C-MYC和MXI1在晚期肺腺癌組織中的表達及其臨床意義

郜娜娜，賀新愛，馬 馨，許林平

(1.焦作市第二人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南 焦作 454000；2.鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 科研外事辦公室，河南 鄭州 450008)

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，也是惡性腫瘤患者死亡的主要原因。在許多國家和地區(qū)肺癌發(fā)病率、死亡率都已上升為惡性腫瘤的首位[1-2]。C-MYC蛋白是最早發(fā)現(xiàn)與腫瘤細胞增殖活性相關(guān)的原癌基因產(chǎn)物之一，在人類許多腫瘤中高表達[3]。C-MYC蛋白本身并不會發(fā)生同源二聚作用，也不結(jié)合DNA，但其能夠與Max形成異源二聚體，能與DNA上的E-box結(jié)合，進而激活靶基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細胞生長、抑制細胞分化和凋亡等改變[4-6]。而MXI1是C-MYC的拮抗蛋白，一般來講，MYC/Max和MXI1/Max二聚體的比例決定基因啟動子的活性，如以MYC/Max二聚體占主導(dǎo)，則主要表現(xiàn)為刺激細胞增殖；如以MXI1/Max二聚體占主導(dǎo)，則主要表現(xiàn)為抑制細胞生長，誘導(dǎo)細胞分化[7]。本研究擬通過檢測晚期肺腺癌組織中C-MYC和MXI1的表達情況，評價兩者表達狀況與臨床病理特征的關(guān)系，并進行統(tǒng)計學(xué)分析和生存狀況分析，旨在初步探討C-MYC和MXI1在晚期肺腺癌患者治療預(yù)后評估中的作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選取焦作市第二人民醫(yī)院病理科2011年1月至2013年1月收治的100例晚期肺腺癌病變標(biāo)本，其中男72例，女28例；年齡35～73歲，中位年齡55歲。見表1。

表1 100例晚期肺腺癌患者基本資料

1.2 主要試劑與實驗方法 C-MYC兔抗人多克隆抗體和MXI1兔抗人多克隆抗體均購自美國Santa Cruz公司，工作濃度為1200；免疫組化S-P通用試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。石蠟標(biāo)本常規(guī)脫蠟后用體積分數(shù)3% H2O2室溫下孵育20 min，封閉內(nèi)源性過氧化物酶，微波抗原修復(fù)，山羊血清封閉，分別加入C-MYC抗體和MXI1抗體4 ℃孵育過夜，再分別加入生物素標(biāo)記的羊抗兔二抗37 ℃孵育30 min，辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈酶卵白素37 ℃孵育30 min，最后用DAB顯色，蘇木精對比顯色，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。各步驟之間每次均用PBS緩沖液洗滌3次，每次5 min。用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 免疫組化結(jié)果判定 C-MYC和MXI1均以細胞漿或細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色。于顯微鏡400倍視野下隨機選取5個有代表性的不同區(qū)域，根據(jù)陽性細胞在全部組織細胞中所占比例及陽性細胞染色強度判斷每個視野的結(jié)果[8-9]。陽性細胞計數(shù)：≤10%，0分；>10%～25%，1分；>25%～50%，2分；>50%～75%，3分；>75%，4分。染色強度分類：未著色，0分；淡黃色1分；黃色或深黃色，2分；褐或棕褐色，3分。兩者計分相乘得到該視野的最終得分。最后該切片根據(jù)得分分為以下4個等級：0～1分(-)、2～4分(+)、5～7分(++)、≥8分(+++)。(-)為陰性，(+)為弱陽性表達，(++)、(+++)為強陽性表達，后兩者均記為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料用百分數(shù)表示，統(tǒng)計分析用χ2檢驗；蛋白表達指標(biāo)之間的相關(guān)關(guān)系采用Spearman等級相關(guān)檢驗；生存分析用Kaplan-Meier法，2組之間生存時間比較用log rank檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 C-MYC和MXI1蛋白在晚期肺腺癌組織中的表達 C-MYC和MXI1陽性表達均主要位于細胞漿，部分位于細胞核，呈棕黃色顆粒狀。晚期肺腺癌組織中C-MYC和MXI1陽性表達率分別為60.00%(60/100)和55.00%(55/100)。見圖1。

2.2 晚期肺腺癌組織中C-MYC蛋白的表達與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系 C-MYC蛋白表達與患者年齡、性別、ECOG評分、吸煙狀態(tài)、CEA、NSE、CYFRA21-1、CA125、中性粒細胞/淋巴細胞比例均無明顯關(guān)系(P>0.05)。見表2。

圖1 C-MYC(A)和MXI1(B)在晚期肺腺癌組織中的陽性表達情況(IHC，×400)

n(%)

2.3 晚期肺腺癌組織中MXI1蛋白的表達與臨床病理特征之間的關(guān)系 MXI1蛋白表達與患者年齡、性別、ECOG評分、吸煙狀態(tài)、CEA、NSE、CYFRA21-1、CA125、中性粒細胞/淋巴細胞比例均無明顯關(guān)系(P>0.05)。見表3。

