蓮子心提取物對(duì)博來(lái)霉素致小鼠肺纖維化的干預(yù)作用研究*

李艷曉，高穎，王火，陳虹

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300110；2.中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)后勤學(xué)院 生藥與藥劑教研室，天津 300309）

基礎(chǔ)研究·論著

蓮子心提取物對(duì)博來(lái)霉素致小鼠肺纖維化的干預(yù)作用研究*

李艷曉1，高穎2，王火2，陳虹2

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300110；2.中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)后勤學(xué)院 生藥與藥劑教研室，天津 300309）

D O I：10.3969/j.i s s n.1005-8982.2017.03.001

目的比較蓮子心提取物（LE）水洗脫（LEW W）和醇洗脫（LEAW）對(duì)博來(lái)霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化（PF）的作用。方法經(jīng)氣管一次性滴注博來(lái)霉素復(fù)制PF小鼠模型，給予2種LE灌胃21 d后，解剖肺臟，蘇木精-伊紅染色法觀察小鼠肺組織炎癥程度并進(jìn)行炎癥評(píng)分，M as s on染色觀察PF程度，計(jì)算肺系數(shù)，檢測(cè)血清還原型谷胱甘肽（G SH）、一氧化氮N O，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TG F-β1）、α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SM A）、膠原蛋白Ⅰ、膠原蛋白Ⅲm R N A表達(dá)水平，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)肺組織勻漿TG F-β1、α-SM A及羥脯氨酸（H Y P）的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果與模型組比較，LEW W 和LEAW組G SH在血清中含量均升高，N O含量降低；肺組織勻漿中TG F-β1、α-SM A、H Y P含量降低（P＜0.05）。結(jié)論LE對(duì)博來(lái)霉素所致PF小鼠有一定防治作用，其機(jī)制可能與LE抗氧化、抑制膠原蛋白形成及下調(diào)TG F-β1有關(guān)。

蓮心提取物；肺纖維化；膠原纖維；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1

肺纖維化（pul m onary f i brosi s，PF）是一種以彌漫性肺泡炎和成纖維細(xì)胞病理性增生所致細(xì)胞外基質(zhì)沉積為特征的慢性進(jìn)行性肺疾病，是多種肺疾病發(fā)展到晚期常見(jiàn)的病理過(guò)程[1]。本病致病因素復(fù)雜，病理機(jī)制不明確。目前學(xué)術(shù)界認(rèn)為氧化-抗氧化機(jī)制失衡是纖維化主要發(fā)病機(jī)制之一，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（t ransf orm i ng growt h f act or，TGF-β1）及其下游α平滑肌肌動(dòng)蛋白（al pha-sm oot h m uscl e act i n，α-SM A）也在PF發(fā)病中起重要作用。

蓮子心為常用中草藥之一，為睡蓮科植物蓮種子中的青嫩胚芽,味苦、性寒。在其水提物與醇提物中主要有效成分為蓮心堿、甲基蓮心堿、異蓮心堿及蓮心堿高氯酸鹽等[2]。據(jù)報(bào)道，異蓮心堿對(duì)半乳糖致小鼠肺纖維化的氧化損傷有一定保護(hù)作用[3]，但對(duì)蓮子心提取物水洗脫（l ot us ext ractwashed wi t h wat er，LEW W）、蓮子心提取物醇洗脫（l ot us ext ract al cohol wash，LEAW）的抗纖維化作用還未有文獻(xiàn)報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 72只健康昆明雄性小鼠，無(wú)特定病原體級(jí)，體重18～20 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證編號(hào)：SCXK（京）2013-0001。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在潔凈級(jí)動(dòng)物房適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，飼料由中國(guó)醫(yī)科學(xué)院動(dòng)物研究所提供，飲用水為自來(lái)水，實(shí)驗(yàn)期間小鼠自由飲水和進(jìn)食。

