肝細胞癌生物標(biāo)記物的研究進展

羅啟杰 胡澤民

肝細胞癌生物標(biāo)記物的研究進展

羅啟杰 胡澤民

原發(fā)性肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是全世界第五大惡性腫瘤，早期診斷較困難，大多數(shù)患者就診時已屬中、晚期而錯失最佳治療時機，HCC的生物標(biāo)志物對于HCC的早期診斷、監(jiān)測腫瘤進展、療效判定、復(fù)發(fā)和存活率的判定十分重要，本文就近年來發(fā)現(xiàn)的肝癌腫瘤標(biāo)記物作一綜述。

肝細胞癌；腫瘤標(biāo)志物

0 前言

原發(fā)性肝細胞癌（hepatocellular carcinoma HCC）是全世界第五大常見惡性腫瘤且預(yù)后不良，這主要是因為其發(fā)現(xiàn)時多處于臨床中晚期，導(dǎo)致大多數(shù)臨床病人失去手術(shù)根治切除及肝移植治療機會。雖然HCC總死亡率有所下降，但HCC發(fā)病率在全世界仍持續(xù)上升［1］。研究表明應(yīng)用AFP（甲胎蛋白）在慢性HBV感染者進行HCC定期監(jiān)測有助于提高HCC患者生存率［2］，并成為長期以來在HCC高危人群篩查的理論支持。但直到最近，應(yīng)用于非乙型肝炎所致肝硬化及慢性肝臟疾病所導(dǎo)致的HCC的研究相對較少。

血清標(biāo)志物是存在于血清中并能進行識別和監(jiān)測由于細胞、生化、分子、遺傳學(xué)變化所導(dǎo)致的正?；虍惓Ｉ飳W(xué)過程的一種蛋白質(zhì)，大多為抗體等物質(zhì)。在過去幾十年中有大量關(guān)于HCC的血清標(biāo)志物被相繼發(fā)現(xiàn)。理想的HCC血清標(biāo)志物應(yīng)具有以下特征：高敏感性、高特異性、高性價比、可重復(fù)性及使用簡便性。一個有效的候選標(biāo)志物可由EDRN（Early detection Research Network）制定的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)進行有效性評價。該標(biāo)準(zhǔn)將標(biāo)志物實驗分為五期以評價其有效性：①臨床前疾病監(jiān)測；②對進展期疾病監(jiān)測的進行臨床評價；③對臨床前疾病監(jiān)測進行縱向性回顧；④前瞻性篩查；⑤癌癥控制效果研究。當(dāng)前大多數(shù)HCC血清學(xué)標(biāo)志物實驗都停留在1～3期研究范圍內(nèi)。世界范圍內(nèi)常用的血清學(xué)標(biāo)志物AFP，DCP（異常凝血酶原）等對HCC監(jiān)測及篩查尚缺乏足夠的靈敏度和特異度。本文旨在對HCC血清學(xué)標(biāo)志物進行總結(jié)和回顧，并對最近出現(xiàn)的血清標(biāo)志物的效果進行相應(yīng)對比。

1 甲胎蛋白（AFP）

甲胎蛋白是一種單多肽鏈蛋白聚糖，正常情況下是由卵黃管的胚胎肝臟細胞和胎兒腸管合成。AFP是由Bergstrand和Czar首先于1956年在胎兒血清中發(fā)現(xiàn)并由Tatarinov在1964年命名為人類腫瘤相關(guān)蛋白［3］。之后Ruoslahti和Seppala發(fā)明了對AFP的定量檢測方法。但是甲胎蛋白的具體功能尚無明確結(jié)論［4］。在HCC患者、肝細胞損傷后再生、慢性肝臟疾病及胚胎性腫瘤中AFP均有明顯表達。AFP在慢性肝臟疾病包括HCV感染有中等程度升高。血清AFP在肝細胞損傷后再生、包括急性肝衰竭中也有升高［5］。在肝硬化患者中也存在相同現(xiàn)象。如果對無肝細胞腫瘤的HCV病人進行抗病毒治療，血清AFP可降低［6］。

最近有研究通過對肝硬化的慢性肝臟疾病人和HCC病人進行病例對照研究，評價AFP的特異性和敏感性，結(jié)果提示AFP最佳截斷值為10.9 ng/L時，敏感度為66%，特異度為82%［7］。假定HCC在篩查人群中的流行率約1%，按此標(biāo)準(zhǔn)相應(yīng)陽性預(yù)測值為3.7%，假陽性率、假陰性率各為17.8%和30%。

