骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞上清液對(duì)腎移植術(shù)后切口愈合不良的療效觀察

林琴 徐艷 林麗麗 陳書尚 楊順良

·論著·

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞上清液對(duì)腎移植術(shù)后切口愈合不良的療效觀察

林琴 徐艷 林麗麗 陳書尚 楊順良

目的 觀察間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）上清液治療腎移植術(shù)后切口愈合不良的臨床療效。方法 選擇2012年6月至2015年6月南京軍區(qū)福州總醫(yī)院泌尿外科異體腎移植術(shù)后發(fā)生切口愈合不良的患者28例，隨機(jī)分為觀察組和對(duì)照組，對(duì)照組予抗感染、換藥等常規(guī)處理；觀察組在對(duì)照組所采取治療措施的基礎(chǔ)上，采用BMSCs上清液噴涂創(chuàng)面。記錄并比較兩組患者的總VAS疼痛評(píng)分、換藥次數(shù)、創(chuàng)面新鮮時(shí)間和切口愈合時(shí)間，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分別采用成組t檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)。結(jié)果 兩組患者切口均完全愈合，觀察組平均VAS疼痛評(píng)分（3.1±1.8 vs 4.6±1.9）、換藥次數(shù)（10.6±3.2 vs 15.1±3.9）、創(chuàng)面新鮮時(shí)間[（7.2±1.8）d vs（9.1±2.1）d]和切口愈合時(shí)間[（16.6±1.4）d vs（19.1±2.1）d]均明顯低于對(duì)照組（P均< 0.05）。觀察組液化切口創(chuàng)面新鮮時(shí)間[（6.3±0.7）d vs（8.3±1.1）d]和切口愈合時(shí)間[（15.9±1.0）d vs（18.3±1.1）d]、感染切口的創(chuàng)面新鮮時(shí)間[（8.5±2.1）d vs（12.3±1.5）d]和切口愈合時(shí)間[（17.7±1.2）d vs（22.3±1.5）d]也明顯短于對(duì)照組（P均< 0.05）。結(jié)論 BMSCs上清液噴涂創(chuàng)面可減少切口滲液，促進(jìn)肉芽生長，縮短切口愈合時(shí)間，減輕患者痛苦，是治療腎移植術(shù)后切口愈合不良的有效方法，值得臨床推廣應(yīng)用。

骨髓； 間質(zhì)干細(xì)胞； 傷口愈合； 腎移植

腎移植術(shù)后切口感染和愈合不良發(fā)生率較高[1]。切口愈合不良既延長了患者住院時(shí)間，增加了患者痛苦和醫(yī)療費(fèi)用，也增加了醫(yī)生的治療壓力。2012年6月至2015年6月，南京軍區(qū)福州總醫(yī)院泌尿外科采用體外培養(yǎng)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cell，BMSCs）上清液噴涂創(chuàng)面治療腎移植術(shù)后切口愈合不良，收到良好效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

一、一般資料

選擇于2012年6月至2015年6月南京軍區(qū)福州總醫(yī)院泌尿外科行異體腎移植、術(shù)后發(fā)生切口愈合不良的患者共28例，年齡24～61歲，中位年齡（36.0±10.9）歲。女11例，男17例。尿毒癥病程1～9年，平均（4.8±2.9）年。原發(fā)病為腎小球腎炎12例，腎病綜合征8例，糖尿病腎病3例，高血壓腎病3例，多囊腎2例。手術(shù)方式均為右側(cè)腹直肌旁切口，術(shù)后免疫抑制方案為嗎替麥考酚酯（驍悉）+他克莫司（普樂可復(fù)）+醋酸潑尼松。切口愈合不良具體為：發(fā)生切口脂肪液化19例，表現(xiàn)為切口有較多淡黃色液體滲出，皮下滲液中含有漂浮脂肪滴；發(fā)生切口感染9例，表現(xiàn)為切口及周圍紅腫、局部有壓痛，切口處有膿液或淡黃色液體滲出。28例患者按完全隨機(jī)法分為觀察組和對(duì)照組（每組各14例），兩組患者在尿毒癥病程、年齡、性別、體重指數(shù)和手術(shù)時(shí)間等方面比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均> 0.05，表1）。

表1 兩組腎移植術(shù)后發(fā)生切口愈合不良患者一般情況的比較

二、方法

1. BMSCs上清液收集：本研究采用的BMSCs上清液由我科實(shí)驗(yàn)室提供[2]。BMSCs按常規(guī)方法體外培養(yǎng)、傳代。取第4代BMSCs，當(dāng)細(xì)胞長到90﹪融合時(shí)，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶中上清液收集于無菌瓶中，至于4 ℃冰箱保存待用。保存時(shí)間不超過12 h。

