常用腦出血?jiǎng)游锬Ｐ偷难芯窟M(jìn)展

林瀟，倪浩棋，黃李潔，諸葛啟釧，張宇

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 神經(jīng)外科，浙江 溫州 325015）

·綜 述·

常用腦出血?jiǎng)游锬Ｐ偷难芯窟M(jìn)展

林瀟，倪浩棋，黃李潔，諸葛啟釧，張宇

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 神經(jīng)外科，浙江 溫州 325015）

腦出血（ICH）的致死致殘率很高，嚴(yán)重危及患者生命健康同時(shí)影響患者出血后的生活質(zhì)量，且目前臨床上缺乏對(duì)其有效的治療方法。為了對(duì)其生理、病理變化進(jìn)行深入研究，以及評(píng)價(jià)出血后相應(yīng)治療方法的有效性，迫切需要建立能產(chǎn)生穩(wěn)定血腫且可重復(fù)性較好的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。筆者通過介紹大、小鼠以及兔、犬等常用動(dòng)物的ICH模型制作方法及優(yōu)缺點(diǎn)，為研究者在探尋ICH發(fā)病機(jī)制、干預(yù)方法和藥物篩選等過程中選擇合適的模型提供參考。

腦出血；動(dòng)物模型；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；自體血注射法；膠原酶注射法

腦出血（intracerebral hemorrhage，ICH）目前占全部腦卒中發(fā)病的10%～20%，依靠目前的循證醫(yī)學(xué)方法，對(duì)其有用的治療手段較少[1]。ICH患者于30 d內(nèi)死亡的可能性高達(dá)35%～52%，且有80%的患者在出血后6個(gè)月時(shí)生活仍不能自理[2]。ICH的致死致殘率很高，且目前治療中能提升患者生存率以及提高出血后生活質(zhì)量的較少[3]。因此，構(gòu)建能夠模擬疾病發(fā)生發(fā)展的動(dòng)物模型極為重要。筆者通過總結(jié)近年來國內(nèi)外多種文獻(xiàn)，概述運(yùn)用不同動(dòng)物建模的方法及其發(fā)展應(yīng)用，為以后的研究提供參考。

1 大鼠ICH模型

大鼠模型現(xiàn)今最常使用。人類發(fā)生自發(fā)性ICH的部位多為基底節(jié)區(qū)，大鼠也擁有基底節(jié)區(qū)，其中的尾狀核為其腦內(nèi)最大核團(tuán)，且容易定位，故多于此定位造模。目前最常用的有以下4種。

1.1 異體血或自體血注射法

1.1.1 單步注射法：該法最早研究且相對(duì)簡(jiǎn)單，早在1982年ROPPER等[4]將27號(hào)針頭植入大鼠右側(cè)基底節(jié)區(qū)，同時(shí)保持實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清醒，并注入0.24～0.28 mL來源于另一大鼠的血液，全程無麻醉，注血速率快。此方法的明顯優(yōu)勢(shì)是無需使用麻醉，與臨床患者發(fā)病時(shí)清醒狀態(tài)相似。但其使用異體血液會(huì)帶來較為嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，同時(shí)，輸血壓力不同于動(dòng)脈血壓，無法模擬人類ICH時(shí)動(dòng)脈壓的情況。為克服上述缺點(diǎn)，BULLOCK等[5]于1984年提出在立體定向下使用導(dǎo)管連接股動(dòng)脈抽血注入的方法，其優(yōu)點(diǎn)是使用自體血不會(huì)引起炎癥反應(yīng)，同時(shí)模擬了自身動(dòng)脈壓，高度契合自發(fā)性ICH的狀況。但模型不易重復(fù)，不同動(dòng)物間來源于自體動(dòng)脈血造成的血腫體積差異很大。此后，PEELING等[6]發(fā)明了通過注射泵來控制注射血液的量和速度產(chǎn)生特定血腫，從而改善該模型的可重復(fù)性。他們用25號(hào)針頭連接注射泵，同時(shí)維持壓力在100 mmHg，將25 μL的血液在10 s內(nèi)全部注入到目的區(qū)域。為防止血液凝固，注血完畢后針頭停留2.5 min再緩慢撤出。他們同時(shí)還對(duì)比了注射25、50、100 μL血液的差異，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生血腫的大小和注血量無關(guān)。YANG等[7]也提出了一種類似的方法，他們將股動(dòng)脈血快速抽入到1 mL的注射器后連于注射泵，然后將100 μL血液迅速注入到大鼠腦內(nèi)并用膠封堵針孔，并快速拔出針頭。這種方法由于注射速率快及拔針過早，易導(dǎo)致血液沿著針道反流、破入側(cè)腦室且溢至硬膜下。但由于方法簡(jiǎn)便，在改變注射速率后仍有學(xué)者使用[8-9]。上述方法都能夠模擬臨床患者的部分出血后狀況，包括血腫的占位效應(yīng)，以及出血后血液多種有害成分產(chǎn)生的毒性作用等。但是這些模型都不能呈現(xiàn)良好的可重復(fù)性，且造成的血腫體積不穩(wěn)定，成功率較低，同時(shí)有出現(xiàn)腦室及硬膜下間隙之間破裂出血和注射的血液返流等情況。