目前為止所有關(guān)于HCC血清標(biāo)志物都存在一個主要缺陷，即在前瞻性研究中無法建立高危人群明確定義。最近完成的一項名為HALT?C（Hepatitis C Antiviral Long?TermTreatment against Cirrhosis）研究對1000名HCC相關(guān)肝硬化病人進行了長達4.3年的隨訪研究，試圖克服這一缺陷。在1000名研究對象中發(fā)現(xiàn)了39例新發(fā)HCC患者，作者針對1000名研究對象在實際檢測環(huán)境下都逐一收集了血清學(xué)標(biāo)本并進行了AFP和DCP的同步檢測［8］。通過對收集數(shù)據(jù)的分析，發(fā)現(xiàn)AFP作為HCC早期血清標(biāo)志物會隨著診斷時機和截斷值發(fā)生相應(yīng)變化。以20 ng/L及200 ng/L分別作為截斷值診斷HCC，AFP的敏感性和特異性分別為61%和81%及22%和100%，低截斷值（＜10 ng/L）可提高敏感性，但是以降低特異性為代價（15%～57%）。以20 ng/L作為截斷值和12個月間期作為臨床診斷前預(yù)警時間，AFP僅有47%的靈敏度和75%的特異度。以上數(shù)據(jù)都表明AFP單獨用于HCC監(jiān)測存在局限性。

最近美國食品和藥物管理局（FDA）批準(zhǔn)了另一個AFP改良血清標(biāo)志物AFP?L3即甲胎蛋白異質(zhì)體的監(jiān)測項目，該檢測項目以投入商用并且可同時檢測總AFP和AFP?L3。亦有研究表明檢測AFP?L3值超過10%的患者比低于10%的患者發(fā)生HCC的危險性增高7倍［9］。之后相繼有研究表明AFP?L3的敏感度波動于36%～96%，特異性波動于89%～94%［10］。AFP-L3表達水平跟腫瘤大小有關(guān)。在小HCC（＜2 cm），其敏感度僅有35%～45%，而大HCC（＞5 cm），其敏感度為80%～90%［11］。同AFP相似AFP?L3在小HCC的低敏感度使其臨床應(yīng)用效果不盡人意。

即便如上所述，AFP仍然是肝硬化病人腫物診斷中的一個有用指標(biāo)。AFP＞200 ng/L加上明確的影像學(xué)表現(xiàn)仍是高度特異的HCC診斷指標(biāo)［12］。而且，持續(xù)增高的AFP值提示未來HCC發(fā)生的高度危險性，暗示AFP充當(dāng)危險預(yù)測的角色。最后，縱向觀察AFP水平變化也有助于評價腫瘤生長、治療反應(yīng)及治療后的復(fù)發(fā)情況。

2 異常凝血酶原（Des?γ?Carboxy Prothrombin，簡稱DCP）

又稱為Ⅱ型維生素K缺乏誘導(dǎo)凝血酶原，由Liebman于1984年第一次引入為潛在的HCC血清標(biāo)志物［13］。DCP是一種由HCC細胞產(chǎn)生的異常的低羥基化凝血酶原前體。DCP應(yīng)用于HCC的監(jiān)測指標(biāo)目前也有不少局限，這主要表現(xiàn)在目前幾個對該指標(biāo)的病例對照試驗報道其敏感性波動于28%～89%和特異性87%～96%［14］。在上述HALT?C研究中，DCP敏感度和特異度分別為74%和86%，截斷值為40 mAU/mL，而截斷值為150 mAU/mL時，DCP敏感度和特異度分別為43%和100%［10］。上述結(jié)果使其在危險人群中的監(jiān)測應(yīng)用意見出現(xiàn)分歧。

先前對DCP的研究提示DCP表達水平在腫瘤侵犯門靜脈、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移及肝包膜浸潤情況下增高明顯［15］。由此可見DCP水平與其說是早期疾病指標(biāo)還不如說是癌癥進展期指標(biāo)。在針對DCP與AFP直接比較的試驗中存在較大爭議，幾項來自日本［16-19］和一項來自美國［14］的研究表明DCP表現(xiàn)優(yōu)于AFP，而其他試驗未發(fā)現(xiàn)二者之間的明確差異。而波動于（40～100 mAU/mL）的DCP截斷值和波動于（20～200 ng/L）的AFP截斷值都使其應(yīng)用受到局限。

