白介素-1受體相關激酶-M在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者單核細胞中的表達及與臨床的相關性①

胡同平 白 力 張文蘭

(包頭醫(yī)學院風濕免疫研究所，包頭醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古自治區(qū)自體免疫學重點實驗室，包頭014010)

白介素-1受體相關激酶-M在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者單核細胞中的表達及與臨床的相關性①

胡同平 白 力 張文蘭②

(包頭醫(yī)學院風濕免疫研究所，包頭醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古自治區(qū)自體免疫學重點實驗室，包頭014010)

目的：研究白介素-1受體相關激酶-M(Interleukin-1 receptor associated kinases M，IRAK-M)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者單核細胞中的表達情況及與臨床的相關性。方法：采用實時熒光定量PCR技術，檢測SLE組和健康對照組單核細胞中IRAK-M的mRNA表達量；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)和抗單鏈DNA抗體(ssDNA)；采用動態(tài)免疫散射比濁法測定補體3(C3)、補體4(C4)和C-反應蛋白(CRP)；采用魏氏法測定紅細胞沉降率(ESR)。同時，使用Pearson或Spearman分析IRAK-M與SLEDAI評分、dsDNA、ssDNA、C3、C4、CRP和ESR的相關性。結果：①SLE組IRAK-M的mRNA表達量明顯低于健康對照組(P<0.05)，活動期SLE組IRAK-M的mRNA表達量明顯低于穩(wěn)定期SLE組(P<0.05)。 ②SLE組dsDNA、ssDNA、CRP和ESR水平明顯高于健康對照組(P<0.05)，C3和C4水平明顯低于健康對照組(P<0.05)；而且，活動期SLE組dsDNA、ssDNA、CRP和ESR水平明顯高于穩(wěn)定期SLE組(P<0.05)，C3和C4水平明顯低于穩(wěn)定期SLE組(P<0.05)。③相關分析顯示：IRAK-M的mRNA表達量與C3成正相關(P<0.05)，與SLEDAI評分、dsDNA、CRP、ESR呈負相關(P<0.05)，與ssDNA和C4無相關性(P>0.05)。結論：IRAK-M在SLE發(fā)病機制中起著重要的作用；定量檢測IRAK-M的mRNA表達量可監(jiān)測SLE疾病活動度和判斷預后。同時，對SLE患者dsDNA、ssDNA、CRP、C3、C4和ESR水平的常規(guī)檢測和定期監(jiān)測是非常必要的。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡；白細胞介素-1受體相關激酶-M；SLEDAI評分

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)是一種可累及多系統(tǒng)、多器官的自身免疫性疾病[1]。迄今為止，其確切的發(fā)病機制尚不清楚，與遺傳、環(huán)境、雌激素、免疫紊亂等多種因素有關，引起B(yǎng)細胞功能的亢進，自身抗體的生成，免疫復合物的沉積，T細胞及NK細胞功能的失調(diào)，最終導致SLE的發(fā)生[2]。白介素-1受體相關激酶-M(Interleukin-1 receptor associated kinases M，IRAK-M)是Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)信號途徑中的負性調(diào)節(jié)因子，在多種感染性及非感染性疾病中，可通過抑制前炎癥因子的產(chǎn)生而調(diào)節(jié)免疫自穩(wěn)和免疫耐受[3]。本研究采用實時熒光定量PCR技術，檢測SLE組和健康對照組單核細胞中IRAK-M的mRNA表達量，同時采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)和抗單鏈DNA抗體(ssDNA)，動態(tài)免疫散射比濁法測定補體3(C3)、補體4(C4)和C-反應蛋白(CRP)，魏氏法測定紅細胞沉降率(ESR)，使用Pearson或Spearman分析IRAK-M與SLEDAI評分、dsDNA、ssDNA、C3、C4、CRP和ESR的相關性，探討其在SLE發(fā)病機制中的作用。

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集2015年1月～2016年4月我院風濕免疫科門診和住院患者及門診健康體檢者。(1)SLE組包括128例SLE患者，均為初次發(fā)病患者，未經(jīng)過糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑治療。其中男性18例，女性110例，年齡17～71歲，平均年齡(41.38±11.17)歲。皆按美國風濕病協(xié)會1982年診斷標準及1997年修訂診斷標準確診。并按SLEDAI評分(≥10分為活動期，<10分為穩(wěn)定期)，將SLE患者進一步分為疾病活動組(68例)和疾病穩(wěn)定組(60例)。(2) 健康對照組50例，男性8例，女性42例，年齡18～69歲，平均年齡(42.51±10.26)歲。

1.2 研究方法 SLE組和健康對照組均于清晨空腹抽取靜脈血，分別注入3個管，一管為EDTA抗凝管2 ml，一管為普通干燥管4 ml，一管為枸櫞酸鈉抗凝管2 ml。EDTA抗凝管采用Ficoll梯度密度離心法分離提取單核細胞，保存于-70℃冰箱內(nèi)。應用人基因RNA提取試劑盒按照說明書進行單核細胞RNA提取，-20℃冰箱保存。實時熒光定量PCR儀分別檢測SLE組和健康對照組單核細胞中IRAK-M的mRNA表達量。普通干燥管分離的血清采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測dsDNA和抗ssDNA，動態(tài)免疫散射比濁法測定C3、C4和CRP。枸櫞酸鈉抗凝管采用魏氏法測定ESR。

