骨橋蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及對預(yù)后的影響

李美艷

(河北省邯鄲市中心醫(yī)院婦一科，河北 邯鄲 056008)

·論 著·

骨橋蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及對預(yù)后的影響

李美艷

(河北省邯鄲市中心醫(yī)院婦一科，河北 邯鄲 056008)

目的檢測骨橋蛋白(osteopontin，OPN)在子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma，EC)組織中的表達(dá)情況，分析探討OPN與EC臨床病理因素(年齡、手術(shù)-病理分期、組織學(xué)分化、肌層浸潤深度、組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)的關(guān)系及其對預(yù)后的影響。方法選取171例經(jīng)病理檢查確診的EC患者，采用免疫組織化學(xué)SP法檢測EC蠟塊中OPN的表達(dá)，并探討其與EC預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果OPN在171例EC組織中的陽性表達(dá)率為63.74%(109/171)，不同手術(shù)-病理分期、組織學(xué)分化、肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中陽性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Kaplan-Meier分析顯示，OPN表達(dá)、手術(shù)-病理分期、肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與EC生存率有關(guān)(P<0.05)。Cox分析顯示，OPN和手術(shù)-病理分期、肌層浸潤深度均為EC不良預(yù)后的危險因素。結(jié)論OPN為EC預(yù)后的危險因素，對判斷預(yù)后及指導(dǎo)治療具有重要的臨床意義。

子宮內(nèi)膜癌；骨橋蛋白；免疫組織化學(xué)；預(yù)后

美國國立癌癥研究所監(jiān)測、流行病和結(jié)果數(shù)據(jù)庫(Surveillance，Epidemiology，and End Results Cancer，SEER)是北美最具代表性的大型腫瘤登記注冊數(shù)據(jù)庫之一[1]，根據(jù)其統(tǒng)計顯示2014年新發(fā)女性癌癥患者超過81萬[2]。子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma，EC)是女性生殖器官最常見的惡性腫瘤之一，占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%，在我國發(fā)病率居婦科惡性腫瘤的第2位[3]，嚴(yán)重威脅女性健康。骨橋蛋白(osteopontin，OPN)在惡性腫瘤中的異常表達(dá)與腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后有關(guān)，已越來越多地應(yīng)用于腫瘤機(jī)制的研究[4-5]，對EC預(yù)后的預(yù)測和診治具有指導(dǎo)作用。本研究探討OPN蛋白與臨床病理因素的關(guān)系及對EC患者預(yù)后的影響，旨在為臨床病情的評估和指導(dǎo)治療提供幫助，對確定個體化治療方案、判斷預(yù)后有重要意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2009年1月—2015年6月邯鄲市中心醫(yī)院婦科隨訪資料完整且初診治療為EC的患者171例(排除合并其他惡性腫瘤及心腦血管疾病者)，年齡24～74歲，平均(49.54±0.76)歲。根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(2009)EC手術(shù)-病理分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ～Ⅱ期145例，Ⅲ～Ⅳ期26例；組織學(xué)分化：高-中分化(G1、G2)112例，低分化(G3)59例；肌層浸潤：<1/2肌層123例，≥1/2肌層48例；組織學(xué)類型：Ⅰ型131例，Ⅱ型40例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：術(shù)后證實(shí)有淋巴轉(zhuǎn)移的23例，無淋巴轉(zhuǎn)移的148例。免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶鏈接(streptavidin persoidase,SP)法提示OPN陽性109例，陰性62例。所有病例術(shù)前均未進(jìn)行放化療及內(nèi)分泌治療，所有病理切片請2位病理科醫(yī)師復(fù)核，并選取包含腫瘤組織的蠟塊標(biāo)本備用。

