RP-HPLC法測定復(fù)方威麥靈膠囊中巖白菜素的含量

朱正華 保花艷 羅 敏

云南省曲靖市食品藥品檢驗檢測中心，云南 曲靖 655000

RP-HPLC法測定復(fù)方威麥靈膠囊中巖白菜素的含量

朱正華 ?；ㄆG 羅 敏

云南省曲靖市食品藥品檢驗檢測中心，云南 曲靖 655000

目的：建立反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定復(fù)方威麥靈膠囊中巖白菜素含量的方法。方法：采用ODS HYPERSIL C18色譜柱(250mm×4.6mm，5um)；以乙腈-水(15∶85)為流動相，流速為1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：275nm。結(jié)果：巖白菜素濃度在20.9～209.4μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=0.9998，平均回收率為98.80%(RSD為0.65%)。結(jié)論：本方法操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于復(fù)方威麥靈膠囊中巖白菜素的含量測定。

復(fù)方威麥靈膠囊；巖白菜素；反相高效液相色譜法

復(fù)方威麥靈膠囊是曲靖市第一人民醫(yī)院研制的院內(nèi)制劑。由金蕎麥、巖白菜素、絞股藍組成，具有祛邪扶正、清熱解毒、活血化瘀、消瘀散結(jié)、鎮(zhèn)咳祛痰的功效，臨床用于咳嗽、慢性支氣管炎、肺膿瘍，肺癌等癥，配合放化療有增效減毒作用。制劑中巖白菜素具有鎮(zhèn)咳祛痰功效，臨床用于慢性支氣管炎。復(fù)方威麥靈膠囊現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中以化學(xué)鑒別及浸出物來控制藥品質(zhì)量，未建立制劑中巖白菜素的含量測定方法。本研究參照文獻[3-5]，以巖白菜素為定量控制指標(biāo)，采用反向高效液相色譜法對巖白菜素進行含量測定，為有效控制復(fù)方威麥靈膠囊質(zhì)量提供了準(zhǔn)確可靠且簡便易行的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1260型高效液相色譜儀(包括G1311C系列四元泵，G1314F VMD檢測器，G1316A柱溫箱，G1329B自動進樣器)；KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；METTLE MS205DU電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；一體式超純水儀(PURELAB FLex 3，英國ELGA公司)

1.2 材料 巖白菜素(批號:111532-201203，含量以100.0%，中國食品藥品檢定研究院)；甲醇為分析純，乙腈為色譜純，水為二次純化水。復(fù)方威麥靈膠囊(批號：150909、151216、160421，曲靖市第一人民醫(yī)院制劑室)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 ODS HYPERSIL C18色譜柱(250mm×4.6mm，5um)；以乙腈(A)-水(B)(15∶85)為流動相；流速為1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：275nm；進樣量10μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液制備 取本品內(nèi)容物，混勻，取約0.5g，精密稱定，置100mL量瓶中，加入甲醇適量，超聲(頻率：45KHz；功率：300W)40min，取出，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品儲備液的制備 精密稱取巖白菜素對照品10.47mg置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得巖白菜素209.4μg/mL的對照品儲備溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按復(fù)方威麥靈膠囊處方比例，分別稱取除巖白菜素以外的其他藥材，依復(fù)方威麥靈膠囊工藝制備不含巖白菜素的陰性樣品，并按“2.2.1”項下制備陰性樣品溶液。2.3 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取“2.2.2”項下巖白菜素對照品儲備溶液1.0、2.5、5.0、7.5、10mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得含巖白菜素分別為20.90、52.35、104.70、157.05、209.40 μg/mL 的系列對照品溶液。在“2.1”項下色譜條件進樣分析，以對照品濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，計算線性回歸方程，得巖白菜素的回歸方程Y=9.7331X+48.0052(r=0.9998)。結(jié)果表明：巖白菜素濃度在20.9～209.4μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗 精密吸取同一巖白菜素對照品溶液(含巖白菜素157.05 μg/mL)“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，測定峰面積值，峰面積值的RSD為0.32%。