對兩項指標(biāo)的聯(lián)合監(jiān)測對敏感度有所改善，但也不可避免的出現(xiàn)特異度減低［20］。如上述的HALT?C研究，聯(lián)合檢測DCP加AFP提高12個月疾病前期敏感度由43%，47%（低閾值40 mAU/ mL，20 ng/L）到73%，同時降低特異度到71%（95%到75%）。簡單來說聯(lián)合應(yīng)用檢測指標(biāo)即使擁有更高的敏感性，但仍有1/4的病人漏診。更有趣的是，39個HCC患者當(dāng)中有大部分是通過影像學(xué)檢查得以確診（US、CT或MR），只有9人是首先通過2倍增高的血清AFP值得以最終確診的病例［8］?；谀壳翱色@得的數(shù)據(jù)，不論AFP、DCP還是二者聯(lián)合應(yīng)用在早期HCC篩查的應(yīng)用中都存在分歧。

3 α左旋鹽藻糖苷酶（Alpha?L?Fucosidase，AFU）

α左旋鹽藻糖苷酶（AFU）是一種有催化多種血清蛋白果糖化功能的溶酶體酶。其功能在HCC及慢性肝病患者中常升高［21］。1998年，Giardina及其同伴對132名肝硬化患者的血清AFU活性進行了前瞻性研究。在8年的隨訪過程中，AFU活性水平在HCC患者中有明顯升高。而在相當(dāng)?shù)牟±蠥FU活性水平變化甚至出現(xiàn)于影像學(xué)（超聲）變化之前［22］。然而其總的敏感度仍相對較低，而其特異度又受到其在肝外疾病如糖尿病、胰腺炎及甲狀腺功能減低癥的表達的影響。

4 磷脂酰肌醇蛋白聚糖（Glypican?3，簡稱GPC3）

磷脂酰肌醇蛋白聚糖（GPC3）是一種細胞表面聚糖蛋白，其功能為通過影響生長因子表達調(diào)節(jié)細胞在胚胎發(fā)育期間增殖和存活。該標(biāo)志物在正常人及慢性肝炎患者中缺乏表達，而在HCC和黑色素瘤細胞中高度表達［23，24］。一項早期研究顯示GPC3蛋白在HCC患者中有72%的表達及53%的HCC患者在隨后檢測中升高［25］。GPC3與AFP的不相關(guān)性提示GPC3可作為血清AFP陰性患者血清標(biāo)志物。盡管有最近研究報道的有力支持，GPC3到目前為止尚未獲得廣泛接受及診斷應(yīng)用。

5 高爾基體蛋白73（Golgi Protein 73，簡稱GP73）

高爾基體蛋白73（GP73）是一種分子量為73道爾頓的定位于高爾基體膜的糖蛋白，該糖蛋白在正常人肝細胞生理過程中有少量表達［26］。在研究成人巨細胞肝炎時第一次發(fā)現(xiàn)有升高表達水平的GP73［26］。進一步研究提示GP73在不同程度急慢性肝病中均有上調(diào)，盡管慢性肝病的病因各不相同［27］。Block等首先于HBV相關(guān)HCC中發(fā)現(xiàn)了增高血清表達水平的GP73［28］。相似的結(jié)果在其后對HCV相關(guān)的HCC研究中得到證實［29］。血清GP73在HCC患者的表達明顯高于無HCC的肝硬化患者。其敏感性和特異性在HCC診斷中分別為69%和75%。已有幾項研究表明GP73在肝硬化程度較高和HCC患者中特異性尚不盡人意［30，31］。以上報道的差異主要來源于基礎(chǔ)疾病的嚴重程度對GP73血清水平的影響。早期研究也表明GP73會隨著肝硬化程度升高呈現(xiàn)正相關(guān)變化［27］。Yamoto等人的研究發(fā)現(xiàn)血清GP73水平在HCC切除術(shù)后肝硬化病人中并未降低，該現(xiàn)象提示在肝硬化病人中血清GP73可能來自非腫瘤細胞［31］。該現(xiàn)象表明GP73也許缺乏腫瘤特異性。

6 其他候選血清標(biāo)志物

6.1 血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）

是一種與腫瘤血管發(fā)生相關(guān)的標(biāo)志物。其在進展期HCC的血漿和肝臟組織中表達升高，尤其在門靜脈癌栓，腫瘤顯微鏡下靜脈侵犯、邊界不清腫瘤及復(fù)發(fā)性HCC中有明顯表達［32］。其他血清標(biāo)志物，如嗜鉻粒蛋白A［33］，鱗狀細胞癌抗原（SCCA）［34］，轉(zhuǎn)化生長因子B1（TGFB1）［35］，肝細胞生長因子（HGF）［36］，人宮頸癌原癌基因（HCCR）［37］，胰島素樣生長因子II（IGF?II）［38］及KL?6［39］等。以上血清標(biāo)志物在確診的HCC中都有相對升高。這些血清標(biāo)志物尚未得到足夠多的、有力的研究支持，而且其中相當(dāng)部分存在特異性較差的缺點。需要更深入的研究將確定他們在HCC篩查和監(jiān)測中的作用。

