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    自擬抑酸止痛方對胃潰瘍大鼠胃酸及胃蛋白酶的影響

    2017-03-04 02:53:13王長宏劉明暉趙樹華吳思宇尚宇航趙雨杰
    關(guān)鍵詞:海螵蛸抑酸吉林大學(xué)

    王 璞 ,王長宏 ,劉明暉*, 趙樹華, 張 學(xué),吳思宇 ,尚宇航 ,趙雨杰

    (1.吉林大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院,吉林 長春 130021;2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 中醫(yī)科)

    自擬抑酸止痛方對胃潰瘍大鼠胃酸及胃蛋白酶的影響

    王 璞1,王長宏2,劉明暉2*, 趙樹華2, 張 學(xué)2,吳思宇1,尚宇航1,趙雨杰1

    (1.吉林大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院,吉林 長春 130021;2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 中醫(yī)科)

    胃潰瘍?yōu)榕R床常見病[1],目前抑酸劑、胃黏膜保護(hù)劑[2,3]等西藥方案成熟,療效確切,但是價(jià)格偏貴、毒副作用大等問題仍不容忽視,且停藥后復(fù)發(fā)率高,流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示達(dá)50%-70%。近年來,中藥對胃潰瘍治療作用的實(shí)驗(yàn)研究取得了諸多進(jìn)展[4],顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢。本課題采用實(shí)驗(yàn)室常用的醋酸涂抹法復(fù)制大鼠消化性潰瘍模型,以胃液量、胃酸度及胃蛋白酶活性為觀察指標(biāo),對抑酸止痛方治療消化性潰瘍的療效及作用機(jī)理進(jìn)行探討,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

    1 材料與方法

    1.1 藥材與試劑 海螵蛸、乳香、沒藥,由吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院中藥房提供,經(jīng)執(zhí)業(yè)中藥師鑒定均為地道藥材,質(zhì)量合格;奧美拉唑腸溶膠囊(沈陽澳華制藥股份有限公司,批號:20121013,規(guī)格:20 mg/粒);酚酞(天津永晟精細(xì)化工有限公司,批號:20130428,分析純);胃蛋白酶測試盒(南京建成科技有限公司,批號:20140310);NaOH(齊齊哈爾化工總廠,批號:20130528),水合氯醛(青島金沙字庫化工廠,批號:40448)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)動物 健康Wistar大鼠60只,SPF級,雌雄各半,體重200±20 g,由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供,合格證號:SCXK(吉)20070003,動物飼養(yǎng):恒溫22℃,大鼠自由進(jìn)食進(jìn)水,室內(nèi)保持自然光暗周期。

    1.3 儀器 MP51001型電子秤(上海橫平科學(xué)儀器有限公司);5810型低溫高速離心機(jī)(德國Eppendorf公司);BlueStar Plus紫外-可見分光光度計(jì)(北京萊伯泰科儀器有限公司)。

    1.4 方法

    1.4.1 藥物制備 抑酸止痛方中海螵蛸:乳香:沒藥按2∶1∶1比例組成,首次加10倍于中藥質(zhì)量蒸餾水浸泡2 h后,常規(guī)煎煮2次,每次30 min,濾出藥液并加熱濃縮成每1 ml藥液含原藥材2 g,冷卻后放置于4℃冰箱備用,待使用時加入蒸餾水稀釋至所需濃度。

    1.4.2 動物模型制備 將Wistar大鼠60只按隨機(jī)數(shù)字法分成假手術(shù)組、模型組、中藥大劑量組、中藥中等劑量組、中藥小劑量組及西藥對照組,每組10只,雌雄各半,按照Takagi[5]方法復(fù)制大鼠胃潰瘍模型:用10%水合氯醛按0.2ml·100 g-1比例對其進(jìn)行腹腔給藥[6],待麻醉后將大鼠仰臥固定,去毛,用75%乙醇進(jìn)行消毒,用手術(shù)刀從劍突下部沿腹白線打開長度約2 cm的刀口,打開腹腔,于胃黏膜下層注入冰醋酸,生理鹽水清洗局部,縫合腹壁;假手術(shù)組開腹后于胃黏膜下層注入同體積生理鹽水。手術(shù)后第3天開始給藥,中藥大劑量組按1.0 g·kg-1體重日1次灌胃(相當(dāng)于成人劑量的20倍);中藥中等劑量組按0.5.0 g·kg-1體重日1次灌胃(相當(dāng)于成人劑量的10倍);中藥小劑量組按0.25 g·kg-1體重日1次灌胃(相當(dāng)于成人劑量的5倍);西藥對照組以奧美拉唑水溶液4 mg·kg-1體重日1次灌胃;假手術(shù)組及模型組給予相同體積的蒸餾水,以上各組給藥天數(shù)為14 d。