1.1.2 兩步注射法：由于單步注射法存在較多的陷，1996年DEINSBERGER等[10]在單步注射法的基礎(chǔ)上提出了兩步注射法，提高了成功率的同時(shí)減少了血液的返流。先注射15 μL自體血，后靜置針頭7 min，使血凝塊形成將針道封堵，再注射余下35 μL。該實(shí)驗(yàn)中13例模型僅有1例出現(xiàn)血腫延伸至硬膜下間隙，因此得到了廣泛運(yùn)用，同時(shí)被用至小鼠模型上。

1.1.3 套管注射法：BARTH等[11]于2007年提出改良的立體定向下套管定點(diǎn)注射法。該方法將大鼠麻醉后固定于立體定位儀上，在前囟右側(cè)鉆孔并將一外套金屬微導(dǎo)管的23 G套管插入硬腦膜深度達(dá)4 mm，而后通過左右旋轉(zhuǎn)各4次的方法在此處以及4.5 mm和5 mm處重復(fù)。此后撤出金屬微導(dǎo)管，將30 μL自體血液在5 min內(nèi)（6 μL/min）勻速注入，注射完畢后停留套管5 min再緩慢撤出。該方法優(yōu)點(diǎn)為：死亡率低（文獻(xiàn)中立即死亡數(shù)為0，后續(xù)恢復(fù)過程中死亡1只）；血腫產(chǎn)生的部位和體積穩(wěn)定，體積為注入血量的一半即15 μL；微導(dǎo)管旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)誤差可以忽略不計(jì)，適用于神經(jīng)移植的研究。

1.2 膠原酶注射法 膠原酶是一種能夠水解蛋白的酶，ICH后血腫的擴(kuò)張以及血管性水腫被認(rèn)為是局部膠原酶集中釋放的結(jié)果[4，12]。因此，在ICH單步注射法發(fā)展的過程中，因其明顯的缺點(diǎn)，部分研究人員發(fā)明了使用膠原酶注射來誘導(dǎo)ICH的方法。ROSENBERG等[13]利用微注射泵在9 min內(nèi)將0.01～0.1 U膠原酶注入大鼠左腦尾狀核，出血發(fā)生在術(shù)后10 min內(nèi)，同時(shí)伴有周圍腦組織明顯水腫。隨后其他研究者對(duì)此模型的改進(jìn)主要為改變注射的位置（改為右側(cè)），以及注射的濃度和速度，再者為改變注射時(shí)大鼠是否肝素化。膠原酶注射法的優(yōu)點(diǎn)在于可模擬人類自發(fā)性ICH的同時(shí)操作步驟簡(jiǎn)單。其還能夠模仿ICH持續(xù)而導(dǎo)致的血腫擴(kuò)大狀態(tài)，但不足的是使用膠原酶注射會(huì)帶來炎癥反應(yīng)，這與臨床上患者ICH時(shí)無顯著可見的炎癥反應(yīng)有較大差別[14]。