1.1.2 藥品及試劑 蓮心提取物（l ot us ext ract，LE）（中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)后勤學(xué)院植物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供）,注射用鹽酸博萊霉素（浙江海正藥業(yè)股份有限公司，H 20055883）,蘇木精-伊紅染色（hem at oxyl i n-eosi n，H E）、M asson染色、一氧化氮合酶及還原性谷胱甘肽試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，Tri zol Reagent由美國(guó)Invet rogen公司生產(chǎn),逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自北京天根技術(shù)有限公司,聚合酶鏈反應(yīng)（pol ym erase chai n react i on，PCR）引物由北京奧科鼎盛生物科技有限公司合成，TGF-β1、α-SM A、羥脯氨酸（hydroxyprol i ne aci d，H YP）試劑盒均購(gòu)自北京方程生物科技有限公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 TS100型倒置顯微鏡及其配套圖像采集系統(tǒng)（日本Ni kon公司），Advent urer萬(wàn)分之一電子天平和TDL-5M低溫離心機(jī)（上海盧湘儀器廠），5417R高速低溫離心機(jī)和移液器（德國(guó)Eppendorf公司），UV-260型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本Shi m adzu公司），BCD-77KD3常溫冰箱（廣東TCL公司），置入-80℃冰箱低溫保存（安徽美菱冰箱），SW-CJ-2FD型無(wú)菌操作臺(tái)（蘇州儀器凈化廠），PTC-200型PCR（美國(guó)M J Research公司），電泳槽（北京六一儀器廠）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 模型復(fù)制、分組及給藥 將72只小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、維生素C組、地塞米松組、LEW W組和LEAW組，每組12只。除正常組外，其他5組小鼠均經(jīng)氣管滴注博萊霉素（2 m g/kg），正常組注入等量生理鹽水。模型復(fù)制后第2天，LEW W組和LEAW組分別灌服LEW W、LEAW[100 m g/（kg·d）]，維生素C組經(jīng)腹腔注射維生素C 100 m g/（kg·d），正常組和模型組給予等體積生理鹽水，1次/d，共給藥21 d，地塞米松組經(jīng)腹腔注射地塞米松2 m g/（kg·d），1次/d，共給藥3 d。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處理和標(biāo)本收集 小鼠在造模21 d稱重后眼球摘除取血并脫頸處死，分離肺組織，稱肺重。血液離心后取血清置于-20℃冰箱冷凍保存，1周內(nèi)用于檢測(cè)一氧化氮NO、谷胱甘肽（Gl ut at hi one，GSH）等氧化指標(biāo)。左肺用10%福爾馬林固定，24 h后進(jìn)行。石蠟包埋并組織切片行H E染色及M asson染色，右肺分置凍存管，迅速置入液氮罐后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存以用于TGF-β1、H YP等濃度測(cè)定和PCR測(cè)定。

1.2.3 檢測(cè)方法 肺系數(shù)=肺重（g）/體重（g）× 100%。血清中NO、GSH含量嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作。酶聯(lián)免疫吸法檢測(cè)各組血清中超氧化物歧化酶（superoxi de di sm ut ase，SOD）、丙二醛、肺組織勻漿中H YP、TGF-β1濃度，所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.2.4 組織病理學(xué)觀察 參照SZAPIEL等[4]的方法評(píng)價(jià)肺泡炎及肺纖維化程度，H E染色評(píng)定肺泡炎分級(jí)：評(píng)0分，無(wú)肺泡炎；評(píng)1分，輕度肺泡炎，評(píng)2分，中度肺泡炎，評(píng)3分，重度肺泡炎。M asson染色評(píng)定肺纖維化分級(jí)：評(píng)1分，無(wú)纖維化；評(píng)2分，輕度纖維化，肺泡的結(jié)構(gòu)發(fā)生紊亂；評(píng)3分，中度纖維化，病變范圍約占全肺的20%～50%；評(píng)4分，重度纖維化，病變范圍＞50%。

1.2.5 蓮子心提取物對(duì)小鼠相關(guān)基因的表達(dá) Tri zol法提取總m RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后行PCR反應(yīng)。凝膠自動(dòng)成像系統(tǒng)觀察電泳結(jié)果，Quant i t y One軟件分析目的片段與內(nèi)參的光密度值，將兩者比值作為目的基因的相對(duì)表達(dá)量，每個(gè)樣本重復(fù)3次。目的基因引物序列、片段長(zhǎng)度及退火溫度見(jiàn)表1。

