體檢人群中蛋白芯片法多腫瘤標(biāo)志物篩查的臨床意義

韓偉平，馬 榮

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 檢驗(yàn)科，遼寧 大連 116027)

論 著

體檢人群中蛋白芯片法多腫瘤標(biāo)志物篩查的臨床意義

韓偉平，馬 榮

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 檢驗(yàn)科，遼寧 大連 116027)

目的 探討體檢人群中芯片法多腫瘤標(biāo)志物篩查的臨床意義。方法 2015年3月至2015年9月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院體檢中心健康體檢者11156名。采集受檢者靜脈血清進(jìn)行蛋白芯片法多腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)，檢測(cè)項(xiàng)目為AFP，CEA，CA12-5，CA15-3，CA19-9，CA24-2，NSE，PSA，F(xiàn)ree-PSA，β-HCG，GH，F(xiàn)erritin 12項(xiàng)常見(jiàn)腫瘤標(biāo)志物。選用CobasE411電化學(xué)發(fā)光儀作為金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行單個(gè)項(xiàng)目腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)復(fù)查，比較兩種檢測(cè)方法的結(jié)果。對(duì)于陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果患者召回做病理學(xué)和影像學(xué)等進(jìn)一步檢查以明確診斷。結(jié)果 11156名體檢者中蛋白芯片法檢測(cè)出腫瘤標(biāo)志物陽(yáng)性者有246名，陽(yáng)性率為2.20%。單個(gè)腫瘤標(biāo)志物CobasE411電化學(xué)發(fā)光儀復(fù)查結(jié)果陽(yáng)性233例，真陽(yáng)性率為94.72%。其中33例經(jīng)病理學(xué)、影像學(xué)等檢查確定為早期或中期腫瘤，腫瘤總檢出率為0.29%。結(jié)論 體檢人群中蛋白芯片法多腫瘤標(biāo)志物篩查有一定的陽(yáng)性率，腫瘤標(biāo)志物陽(yáng)性的高危人群應(yīng)定期體檢監(jiān)測(cè)相關(guān)指標(biāo)并咨詢專業(yè)臨床醫(yī)師，做到早發(fā)現(xiàn)早治療。

蛋白芯片技術(shù);多腫瘤標(biāo)志物;體格檢查;腫瘤

腫瘤性疾病因其極高的死亡率成為威脅人類生命健康安全的重要原因。由于其發(fā)病的隱蔽性和癥狀的不易察覺(jué)性，腫瘤常常難于早期發(fā)現(xiàn)，而一經(jīng)發(fā)現(xiàn)已經(jīng)是晚期，往往已錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)間，因此，腫瘤的早期診斷和治療對(duì)于腫瘤的預(yù)后至關(guān)重要。腫瘤標(biāo)志物(tumor maker,TM)是由腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)或由機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫反應(yīng)而異常產(chǎn)生或升高的一類物質(zhì)。這類物質(zhì)不存在于正常成人組織(或含量很低)，而是在分化異常的腫瘤組織中的含量明顯增高，因而可以作為腫瘤早期診斷的重要參考指標(biāo)。近年來(lái)多位學(xué)者研究表明多腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)在一定程度上提高了對(duì)腫瘤早期診斷的靈敏度和特異度[1]。目前，多腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)結(jié)合具有高通量、微型化、自動(dòng)化的蛋白芯片技術(shù)被應(yīng)用于腫瘤早期診斷中，本實(shí)驗(yàn)擬針對(duì)多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)(上海數(shù)康生物科技有限公司研制)在我院健康體檢人群篩查結(jié)果進(jìn)行分析，并對(duì)陽(yáng)性個(gè)體進(jìn)行追蹤隨訪，探討健康體檢人群中蛋白芯片法多腫瘤標(biāo)志物篩查對(duì)惡性腫瘤早期診斷的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

2015年3月至2015年9月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院體檢中心健康體檢者11156名，年齡25～80歲，平均45.2歲。

1.2 試劑和儀器

上海數(shù)康生物科技有限公司研制生產(chǎn)的HD-2001A型系列生物芯片檢測(cè)儀和多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)試劑盒；瑞士羅氏公司生產(chǎn)的CobasE411電化學(xué)發(fā)光儀及其配套試劑盒。

