新生兒ABO血型鑒定方法的研究進展

覃日吉，韋海春

(1.柳州市柳江區(qū)婦幼保健院檢驗科，廣西柳州545100；2.柳州市婦幼保健院檢驗科，廣西柳州545001)

新生兒ABO血型鑒定方法的研究進展

覃日吉1，韋海春2

(1.柳州市柳江區(qū)婦幼保健院檢驗科，廣西柳州545100；2.柳州市婦幼保健院檢驗科，廣西柳州545001)

新生兒ABO血型鑒定常因抗體效價低或紅細胞表面抗原形成不足而出現(xiàn)正、反定型不符，給血型鑒定帶來了困難，嚴重影響新生兒的輸血安全。因此，重視對新生兒ABO血型鑒定方法的研究，選取最佳的鑒定方法，以確保新生兒輸血的安全性和有效性顯得十分重要。本文對近年新生兒ABO血型鑒定方法的研究進展作一綜述。

新生兒；血型鑒定；玻片法；試管法；微量板法；微柱凝膠法

ABO血型是唯一一個抗原抗體正反規(guī)律的血型，也是臨床輸血最重要的血型。ABO血型不合的輸血可導致致命的急性血管內溶血反應和母子ABO系統(tǒng)血型不合造成的ABO系統(tǒng)新生兒溶血病[1]。由于新生兒紅細胞血型抗原形成不足或抗體效價低，以及母體抗體包被抗原等而出現(xiàn)血型鑒定方法凝集很弱或不凝集現(xiàn)象，出現(xiàn)正、反定型不符結果，給血型鑒定帶來一定的困難[2]，嚴重影響新生兒的輸血安全。本文對新生兒ABO血型鑒定方法的研究進展綜述如下：

1 玻片法

玻片法是利用血凝反應原理，IgM型抗-A和抗B抗體及有A/B抗原的紅細胞在液體介質中直接反應，通過抗體的力量凝紅細胞而無離心力加速反應，出現(xiàn)肉眼可見的凝集[1]。操作方法：(1)正定型：在清潔的玻片上，用蠟筆劃成3個圓圈，在其中滴加受檢者紅細胞懸液各1滴，再分別加1滴抗-A、抗-B和抗-A、B標準血清，混勻；(2)反定型：另取潔凈玻片1張，同樣用蠟筆劃成3個圓圈，分別滴加受檢者血清各1滴，再用滴管加A、B和O型試劑紅細胞懸液1滴，混勻。2 m in末觀察結果，凝集(或溶血)為陽性反應，均勻細胞懸液為陰性結果。玻片法操作簡單、方便快捷被廣泛應用于臨床，但受環(huán)境和經(jīng)驗因素影響較大，準確性較低，適宜作為初篩方法。

王然婷[3]將154例受檢者分別采用玻片法及試管法進行血型鑒定，結果顯示兩種方法鑒定結果基本一致，其中AB型兩種方法鑒定結果相同，A型、B型及O型以試管法的鑒定準確率高于玻片法，但兩種方法鑒定結果比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；她認為采用玻片法和試管法進行血型鑒定，應做好一人一玻片，以避免檢驗結果錯誤；在采集標本時應嚴格按照相關技術標準規(guī)范操作，避免標本采集錯誤；填寫報告單、輸血單時要嚴謹仔細，認真核對嚴防血型填寫錯誤[3]。劉凱等[4]為了觀察玻片法和微柱凝膠法鑒定ABO血型正確性的差異，對224例患者采用EDTA-K2抗凝劑抗凝的血型鑒定標本，同時采用玻片法和手工微柱凝膠法進行鑒定。結果玻片法一次性判讀正確率正定型為98.6%、反定型為97.5%；手工微柱凝膠法一次性判讀正確率正定型為100%、反定型為99.9%，兩種方法檢測結果比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。表明在一次性判讀正確率方面，手工微柱凝膠法優(yōu)于玻片法，可以有效減少或杜絕血型鑒定的錯誤。