表1 逆轉(zhuǎn)錄PCR的引物序列、產(chǎn)物大小及退火溫度

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組比較用單因素方差分析，組間多重比較用LSD-t法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

正常組：小鼠身體健壯，活潑好動(dòng)，皮毛光滑，進(jìn)食量多，體重增加明顯，唇及爪色澤淡紅。模型組：模型復(fù)制后，小鼠很快出現(xiàn)精神不振，皮毛干枯無(wú)光澤，少動(dòng)，進(jìn)食少，體重減輕，唇及爪輕度紫紺，約1周后食欲與體重有改善。維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組：精神狀態(tài)、進(jìn)食、活動(dòng)、體重均較模型組較好，唇及爪輕度紫紺未見(jiàn)明顯。

2.2 LE對(duì)博來(lái)霉素致小鼠肺纖維化的影響

2.2.1 病理改變 除正常組外，其余各組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整性均受到不同程度破壞，肺泡壁加厚，出現(xiàn)不同程度充血及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，且尤以模型組小鼠上述指標(biāo)改變最為顯著（見(jiàn)圖1）。與正常組比較，模型組M asson染色見(jiàn)肺泡間隔明顯增寬，膠原纖維增多，肺泡結(jié)構(gòu)改變，成纖維細(xì)胞大量聚集，大量膠原纖維成束狀或者片狀沉積，肺泡壁變厚，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂。維生素C組、地塞米松組與LEW W、LEAW組表現(xiàn)出基本一致的變化規(guī)律，但肺泡炎和纖維化的程度減輕（見(jiàn)圖2）。

2.2.2 肺泡炎癥、纖維化等級(jí)評(píng)分 與正常組比較，模型組小鼠肺組織炎癥及纖維化程度均增高，各組小鼠肺泡炎癥程度評(píng)分及纖維化程度評(píng)分比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=107.113和 87.230，P=0.013和0.025）。維生素C組、地塞米松組與模型組肺泡炎癥程度及纖維化程度比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.126和3.523，P=0.000）。維生素C組、地塞米松組、LEW W組和LEAW組與模型組肺泡炎癥程度比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.762、3.561、3.142和3.827，P=0.000）。LEW W組與維生素C組和LEAW組肺泡炎癥程度比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.031和0.061，P=0.057和0.112）。LEW W組與地塞米松組肺泡炎癥程度比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.412，P=0.031）；維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組與模型組纖維化程度比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.768、6.235、4.162和3.251，P=0.000）。LEW W組與維生素C組纖維化程度比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.142，P=0.022），LEW W組與地塞米松組、LEAW組纖維化程度比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.361和0.823，P=0.712和0.634）。上述結(jié)果表明，模型組肺泡炎癥程度及纖維化程度均高于維生素C組、地塞米松組、LEAW組及LEW W組，其中LEAW組與LEW W組抗炎和抗纖維化比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但優(yōu)于維生素C組。見(jiàn)表2。

2.3 LE對(duì)肺纖維化小鼠體重、肺濕重及肺系數(shù)的影響

與正常組比較，模型組小鼠體重減輕，肺濕重和肺系數(shù)增大，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。正常組小鼠體重、肺濕重及肺系數(shù)與模型組比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.126、8.231和3.242，P=0.000）。LEAW組小鼠體重、肺濕重及肺系數(shù)與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 3.728、7.912和 14.232，P=0.012、0.032和 0.041）。LEW W組小鼠體重、肺濕重及肺系數(shù)與模型組比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.612、2.078和4.292，P=0.014、0.033和0.021）。維生素C組、地塞米松組與LEAW組肺系數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.913和7.123；P=0.012和0.031）。LEW W組與LEAW組小鼠肺濕重、肺系數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.231和2.812，P=0.013和0.314）。LEW W組與LEAW組小鼠體重比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.121，P=0.512）。上述結(jié)果表明，LEAW、LEW W可使小鼠體重增長(zhǎng)，降低肺濕重和肺系數(shù)，且效果與地塞米松相當(dāng)，但兩者對(duì)體重的改變差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表3。