    1.4.3 指標(biāo)檢測 胃液檢測:給藥結(jié)束后1天,大鼠背位固定,剪開腹腔,結(jié)扎賁門,摘取全胃,于胃大彎處剪一小口,將胃內(nèi)容物收集于刻度離心管中,記錄胃液量。胃總酸度檢測 :所收集胃液置于離心管中,以半徑4 cm、轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心15 min后,吸取上層清液1 ml,加酚酞指示劑1滴,用0.01 mol·L-1的NaOH滴定至指示色不變,根據(jù)所消耗NaOH量,由公式總酸度(mol·L-1)=10×耗去NaOH溶液量(ml)可計(jì)算胃總酸度。胃蛋白酶活性的檢測:依據(jù)胃蛋白酶測試盒說明書進(jìn)行檢測,取反應(yīng)終止后的樣本在660 nm波長處測定光密度(OD),代入回歸方程(以標(biāo)準(zhǔn)品胃蛋白酶OD值對質(zhì)量濃度進(jìn)行回歸分析)計(jì)算胃蛋白酶活性(U/ml)。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    2 結(jié)果

    與模型組對比,各組大鼠胃液量、胃酸總量及胃蛋白酶活性均顯著降低(P<0.05);與奧美拉唑組對比,中藥高劑量組各項(xiàng)指標(biāo)無顯著差異(P>0.05);中藥中、低劑量組各項(xiàng)指標(biāo)高于中藥高劑量組及奧美拉唑組(P<0.05);隨著中藥劑量的增加,各項(xiàng)觀察指標(biāo)依次降低(P<0.05),說明抑酸止痛方療效與劑量成正相關(guān)。具體見表1。

    表1 抑酸止痛方對大鼠胃液量、胃酸總量 及胃蛋白酶活性的影響

    a與b:P<0.05;a與c:P<0.05;b與cP>0.05。

    3 討論

    一直以來,“胃酸-胃蛋白酶自身消化”被認(rèn)為是消化性潰瘍的最終形成原因[7,8],這一觀念在“HP時代”仍占主導(dǎo)地位。胃蛋白酶是由胃主細(xì)胞分泌的胃蛋白酶原經(jīng)胃酸激活而形成,它具有降解蛋白質(zhì)分子的作用,因此對消化道黏膜有侵襲作用[9]。胃液是消化液中的主要成分,胃黏膜壁細(xì)胞、主細(xì)胞和黏液細(xì)胞均能分泌,由胃酸、胃蛋白酶、黏液、氯化鈉、氯化鉀等成分組成。胃酸有多種作用,其主要功能之一就是激活胃蛋白酶原,使之轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂猩锘钚缘奈傅鞍酌?,同時為胃蛋白酶發(fā)揮作用提供適宜的外界環(huán)境。當(dāng)胃內(nèi)pH值上升超過4.0時[10],胃蛋白酶即失活,因此胃蛋白酶的活性受到胃內(nèi)環(huán)境制約,我們在探討消化性潰瘍的病因病機(jī)及治療方案時,首先要考慮胃酸的作用[11-12]。綜上,胃酸的作用在潰瘍發(fā)生中占主導(dǎo)地位。

    抑酸止痛方是臨床驗(yàn)方,方劑組成為海螵蛸、乳香、沒藥[13],其中海螵蛸抑酸、定痛、止血、愈瘍之功效;乳香行氣止痛;沒藥散瘀結(jié)、消腫脹。有研究報(bào)道,以海螵蛸、乳香、沒藥為主要組成的方劑在研究中普遍應(yīng)用于非甾體型、慢性乙酸性、幽門結(jié)扎型和應(yīng)激型胃潰瘍模型,均有顯著的抗?jié)冏饔谩?/p>

    本研究表明,抑酸止痛方對幽門結(jié)扎型大鼠胃潰瘍模型可顯著降低胃總酸度并能夠抑制胃蛋白酶活性,且無明顯的毒副作用。

    [1]王長宏,劉明暉,王 璞,等.六君子湯對胃潰瘍大鼠胃組織中EGF、TGF-α的影響[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2015,31(3):448.

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    國家中醫(yī)藥管理局全國名老中醫(yī)藥專家傳承工作室項(xiàng)目([2014]20) ;吉林大學(xué)“大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃”項(xiàng)目 (20161100548);吉林大學(xué)課題項(xiàng)目(2016YX285)

    1007-4287(2017)02-0311-02

    2016-10-10)

    *通訊作者

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