表3 MXI1蛋白的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n(%)

2.4 晚期肺腺癌組織中C-MYC和MXI1表達的相關(guān)性 在100例晚期肺腺癌組織中，C-MYC和MXI1同時表達陽性者24例，同時表達陰性者16例，C-MYC陽性而MXI1陰性者28例，C-MYC陰性而MXI1陽性者32例，Spearman等級相關(guān)性分析顯示C-MYC、MXI1表達呈負相關(guān)(r=-0.206，P<0.05)。見表4。

表4 晚期肺腺癌組織中C-MYC和MXI1表達的相關(guān)性 n

2.5 晚期肺腺癌患者C-MYC、MXI1表達與其中位生存時間的關(guān)系 應(yīng)用Kaplan-Meier法對100例晚期肺腺癌患者進行生存分析，所有患者的中位生存時間是19.11個月，應(yīng)用log rank法對2組之間患者進行生存時間比較，結(jié)果顯示C-MYC陰性患者比C-MYC陽性患者具有較長的生存時間(21.00個月vs15.00個月)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=10.890，P=0.001)；而MXI1陽性患者比MXI1陰性組的患者具有較長的生存時間(21.00個月vs13.00個月)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=15.080，P=0.001)。見圖2、3。

圖2 C-MYC陽性患者和C-MYC陰性患者生存時間比較

圖3 MXI1陽性患者和MXI1陰性患者生存時間比較

3 討論

C-MYC蛋白是最早發(fā)現(xiàn)與腫瘤細胞增殖活性相關(guān)的原癌基因產(chǎn)物之一，在人類許多腫瘤中高度表達[3]。C-MYC蛋白是一種多功能蛋白，有廣泛的生物學(xué)功能，一方面參與細胞增殖、分化和細胞周期的調(diào)節(jié)，另一方面亦能啟動凋亡和衰老程序[10]。在本研究中我們發(fā)現(xiàn)在晚期肺腺癌組織中C-MYC陽性表達率為60.00%，且其表達與患者的臨床病理特征無明顯關(guān)系，提示C-MYC表達在晚期肺腺癌中是普遍的現(xiàn)象。我們進一步對100例晚期肺腺癌患者進行了生存分析，所有患者的中位生存時間是19.11個月，應(yīng)用log rank法對2組患者進行生存時間比較，結(jié)果顯示C-MYC陰性患者比C-MYC陽性患者具有較長的生存時間。這可以直接說明C-MYC高表達可以影響患者的生存時間。從而可以說明C-MYC蛋白的高表達可能對晚期肺腺癌的預(yù)后有一定的影響，C-MYC可以作為晚期肺腺癌預(yù)后不良的標(biāo)志。而Mad(包括MXI1、MAD1等)是C-MYC的拮抗蛋白，一般來講，MYC/Max和MAD/Max二聚體的比例決定基因啟動子的活性，如以MYC/Max二聚體占主導(dǎo)，則主要表現(xiàn)為刺激細胞增殖，如以MAD/Max二聚體占主導(dǎo)，則主要表現(xiàn)為抑制細胞生長，誘導(dǎo)細胞分化[7]。我們的研究發(fā)現(xiàn)在晚期肺腺癌組織中MXI1陽性表達率為55.00%，且其表達與患者的臨床病理特征無明顯關(guān)系，提示MXI1的表達亦在晚期肺腺癌中是普遍的現(xiàn)象。同樣應(yīng)用log rank法對2組之間患者進行生存時間比較，結(jié)果顯示MXI1陽性患者比MXI1陰性患者具有較長的生存時間。這可以直接說明MXI1低表達可以影響患者的生存時間。從而可以說明MXI1蛋白的低表達可能對晚期肺腺癌的預(yù)后有一定的影響，MXI1可以作為晚期肺腺癌預(yù)后不良的標(biāo)志。

本組數(shù)據(jù)顯示C-MYC高表達的患者、MXI1低表達的患者預(yù)后較差，提示2種蛋白存在相關(guān)性，我們通過Spearman等級相關(guān)性分析顯示C-MYC、MXI1表達呈負相關(guān)。這可能是癌基因C-MYC高表達和抑癌基因MXI1的低表達可以促進腫瘤細胞的增殖，抑制腫瘤細胞的凋亡等，從而促進晚期肺腺癌的發(fā)生和發(fā)展，影響了晚期肺腺癌患者的預(yù)后。我們前期的研究亦發(fā)現(xiàn)C-MYC和MXI1的異常表達與乳腺癌患者的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[9-11]。在此基礎(chǔ)上我們進行了本研究，且研究結(jié)果相同，提示兩者的異常表達在晚期肺腺癌患者的發(fā)生和演化中起到重要作用，為晚期肺腺癌的預(yù)后評估提供了新的指標(biāo)。

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