1.3 微氣囊充漲法 由于注射自體血和膠原酶存在不利因素較多，SINAR等[15]發(fā)明了另外一種物理性的方法，即微氣囊充漲法。他們于右側(cè)尾狀核內(nèi)插入連接微氣囊的25號(hào)鈍性針頭并靜置30 min，將微球囊以2.5 μL/s的速率充至50 μL（平均壓力控制在13.3 kPa），保留10 min后抽出氣體。該模型可通過調(diào)節(jié)氣囊體積，模擬不同的血腫量。不僅能避免針道返流和血液破入腦室、蛛網(wǎng)膜下腔的意外，且能克服血腫大小不穩(wěn)、形態(tài)不一的缺點(diǎn)，更能準(zhǔn)確模擬血腫的占位效應(yīng)。但其無法模擬真實(shí)臨床環(huán)境中患者ICH時(shí)病理變化，包括隨后的炎癥反應(yīng)、血液成分的溶解、血栓的形成等過程。因此，該法多只用于模擬手術(shù)清除血腫的臨床狀況。

1.4 自發(fā)性ICH大鼠模型 除了上述通過人為的技術(shù)手段進(jìn)行造模的方法外，還可以通過特定人工培育技術(shù)所培養(yǎng)出的易自發(fā)性卒中的大鼠，再通過其自發(fā)或者人為手段誘發(fā)ICH。最常見的自發(fā)性ICH模型有：改變遺傳基因獲得的易卒中自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneous hyper-tensive rat，SHR）和腎血管性高血壓大鼠（renal hyper-tensive rat，RHR）。

1.4.1 SHR：SHR是1963年使用Wistar大鼠培育形成，可自發(fā)顱內(nèi)出血，同時(shí)病理過程與人類極為相似。但因飼養(yǎng)不易，易變異和難保種，發(fā)生率不穩(wěn)定，卒中類型難確定，出血時(shí)間、出血量及部位無法控制等缺點(diǎn)限制應(yīng)用[16]。

1.4.2 RHR：RHR是將大鼠腎動(dòng)脈用特制銀夾夾閉，造成狹窄的同時(shí)可引發(fā)腎性高血壓，最終導(dǎo)致ICH。腎動(dòng)脈夾閉后7 d血壓即開始呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，術(shù)后3周可使平均動(dòng)脈收縮壓達(dá)到150 mmHg，造模10周后引起的腦血管損傷以及血管、微血管的病變與高血壓極為相似。但該法成功率偏低，典型者成功率僅達(dá)40%～60%。周爽等[17]在此基礎(chǔ)上，利用額外注射膠原酶和肝素于腦內(nèi)使該模型造模時(shí)間縮短，同時(shí)卒中的類型和出血的部位變得相對(duì)恒定，且重復(fù)性提高，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。該模型相對(duì)廉價(jià)，且易于得到，同時(shí)造模簡(jiǎn)單又易于飼養(yǎng)。此類模型缺點(diǎn)與SHR類似。

1.5 不同大鼠ICH模型的比較 在實(shí)際應(yīng)用微氣囊充漲法和自發(fā)性ICH模型不多見，故以下僅比較最常用的自體血注射法和膠原酶注射法之間的比較。

1.5.1 血腫體積：MACLELLAN等[18]直接對(duì)比血液注射法和膠原酶注射法之間的差別。他依照BULLOCK的單步注射法和膠原酶注射法作對(duì)比。在完成各成分注射1 h后開始對(duì)比血腫的大小。自體血注射模型在前4 h內(nèi)的血腫體積保持相對(duì)穩(wěn)定，而膠原酶注射的模型在前4 h內(nèi)血腫體積有明顯的增大趨勢(shì)。隨后他通過MRI測(cè)量血腫體積和損傷區(qū)域發(fā)現(xiàn)，早期的血腫體積雖然相近，但是在隨后4～6周的恢復(fù)階段，注射膠原酶的模型有更大的病變體積。

1.5.2 功能恢復(fù)：MACLELLAN等[19]通過神經(jīng)功能缺損評(píng)分來測(cè)定大鼠在2種注射模型中ICH后功能恢復(fù)的狀況。通過測(cè)定實(shí)驗(yàn)組在注射血液以及膠原酶后28 d內(nèi)的評(píng)分，發(fā)現(xiàn)前者功能恢復(fù)好、損傷輕，在21 d時(shí)基本可恢復(fù)神經(jīng)功能，而膠原酶組大鼠功能恢復(fù)緩慢，第28 d時(shí)仍留有神經(jīng)功能缺陷。