6.2 腫瘤源性自身抗體（TAAs）

此前已有幾項研究記錄到在HCC患者體內(nèi)出現(xiàn)了腫瘤源性自身抗體（TAAs）［40，41］。TAAs的表達是由癌癥發(fā)生過程中異常細胞蛋白合成過程中出現(xiàn)的，并由此導(dǎo)致了自身免疫源性產(chǎn)生，因此TAAs被認為是一種表明腫瘤惡性轉(zhuǎn)化的標(biāo)志物［42］。但是，其對HCC的敏感性較低，缺乏肝臟表達特異性，因為在相當(dāng)數(shù)量的其他類型腫瘤中TAAs均有不同程度表達。最近Chen等試圖通過聯(lián)合TAAs和其他非TAAs檢測指標(biāo)如AFP來克服這一缺陷［43］。在其研究中證實通過10個HCC相關(guān)TAAs聯(lián)合檢測敏感性為66.2%，如果聯(lián)合AFP其敏感性可得到進一步提高。但是TAAs在HCC和肝硬化中表現(xiàn)差強人意，其特異性為66.7%。至今為止，尚無對TAAs在HCC監(jiān)測中效果的前瞻性研究報道。

6.3 蛋白組學(xué)和糖蛋白組學(xué)方法

血清蛋白組學(xué)長期以來被視為尋找癌癥標(biāo)志物包括HCC在內(nèi)的突破行技術(shù)革命。該技術(shù)允許檢測和定量分析上千種血清或血漿蛋白及其分子片段。蛋白組學(xué)方法在過去十年由于表面增強激光解吸附/電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)（SELDI?TOF?MS）出現(xiàn)得到不斷的發(fā)展。

在2003年由Poon等應(yīng)用SELDI?TOF?MS技術(shù)進行的一項病例對照研究中，對38位來自中國的HCC病人和20位慢性肝炎病人血清進行了分析［44］。在該項試驗中，檢出250種蛋白組學(xué)特征，對區(qū)分該兩組病人的敏感性和特異性分別達到90%和92%。該研究結(jié)果被廣泛引用，但至今尚未有研究能重復(fù)上述結(jié)果。

但最初關(guān)于蛋白組學(xué)的可觀前景卻由于實施方法和實驗方法限制導(dǎo)致其實用性大大減低。其中最主要的矛盾體現(xiàn)在以下方面：①實驗過程中存在難以控制的生物學(xué)干擾；②重復(fù)性差，主要表現(xiàn)在同一血清即使重復(fù)檢測變異較大和不同實驗室難以統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)；③花費過高；④缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)化。因此至今為止蛋白組學(xué)檢測方法從未超過EDRN標(biāo)準(zhǔn)的一期實驗。

糖蛋白組學(xué)的研究方法是通過已知癌癥病人血清蛋白來研究其糖基化改變產(chǎn)物在相關(guān)癌癥中的表達。該方法實例有高度果糖化的AFP產(chǎn)物AFP?L3（見前）。在慢性肝炎和HCC患者血清中果糖化蛋白水平升高這一現(xiàn)象已經(jīng)被證實。一項最新的研究證實了56種蛋白在HCC中有高度果糖化，其中又發(fā)現(xiàn)兩種價值較高的候選蛋白，血液結(jié)合素（hemopexin）和胎球蛋白A（fetuin?A）。在HCC患者中血液結(jié)合素升高1.4倍，胎球蛋白升高2.5倍；雖然其差異不大，但其在研究中表現(xiàn)優(yōu)異，診斷超過300名病例［45，46］。而另一方面，Morata等卻未能確認糖基化血液結(jié)合素的優(yōu)異表現(xiàn)［29］。盡管有較多前景可觀的研究結(jié)果在前，糖蛋白組學(xué)的診斷價值尚不完全清楚。

6.4 微衛(wèi)星RNA（MicroRNA，簡稱miRNA）

微衛(wèi)星RNA是一種小片段、非編碼RNA，主要調(diào)控基因表達、細胞分化、肝細胞維持及表皮-實質(zhì)轉(zhuǎn)化［47］。miRNA下調(diào)見于腫瘤發(fā)生且與影響的靶向基因有關(guān)，miRNA以腫瘤抑制因子或以原癌基因的形式發(fā)揮其作用。最近有幾項研究也證實miRNA在HCC組織中發(fā)生明顯改變［48，49］。