圖1 各組小鼠肺組織病理改變 （H E×200）

圖2 各組小鼠肺組織病理改變 （M asson×200）

2.4 LE對(duì)博來(lái)霉素致肺纖維化小鼠血清GSH、NO的影響

各組小鼠血清中GSH、NO含量比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。維生素C組、地塞米松組與模型組GSH、NO含量比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.182和12.124，P=0.000）；維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組與模型組GSH比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.912、3.626、3.935和3.867，P=0.000）；LEW W組與維生素C組、地塞米松組及LEAW組GSH比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 5.231、6.243和3.563，P=0.021、0.032和0.041）。維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組與模型組NO含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.192、5.122和4.143，P=0.031、0.021和0.022）；LEW W組與維生素C組、地塞米松組NO含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=9.322和4.243，P=0.210和0.042）；LEW W組與LEAW組NO含量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 2.535，P=0.712）。上述結(jié)果表明，模型組GSH含量低于維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組，但其NO含量高于維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組。LEW W組和LEAW組對(duì)抑制GSH含量降低的效果弱于維生素C組、地塞米松組。見(jiàn)表4。

表2 各組小鼠炎癥及纖維化程度評(píng)分 （n=7，分，±s）

表2 各組小鼠炎癥及纖維化程度評(píng)分 （n=7，分，±s）

組別 纖維化程度評(píng)分正常組 0.45±0.05 1.62±0.07模型組 2.47±0.18 3.24±0.35維生素C組 1.72±0.21 2.71±0.22地塞米松組 1.30±0.17 2.36±0.14 LEW W組 1.55±0.16 2.47±0.21 LEAW組 1.32±0.08 2.55±0.19 F值 107.113 87.230 P值 0.013 0.025肺泡炎癥評(píng)分

表3 各組小鼠體重、肺濕重及肺系數(shù)比較 （n=7±s）

表3 各組小鼠體重、肺濕重及肺系數(shù)比較 （n=7±s）

組別肺系數(shù)正常組 100 28.58±1.36 0.1989±0.012 0.5339±0.0376模型組 100 21.12±0.92 0.2514±0.019 0.8165±0.0565維生素C組 100 24.25±0.77 0.2158±0.017 0.7135±0.0469地塞米松組 2 25.45±1.26 0.2280±0.022 0.6434±0.0826 LEW W組 100 24.65±1.21 0.2182±0.015 0.6683±0.0188 LEAW組 100 25.13±0.88 0.2193±0.020 0.6631±0.1682 F值 15.162 10.318 54.126 P值 0.025 0.039 0.027劑量/（m g/kg）體重/ g肺濕重/ g

表4 各組小鼠血清中GSH、NO濃度比較（n=7，μm ol/L±s）

表4 各組小鼠血清中GSH、NO濃度比較（n=7，μm ol/L±s）

組別NO正常組 33.56±7.74 2.71±0.72模型組 28.99±4.81 8.36±0.25維生素C組 39.95±8.02 6.03±0.68地塞米松組 44.06±10.64 4.22±0.33 LEW W組 43.15±11.18 4.07±0.51 LEAW組 34.47±6.96 3.16±0.27 F值 132.104 42.172 P值 0.041 0.016GSH

2.5 LE對(duì)肺纖維化小鼠TGF-β1、α-SMA、CollengenⅠ及CollengenⅢmRNA表達(dá)的影響

各組小鼠 TGF-β1、α-SM A、Col l engenⅠ及Col l engenⅢ m RNA表達(dá)，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與對(duì)照組比較，模型組TGF-β1、α-SM A、Col l engenⅠ及Col l engenⅢm RNA表達(dá)量比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.028、3.927、8.927和5.928，P=0.000），模型組升高；與模型組比較，維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組可下調(diào)TGF-β1、α-SM A及Col l engenⅢ m RNA表達(dá)量，LEAW可同時(shí)下調(diào)Col l engenⅠm RNA的表達(dá)水平；LEAW 組與 LEW W 組 TGF-β1、α-SM A、Col l engenⅠ m RNA水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 3.291、4.928和 7.283，P=0.023、0.029和 0.041），LEAW組下調(diào)TGF-β1、α-SM A、Col l engenⅠm RNA表達(dá)的能力優(yōu)于LEW W組。見(jiàn)表5和圖3。