1.5.3 血腦屏障的破壞：MACLELLAN等[19]對(duì)比了自體血注射和膠原酶注射所造成的血腦屏障的破壞差異。通過使用MRI圖像顯示血腦屏障破壞的情況，發(fā)現(xiàn)在膠原酶注射后12 h血腫的信號(hào)明顯增強(qiáng)，而周圍邊緣組織的信號(hào)增強(qiáng)不明顯。ICH后血腫和邊緣組織的信號(hào)于2～4 d內(nèi)都明顯增高。相對(duì)于自體血注射法，膠原酶注射對(duì)血腦屏障的破壞更加嚴(yán)重。總之，膠原酶注射能夠造成更大的腦損害，自體血注射法則在神經(jīng)功能恢復(fù)方面更加良好。

2 小鼠ICH模型

小鼠的ICH模型來源于上述大鼠模型，方法以自體血注射和膠原酶注射為主，與上述相同。

2.1 自體血或異體血注射法 NAKAMURA等[20]將小鼠自體動(dòng)脈血直接注射到右側(cè)基底神經(jīng)節(jié)進(jìn)行研究，同時(shí)對(duì)比注射異體血和0.9%氯化鈉溶液所造成的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)異體血將導(dǎo)致更大的腦水腫。

2.1.1 兩步注射法：此法改良于大鼠的方法。BELAYEV等[21]在運(yùn)用套管的基礎(chǔ)上試驗(yàn)了兩步注射法。先通過立體定位儀將套管置入小鼠左側(cè)紋狀體，然后注射5 μL的異體小鼠肝素化的心臟血，停針7 min使血液凝固，再注入余下的10 μL血液，隨后靜止10 min緩慢退出套管。RYNKOWSKI等[22]在2008年提出了改良后的小鼠兩步注射法，通過小鼠尾動(dòng)脈采集自體血30 μL后在立體定位儀下通過微注射泵以2 μL/min的速度注入5 μL自體血并留針7 min，再繼續(xù)以2 μL/min的注射速度注入余下的血液，留置插管10 min，隨后緩慢撤出。該法所產(chǎn)生的血腫量一致，且在腦水腫和神經(jīng)評(píng)估方面都有良好的一致性和穩(wěn)定性，適用于出血性卒中的藥物和手術(shù)治療的評(píng)估，得到了廣泛應(yīng)用。SANSING等[23]在2011年改變了注血量，將15 μL的小鼠自體血分成2份，先以1 μL/min的速度注射7.5 μL，停針5 min后再以同樣速率注入余下的血液。上述方法都因注射速率緩慢可避免血液進(jìn)入腦室內(nèi)及蛛網(wǎng)膜下腔。

2.1.2 三步注射法：MANAENKO等[24]提出了一種三步注射法。此法所采取的血液來自異體小鼠的靜脈血，注射時(shí)在最初5 μL注射完后停針7 min（產(chǎn)生血凝塊），后再注射5 μL，停留1 min（加強(qiáng)血凝塊的形成），隨后4 min內(nèi)注入剩余的20 μL血液。該注射法產(chǎn)生的血腫量較穩(wěn)定且沒有出現(xiàn)返流。

2.2 膠原酶注射法 CHOUDRI等[25]在1997年于大鼠模型的基礎(chǔ)上建立小鼠膠原酶注射法模型。他們將1 μL膠原酶在4 min左右全部注入小鼠右側(cè)基底神經(jīng)節(jié)的位置。隨后CLARK等[26]在此基礎(chǔ)上稍作修改，先在2 min內(nèi)注射0.5 μL的膠原酶，隨后留針3 min，再將余下0.5 μL在2 min內(nèi)注入，這種方法可以減少針道的返流。

2.3 藥物誘導(dǎo)的小鼠高血壓腦出血模型 張玲玉等[27]對(duì)C57BIM6小鼠定量注射血管緊張素I I和一氧化氮合酶抑制劑后使小鼠產(chǎn)生慢性高血壓，再通過后續(xù)注射血管緊張素I I可出現(xiàn)高血壓性ICH。此法造模簡(jiǎn)單，創(chuàng)傷小，但出血部位不定及出血量不穩(wěn)。