2.5 重復(fù)性試驗 取同1批復(fù)方威麥靈膠囊(批號150909)6份，按“2.2.1”項下的方法處理，考察方法的重復(fù)性。供試品中巖白菜素含量的RSD為1.2%。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同1份供試品溶液(批號150909)，分別于0、2、4、8、12、24h按“2.1”項下色譜條件進行分析。結(jié)果巖白菜素峰面積值的RSD為1.2%。表明供試品溶液在室溫下放置24h基本穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗 分別取已知含量的同一批復(fù)方威麥靈膠囊(批號150909)約0.25g，精密稱定，共6份，分別精密加入對照品溶液(濃度為7.011 mg/mL)1mL，按“2.2.1”項下的方法處理，制備供試品溶液，分別測定，計算回收率。平均回收率為98.80%，RSD為0.65%。見表1。

2.8 專屬性試驗 將陰性樣品溶液按“2.1”項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果色譜圖中在巖白菜素相應(yīng)出峰位置未出現(xiàn)干擾峰。

表1 回收率測定結(jié)果 (n=6)

2.9 樣品含量測定 取不同批號的供試品3批按“2.2.1”項下的方法處理，制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，按上述色譜條件測定峰面積積分值，以外標(biāo)法計算巖白菜素含量。見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果 (n=3)

3 討論

3.1 流動相的選擇 實驗先后試用文獻中[3-4]甲醇-水(25∶75)不同比例作為流動相以及文獻中[5]中甲醇-1%醋酸溶液(11∶89)不同比例作為流動相測定，對照品及樣品中巖白菜素的峰形均不理想。結(jié)果本文試用了文獻[6]的乙腈-水(10∶90)的不同比例作為流動相，結(jié)果以乙腈-水(15∶85)為流動相能得到對稱性較好的巖白菜素峰，并且樣品中巖白菜素與其它雜質(zhì)能很好地分離，故選用乙腈-水(15∶85)為流動相。

3.2 提取方法的選擇 ①提取方法的確定：試驗中試用了文獻[6]中樣品處理方法，結(jié)果超聲提取效果較好，且加標(biāo)回收率較高，故選用超聲提取。②超聲時間的確定：精密稱取樣品(批號20150909)5份，每份約0.5g，置100mL量瓶中，加入甲醇適量,分別超聲(頻率：45KHz；功率：300W)處理10、20、30、40、50 min后測定巖白菜素含量，結(jié)果超聲30 min后，巖白菜素含量基本不再改變，證明樣品超聲處理30min后，能將樣品中的巖白菜素提取完全，所以超聲(頻率：45KHz；功率：300W)時間確定為40 min。

綜上，該方法準(zhǔn)確、快速、簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于復(fù)方巖白菜膠囊中巖白菜素的含量測定。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：105.

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[3]孫詩清.李多偉.郭培瑩. RP-HPLC測定不同產(chǎn)地鬼燈檠中巖白菜素的含量[J].中成藥，2003，25(12)：979-981.

[4] 楊懷鏡，姚宏春，張全望． HPLC 法測定巖白菜素和復(fù)方巖白菜素片的含量[J]．中國藥事，2003，17(3) : 171．

[5] 魏學(xué)君，任文學(xué)，陳占立，等. 反相高效液相色譜法測定復(fù)方矮地茶膠囊中巖白菜素含量[J]. 中國藥業(yè). 2009，18(22)：29-30．

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Determination of Bergenin in Compound Wei Mailing Capsules by RP-HPLC

ZHU Zhenghua BAO Huayan LUO Min

Yunnan qujing city food and drug inspection test center,Qujing 655000，China

Objective To establish high performance liquid chromatography(HPLC) determination of bergenin in compound Wei Mailing capsules.Method The determination was performed on ODS HYPERSIL C18(250mm×4.6mm，5μm)column with mobile phase consisted of acetonitrile-water(15∶85，V/V)at the flow rate of 1.0 ml/min. The column temperature was 30 ℃，and the detection wavelength was set at 275nm.Results The linear range of bergenin were 20.9～209.4 μg(r=0.9998)with an average recovery of 98.80%(RSD=0.65%).Conclusions The method is simple, the result is accurate and reliable.It can be used for the determination of bergenin in compound Wei Mailing capsules.

Compound Wei Mailing Capsules; Bergenin;RP-HPLC

朱正華(1982-)，男，漢族，本科，主管藥師，研究方向為食品、藥品、保健品、化狀品的檢驗檢測。E-mail:63149022@qq.com

R914

A

1007-8517(2017)04-0027-03

2016-12-09 編輯：梁志慶)