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    黃芩素和U0126體外抗人乳腺癌的作用及機(jī)制研究①

    2017-02-27 05:56:28安宏元向川南喻小蘭唐小平張宇驕夏紀(jì)毅
    中國(guó)免疫學(xué)雜志 2017年2期
    關(guān)鍵詞:乳腺癌檢測(cè)

    安宏元 向川南 喻小蘭 唐小平 張宇驕 夏紀(jì)毅⑤

    (四川省瀘州市人民醫(yī)院乳腺外科,瀘州646000)

    ·中醫(yī)中藥與免疫·

    黃芩素和U0126體外抗人乳腺癌的作用及機(jī)制研究①

    安宏元 向川南 喻小蘭②唐小平③張宇驕④夏紀(jì)毅③⑤

    (四川省瀘州市人民醫(yī)院乳腺外科,瀘州646000)

    目的:探討黃芩素和U0126體外對(duì)乳腺癌的作用及其機(jī)制。方法:用黃芩素、U0126單獨(dú)處理以及二者聯(lián)合處理人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞,采用CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MCF-7細(xì)胞周期以及凋亡變化;顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)量變化; TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡改變;劃痕實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞遷移情況; Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)因子的蛋白水平變化,分析黃芩素與U0126對(duì)乳腺癌細(xì)胞的增殖、凋亡和遷移的影響。結(jié)果:黃芩素或U0126可抑制細(xì)胞的增殖且具有濃度依賴性(P<0.05);黃芩素阻滯MCF-7細(xì)胞周期進(jìn)入S期,增加G0~G1期細(xì)胞比例(P<0.05),降低S期細(xì)胞比例(P<0.05),誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡(P<0.05);降低ERK1/2和JNK蛋白的磷酸化水平和CyclinD1的蛋白水平表達(dá);黃芩素與U0126聯(lián)合處理MCF-7細(xì)胞,與黃芩素單獨(dú)處理組相比較,S期細(xì)胞比例明顯降低(P<0.05),細(xì)胞凋亡更加明顯(P<0.05), ERK1/2和JNK的磷酸化水平(P<0.05)、CyclinD1的蛋白表達(dá)量降低更加明顯(P<0.05);同時(shí)黃芩素可有效抑制人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞的遷移(P<0.05)。結(jié)論:黃芩素和U0126通過降低ERK1/2、JNK的磷酸化水平表達(dá),降低CyclinD1的水平表達(dá),有效抑制MCF-7細(xì)胞增殖和遷移,誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡并且二者具有協(xié)同作用。因此,黃芩素和U0126聯(lián)合有望用于臨床治療乳腺癌。

    黃芩素;U0126;人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7;凋亡;遷移

    乳腺癌是當(dāng)前社會(huì)的重大公共衛(wèi)生問題,嚴(yán)重威脅著女性身心健康[1]。乳腺癌的增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移受多種信號(hào)通路的調(diào)控,如CyclinD1、ERK1/2和JNK等[2]。ERK1/2和JNK是有絲分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)家族的重要成員,二者可被多種蛋白激酶磷酸化并活化,然后進(jìn)入細(xì)胞核,縮短G1期,促進(jìn)細(xì)胞提前進(jìn)入S期,介導(dǎo)細(xì)胞增殖失控、凋亡和惡性轉(zhuǎn)移[3]。

    黃芩素是黃芩中具有活性的黃酮類化合物,具有抗菌消炎和抗感染的功效。目前,已有研究報(bào)道,黃芩素抑制部分癌癥細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,如宮頸癌、肺癌和前列腺癌等[4-6],具有良好的臨床應(yīng)用前景,但其在乳腺癌中的作用效果還知之甚少[7]。U0126是ERK1/2的特異性抑制劑[8],可抑制與癌癥細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號(hào)通路活性,與黃芩素等中藥聯(lián)合使用具有協(xié)同效應(yīng),有望在臨床上得到廣泛應(yīng)用[9]。