2.4 不同小鼠ICH模型的比較 小鼠的不同ICH模型之間的比較與大鼠不同ICH模型之間差異較為相似。KRAFFT等[28]在2012年的實(shí)驗(yàn)中對(duì)比了小鼠神經(jīng)功能以及腦水含量在注射自體血和膠原酶后的變化，發(fā)現(xiàn)2種方法都能造成較為嚴(yán)重的神經(jīng)功能損害及腦水腫，后者造成的損害更為嚴(yán)重。

3 兔ICH模型

兔子與靈長類動(dòng)物有相似的進(jìn)化史，且具有與人類相似的腦血管形態(tài)特征。因此，當(dāng)發(fā)生ICH時(shí)，腦血管的生理學(xué)和化學(xué)變化與人類有很大的相似之處。兔腦體積明顯大于鼠腦，便于手術(shù)操作和標(biāo)本收集，更適于神經(jīng)影像學(xué)等方面的研究。

3.1 自體血注射法

3.1.1 單步注射法：KAUFMAN等[29]首次將兔子用于ICH模型研究，他們直接注射自體血液造模，但兔子在注射后短時(shí)間內(nèi)即死亡。發(fā)現(xiàn)整個(gè)兔腦內(nèi)可容納相當(dāng)于3%～5%腦組織體積的血腫量，該血腫量約為人ICH 50 mL的體積。QURESHI等[30]又對(duì)上述方法進(jìn)行改良，用30 G的針頭置入兔的左側(cè)額葉，同時(shí)注入自體血，來觀察神經(jīng)元細(xì)胞的損傷程度。注血速率的不同對(duì)血腫的形成影響很大。張建軍等[31]在單步注射法的基礎(chǔ)上，比較了快速注血和緩慢注血的差別。他們將2 min內(nèi)緩慢注入250 μL兔自體血和30 s內(nèi)快速注入作比較，通過MRI、神經(jīng)功能評(píng)分和病理發(fā)現(xiàn)快速注血形成的血腫不規(guī)則，緩慢注血所造成的神經(jīng)功能缺損評(píng)分更低（功能損害更嚴(yán)重）且可見大量小膠質(zhì)細(xì)胞及中性粒細(xì)胞。

3.1.2 兩步注射法：由于兩步注射法在大、小鼠身上得到的良好應(yīng)用以及其優(yōu)點(diǎn)，也產(chǎn)生了兔的兩步注射法。YU等[32]用兩步注射法在兔的基底節(jié)區(qū)注入300 μL自體血成功造模。他們用自制的雙層套管（內(nèi)圈8.5 mm長，直徑為25 G；外圈6 mm長，直徑為20 G）插入右側(cè)基底節(jié)后，然后連接于右側(cè)股動(dòng)脈和微注射泵。在起初的2 min內(nèi)勻速注入50 μL自體血，而后調(diào)整雙層套管和針管，再注入余下的250 μL自體血。該方法的實(shí)驗(yàn)存活率達(dá)到了93.5%，且未發(fā)生破入側(cè)腦室和蛛網(wǎng)膜下腔的意外。該法產(chǎn)生的血腫體積穩(wěn)定，周圍有相應(yīng)的組織水腫帶產(chǎn)生，神經(jīng)功能損傷較輕且恢復(fù)較為迅速。

4 靈長類動(dòng)物ICH模型

黑猩猩和恒河猴等靈長類動(dòng)物有90%的DNA和人類相同，且它們的生理結(jié)構(gòu)和大腦構(gòu)造等都與人類相近，是臨床研究中最佳的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。但是此類動(dòng)物比較珍貴，飼養(yǎng)費(fèi)用高且困難，因此無法大批量的應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)，研究主要集中在自體血注射法。BULLOCK等[33]通過用導(dǎo)尿管連接長尾黑顎猴右側(cè)股動(dòng)脈以及猴的右側(cè)內(nèi)囊，使自身動(dòng)脈血穩(wěn)定進(jìn)入到猴的大腦內(nèi)，并監(jiān)測(cè)ICH后60～90 min局部腦血流量的變化。該方法可減少注射血液所帶來的并發(fā)癥，同時(shí)穩(wěn)定了ICH的壓力，使其接近于正常出血時(shí)的壓力。