2 結果

2.1 SLE組和健康對照組IRAK-M的mRNA表達量 從表1可以看出，SLE組IRAK-M的mRNA表達量明顯低于健康對照組(P<0.05)，活動期SLE組IRAK-M的mRNA表達量明顯低于穩(wěn)定期SLE組(P<0.05)。

2.2 dsDNA和ssDNA的結果 從表2可以看出，SLE組dsDNA和ssDNA水平均高于健康對照組(P<0.05)；活動期SLE組dsDNA和ssDNA水平均高于穩(wěn)定期SLE組(P<0.05)。

2.3 C3和C4的結果 從表3可以看出，SLE組C3和C4水平均低于健康對照組(P<0.05)；活動期SLE組C3和C4水平均低于穩(wěn)定期SLE組(P<0.05)。

2.4 CRP的結果 從表4可以看出，SLE組CRP水平高于健康對照組(P<0.05)；活動期SLE組CRP水平高于穩(wěn)定期SLE組(P<0.05)。

2.5 ESR的結果 從表5可以看出，SLE組ESR水平高于健康對照組(P<0.05)；活動期SLE組ESR水平高于穩(wěn)定期SLE組(P<0.05)。

GroupsnIRAK?MSLEpatients128369±0821)Activeperiod68252±0572)Stableperiod60458±071Healthycontrols50573±062

Note：Compared with healthy controls，1)P<0.05;compared with stable period，2)P<0.05.

GroupsndsDNAssDNASLEpatients12839328±247641)12172±82851)Activeperiod6852141±212552)17125±63042)Stableperiod6021143±106774393±1849Healthycontrols501495±743448±222

Note：Compared with healthy controls，1)P<0.05;compared with stable period，2)P<0.05.

GroupsnC3C4SLEpatients128063±0551)011±0091)Activeperiod68041±0232)008±0062)Stableperiod60103±037018±009Healthycontrols50135±063028±012

Note：Compared with healthy controls，1)P<0.05;compared with stable period，2)P<0.05.

GroupsnCRPSLEpatients1283165±19621)Activeperiod685192±32552)Stableperiod601043±677Healthycontrols50315±222

Note：Compared with healthy controls，1)P<0.05;compared with stable period，2)P<0.05.

GroupsnESRSLEpatients1284112±29581)Activeperiod686512±44362)Stableperiod602657±1653Healthycontrols50218±127

Note：Compared with healthy controls，1)P<0.05;compared with stable period，2)P<0.05.

2.6 IRAK-M的mRNA表達量與SLEDAI評分、dsDNA、ssDNA、C3、C4、CRP和ESR的相關性分析 從表6中數(shù)據(jù)可以看出，IRAK-M的mRNA表達量與C3成正相關(P<0.05)，與SLEDAI評分、dsDNA、CRP、ESR呈負相關(P<0.05)，與ssDNA和C4無相關性(P>0.05)。

表6 SLE患者IRAK-M與SLEDAI、dsDNA、ssDNA、C3、C4、CRP和ESR的相關性

Tab.6 Correlation of SLEDAI,dsDNA,ssDNA,C3,C4,CRP and ESR with IRAK-M

IndexrvaluePvalueSLEDAI-0227<005dsDNA-0392<005ssDNA-0808>005C30132<005C40534>005CRP-024<005ESR-016<005

3 討論

SLE是一種免疫相關疾病，細胞免疫、體液免疫紊亂及自身抗體的產(chǎn)生是重要的致病因素。其臨床表現(xiàn)差異很大，多種器官臟器均可受累，一旦病情發(fā)展惡化，最終可出現(xiàn)多器官衰竭而死亡，因此對SLE發(fā)病機制及診斷的研究顯得十分重要。

TLRs是哺乳動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一類與果蠅Toll蛋白具有同源性的受體家族，是固有免疫反應的模式識別受體，參與識別病原體、介導前炎癥細胞因子的產(chǎn)生、啟動免疫應答，為機體天然免疫的第一道防線。目前為止，已發(fā)現(xiàn)多種TLR信號通路的負向調(diào)控分子，包括 IRAK-M、SOCS-1、A20、Tank、SIGIRR及ST2等。IRAK-M對TLRs信號轉導負性調(diào)控的機制，目前還不十分清楚。IRAK-M可能通過抑制IRAK-1的磷酸化，防止其與受體復合物分離，并促進IRAK-1、IRAK-4和MyD88之間的結合，進而對TLRs介導的信號通路起負性調(diào)控作用[4-6]。本研究顯示，SLE患者組IRAK-M的mRNA表達量明顯低于健康對照組(P<0.05)，而活動期SLE組IRAK-M的mRNA表達量明顯低于穩(wěn)定期SLE組(P<0.05)，這表明，IRAK-M的mRNA表達量降低是SLE免疫紊亂的炎癥狀態(tài)下機體的反應，是SLE的結果，暗示著IRAK-M的缺乏與炎癥反應增強和TLR信號通路激活有關，這也證明了IRAK-M的負性調(diào)節(jié)作用。