表5 各組小鼠肺組織TGF-β1、CollengenⅠ及CollengenⅢ mRNA表達(dá)水平比較 （n=7±s）

表5 各組小鼠肺組織TGF-β1、CollengenⅠ及CollengenⅢ mRNA表達(dá)水平比較 （n=7±s）

組別Col l engenⅢm RNA正常組 0.74±0.06 0.58±0.03 0.60±0.012 1.01±0.09模型組 1.15±0.12 1.24±0.11 1.29±0.11 1.12±0.15維生素C組 0.77±0.07 0.86±0.06 1.23±0.17 1.19±0.14地塞米松組 1.20±0.16 0.82±0.09 0.71±0.1 1.03±0.08 LEW W組 0.79±0.11 1.05±0.12 1.38±0.15 0.78±0.07 LEAW組 0.64±0.08 0.77±0.58 0.76±0.02 0.79±0.16 F值 23.142 45.834 76.164 42.186 P值 0.019 0.036 0.012 0.002TGF-β1m RNAα-SM A m RNACol l engenⅠm RNA

圖3 各組小鼠肺組織TGF-β1、α-SMA、CollengenⅠ及CollengenⅢ mRNA表達(dá)情況

2.6 LE對(duì)博來(lái)霉素致肺纖維化小鼠肺組織中TGF-β1、α-SMA及HYP含量的影響

各組小鼠肺組織中TGF-β1、α-SM A及H YP含量表達(dá)，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組比較，對(duì)照組中TGF-β1、α-SM A及H YP含量比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 6.203，9.382和3.827，P=0.000），對(duì)照組含量升高；與模型組相比，給藥組小鼠肺組織中TGF-β1、α-SM A及H YP含量均有不同程度的降低，LEAW組與維生素C組、地塞米松組及LEAW組TGF-β1和H YP含量比較，經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.292和3.927，P=0.012和=0.024），LEAW組最低。見(jiàn)表6。

表6 各組小鼠肺組織 TGF-β1、α-SMA及HYP濃度比較 （n=7±s）

表6 各組小鼠肺組織 TGF-β1、α-SMA及HYP濃度比較 （n=7±s）

組別H YP/（μg/L）正常組 16.11±2.14 12.91±0.24 6.46±0.71模型組 98.76±13.78 28.24±0.42 16.45±2.41維生素C組 67.92±9.24 17.44±0.13 13.62±1.14地塞米松組 45.43±5.10 16.58±0.23 13.57±1.52 LEW W組 48.72±4.82 17.12±0.21 12.84±1.23 LEAW組 36.00±4.38 16.76±0.24 12.13±1.41 F值 75.142 56.823 46.712 P值 0.004 0.014 0.007TGF-β1/（ng/L）α-SMA/（ng/L）