2 試管法

試管法是利用血凝反應原理，將IgM抗-A和抗B抗體及有A/B抗原的紅細胞在液體介質中直接反應，并通過離心力加速反應，出現(xiàn)肉眼可見的凝集[1]。操作方法：(1)正定型：分別滴加抗-A、抗-B和抗-A、B標準血清各1滴于標記的試管，再用滴管分別加入受檢者5%紅細胞鹽水懸液各1滴，混勻；(2)反定型：另取試管3支，分別標明A紅細胞、B紅細胞和O紅細胞，用滴管分別在試管中滴加受檢者血清各2滴，再分別加入A、B和O型標準紅細胞懸液各1滴，混勻；(3)室溫反應平衡后，以900～1000 g，離心15～30 s。輕輕搖動試管，用液體沖刷紅細胞扣，肉眼觀察細胞扣劃落情況，判斷有無凝集或溶血現(xiàn)象。試管法是傳統(tǒng)經(jīng)典的ABO定型方法，也是基層醫(yī)院常規(guī)采用的血型鑒定方法，配合正反定型，確定ABO血型的準確性高。但與微柱凝膠法相比，其操作難以規(guī)范化、自動化，鑒定敏感性較差，且檢測結果不易保存。

張敏等[5]采用試管法、微柱凝膠血型卡和抗人球蛋白卡對60名嬰兒全血標本進行ABO血型鑒定，同時比較60名標本抗體檢出率在血型和年齡分布中的差異。結果顯示：試管法、微柱凝膠血型卡和抗人球蛋白卡鑒定時，正定型結果一致；反定型時，其抗體檢出率分別為81.7%、70.0%、91.7%，三種方法抗體檢出率比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；在≥4個月嬰兒A型抗體檢出率分別為100%、75%、93.8%，試管法和微柱凝膠血型卡A型抗體檢出率比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。指出采用試管法檢測時，控制好離心力和振蕩試管力度，反而能觀察到較弱的凝集，在微柱凝膠血型卡未能檢出的抗體反而試管法可以檢測出。申衛(wèi)和[6]對1 193例門診新生兒患者分別采用玻片法、試管法和手工微柱凝膠法進行ABO、RhD血型正反對比鑒定，結果顯示：一次性正確率，玻片法正定型為98.91%，試管法正定型為99.92%、反定型為99.83%，手工微柱凝膠法分別為100%、99.97%，提示在ABO血型鑒定中，手工微柱凝膠法的靈敏度和準確性優(yōu)于試管法，試管法優(yōu)于玻片法。李萌等[7]對408例嬰幼兒(其中0～6個月115例，6個月～1歲124例，＞1歲169例)血型采用微柱凝膠法結合鹽水試管法進行血型反定型。結果：正反定型不一致的比例分別為0～6個月為73%(84/115)，6個月～1歲為14.5%(18/124)，1歲以上為3.0%(5/169)；正反定型不一致者血型構成比分別為A型占41.1%(44/107)，B型占19.6%(21/107)，O型占39.3%(42/107)；23例正反定型不一致者經(jīng)鹽水試管法離心3次后，其反定型結果與正定型相符。認為抗原較弱血型鑒定時，微柱凝膠法均能清晰反應，結果直觀可靠。但在檢測弱抗體時，若采用傳統(tǒng)鹽水試管法進行鑒定，則可以有效檢出弱抗體。所以在嬰幼兒ABO血型鑒定時，采用微柱凝膠法結合鹽水試管法，更能準確反映血型結果。鄺苑麗等[8]分析了某醫(yī)院2003年8月至2013年8月試管法血型鑒定錯誤有11例、住院患者輸血不符有3例的主要原因，其中43%(6/14)是檢驗人員粗心大意或操作不當所造成；29%(4/14)是臨床醫(yī)生或護士粗心大意或不嚴格執(zhí)行查對制度所致；21% (3/14)是由于受檢者血液含有較多的自身冷凝素造成的假陽性。因此，在ABO血型鑒定過程中必須嚴格按標準操作規(guī)程完成，以獲得準確的血型，確保安全輸血。