最近有研究表明miRNA在血清中相對穩(wěn)定并且可通過實時定量PCR檢測其拷貝數(shù)。對多種腫瘤的研究表明miRNA是一個非常有效的診斷工具。Li等研究發(fā)現(xiàn)在HBV感染的病人中有幾種miRNA出現(xiàn)了升高［50］。其中兩種miRNA（miR?10a和miR?125b）可以預(yù)測HBV相關(guān)HCC的發(fā)生。Qu等應(yīng)用相似的方法對HCV相關(guān)肝臟疾病人群進行了隊列研究，其研究發(fā)現(xiàn)在HCC患者中有兩種miRNA（miR?16和miR?199a）表達減少［51］。但進一步對其研究數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)其中有相當(dāng)數(shù)量HCC和肝硬化病人發(fā)生了重復(fù)。而且超過50%的對照組患者并未出現(xiàn)嚴重的肝硬化，這將直接導(dǎo)致HCC患者和對照組患者差異被放大。Xu等以HBV相關(guān)HCC患者與正常控制組進行比較發(fā)現(xiàn)三種相關(guān)miRNA（miR?21、miR?122和miR?223）［52］。但在HBV感染的慢性肝炎病人其表達程度卻更高。于是作者推測miRNA表達水平升高與其說是腫瘤源性還不如說是由肝細胞損傷所導(dǎo)致，如此一來降低了miRNA作為HCC標(biāo)志物應(yīng)用的有效性。而是否存在特異性HCC的miRNA標(biāo)志物需要進一步探索及確證。

6.5 環(huán)狀RNA（Circular RNA，circRNA）

環(huán)狀RNA是一類通過反向剪接方式形成的非編碼RNA，因其剪接來源不同，主要分為外顯子來源環(huán)狀RNA和內(nèi)含子來源環(huán)狀RNA。數(shù)量眾多的環(huán)狀RNA在多種生物中被發(fā)現(xiàn)，其有重要的生物學(xué)功能，可以充當(dāng)微小RNA海綿，還能與蛋白質(zhì)相結(jié)合，從而參與基因表達調(diào)控并影響蛋白質(zhì)的功能。此外，個別環(huán)狀RNA甚至能編碼蛋白質(zhì)，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起調(diào)控作用。Qin等在基于89對肝癌和鄰近的肝組織樣本的分析，Hsa_circ_0001649在HCC組織中表達顯著下調(diào)，表明hsa_circ_0001649可能作為肝癌新的潛在生物標(biāo)志物，并可能在肝癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用［53］。CircRNAs可能作為微rna（microRNA）海綿和調(diào)節(jié)拼接和轉(zhuǎn)錄，顯示circRNAs與人類疾病密切相關(guān)，特別是癌癥方面，可能成為更好的生物標(biāo)志物。隨著技術(shù)的發(fā)展，進一步的研究將揭示circRNAs的生理和病理過程，在癌癥的診斷和治療發(fā)揮重要作用。

7 總結(jié)

癌癥血清標(biāo)志物從實驗室到臨床需要極其漫長的過程，HCC血清標(biāo)志物亦是如此?，F(xiàn)今通過美國FDA批準(zhǔn)的標(biāo)志物僅有9種，其中沒有任何一種標(biāo)志物擁有絕對的腫瘤特異性，大多數(shù)只用于監(jiān)測現(xiàn)患病人病情、對治療的反應(yīng)及評價手術(shù)后復(fù)發(fā)情況。蛋白組學(xué)盡管其概念可觀，但到現(xiàn)在為止尚不能成功應(yīng)用于臨床，到目前為止僅有占3%的報道可行的蛋白組學(xué)標(biāo)志物應(yīng)用于臨床［54］。而前述HALT?C研究方法通過建立高危人群對AFP和DCP，兩種廣泛應(yīng)用的血清標(biāo)志物進行了長時間觀察，取得了比其他研究更為客觀的研究結(jié)果，該實驗包括了數(shù)量充足的實驗對象、長時間完整的隨訪情況及詳盡的高危人群資料。獨特之處更在于其實驗設(shè)計的完備，通過該設(shè)計將基礎(chǔ)疾病影響血清標(biāo)志物的混雜因素影響降到最低，而其他實驗往往難以控制其影響。但是即便如此仍不能說明AFP、DCP兩種血清標(biāo)志物單用或聯(lián)合對HCC監(jiān)測有特別優(yōu)異之處。因此縱觀所有HCC血清標(biāo)志物，目前其應(yīng)用效果均不盡人意。就實驗方法而言，HALT?C研究為其他同類研究提供了一個比較完整的實驗方法路徑。

［1］Kamangar F，Dores GM，Anderson WF.Patterns of cancer in?cidence，mortality，and prevalence across five continents；de?fining priorities to reduce cancer disparities in different geo?graphic regions of the world［J］.J Clin Oncol，2006，24（14）：2137-2150.