2.治療方法：對(duì)照組：先拆除其全部或部分皮內(nèi)及皮下縫線，清除壞死組織，使用3﹪雙氧水和生理鹽水清洗傷口，覆蓋無菌敷料。以后每天評(píng)估切口，外層敷料濕透時(shí)給予及時(shí)更換敷料。同時(shí)使用廣譜抗生素或選擇敏感抗生素防治感染。待創(chuàng)面新鮮、肉芽組織生長良好后，再進(jìn)行2次縫合。觀察組：在對(duì)照組所采取治療措施的基礎(chǔ)上，每日無菌換藥時(shí)，將10 ml體外培養(yǎng)的第4代BMSCs上清液混勻后，均勻噴涂于創(chuàng)面，再覆蓋無菌敷料。

3.觀察指標(biāo)：記錄并比較兩組患者的如下指標(biāo)：（1）患者總疼痛評(píng)分：從切口敞開到2次縫合前，每天固定時(shí)間采用視覺模擬VAS評(píng)分評(píng)估患者切口疼痛程度：0分為無痛，10分為最痛，1～3為輕度疼痛，4～6為中度疼痛，7～10為重度疼痛；（2）換藥次數(shù)：從切口敞開到2次縫合前的總換藥次數(shù)；（3）創(chuàng)面新鮮時(shí)間：從切口敞開到創(chuàng)面新鮮、肉芽組織生長良好，可開始進(jìn)行2次縫合的時(shí)間；（4）切口愈合時(shí)間：從切口敞開到切口完全愈合的時(shí)間。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理。兩組間病程、年齡、體重指數(shù)、手術(shù)時(shí)間VAS評(píng)分、換藥次數(shù)、創(chuàng)面新鮮時(shí)間和切口愈合時(shí)間用±s表示，采用成組t檢驗(yàn)，兩組患者的性別、切口液化和切口感染發(fā)生率的比較采用卡方檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、總體治療效果

兩組患者治療后，切口都完全愈合后出院。觀察組患者在使用BMSCs上清液后，其切口滲出減少速度和肉芽生長速度較快。如表2所示，觀察組平均VAS疼痛評(píng)分、換藥次數(shù)、創(chuàng)面新鮮時(shí)間和切口愈合時(shí)間均明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均< 0.05）。

表2 兩組腎移植術(shù)后發(fā)生切口愈合不良的患者治療結(jié)果比較（±s）

表2 兩組腎移植術(shù)后發(fā)生切口愈合不良的患者治療結(jié)果比較（±s）

分組 例數(shù) VAS評(píng)分（分） 換藥次數(shù) 創(chuàng)面新鮮時(shí)間（d） 切口愈合時(shí)間（d）觀察組 14 3.1±1.8 10.6±3.2 7.2±1.8 16.6±1.4對(duì)照組 14 4.6±1.9 15.1±3.9 9.1±2.1 19.1±2.1 t 值 2.129 3.298 2.627 3.748 P值 0.043 0.003 0.014 0.001

二、液化切口治療效果

如圖1所示，觀察組液化切口的創(chuàng)面新鮮時(shí)間[（6.3±0.7）d vs（8.3±1.1）d]和切口愈合時(shí)間[（15.9±1.0）d vs（18.3±1.1）d]均明顯短于對(duì)照組（P均< 0.01）。

圖1 兩組腎移植術(shù)患者脂肪液化切口愈合情況比較

三、感染切口治療效果

如圖2所示，觀察組感染切口的創(chuàng)面新鮮時(shí)間（8.5±2.1）d vs（12.3±1.5）d和切口愈合時(shí)間（17.7±1.2）d vs（22.3±1.5）d也明顯短于對(duì)照組（P均< 0.05）。