1.2 試劑與方法 鼠抗人OPN單克隆抗體為美國Santa Gruz公司產(chǎn)品，購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組織化學(xué)SP法試劑盒、PBS緩沖液、DAB試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)公司。采用免疫組織化學(xué)SP法檢測OPN在EC中的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按說明書操作，以已確定的陽性標(biāo)本切片為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 每張切片均按陽性細(xì)胞百分比及染色強(qiáng)弱免疫組織化學(xué)評分。OPN陽性染色主要定位于細(xì)胞質(zhì)(胞膜或胞漿)，細(xì)胞核不著色，以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性表達(dá)。光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果，高倍鏡下每張切片隨機(jī)觀察5個視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)。染色強(qiáng)度評分：基本不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細(xì)胞百分比評分：<10%為0分，10%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%為3分。染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比的乘積≥3分為免疫反應(yīng)陽性，結(jié)果判斷均由2名高年資病理醫(yī)生統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 隨訪 通過電話、門診復(fù)查、微信、微博、QQ聊天等通訊方式(電話、微信和QQ聯(lián)系為主)對患者進(jìn)行隨訪，將確診時間作為隨訪起始時間，將手術(shù)時間作為生存起始時間，以復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移作為終止事件。生存時間以月為單位，末次隨訪時間為2015年6月30日。隨訪期內(nèi)，共52例死亡，其中51例死于EC轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)，占29.82%(51/171)，1例死于其他原因。失訪3例，隨訪率98.25%(168/171)，失訪者自失訪之日按截尾數(shù)據(jù)處理。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0軟件分析數(shù)據(jù)。計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；Kaplan-Meier法計算生存率并繪制生存曲線；采用Cox回歸分析觀察預(yù)后。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 OPN在EC中的表達(dá)情況 171例EC組織中OPN的總陽性表率達(dá)63.74%(109/171)。手術(shù)-病理分期Ⅲ～Ⅳ期者OPN陽性表達(dá)率高于Ⅰ～Ⅱ期者(P<0.05)，組織分化低分化者OPN陽性表達(dá)率高于高-中分化者(P<0.05)；肌層浸潤深度≥1/2層者OPN陽性表達(dá)率高于<1/2層者(P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者OPN陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)；不同年齡和不同組織學(xué)類型之間OPN陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 OPN與EC臨床病理特征之間的關(guān)系Table 1 The relationship between OPN and clinicopathological features of EC

2.2 EC患者3年和5年生存率分析 171例EC患者的3年和5年生存率分別為77.19%(132/171)和71.93%(123/171)，生存時間范圍為8～72個月，中位生存時間30.0個月，平均生存時間為(33.3±1.3)個月。171例EC患者整體生存曲線見圖1。

2.3 OPN表達(dá)陽性組和OPN表達(dá)陰性重組生存率比較 EC患者中OPN表達(dá)陽性109例，其3年死亡34例，生存率68.81%(75/109)，5年死亡43例，5年生存率60.55%(66/109)；OPN表達(dá)陰性組62例，其3年死亡5例，生存率91.94%(57/62)，5年死亡10例，生存率83.87%(52/62)。Kaplan-Meier單因素分析顯示OPN表達(dá)陽性組的生存率顯著低于陰性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2，生存曲線見圖2。

圖1 171例EC患者整體生存曲線

表2 EC患者臨床病理和生物學(xué)特征單因素分析Table 2 The single factor analysis of EC patients on clinical and biological characteristics

圖2 OPN表達(dá)情況的生存曲線

2.4 EC患者預(yù)后影響因素的多因素分析 以患者結(jié)局為因變量，以年齡(0=<50歲，1=≥50歲)、手術(shù)-病理分期(0=Ⅰ～Ⅱ期，1=Ⅲ～Ⅳ期)、組織學(xué)分化(0=低分化，1=高-中分化)、肌層浸潤深度(0=<1/2肌層，1=≥1/2肌層)、組織學(xué)類型(0=Ⅱ型，1=Ⅰ型)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(0=無，1=有)、OPN陽性(0=否，1=是)為自變量，進(jìn)行Cox多因素回歸分析，結(jié)果顯示影響EC手術(shù)預(yù)后的因素為OPN陽性與手術(shù)-病理分期、肌層浸潤深度共3項(xiàng)(P<0.05)，而年齡、組織學(xué)分化、組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移則未入選(P>0.05)。其中依據(jù)相對危險度由大至小分別為OPN陽性、手術(shù)-病理分期、肌層浸潤深度。見表3。

表3 影響EC患者預(yù)后的Cox多因素分析Table 3 The multiplicity analysis with Cox in prognosis of EC patients

3 討 論

惡性腫瘤相關(guān)研究涉及OPN表達(dá)與一些預(yù)后因子，如性別、年齡、病理類型、組織學(xué)分化、手術(shù)-病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及浸潤深度等的相互關(guān)系，期望能通過這些研究探索OPN能成為有意義的預(yù)后因子[6]。