［2］Zhang BH，Yang BH，Tang ZY.Randomized controlled trial of screening for hepatocellular carcinoma［J］.J Cancer Res Clin Oncol，2004，130（7）：417-422.

［3］TATARINOV IuS.Detection of embryo?embryo?specific alpha?golbulin in the blood serum of a patient with primary liver can?cer［J］.Vopr Med Khim，1964，10：90-91.

［4］Ruoslahti E，Seppala M.Studies of carcino?fetal proteins.Dem?onstration of fetoprotein in serum of healthy human adults［J］. Int J Cancer，1971，8（3）：374-383.

［5］Schmidt LE，Dalhoff K.Alpha?fetoprotein is a predictor of out?come in acetaminophen induced liver injury［J］.Hepatolgy，2005，41（1）：26-31.

［6］Di Bisceglie AM，Sterling RK，Chung RT，et al.Serum alpha?fetoprotein levels in patients with advanced hepatitis C：results from the HALT?C Trial［J］.J Hepatol，2005，43（3）：434-441.

［7］Marrero JA，F(xiàn)eng Z，Wang Y，et al.Alpha?fetoprotein，des?gamma carboxyprothrombin，and lectin?bound alpha?fetoprotein inearlyhepatocellularcarcinoma［J］.Gastroenterology，2009，137（1）：110-118.

［8］Lok AS，Sterling RK，Everhart JE，et al.Des?gamma?carboxy prothrombin and alpha?fetoprotein as biomarkers for the early detection of hepatocellular carcinoma［J］.Gastroenterology，2010，138（2）：493-502.

［9］Yamagata Y，Shimizu K，Nakamura K，et al.Simultaneous de?termination of percentage of Lens culinaris agglutinin?reactive alpha?fetoprotein and alpha?fetoprotein concentration using the LiBASys clinical auto?analyzer［J］.Clin Chim Acta，2003，327（1-2）：59-67.

［10］Oka H，Saito A，Ito K，et al.Multicenter prospective analysis of newly diagnosed hepatocellular carcinoma with respect to the percentage of Lens culinaris agglutinin?reactive alpha?fetopro?tein［J］.J Gastroenterol Hepatol，2001，16（12）：1378-1383.

［11］Li D，Mallory T，Satomura S.AFP?L3：a new generation of tu? mor marker for hepatocellular carcinoma［J］.Clin Chim Acta，2001，313（1-2）：15-19.

［12］Nguyen MH，Garcia RT，Simpson PW，et al.Racial differences in effectiveness of alpha?fetoprotein for diagnosis of hepatocellu?lar carcinoma in hepatitis C virus cirrhosis［J］.Hepatology，2002，36（2）：410-417.

［13］Toyosaka A，Okamoto E，Mitsunobu M，et al.Intrahepatic me?tastase in hepatocellular carcinoma：evidence for spread via the portal vein as an efferent vessel［J］.Am J Gastroenterol，1996，91（8）：1610-1615.

［14］Marrero JA，Su GL，Wei W，et al.Des?gamma carboxyprot?hrombin can differentiate hepatocellular carcinoma form nonma?lignant chronic liver disease in American patients［J］.Hepatol?ogy，2003，37（5）：1114-1121.

［15］Koike Y，Shiratori Y，Sato S.Des?gamma?carboxy prothrombin as a useful predisposing factor for the development of portal ve?nous invasion in patients with hepatocellular carcinoma：a pro?spective analysis of 227 patients［J］.Cancer，2001，91（3）：561-569.

［16］Kasahara A，Hayashi N，F(xiàn)usamoto H.Clinical evaluation of plasma des?gamma?carboxy as a marker protein of hepatocellu?lar carcinoma in patients with tumors of various sizes［J］.Dig Dis Sci，1993，38（12）：2170-2176.

［17Mita Y，Aoyagi Y，Yanagi M，et al.The usefulness of deter?mining des?gamma?carboxy prothrombin by sensitive enzyme im?munoassay in the early diagnosis of patients with hepatocellular carcinoma［J］.Cancer，1998，82（9）：1643-1648.

［18］Nakagawa T，Seki T，Shiro T，et al.Clinicopathologic signifi?cance of protein induced vitamin K absence or antagonist II and alpha?fetoprotein in hepatocellular carcinoma［J］.Int J Oncol，1999，14（2）：281-286.