圖2 兩組腎移植術(shù)患者感染切口愈合情況比較

討 論

切口愈合不良是腎移植術(shù)后的常見并發(fā)癥之一，極易引發(fā)醫(yī)患糾紛[1,3]。造成腎移植術(shù)后切口不良的主要原因包括[3-6]：尿毒癥患者營養(yǎng)狀況差、血清白蛋白普遍低下，組織細(xì)胞再生不良或緩慢，肉芽組織生長緩慢，切口愈合能力差；手術(shù)時(shí)間長，創(chuàng)傷大，術(shù)中肝素的使用致創(chuàng)面容易滲血，特別是止血不徹底時(shí)，術(shù)后易發(fā)生皮下滲血，影響愈合甚至引起感染；術(shù)后激素等免疫抑制劑導(dǎo)致切口組織生長緩慢；免疫功能低下，抵抗力減弱，易發(fā)生感染，影響切口愈合；部分患者肥胖，皮下脂肪組織多，血液供應(yīng)相對(duì)較少，創(chuàng)面局部的血液循環(huán)差，且脂肪組織易發(fā)生氧化分解，導(dǎo)致切口脂肪液化。

由于腎移植術(shù)后切口愈合能力差，一旦出現(xiàn)切口愈合不良，處理較為棘手。研究已經(jīng)證實(shí)，BMSCs具有促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用[7-8]。其機(jī)制除了BMSCs能在傷口愈合中分化為其他細(xì)胞外[9-10]，更重要的是，BMSCs旁分泌的一些可溶性因子可調(diào)控局部細(xì)胞反應(yīng)，在促進(jìn)創(chuàng)面愈合方面可能發(fā)揮了更大作用[11-12]。研究發(fā)現(xiàn)，BMSCs分泌的與血管形成有關(guān)的細(xì)胞因子很多，包括VEGF、FGF、TGF-β、促紅細(xì)胞生成素等。這些生長因子可刺激內(nèi)皮祖細(xì)胞的動(dòng)員、擴(kuò)增及分化，促進(jìn)新生血管形成。其中VEGF還可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)蛋白水解酶、間質(zhì)膠原酶及組織因子而促進(jìn)血管形成。此外，BMSCs還可分泌基質(zhì)金屬蛋白酶，后者在細(xì)胞遷移和組織重塑方面具有重要作用[11-12]。這些研究表明，單獨(dú)使用BMSCs上清液而不是BMSCs，也可能修復(fù)受損組織，促進(jìn)切口愈合。馮鵬等[13]研究證實(shí)了這一推論。但目前臨床上采用BMSCs上清液來治療切口愈合不良的研究甚少。

本研究所采用的BMSCs上清液來自體外培養(yǎng)的第4代異體人BMSCs，此時(shí)細(xì)胞已純化且增殖旺盛，推測(cè)具有較高濃度的可溶性細(xì)胞因子[14-15]。本研究結(jié)果表明，BMSCs上清液可減少切口滲液，促進(jìn)肉芽生長，因而觀察組切口愈合時(shí)間明顯短于對(duì)照組；相應(yīng)的總患者VAS疼痛評(píng)分和換藥次數(shù)明顯低于對(duì)照組。本研究還發(fā)現(xiàn)，觀察組液化切口與感染切口的創(chuàng)面新鮮時(shí)間、切口愈合時(shí)間均明顯短于對(duì)照組，說明BMSCs上清液對(duì)于液化切口和感染切口均適用，能顯著促進(jìn)切口愈合。此外，與采用BMSCs移植相比，上清液取材方便，沒有倫理道德以及法律上的限制，且使用簡(jiǎn)便，減輕患者痛苦，是治療腎移植術(shù)后切口愈合不良的有效方法，值得臨床推廣應(yīng)用。

1 劉航, 梁思敏, 吳小候. 0.2T永磁速愈貼促進(jìn)腎移植術(shù)后切口愈合的療效觀察[J]. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2009, 34(5):656.

2 Tan J, Wu W, Xu X, et al. Induction therapy with autologous mesenchymal stem cells in living-related kidney transplants:a randomized controlled trial[J]. JAMA, 2012, 307(11):1169-1177.

3 宋金華. 腎移植術(shù)后切口脂肪液化的護(hù)理[J]. 中國醫(yī)藥指南, 2013, 11(21):359-360.

4 李丹. 淺談普外科手術(shù)患者發(fā)生術(shù)后切口愈合不良的原因及處理方法[J]. 當(dāng)代醫(yī)藥論叢, 2015, 13(1):189-190.

5 Knight RJ, Villa M, Laskey R, et al. Risk factors for impaired wound healing in sirolimus-treated renal transplant recipients[J]. Clin Transplant, 2007, 21(4):460-465.

6 Filocamo MT, Zanazzi M, Marzi VL, et al. The approach by midline incision for extraperitoneal kidney transplantation[J]. Transplant Proc, 2007, 39(10):3077-3080.