本文結果還顯示，SLE患者和健康對照組相比較，無論是dsDNA、ssDNA，還是C3、C4，以及CRP和ESR水平，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而且，SLE活動期和穩(wěn)定期的比較，也是差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，因此，對患者進行這些指標的常規(guī)檢測和對SLE患者定期進行這些指標的監(jiān)測，是非常必要的。

IRAK-M的mRNA表達量與SLEDAI評分、dsDNA、ssDNA、C3、C4、CRP和ESR的相關性分析結果顯示，IRAK-M的mRNA表達量與C3成正相關(P<0.05)，與SLEDAI評分、dsDNA、CRP、ESR呈負相關(P<0.05)，與C4、ssDNA無相關性(P>0.05)。這些結果顯示，嚴密監(jiān)測SLE患者單核細胞中IRAK-M的mRNA表達量對患者的臨床診療有重要價值。

[1] 龐春艷,呂鳳鳳,尹芳蕊,等.CD40 siRNA對MRL/Lpr小鼠狼瘡腎炎的治療作用[J].中國免疫學雜志,2015,31(8):1089-1093.

[2] 陳海蓮,楊曉娥.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個核細胞Toll樣受體9和核因子-κB水平的測定及其臨床意義[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志,2016,26(11):63-67.

[3] Flavell R,Christman JW,Standiford TJ,etal.Glucocorticoids suppess inflammation via the upregulation of negative regulator IRAK-M[J].J Immunol,2015,6(5):6062-6065.

[4] 李君莉,張 權,程明亮.苗藥防感香囊對小鼠肺組織IRAK-M、SOCS1基因和蛋白表達的影響[J].貴陽醫(yī)學院學報,2014,39(5):706-708.

[5] Ballinger MN,Newstead MW,Zeng X,etal.IRAK-M promotes alternative macrophage activation and fibroproliferation in bleomycin-induced lung injury[J].J Immunol,2015,194 (4):1894-1904.

[6] Kobayashi K,Hemandez LD,Galhn JE,etal.IRAK-M is a negative regulator of Toll-like receptor signaling[J].Cell,2013,7(2):191-202.

[收稿2016-08-12]

(編輯 張曉舟)

Expression and clinical relevance of IRAK-M in monocytes in patients with systemic lupus erythematosus

HUTong-Ping，BaiLi,ZHANGWen-Lan.

InstituteofRheumatologyofBaotouMedicalCollege,theFirstAffiliatedHospitalofBaotouMedicalCollege,KeyAutoimmunityLabofInnerMongolia,Baotou014010,China

Objective:To study the expression and clinical relevance of IRAK-M in monocytes in patients with systemic lupus erythematosus.Methods: Real-time quantitative PCR was performed for IRAK-M mRNA measurement and enzyme-linked immunosorbent assay was used for anti-double-stranded DNA antibody(dsDNA) and anti-single-stranded DNA antibody (ssDNA).Dynamic scattering turbidimetric immunoassay was applied for complement 3(C3),complement 4(C4) and C-reactive protein(CRP),while Westergren method for erythrocyte sedimentation rate (ESR).Correlation analysis of IRAK-M with SLEDAI,dsDNA,ssDNA,C3,C4,CRP and ESR was computed by Pearson or Spearman.Results: ①The result showed that the mRNA expression of IRAK-M in SLE patients was significantly lower than healthy controls (P<0.05);and the mRNA expression of IRAK-M in active group was significantly lower than stable group (P<0.05).②The levels of dsDNA,ssDNA,CRP and ESR in SLE patients were significantly higher than healthy controls(P<0.05);and the levels of C3 and C4 in SLE patients were significantly lower than healthy controls(P<0.05).Meanwhile,the levels of dsDNA,ssDNA,CRP and ESR in active group were significantly higher than stable group (P<0.05),and the levels of C3 and C4 in active group were significantly lower than stable group (P<0.05).③Correlation analysis showed that the mRNA expression of IRAK-M had a positive correlation with C3 (P<0.05),and had a negative correlation with SLEDAI,dsDNA,CRP and ESR (P<0.05)，but had no correlation with ssDNA and C4(P>0.05).Conclusion: This study indicated that IRAK-M play certain significant roles in the pathogenesis of SLE.We can monitor SLE disease activity and prognosis by quantitative detection of mRNA expression of IRAK-M.Meanwhile,it is very necessary to routinely test and regularly monitor the levels of dsDNA,ssDNA,C3,C4,CRP and ESR in SLE.

SLE;IRAK-M;SLEDAI

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.02.019

①本文為國家自然科學基金(No.81360464)和內(nèi)蒙古自治區(qū)高等學?？茖W研究項目(No.NJZY12219)。

胡同平(1976年-)，男，碩士，副主任檢驗師，主要從事自身抗體的實驗室檢測研究，E-mail：hutongping1976@126.com。

R446.62

A

1000-484X(2017)02-0256-04

②通訊作者，E-mail：zwl20051001@126.com。