) 語(yǔ)

本文建立了一種利用高效液相檢測(cè)桑白皮中摩魯新 L的方法，結(jié)果表明：本方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確且重現(xiàn)性好，可以作為桑白皮中摩魯新L的含量測(cè)定方法。

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(責(zé)任編輯：汪材印)

10.3969/j.issn.1673-2006.2017.01.31

2016-10-29

安徽省教育廳自然科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(KJ2016A500)；亳州市中藥科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(BZ2013zzb06)。

薛天樂(lè)(1981-)，安徽亳州人，碩士，講師，研究方向:中藥活性成分提取與分離。

R284.1

A

1673-2006(2017)01-0114-03