3 微量板法

微量板法主要包括梯形微板法和U型微板法。梯形微板法：是用全自動加樣系統(tǒng)將標準紅細胞和待檢血漿分別加入梯形微板中，振蕩混勻，靜置反應后，用數(shù)字血型分析儀進行讀板。該方法是將每個微孔分解為6 300點，劃分為3個不同的區(qū)域進行掃描，并將實驗結果采用CCD系統(tǒng)圖像數(shù)字化處理，運用模糊數(shù)學的方法進行分析判斷，得出血型鑒定結果。U型微板法：也是用全自動加樣系統(tǒng)將標準紅細胞和待檢血漿加入U型微板中，振蕩混勻、離心、懸浮、靜置稍許。用酶標儀掃描。獲取每孔的相對透光率Tc。根據(jù)ABO血型定型原則確定反定型結果[9]。韓璐等[9]采用梯形微板法和U型微板法進行血型反定型檢測的比較研究，結果顯示：(1)1次判斷正確率梯形微板法為100%(1 003/1 003)，U型微板法為98.5%(988/1 003)，兩種方法比較差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。(2)靈敏度：分別取A型、B型血漿各30份混合配成AB型血漿，倍比稀釋后用梯形微板法和U型微板法檢測。結果：梯型微板法A、B細胞側可檢出的稀釋倍數(shù)均為6.25%(1/16)；U型微板法A細胞側可檢出的稀釋倍數(shù)為25%(1/4)，B細胞側可檢出的稀釋倍數(shù)為12.5%(1/8)。(3)亞型和不規(guī)則抗體檢查率：兩種方法對ABO亞型的檢出率均為0.013%(P＞0.05)，不規(guī)則抗體檢出率梯形微板法為0.03%(36/120 469)，明顯高于U型微板法的0.008%(9/115 278)，兩種方法比較差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，說明梯型微板法的準確性、靈敏度、不規(guī)則抗體的檢出率都優(yōu)于U型微板法。萬德學等[10]、鄔麗芳等[11]研究認為微量板法把血型儀、全自動加樣儀、酶標儀有機結合，改變了傳統(tǒng)的手工操作，減少了人工誤差，實現(xiàn)了ABO血型鑒定自動化，是一種既省時又省力的ABO血型鑒定方法。

4 微柱凝膠法

微柱凝膠法是新興的血型血清學檢測技術，在微柱凝膠介質中，紅細胞A、B抗原與相應抗-A、抗-B抗體結合，利用凝膠的空間位阻，經(jīng)低速離心，凝集的紅細胞懸液在凝膠上層，未和抗體結合的紅細胞則沉于凝膠底部[1]。操作方法：①按標準操作規(guī)程配制好檢測樣本的紅細胞懸液和試劑紅細胞懸液。②在反定型的微柱凝膠檢測管中先加入檢測樣本的血清或血漿，再加入試劑紅細胞懸液；在正定型的微柱凝膠檢測管中加入樣本的紅細胞懸液。③按實驗操作流程在專用微柱凝膠離心機中低速離心。出現(xiàn)凝集和(或)溶血結果為陽性，不凝集為陰性。該方法具有易于操作標準化、自動化、判讀客觀和可靠、鑒定準確性較高、結果可長期保存、有利于大量樣本操作等優(yōu)點[1]。尤其在引入全自動加樣、離心判讀結果后，實現(xiàn)了血型鑒定的自動化、標準化、信息化[12]，消除了人為因素對檢測結果的影響[13]，已有取代試管法的趨勢，是西方國家常規(guī)采用ABO血型的鑒定方法[14-15]。但在實驗過程中，如果被檢血清、血漿中存在高效價冷凝集抗體或蛋白異常，可能出現(xiàn)檢測結果的假陽性，同時微柱凝膠法檢測成本較高。