1.3 方 法

多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片法以化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫方法為基礎(chǔ)，采集受檢者靜脈血離心后留取血清進(jìn)行蛋白芯片法多腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)，檢測(cè)項(xiàng)目為AFP,CEA,CA12-5,CA15-3，CA19-9，CA24-2，NSE, PSA,Free-PSA, β-HCG,HGH, Ferrition 12項(xiàng)常見(jiàn)腫瘤標(biāo)志物。 對(duì)于檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性者采用CobasE411電化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行單個(gè)項(xiàng)目腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)復(fù)查，并與芯片法結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析。對(duì)于高度疑似病例進(jìn)行隨訪，做病理學(xué)和影像學(xué)等進(jìn)一步檢查以明確診斷。各項(xiàng)檢測(cè)均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 結(jié)果判斷

上海數(shù)康蛋白芯片12項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物正常參考值范圍,見(jiàn)表1。研究針對(duì)Ferritin單項(xiàng)指標(biāo)升高無(wú)特殊意義不計(jì)入陽(yáng)性，其升高臨床意義需結(jié)合其他指標(biāo)做出判斷。其他腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)檢測(cè)超過(guò)正常參考值范圍即診斷為陽(yáng)性。對(duì)于經(jīng)蛋白芯片法測(cè)得陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行CobasE411電化學(xué)發(fā)光儀單個(gè)項(xiàng)目腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)復(fù)查結(jié)果超出其參考值范圍者記為真陽(yáng)性。在單個(gè)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的正常參考值范圍中，CEA、CA-125、CA19-9、CA24-2、Free-PSA、β-HCG、GH、Ferritin 8項(xiàng)正常參考值范圍與蛋白芯片法相同， AFP<9 μg/L，CA15-3<25 KU/L，PSA<4 μg/L， NSE<16.3 μg/L，為正常參考值范圍。

表1 12項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片正常參考值范圍

Tab 1 Normal reference range of the 12 tumor markers on the protein chip

腫瘤標(biāo)志物 參考臨界值 AFP(μg/L)20CEA(μg/L)5NSE(μg/L)13CA12-5(KU/L)35CA15-3(KU/L)35CA19-9(KU/L)35CA24-2(KU/L)20PSA(μg/L)5Free-PSA(μg/L)1β-HCG(IU/L)3GH(μg/L)7.5Ferritin**

**Ferritin<322 μg/L(男性)/ <219 μg/L(女性)

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。定性變量統(tǒng)計(jì)描述采用百分比和頻數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1 蛋白芯片法多腫瘤標(biāo)志物檢出陽(yáng)性結(jié)果與CobasE411電化學(xué)發(fā)光儀單個(gè)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果比較

蛋白芯片法檢測(cè)超出正常參考值范圍選用CobasE411電化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行單個(gè)項(xiàng)目腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)復(fù)查者共246例。其中蛋白芯片法與單個(gè)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果13例存在顯著差異，而兩者結(jié)果一致即真陽(yáng)性者233例(94.72%)。蛋白芯片法多腫瘤標(biāo)志物檢出陽(yáng)性結(jié)果與單個(gè)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果比較不一致的具體情況見(jiàn)表2。

2.2 確診患者蛋白芯片法多腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)結(jié)果

綜合考慮體檢者蛋白芯片法腫瘤標(biāo)志物測(cè)定結(jié)果和CobasE411電化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定結(jié)果，篩選出的233例陽(yáng)性檢出者進(jìn)行臨床隨訪，利用影像學(xué)、病理學(xué)等檢測(cè)手段對(duì)于高度疑似病例進(jìn)一步確診，其中確診為中早期腫瘤的有33例，占全部體檢人群的0.29%，其中男性18例，女性15例。

表2 13例蛋白芯片法多腫瘤標(biāo)志物檢出陽(yáng)性結(jié)果與化學(xué)發(fā)光法單個(gè)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果比較

Tab 2 Comparison of positive results of 13 tumor markers detected by protein chip method and the results of single tumor marker detected by chemiluminescence