3 討論

PF是一種進(jìn)行性、不可逆的慢性肺間質(zhì)纖維化疾病，且5年存活率低[5]。PF疾病早期可出現(xiàn)氧化應(yīng)激，引發(fā)炎癥反應(yīng)。正常機(jī)體抗氧化系統(tǒng)中主要包括酶類抗氧化系統(tǒng)如SOD、髓過(guò)氧化物酶、GSH等和費(fèi)酶類抗氧化系統(tǒng)如維生素C、E等[6]。GSH是一種低分子自由基清除劑，可防止血紅蛋白及其他輔因子受氧化損傷。在復(fù)雜的纖維化病理過(guò)程中NO不僅可與氧自由基產(chǎn)生氧化物，而且可作為細(xì)胞信號(hào)分子介導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞及肺泡上皮細(xì)胞等細(xì)胞的增殖或凋亡來(lái)參與肺間質(zhì)纖維化的形成。蓮子心作為一種傳統(tǒng)中藥材，具有很明顯的抗炎、抗氧化等多種藥學(xué)活性。在本實(shí)驗(yàn)中給予LE干預(yù)性治療后，與模型組相比其氧化生成產(chǎn)物GSH升高，NO含量降低，表明LE具有對(duì)博來(lái)霉素誘導(dǎo)肺纖維化抗氧化應(yīng)激的作用。肺纖維化后期主要表現(xiàn)為肺間質(zhì)增寬、細(xì)胞外基質(zhì)沉積及膠原纖維（Col l engenⅠ及Col l engenⅢ）大量生成[7]，形成廣泛纖維化。H YP作為膠原纖維蛋白中主要的組成成分，可準(zhǔn)確地間接反映膠原纖維蛋白的含量[8]。近年來(lái)有研究證實(shí)，TGF-β1為關(guān)鍵的致肺纖維化的細(xì)胞因子，可以促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化，上調(diào)其下游的α-SM A表達(dá)[9]，并促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的生成與沉積，進(jìn)一步促進(jìn)肺纖維化的發(fā)展[10]。細(xì)胞外基質(zhì)主要由成纖維細(xì)胞病灶轉(zhuǎn)型的肌成纖維細(xì)胞組成，其主要表達(dá)產(chǎn)物為α-SM A[11]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，LE可降低對(duì)博來(lái)霉素致小鼠肺纖維化模型肺組織TGF-β1、α-SM A、Col l engenⅠ及Col l engenⅢ m RNA表達(dá)；酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)顯示，LE給藥組H YP表達(dá)降低。另外從M asson染色的病理切片中見(jiàn)其可有效抑制膠原纖維形成，降低肺纖維化程度。實(shí)驗(yàn)證明，LE能抗博來(lái)霉素之小鼠肺纖維化，且LEAW組效果明顯優(yōu)于維生素C組。

綜上所述，蓮心提取物可通過(guò)抗氧化、抑制膠原纖維形成及下調(diào)TGF-β1，進(jìn)而抑制成纖維細(xì)胞的活化、增殖，下調(diào)α-SM A的表達(dá)，減少細(xì)胞外基質(zhì)的大量沉積，發(fā)揮其抗纖維化作用。

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（童穎丹 編輯）

Intervention ofPlumula Nelumbinisextracts on Bleomycininduced pulmonary fibrosis of mice*

Yan-xiao Li1,Ying Gao2,Huo Wang2,Hong Chen2
(1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300110,China;2.Department of Pharmacy,Logistics College of Chinese People's Armed Police Force, Tianjin 300309,China)

ObjectiveTo investigate the effect ofPlumula Nelumbinisextracts eluted with water(LEWW) or alcohol (LEAW)on Bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice.MethodsThe mouse model of pulmonary fibrosis was prepared by disposable intratracheal instillation of Bleomycin.The two kinds ofPlumula Nelumbinisextracts were administrated orally for 21 days.After that,the lung tissues were obtained for HE staining and Masson staining;and inflammation score and the degree of pulmonary fibrosis,lung coefficient calculation,serum glutathione(GSH)and nitric oxide(NO)were evaluated.RT-PCR was used for detection of transforming growth factor-β1(TGF-β1),smooth muscle actin (α-SMA),collagen-Ⅰ,collagen-Ⅲ mRNA expression levels.TGF-β1,α-SMA and hydroxyproline (HYP)protein expression levels in the lung tissues were measured using ELISA.ResultsCompared with the model group,the serum content of GSH increased,NO decreased;meanwhile the content of TGF-β1,α-SMA and HYP in the lung homogenate was lowered in the LEWW and LEAW groups (P＜0.05).ConclusionsPlumula Nelumbinisextracts have anti-fibrotic effect to Bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice.The mechanism may be related to the anti-oxidant activity of Plumula Nelumbinisextracts,inhibition of collagen formation and down-regulation of TGF-β1.

Plumula Nelumbinisextract;pulmonary fibrosis;collagen fiber;transforming growth factor-β1

1005-8982（2017）03-0001-06

R 285.5

A

2016-05-11

國(guó)家自然科學(xué)基金（No：81503233）；武警后勤學(xué)院院級(jí)課題（No：W H J201510）

高穎，E-m ai l：gyi ng77@163.com；Tel：15922098199