3.1 OPN與腫瘤 OPN是骨基質(zhì)中一種富含唾液酸的分泌型鈣結(jié)合磷酸化糖蛋白，是Senger等于1979年首次發(fā)現(xiàn)，繼而由Franzen等證明了這種蛋白的存在，并正式命名為骨橋蛋白，人OPN由314個氨基酸組成，定位在染色體4q13，是一個獨(dú)立編碼基因[5,7-9]。研究表明，OPN的過表達(dá)與腫瘤的高侵襲、轉(zhuǎn)移潛力以及預(yù)后差密切相關(guān)[10]。近年研究表明，OPN與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系日益受到關(guān)注[11]。孫現(xiàn)軍等[12]研究表明，OPN具有多種生物學(xué)功能，與腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。另有學(xué)者通過基因芯片技術(shù)，分析得出OPN在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中有一定的標(biāo)志性作用[13]。在腫瘤組織中OPN與臨床病理特征關(guān)系方面，近期許英藝等[6]Meta分析胃癌組織顯示，OPN在高-中分化組與低分化組、臨床Ⅰ～Ⅱ期組與Ⅲ～Ⅳ期組、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。證明OPN參與了胃癌腫瘤發(fā)生發(fā)展的全過程，檢測OPN表達(dá)有助于判斷腫瘤患者的預(yù)后。顯然，OPN已經(jīng)成為判斷腫瘤轉(zhuǎn)移的重要標(biāo)志物[14]，故OPN與預(yù)后因子的關(guān)系也成為一個研究探索方向。

3.2 OPN與EC組織病理參數(shù)的關(guān)系 對于EC的預(yù)后，國內(nèi)外已有報道認(rèn)為，EC的預(yù)后可能與年齡、生育史、病理類型、組織學(xué)分級、手術(shù)-病理分期、宮頸受累、肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素有關(guān)，但是各文獻(xiàn)報道的結(jié)果不一[15-16]，這使術(shù)前確定EC患者的高危臨床病理標(biāo)準(zhǔn)尚不十分理想。有學(xué)者采用免疫組織化學(xué)方法和免疫熒光檢驗(yàn)法研究EC組織發(fā)現(xiàn)，OPN在其的發(fā)病機(jī)制中起重要的作用，與EC腫瘤的侵襲性生長相關(guān)[17]。探索OPN能否成為一個預(yù)后因子，以及OPN與EC相關(guān)臨床病理參數(shù)的關(guān)系成為研究的熱點(diǎn)。本研究結(jié)果顯示，OPN在EC中的表達(dá)與患者的年齡(≥50歲或<50歲)及組織學(xué)類型無顯著關(guān)聯(lián)，而OPN的陽性表達(dá)率在手術(shù)-病理分期、組織學(xué)分化、肌層浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移各組中差異有統(tǒng)計學(xué)意義。與許英藝等[6]報道一致。本研究相關(guān)分析顯示，OPN與這4個臨床病理因素呈相關(guān)關(guān)系，但組織學(xué)分化的等級相關(guān)系數(shù)值為負(fù)。這提示隨著分化程度降低OPN的表達(dá)有上升趨勢。EC中OPN與臨床參數(shù)密切相關(guān)，分析探討二者關(guān)系，能作為腫瘤標(biāo)志物協(xié)助診斷、指導(dǎo)治療及評估EC預(yù)后，有望為臨床醫(yī)生對EC的早期診斷、預(yù)防提供依據(jù)。

3.3 OPN與EC預(yù)后的單因素生存分析 OPN表達(dá)在對EC預(yù)后的影響方面，王琰等[18]研究顯示，OPN在EC中的陽性表達(dá)率越高，其惡性度越高，預(yù)后越差。提示OPN與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展可能相關(guān)，并且可能參與了腫瘤的侵襲性生長，考慮OPN可能成為判斷EC預(yù)后的指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，OPN陽性表達(dá)的EC患者3年和5年生存率分別為68.81%、60.55%，中位生存期為25.0個月，明顯低于OPN陰性表達(dá)患者的91.94%、83.87%和中位生存期37.0個月(P<0.05)。提示OPN陽性表達(dá)可作為EC侵襲進(jìn)展及預(yù)后不良的生物學(xué)因素標(biāo)志之一，這與以往研究相符。因此，OPN陽性表達(dá)可判斷EC的侵襲與轉(zhuǎn)移情況，下調(diào)OPN表達(dá)具有增加患者生存時間的可能，預(yù)示OPN可能成為惡性腫瘤治療的一個新靶點(diǎn)，而阻斷OPN與其受體的信號傳導(dǎo)可能為腫瘤治療提供新的生物學(xué)依據(jù)[13]。