3 討 論

隨著臨床醫(yī)學(xué)對(duì)惡性腫瘤認(rèn)識(shí)的提高以及人類生存環(huán)境的不斷惡化，臨床發(fā)生并確診的惡性腫瘤患者越來(lái)越多。惡性腫瘤的早發(fā)現(xiàn)早診斷對(duì)于腫瘤患者有著越來(lái)越重大的意義?，F(xiàn)在臨床生物醫(yī)學(xué)研究提出的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)為惡性腫瘤的早期篩查、診斷、治療及預(yù)后觀察提供了更好的方法和手段。與酶聯(lián)免疫分析、放射免疫分析等傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法相比較，由上海數(shù)康公司研發(fā)生產(chǎn)的多腫瘤標(biāo)志物(tumor maker,TM)蛋白芯片以微陣列原理為基礎(chǔ),而化學(xué)發(fā)光免疫膜技術(shù)結(jié)合計(jì)算機(jī)圖像分析方法被應(yīng)用于多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片能夠達(dá)到并行性聯(lián)合檢測(cè)和高通量綜合分析,使腫瘤診斷的敏感性和特異性顯著提高[3]。早期無(wú)癥狀腫瘤患者血清中的多腫瘤標(biāo)志物可被蛋白芯片集成在模塊上預(yù)設(shè)的12項(xiàng)TM的單克隆抗體捕獲，然后利用生物芯片技術(shù)并行檢測(cè)能力和化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行定量分析，一次檢測(cè)獲得12項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)值，從而達(dá)到在健康體檢人群中對(duì)早期腫瘤患者進(jìn)行篩查診斷的目的。該檢測(cè)系統(tǒng)將12項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)，所需的樣本量少，檢查創(chuàng)傷小，并且在一定程度上彌補(bǔ)了單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)TM存在的靈敏度低、特異性差、漏檢率高等問(wèn)題[4]，提高了輔助診斷的準(zhǔn)確率，對(duì)體檢人群中無(wú)癥狀患者的早期篩查有重要意義。

本文對(duì)大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院體檢中心11156例健康體檢者靜脈血清中腫瘤標(biāo)志物含量的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果表明，11156名體檢者中蛋白芯片法檢測(cè)出腫瘤標(biāo)志物陽(yáng)性者有246名，陽(yáng)性率為2.20%。對(duì)于蛋白芯片法檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性者246例選用CobasE411電化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行單個(gè)項(xiàng)目腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)復(fù)查。其中蛋白芯片法檢測(cè)結(jié)果與單個(gè)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果僅13例存在顯著差異，而兩者結(jié)果一致即真陽(yáng)性的有233例，真陽(yáng)性在全部陽(yáng)性結(jié)果中所占比例為94.72%。蛋白芯片法腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果有很高的真陽(yáng)性率即有較高的臨床參考價(jià)值。但是由于蛋白芯片法主要針對(duì)的是健康體檢人群，因此部分腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)濃度范圍相對(duì)于單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)低，因此，對(duì)于蛋白芯片法測(cè)得的某種腫瘤標(biāo)志物高出參考范圍較多者，若想獲得其較準(zhǔn)確的檢測(cè)值需進(jìn)一步做單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)。而蛋白芯片法也由于這一原因，不宜用于已確診的腫瘤患者腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)。綜合考慮體檢者蛋白芯片法腫瘤標(biāo)志物測(cè)定結(jié)果和CobasE411電化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定結(jié)果，篩選出的233例以上真陽(yáng)性檢出者進(jìn)行臨床隨訪，利用影像學(xué)、病理學(xué)等檢測(cè)手段對(duì)于高度疑似病例進(jìn)一步確診，其中確診為中早期腫瘤的有33例，占全部體檢人群的0.29%，其中男性18例，女性15例。每一例腫瘤患者其異常腫瘤標(biāo)志物均為多種，因而，多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于健康體檢人群惡性腫瘤篩查相對(duì)單項(xiàng)更有意義[5-6]。