7 Wu Yaojiong, Zhao C, Tredget E. Concise review: bone marrowderived stem/progenitor cells in cutaneous repair and regeneration[J]. Stem Cells, 2010, 28(5):905-915.

8 胡冰, 王春芳, 雷晉, 等. 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與皮膚組織塊共培養(yǎng)影響創(chuàng)面愈合的研究[J/CD]. 中華臨床醫(yī)師雜志（電子版）, 2015, 9(10):115-119.

9 鐘曉紅, 王明剛, 趙李平, 等. 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在糖尿病創(chuàng)面中向皮膚腺上皮的分化[J]. 中國組織工程研究與臨床康復(fù), 2010, 14(6):1019-1022.

10 周偉, 徐艷華, 吳小翎, 等. 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肌成纖維母細(xì)胞的體內(nèi)誘導(dǎo)[J]. 中國生物制品學(xué)雜志, 2011, 24(5):561-565.

11 Moreau JE, Chen J, Bramono DS, et al. Growth factor induced fibroblast differentiation from human bone marrow stromal cells in vitro[J]. J Orthop Res, 2005, 23(1):164-174.

12 Kim Han, Lee Hyun, Won Ho, et al. Mesenchymal stem cells improve wound healing in vivo via early activation of matrix metalloproteinase-9 and vascular endothelial growth factor[J]. J Korean Med Sci, 2011, 26(6):726-733.

13 馮鵬, 李光來, 王飛. 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞上清液治療大鼠腦缺血的作用機(jī)制[J]. 中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志, 2008, 6(3):292-294.

14 許鍵煒, 申長清, 趙芳芳, 等. 同源異體間充質(zhì)干細(xì)胞上清液干預(yù)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎[J]. 貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2013, 38(4):339-343.

15 Ma ling, Liu ding, Li chun, et al. Human mesenchymal stem cells increases expression of α-tubulin and angiopoietin 1 and 2 in focal cerebral ischemia and reperfusion[J]. Curr Neurovasc Res, 2013, 10(2):103-111.

Human bone marrow mesenchymal stem cell supernatant promotes surgical incision healing in patients receiving renal transplantation

Lin Qin, Xu Yan, Lin Lili, Chen shushang, Yangshunliang. Department of Urology, Fuzhou General Hospital, Fuzhou 350025,China Corresponding author: Lin Qin, Email:841739771@qq.com

ObjectiveTo evaluate the effect of human bone marrow mesenchymal stem cell(BMSC) supernatant on healing of incision in patients receiving renal transplantation.MethodsFrom June 2012 to June 2015, a total of 28 patients with wound healing after renal transplantation in the Department of Urology in Fuzhou General Hospital were enrolled and randomized into two groups（n =14 both）. The patients in the control group received standard treatment, including anti-infection and change of dressing. The patients in the BMSC group received additional treatment with the supernatant of BMSC. The total VAS pain scores, times of dressing change, time of returning fresh of incision surface and incision healing time were compared between groups.ResultsAll incisions in both groups healed after the treatment. Compared with the control group, the BMSC group had significant lower total VAS pain scores（3.1±1.8 vs 4.6±1.9, P < 0.05）, fewer dressing changes（15.1±3.9 vs 10.6±3.2, P < 0.05）, shorter time of returning fresh of incision surface[(7.2±1.8)d vs(9.1±2.1)d, P < 0.05]and incision healing time[(16.6±1.4)d vs (19.1±2.1)d, P < 0.05]. The observation group also had shorter time of returning fresh of incision surface [（6.3±0.7）d vs（8.3±1.1）d, P < 0.05] and incision healing time[（15.9±1.0）d vs（18.3±1.1）d, P < 0.05] for the liquefied incisions, as well as shorter time of returning fresh of incision surface[（8.5±2.1）d vs（12.3±1.5）d, P < 0.05] and incision healing time[（17.7±1.2）d vs（22.3± 1.5）d, P < 0.05]for the infected incisions.ConclusionThe supernatant of BMSC can decrease incision effusion, promote the growth of granulation, shorten thetime of incision healing and reduce pain in patients receiving renal transplantation.

Bone marrow; Mesenchymal stem cells; Wound healing; Renal transplantation

2016-03-10）

（本文編輯：蔡曉珍）

10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2017.01.008

350025 福州，南京軍區(qū)福州總醫(yī)院泌尿外科

林琴，Email：841739771@qq.com

林琴，徐艷，林麗麗，等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞上清液對(duì)腎移植術(shù)后切口愈合不良的療效觀察[J/CD].中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志（電子版）, 2017, 7(1):45-48.