3.4 OPN與EC預(yù)后的多因素生存分析 目前國內(nèi)外對EC預(yù)后相關(guān)影響因素的研究較多，但未形成統(tǒng)一的獨(dú)立影響因素[19]。本研究旨在探討OPN表達(dá)結(jié)合臨床病理因素與EC發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及其在EC預(yù)后判斷等方面的潛在價值，對EC患者的臨床診療方案制定將有意義。本研究中，考慮到可能影響EC患者預(yù)后包括OPN和臨床病理因素7項(xiàng)，對于組織學(xué)分化，相關(guān)分析表明OPN與之密切相關(guān)，但單因素分析時組織學(xué)分化差異并無統(tǒng)計學(xué)意義，這可能與本研究樣本例數(shù)不足有關(guān)，低分化組患者5年生存率為59.32%，明顯低于高-中分化組的78.57%，也證明了低分化的EC患者預(yù)后差。本研究單因素分析顯示除OPN外，手術(shù)-病理分期、肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均與EC預(yù)后密切相關(guān)，而Cox多因素分析顯示僅手術(shù)-病理分期、肌層浸潤深度、OPN陽性3項(xiàng)差異有統(tǒng)計學(xué)意義，這3個因素即是影響EC患者預(yù)后的危險因素。雖然單因素分析中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移3年和5年生存率差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與EC不良預(yù)后密切相關(guān)，但多因素分析時并未進(jìn)入Cox回歸模型的方程中。分析原因可能為影響EC預(yù)后的因素復(fù)雜而多樣，不同因素影響的權(quán)重各異，它們彼此又通過一定機(jī)制和通路相互作用，共同對EC預(yù)后產(chǎn)生不利影響，對此有待下一步加大樣本量深入研究。

本研究Cox多因素分析顯示，分期為Ⅲ～Ⅳ期者死亡危險度是Ⅰ～Ⅱ期者5.225倍，浸潤肌層≥1/2者死亡危險度是<1/2者的4.962倍，提示分期愈晚、肌層浸潤越深，預(yù)后越差。而OPN死亡危險度最大為5.261，提示OPN表達(dá)陽性者預(yù)后差。EC組織中的OPN的表達(dá)是影響EC的負(fù)性預(yù)后因子，對EC預(yù)后有不利影響，與單因素分析結(jié)果一致，再次表明了檢測OPN可作為判斷EC患者預(yù)后和術(shù)后復(fù)發(fā)的重要指標(biāo)，有可能為EC的早期診斷和臨床治療提供新的方法。

綜上所述，OPN表達(dá)與手術(shù)-病理分期、組織學(xué)分化、肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，并共同影響EC患者生存率。OPN為EC的預(yù)后危險因素，對判斷預(yù)后及指導(dǎo)治療具有重要的臨床意義。EC臨床需重視手術(shù)-病理分期晚、組織分化差、肌層浸潤深、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等高危因素的病例，以手術(shù)-病理分期、肌層浸潤深度為基礎(chǔ)，結(jié)合OPN的檢測，能有效分析EC惡性程度及更精確判斷預(yù)后，便于制定個體化、綜合化的治療方案，最大限度地改善患者預(yù)后并提高其生活質(zhì)量。由于本研究病例數(shù)相對較少，有必要在以后的診斷治療過程中收集更多的病例，展開更深入的研究，以便進(jìn)一步證實(shí)OPN的表達(dá)與EC臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)，為EC的治療和預(yù)后干預(yù)提供更強(qiáng)的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。

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(本文編輯：劉斯靜)

Expression of OPN in tissue of the paitents with endometrial carcinoma and effect on the prognosis

LI Mei-yan

(TheFirstDepartmentofGynaecology,HandanCentralHospital,HebeiProvince,Handan056008,China)

Objective To detect the expression of osteopontin(OPN) in tissues of endometrial carcinomas and to analyze its relationship with clinicopathologic features(age, clinical and surgical stage, histo-differentiation, myometrial invasion, histological type, lymph node metastasis) in order to investigate the effect on the prognosis of endometrial carcinoma. Methods One hundred and seventy-one patients by pathological examination to be endometrial carcinoma were selected. The expression of OPN was identified by immunohistochemically SP method in 171 paraffin block. The relationship on the OPN expression and the prognosis of endometrial carcinoma was discussed. Results The positive expression rate of OPN was 63.74%(109/171) in 171 patients with endometrial carcinoma. The differences of OPN positive status with different situation of clinical and surgical stage, histo-differentiation, myometrial invasion and lymph node metastasis were statistical significance(P<0.05). Kaplan-Meier method showed that OPN, clinical and surgical stage, myometrial invasion and lymph node metastasis were related with survival rate of endometrial carcinoma(P<0.05). Cox analysis showed that OPN, clinical and surgical stage, myometrial invasion were risk factors of endometrial carcinoma prognosis. Conclusion OPN was an important factor effect on prognostic of endometrial carcinoma, and it had a great clinical significance in judging prognostic and guiding clinical treatment of endometrial carcinoma.

endometrial carcinoma； osteopontin； immunohistochemistry； prognosis

2016-03-31；

2016-04-25

李美艷(1979-)，女，河北邯鄲人，河北省邯鄲市中心醫(yī)院副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事婦科疾病診治研究。

R737.33

A

1007-3205(2017)02-0168-05

10.3969/j.issn.1007-3205.2017.02.011