ZHU等[34]創(chuàng)造了一種新的注射法。他們?cè)?只食蟹猴的右側(cè)紋狀體內(nèi)注入了1.5 mL的自體血。術(shù)前15 min先從右側(cè)股動(dòng)脈抽取3 mL新鮮動(dòng)脈血（存于肝素管內(nèi)），后將麻醉的猴子固定于立體定向架上，將7 G的硬套管插入右側(cè)紋狀體內(nèi)，每5 min注入0.5 mL肝素化的自體血，形成一個(gè)小血凝塊，至最后一次注射完畢后緩慢撤出針管。在術(shù)后12 h內(nèi)猴子都出現(xiàn)了嗜睡、抑郁情緒以及聽覺和感覺受損的狀態(tài)，同時(shí)神經(jīng)功能缺損明顯。MRI檢測(cè)顯示血腫形狀規(guī)則，在術(shù)后4周血腫仍未吸收完全。該模型適合于評(píng)估神經(jīng)功能接受對(duì)應(yīng)治療后的恢復(fù)情況。

5 犬ICH模型

犬易于飼養(yǎng)且犬腦的體積較大，方便手術(shù)操作及精細(xì)觀察生理和病理變化。但犬的飼養(yǎng)價(jià)格較高，且來源較少。

5.1 自體血注射法 早在1963年，WHISNANT等[35]就將犬用來研究ICH。他們將0.5～1.5 mL的犬自體血分別注入其腦基底核和深層白質(zhì)中，能夠產(chǎn)生不同體積的顱內(nèi)血腫。STEINER等[36]完成了真正意義上犬的單步注射法。他們將7.5 mL的犬自體血在動(dòng)脈壓力控制下在20～30 min內(nèi)注入到犬的基底神經(jīng)節(jié)旁的深層白質(zhì)內(nèi)。然而實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)了小腦幕下疝，因此他們?cè)谥蟾淖兞俗⒀膭┝?，注?.8～5.5 mL的自體血，成功構(gòu)建了犬的ICH模型。LEE等[37]利用注射泵于8 min內(nèi)將3～5 mL的犬自體血注入到顳葉皮層區(qū)，形成了穩(wěn)定一致的血腫。

5.2 膠原酶注射法 由于犬需要注射的劑量較大因此較少使用。AN等[38]將500 U的細(xì)菌膠原酶通過微注射泵在5 min內(nèi)勻速注入到犬腦的頂葉中，用于測(cè)定ICH隨時(shí)間變化在MRI上的圖像改變。

5.3 微氣囊充漲法 在1985年TAKASUGI等[39]就利用微氣囊植入犬的腦內(nèi)，將血液注入氣囊內(nèi)充漲氣囊，因此減少了直接注血所帶來的針道返流現(xiàn)象，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)周圍組織的損傷是因腦組織修復(fù)時(shí)間的延遲，而與血腫大小無關(guān)。

5.4 DSA介導(dǎo)下使用導(dǎo)絲的ICH模型 犬的體積相對(duì)較大，因此可以使用DSA介入的方法將導(dǎo)絲進(jìn)入至顱內(nèi)后刺破血管從而造成ICH。周玉滕等[40]在2005年使用DSA給犬造模，先使用Seldinger法穿刺犬的右股動(dòng)脈，后在灌注76%泛影葡胺及使用DSA造影的幫助下將導(dǎo)管最終延伸至犬頸內(nèi)動(dòng)脈入顱處。此時(shí)于導(dǎo)管內(nèi)置入直頭導(dǎo)絲，接著緩慢入顱內(nèi)約2 cm。通過CT證實(shí)導(dǎo)絲頂端位于基底節(jié)區(qū)或顳葉即可，然后人為快速轉(zhuǎn)動(dòng)和提插使導(dǎo)絲刺破血管，當(dāng)術(shù)者感到明顯突破感時(shí)，即表示造模成功。

5.5 超聲波引導(dǎo)下穿刺出血 這是一項(xiàng)最新的ICH造模技術(shù)，ZHOU等[41]利用超聲波對(duì)腦血管的顯像作用，對(duì)構(gòu)建ICH的出血部位可精確選擇，后通過活檢針的穿刺作用造模。他們將犬麻醉后固定在平板上，暴露硬腦膜后將超聲探頭貼于表面，顯示大腦的結(jié)構(gòu)及判斷血管位置，同時(shí)尋找大腦中動(dòng)脈（middle cerebral artery，MCA）。當(dāng)在超聲圖像上發(fā)現(xiàn)MCA時(shí)，在超聲探頭的前端連接一個(gè)活檢穿刺針，同時(shí)在超聲圖像上尋找MCA的最大直徑處，用活檢針輕輕穿刺該部位，并留針5 min。這種模型能產(chǎn)生穩(wěn)定一致的結(jié)果，各血腫的大小相近，且成功率高。該模型較為簡(jiǎn)單方便，且定位準(zhǔn)確，同時(shí)能夠模擬真實(shí)的出血過程，無需額外注射任何物質(zhì)（不同于膠原酶和自體血的注射），大有利于探討新的ICH治療方法和比較臨床干預(yù)結(jié)果的趨勢(shì)。