本研究對(duì)蛋白芯片法測(cè)多腫瘤標(biāo)志物在體檢人群中的陽(yáng)性檢出率做了較為全面的研究，并且根據(jù)其結(jié)果和單個(gè)項(xiàng)目腫瘤標(biāo)志物的復(fù)查結(jié)果對(duì)高危人群進(jìn)行追蹤、隨訪、確診。結(jié)果表明，蛋白芯片法更適合多腫瘤標(biāo)志物在體檢人群中進(jìn)行普查，對(duì)于早期無(wú)癥狀腫瘤患者有較好的篩查作用，一次可獲取12項(xiàng)指標(biāo)，實(shí)現(xiàn)同時(shí)對(duì)多種腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，且具有創(chuàng)傷小、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠等優(yōu)點(diǎn)。對(duì)于無(wú)癥狀早期癌癥患者有十分高的早期診斷價(jià)值。對(duì)于體檢人群中蛋白芯片法多腫瘤標(biāo)志物篩查出的高危人群配合CT、B超、病理檢查等進(jìn)一步檢測(cè)以確診，同時(shí)配合專業(yè)醫(yī)生為陽(yáng)性檢出者提供咨詢、隨訪等幫助，從而更好的達(dá)到早期發(fā)現(xiàn)、早期治療的目的。

[1] 陳紅波. 腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)在臨床上的應(yīng)用價(jià)值[J]. 中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥, 2009, 4(18):128-129.

[2] Lund H, Snilsberg A H, Paus E, et al. Sports drug testing using immuno-MS: clinical study comprising administration of human chorionic gonadotropin to males[J]. Anal Bioanal Chem, 2013, 405(5):1569-1576.

[3] 張湘瑜, 王艷姣. C-12多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片對(duì)老年肺癌的診斷價(jià)值[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志, 2009, 29(9):1108-1110.

[4] 梁茱, 王海楓, 吳愛(ài)祝,等. 多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在肺癌診斷中的臨床意義[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 30(11):2516-2518.

[5] Lu W, Yuan H. Investigating waste reduction potential in the upstream processes of offshore prefabrication construction[J]. Cancer Res, 2005, 65(22):10613-10622.

[6] 齊軍. 蛋白芯片技術(shù)及在腫瘤實(shí)驗(yàn)室診斷中的應(yīng)用現(xiàn)狀[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2003, 26(10):639-640.

Clinical significance of multi-tumor marker protein chip screening in healthy population

HAN Weiping, MA Rong

(DepartmentofClinicalLaboratory,theSecondAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116027,China)

Objective To discuss the clinical significance of multi-tumor markers protein chip screening during regular check-up in healthy population . Methods Totally, 11156 healthy volunteers were selected in the Medical center of Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University from March,2015 to September 2015, including 5649 men and 5507 women. Venous serum samples of the volunteers were collected and centrifuged for multi-tumor markers Protein chip examination (including AFP, CEA, CA12-5, CA15-3, CA19-9, CA24-2, NSE, PSA, Free-PSA, β-HCG, GH, Ferritin). Positive results of protein chip would be rechecked by single tumor marker technology, which was used as the golden standard. The highly suspected cases were recalled for further pathological examination and imaging studies to confirm the diagnosis. Results Among 11156 blood samples, 246 cases were positive for tumor marker according to protein chip technology with a positive rate of 2.20%. Among the 246 positive cases, 233 cases were positive after single standard technology with a true positive rate of 94.72%. Among them, 33 cases were diagnosed with early cancer by further examination of pathology and imaging studies. Conclusion Multi-tumor markers protein chip screening in healthy population dose have certain positive rate. The tumor markers positive high-risk groups should receive regular medical monitoring for relevant indicators and consult a professional clinician to get early detection and early treatment.

protein chip technology; multi-tumor markers; health examination; tumor

韓偉平(1982-)，女，主管技師。E-mail:hanweiping2000@163.com

馬 榮，主任技師。E-mail:772850415@qq.com

10.11724/jdmu.2017.01.17

R737.31

A

1671-7295(2017)01-0074-04

韓偉平，馬榮.體檢人群中蛋白芯片法多腫瘤標(biāo)志物篩查的臨床意義[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2017,39(1)：74-77.

2016-10-12；

2016-12-30)