［19］Takikawa Y，Suzuki K，Yamazaki K，et al.Plasma abnormal prothrombin（PIVKA?II）：a new and reliable marker for the de?tection of hepatocellular carcinoma［J］.J Gastroenterol Hepa?tol，1992，7（1）：1-6.

［20］Ishii M，Gama H，Chida N，et al.Simultaneous measurements of serum alpha?fetoprotein and protein induced by vitamin K ab?sence for detecting hepatocellular carcinoma.South Tohoku Dis?trict study Group［J］.Am J Gastroenterol，2000，95（4）：1036-1040.

［21］Ishizuka H，Nakayama T，Matsuoka S，et al.Prediction for the development of hepato?cellular?carcinoma in patients with liver cirrhosis by the serial determinations of serum alpha?L?fucosi?dase activity［J］.Intern Med，1999，38（12）：927-931.

［22］Giardina MG，Matarazzo M，Morante R，et al.Serum alpha?L?fucosidase activity and early detection of hepatocellular carcino?ma：a prospective study of patients with cirrhosis［J］.Cancer，1998，83（12）：2468-2474.

［23］Zhu ZW，F(xiàn)riess H，Wang L，et al.Enhanced goypican?3 ex?pression differentiates the majority of hepatocellular carcinoma from benign hepatic disorders［J］.Gut，2001，48（4）：558-564.

［24］Nakatsura T，Kageshita T，Ito S，et al.Identification of glypi?can?3 as a novel tumor marker for melanoma［J］.Clin Cancer Res，2004，10（19）：6612-6621.

［25］Capurro M，Wanless IR，Sherman M，et al.Glypican?3；a novel Serum and histochemical marker for hepatocellular carci?noma［J］.Gastroenterology，2003，125（1）：89-97.

［26］Kladney RD，Bulla GA，Guo L，et al.GP73，a novel Golgi?lo?calized protein upregulated by viral infection［J］.Gene，2000，249（1-2）：53-65.

［27］Iftikhar R，Kladney RD，Havlioglu N，et al.Disease?and cell?specific expression of GP73 in human liver disease［J］.Am J Gastroenterol，2004，99（6）：1087-1095.

［28］Block TM，Comunale MA，Lowman M，et al.Use of targeted glycoproteomics to identify serum glycoproteins that correlate with liver cancer in woodchucks and humans［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2005，102（3）：779-784.

［29］Marrero JA，Romano PR，Nikolaeva O，et al.GP73，a resi?dent Golgi glycoprotein，is a novel serum marker for hepatocel?lular carcinoma［J］.J Hepatol，2005，43（6）：1007-1012.

［30］Ozkan H，Erdal H，Tutkak H，et al.Diagnostic and prognostic validity of Golgi protein 73 in hepatocellular carcinoma［J］.Di?gestion，2011，83（1-2）：83-88.

［31］Yamamoto K，Imamura H，Matsuyama Y，et al.AFP，AFP?L3，DCP，and GP73 as markers for monitoring treatment re?sponse and recurrence and as surrogate markers of clinicopatho?logical variables of HCC［J］.J Gastroenterol，2010，45（12）：1272-1282.

［32］Li XM，Tang ZY，Qin LX，et al.Serum vascular endothelial growth factor is a predictor of invasion and metastasis in hepato?cellular carcinoma［J］.J Exp Clin Cancer Res，1999，18（4）：511-517.

［33］Leone N，Pellicano R，Brunello F，et al.Elevated serum chro?mogranin A in patients with hepatocellular carcinoma［J］.Clin Exp Med，2002，2（3）：119-123.

［34］Giannelli G，Marinosci F，Trerotoli P，et al.SCCA antigen combined with alpha?fetoprotein as serologic markers of HCC［J］.Int J Cancer，2005，117（3）：506-509.

［35］Bedossa P，Peltier E，Terris B，et al.Transforming growth fac?tor?beta 1（TGF?beta 1）and TGF?beta 1 receptors in normal，cirrhotic，and neoplastic human livers［J］.Hepatology，1995，21（3）：760-766.

［36］Yamagamim H，Moriyama M，Matsumura H，et al.Serum con?centrations of human hepatocyte growth factor is a useful indica?tor for predicting the occurrence of hepatocellular carcinoma in C?viral chronic liver diseases［J］.Cancer，2002，95（4）：824-834.

［37］Yoon SK，Lim NK，Ha SA，et al.The human cervical cancer oncogene protein is a biomarker for human hepatocellular carci?noma［J］.Cancer Res，2004，64（15）：5434-541.