總之，犬的模型現(xiàn)多用于研究腦的MRI成像，以及腦的生理學(xué)和外科學(xué)干涉治療。犬的MRI研究多用于探究ICH的急性、亞急性和慢性變化。同時(shí)犬腦模型被用來研究腦的生理變化和貧血對(duì)腦血流動(dòng)力的改變[42]，以及細(xì)胞的變化和微環(huán)境的改變[43]。

6 豬ICH模型

豬腦體積大、白質(zhì)發(fā)達(dá)，非常適合ICH的研究，血腫體積較大，便于仔細(xì)的檢查和研究。主要為自體血注射法，WAGNER等[44]通過注射泵緩慢地將1.7 mL豬血注入到豬的額葉白質(zhì)中，形成了較為穩(wěn)定且分布均勻的血腫。KüKER等[45]通過微氣囊將0.5～2 mL的豬靜脈血注入到豬的前額葉，減少針道的返流。而后的改良法將18 G的針經(jīng)術(shù)前鉆孔處垂直刺入造模位點(diǎn)后去除其內(nèi)芯，通過股動(dòng)脈采血1 mL，并利用連接軟管的注射器在2 min內(nèi)先注入0.5 mL動(dòng)脈血，靜止5 min后以相同速率注血2 mL[46]。

7 討論

不同動(dòng)物的造模方法主要為血液的注射、膠原酶的注射、氣囊的充漲壓迫、自發(fā)性的動(dòng)物ICH模型，也有一些新出現(xiàn)的方法如在DSA介入以及利用超聲定位準(zhǔn)確造模的方法，這些方法經(jīng)過多年改良大大提高了造模的成功率以及減少了動(dòng)物的死亡率，且能產(chǎn)生穩(wěn)定一致、重復(fù)性好、精確度高的血腫。自體血注入法與臨床患者自發(fā)性ICH的過程最類似，可研究腦組織代謝和血流受各種因子的影響過程，以及腦實(shí)質(zhì)出血的病理形態(tài)學(xué)改變等，為臨床治療提供依據(jù)[47]。膠原酶誘導(dǎo)法操作更簡(jiǎn)便，同時(shí)重復(fù)性良好，與臨床ICH后的病理變化及生化指標(biāo)改變等有較多相同之處，出血面積大小受控。但因其所致出血以彌漫性出血為主，與真正意義上的出血產(chǎn)生的血腫不同，較為適合研究ICH時(shí)血腫和水腫的影響作用等，也可用于藥效評(píng)價(jià)及神經(jīng)功能恢復(fù)狀況[48]。微氣囊充漲法可模擬血腫的占位效應(yīng)以及血腫清除后的腦內(nèi)發(fā)生的病理和生理變化、腦血流局部的改變以及顱內(nèi)壓的調(diào)節(jié)等，因此多用于模擬行手術(shù)清除血腫的過程，研究血腫清除術(shù)適當(dāng)?shù)闹委煏r(shí)間窗。至于新產(chǎn)生的DSA介入穿刺造模法以及超聲引導(dǎo)下的穿刺造模法等新生方法，有其特定的優(yōu)點(diǎn)，但仍需經(jīng)過一定的研究檢驗(yàn)和改良。

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（本文編輯：趙翠翠）

R651

A

10.3969/j.issn.2095-9400.2017.09.017

2016-10-12

溫州市公益性科技計(jì)劃項(xiàng)目（Y20150042）；浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生重大科技計(jì)劃項(xiàng)目（WKJ2013-2-022）。

林瀟（1991-），男，浙江溫州人，碩士生。

張宇，副主任醫(yī)師，副教授，Email：drzhyu@126.com。