范小春[16]將257例住院的1d～6個月嬰幼兒根據(jù)年齡分為四組，1～10 d為Ⅰ組，共69例；10 d～1個月為Ⅱ組，共71例；1～3個月為Ⅲ組，共60例；3～6個月為Ⅳ組，共57例。分別采用試管法和微柱凝膠法進行ABO血型正反定型鑒定，結果：試管法Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組正反定型符合率分別為52.17%、53.52%、66.67%、73.68%，微柱凝膠法則分別為65.22%、67.61%、83.33%、87.72%，兩種方法比較差異有統(tǒng)計學意義(均P＜0.05)，提示微柱凝膠法檢測正反定型符合率明顯高于試管法，表明隨著嬰幼兒年齡的增長，其正反定型符合率也隨之增加。常靜秋[17]分別采用國產(chǎn)、進口微柱凝膠卡，試管法對500份新生兒血液標本進行ABO血型鑒定，結果顯示微柱凝膠法比試管法的操作更加標準化，靈敏度、特異性、客觀性等方面均優(yōu)于試管法(均P＜0.05)，國產(chǎn)和進口微柱凝膠卡的血型鑒定結果差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但國產(chǎn)微柱凝膠卡費用相對較低，可廣泛應用于臨床。馬曙軒等[18]觀察了國產(chǎn)微柱凝膠卡(甲卡)與進口微柱凝膠卡(乙卡)鑒定3歲以下嬰幼兒ABO及RhD血型的效果，共檢測6個月齡以下患兒3 938例，其中早產(chǎn)兒96例，足月新生兒355例，血液病患兒570例，其他疾病患兒2 917例。A抗原、B抗原、D抗原初檢及復檢兩種卡符合率為100%；早產(chǎn)兒A、B抗原凝集強度3+以上者兩種卡均達83%左右，兩者比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。檢測7個月齡～3歲患兒12 500例，A抗原、B抗原、D抗原初檢及復檢符合率為100%。表明甲卡和乙卡在鑒定3歲以下嬰幼兒A抗原、B抗原、D抗原的能力方面差異無統(tǒng)計學意義，兩者均能夠保證患兒血型鑒定及安全輸血的需求。王嬌華等[19]采用微柱凝膠法檢測6 560血型標本，結果顯示正反定型不符37例。分析其原因，分別是疾病因素影響26例(70.3%)，臨床治療影響7例(18.9%)，生理因素影響4例(10.8%)。徐星洋等[20]采用Autovue Innova血型儀全自動法與鹽水手工法對5 302例血型標本進行ABO血型及Rh(D)血型鑒定，結果合格率分別為99.7%和99.6%，兩種方法比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。但Autovue Innova全自動法比手工鹽水法速度快、效率高、結果準確，更適用于大批量血型標本檢測。吳穗等[12]分別采用美國強生Ortho Autouve Innova全自動血型及配血分析系統(tǒng)(儀器法)和傳統(tǒng)試管法對9 350份EDTA-K2抗凝血樣本進行ABO血型和RhD血型檢測。結果：儀器法與試管法共檢出A型2 982例、B型2 545例、O型2 823例、AB型1 000例，一次性判斷準確率分別為99.71%、100.00%；共檢出Rh陰性48例，陰性率占0.51%，一次性判斷準確率分別為99.74%、100.00%。兩種方法檢測準確率比較差異無統(tǒng)計學意義(P均＞0.05)。其中儀器法檢出正反定型不一致者37例，包括新生兒18例，抗原減弱、抗體效價減低6例等。表明全自動血型及配血分析系統(tǒng)用于ABO血型和RhD血型檢測安全可靠，靈敏度高，易于檢出弱抗原、弱抗體及發(fā)現(xiàn)ABO亞型。由于強生Antove系統(tǒng)能將所有樣本、各種檢測試劑用條碼識別進入主數(shù)據(jù)庫，實現(xiàn)了血型鑒定過程中加樣、離心、結果判讀的自動化、標準化[20-24]。對提高ABO血型鑒定檢驗質量發(fā)揮了很大的促進作用。

5 結語

上述4種鑒定方法各有優(yōu)缺點，玻片法簡單易行，但易受環(huán)境和經(jīng)驗因素的影響，準確性相對較低，適合作為初篩方法。試管法是經(jīng)典的ABO定型方法，操作簡單、快捷，確定ABO血型的準確性高，但操作難以規(guī)范化、自動化，且檢測結果不易保存。微量板法和微柱凝膠法改變了傳統(tǒng)的手工操作，減少了人工誤差，實現(xiàn)了操作自動化，其鑒定準確率高，且檢測數(shù)據(jù)可以保存和網(wǎng)絡傳送，但檢測費用相對較高。美國強生Ortho Autouve Innova全自動血型及配血分析系統(tǒng)實現(xiàn)了血型鑒定過程中加樣、離心、結果判讀、保存及查詢全過程的自動化、標準化，提高了ABO血型鑒定檢驗質量?？傊律鷥篈BO血型鑒定方法取得了許多理想的研究成果，對于提高血型鑒定質量，確保新生兒輸血的安全性和有效性都具有重要的臨床意義。至于制定適合嬰幼兒個體化血型鑒定作業(yè)程序，標本采集和處理的標準化要求，應用多少濃度紅細胞懸液才能準確鑒定血型，多少溫度和濕度才能確?？乖罴逊磻?，怎樣的抗原抗體比例才能完全表達紅細胞表型，如何解決ABO以外抗體對血型鑒定的干擾，諸如此類問題仍有待今后的進一步研究[25]。

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R457.1+1

A

1003—6350（2017）13—2164—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.13.031

2016-11-17)

廣西衛(wèi)生和計劃生育委員會自籌資金課題(編號：2016694)

覃日吉。E-mail：ganhongyu1111@163.com