［38］Tsai JF，Jeng JE，Chuang LY，et al.Serum insulin?like growth factor?II and alpha?fetoprotein as tumor markers of hepatocellu?lar carcinoma［J］.Tumor Biol，2003，24（6）：291-298.

［39］Moriyama M，Matsumura H，Watanabe A，et al.Detection of serum and intrahepatic KL?6 in anti?HCV positive patients with hepatocellular carcinoma［J］.Hepatol Res，2004，30（1）：24-33.

［40］Wright LM，Kreikemeier JT，F(xiàn)immel CJ.A concise review of serum markers for hepatocellular cancer［J］.Cancer Detect Prev，2007，31（1）：35-44.

［41］Himoto T，Kuriyama S，Zhang JY，et al.Analyses of autoanti?bodies against tumor-associated antigens in patients with hepa?tocellular carcinoma［J］.Int J Oncol，2005，27（4）：1079-1085.

［42］Ulanet DB，Torbenson M，Dang CV et al.Unique conformation of cancer autoantigen B23 inhepatoma：a Mechanism for speci?ficity yi the autoimmune response［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2003，100（21）：12361-12366.

［43］Chen Y，Zhou Y，Qiu S，et al.Autoantibodies to tumor-associ?ated antigens combined with abnormal alpha-fetoprotein en?hance immunodiagnosis of hepatocellular carcinoma［J］.Cancer Lett，2010，289（1）：32-39.

［44］Poon TC，Yip TT，Chan AT，et al.Comprehensive proteomic profiling identifies serum proteomic signatures for detection of hepatocellular carcinoma and its subtypes［J］.Clin Chem，2003，49（5）：752-760.

［45］Comunale MA，Wang M，Hafner J，et al.Identification and de?velopment of fucosylated glycoproteins as biomarkers of primary hepatocellular carcinoma［J］.J Proteome Res，2009，8（2）：595-602.

［46］Wang M，Long RE，Comunale MA，et al.Novel fucosylated biomarkers for the early detection of hepatocellular carcinoma［J］.CancerEpidemiolBiomarkersPrev，2009，18（6）：1914-1921.

［47］Lewis BP，Shih IH，Jones?Rhoades MW，et al.Prediction of manmmalian microRNA targets［J］.Cell，2003，115（7）：787-798.

［48］Toffanin S，Hoshida Y，Lachenmayer A，et al.MicroRNA?based classification fo hepatocellular carcinoma and oncogenic role of miR?517a［J］.Gastroenterology，2011，140（5）：1618-1628.

［49］Pineau P，Volinia S，McJunkin K，et al.MiR?221 overexpres?sion contributes to liver tumorigenesis［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2010，107（1）：264-269.

［50］Li LM，Hu ZB，Zhou ZX，et al.Serum microRNA profiles serve as novel biomarkers for HBV infection and diagnosis of HBV-positive hepatocarcinoma［J］.Cancer Res，2010，70（23）：9798-9807.

［51］Qu KZ，Zhang K，Li H，et al.Circulating microRNAs as bio?markers for hepatocellular carcinoma［J］.J Clin Gastroenterol，2011，45（4）：355-360.

［52］Xu J，Wu C，Che X，et al.Circulating microRNAs，miR-21，miR-122，and miR-223，in patients with hepatocellular carci?noma or chronic hepatitis［J］.Mol Carcinog，2011，50（2）：136-142.

［53］Qin M，Liu G，Huo X，et al.Hsa_circ_0001649：a circular RNA and potential novel biomarker for hepatocellular carcino?ma［J］.Cancer Biomark，2016，16（1）：161-169.

［54］Diamandis EP.Cancer biomarkers：can we turn recent failures into success［J］？J Natl Cancer Inst，2010，102（19）：1462-1467.

Progress of biomarkers of hepatocellular carcinoma

LUO Qijie，HU Zemin.Faculty of Graduate Studies，Guangdong Medical University，Zhanjiang，524000，China.

Hepatocellular Carcinoma（HCC）is the world′s fifth malignant tumor.Most patients have been in advanced stage and missed the best treatment timing when they are diagnosed.The effective biomarkers are important for the early diagnosis，the monitoring of tumor progression，judgement of curative effect，recurrence and survival rate of judgement.This article reviewed the several biomarkers which have been found in the past few years.

hepatocellular carcinoma；biomarkers

R735.7

A

10.3969/j.issn.1009?976X.2017.02.025

2016-12-30）

中山市科技計劃項目（20132A123）

524000廣東湛江廣東醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院

羅啟杰，E?mail：905250020@qq.com