    乳腺癌細(xì)胞增殖失控和惡性轉(zhuǎn)移是其致死的重要原因之一,人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7具有低侵襲、低轉(zhuǎn)移能力,為體外研究中西藥對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移的影響提供了很好的細(xì)胞模型[10]。抑制乳腺癌細(xì)胞惡性增殖和轉(zhuǎn)移,促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡是治療乳腺癌的重要策略之一,因此本研究主要探討黃芩素和U0126對(duì)MCF-7增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移的影響以及相關(guān)的分子機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 細(xì)胞株與試劑 人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7購(gòu)于上??蠌?qiáng)儀器有限公司;RPMI1640(美國(guó)Gibco公司)胎牛血清購(gòu)于杭州四季青公司;青霉素和鏈霉素購(gòu)于北京索萊寶公司;胰酶購(gòu)于華美公司;黃芩素購(gòu)于普瑞法科技有限公司;抑制劑U0126購(gòu)于碧云天生物科技有限公司;TUNEL試劑盒購(gòu)于ROCHE公司;小鼠抗人GAPDH內(nèi)參、辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗小鼠IgG及辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔IgG 購(gòu)于碧云天生物科技公司;CyclinD1、ERK1/2、JNK引物均由上海生工合成;兔抗人CyclinD1抗體、兔抗人ERK1/2抗體、兔抗人P-ERK1/2抗體、兔抗人JNK抗體及兔抗人P-JNK抗體均購(gòu)于CST公司。

    1.2 方法

    1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7由上海肯強(qiáng)科技有限公司提供,采用RPMI1640(含有10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 U/ml鏈霉素)培養(yǎng)液培養(yǎng)。培養(yǎng)條件:37℃,5%CO2的培養(yǎng)箱。

    1.2.2 CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞制備細(xì)胞懸液,將100 μl 含2×104ml-1的MCF-7細(xì)胞懸液接種至96孔板中,貼壁后,按照不同濃度加入0、1、2、5、10、20、50、100、200、300 μmol/L的黃芩素和按照使用說明書給出的適用范圍分別加入0、2、5、10、20 μmol/L的U0126,同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照以及DMSO對(duì)照組, 37℃培養(yǎng)4 h;加入10 μl CCK8,混勻,培養(yǎng)4 h,生成Formazan,測(cè)定450nm吸光度(OD值)。設(shè)定空白對(duì)照1:在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入CCK8,測(cè)定450nm的吸光度(OD值),空白對(duì)照2:在不含細(xì)胞加入黃芩素或U0126的培養(yǎng)基中加入CCK8,測(cè)定450nm的吸光度,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    1.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期以及細(xì)胞凋亡情況 將1 ml 1.25×105ml-1的MCF-7細(xì)胞接種至12孔板,貼壁后,用黃芩素、U0126及黃芩素聯(lián)合U0126處理細(xì)胞24 h,收集細(xì)胞,室溫PBS洗滌兩次,加入1 ml 70%預(yù)冷乙醇固定,過夜,離心去除乙醇;PBS重懸,加入RNase至終濃度為100 mg/L, 37℃水浴30 min,加入PI染色液至終濃度為50 mg/L,4℃避光染色3 min,用488nm的激發(fā)波長(zhǎng)檢測(cè)細(xì)胞周期分布。用細(xì)胞周期擬合軟件進(jìn)行分析結(jié)果,記錄亞二倍體峰,即凋亡細(xì)胞峰sub-G1期、G0/G1期、S期、G2/M期細(xì)胞比例。檢測(cè)早期凋亡和晚期凋亡按照相關(guān)的試劑盒步驟進(jìn)行操作。結(jié)果采用CellQuest軟件進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    1.2.4 細(xì)胞顯微攝影檢測(cè)細(xì)胞數(shù)量變化 分別加入0、1、2、5、10、20、50、100、200、300 μmol/L黃芩素處理MCF-7細(xì)胞24 h,低倍鏡下觀察黃芩素對(duì)MCF-7細(xì)胞的數(shù)量變化。

    1.2.5 TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡 MCF-7細(xì)胞經(jīng)10 μmol/L黃芩素及10 μmol/L U0126處理24 h后,移除培養(yǎng)液,PBS漂洗2遍,4%PFA室溫固定10 min,PBS漂洗2遍,3%過氧化氫浸泡10 min,抑制內(nèi)源性過氧化氫酶,PBS漂洗2遍,蛋白酶室溫孵育30 min,PBS洗2遍,加入50 μl TUNEL反應(yīng)液,室溫濕盒中孵育1 h,PBS洗3遍,加convert-POD,室溫30 min后,PBS再漂洗3遍,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,梯度酒精脫水后中性樹膠封片,顯微鏡下攝片分析結(jié)果。

    1.2.6 Western blot檢測(cè)增殖和凋亡相關(guān)蛋白水平 20 μmol/L黃芩素和10 μmol/L U0126處理MCF-7細(xì)胞后,用4℃預(yù)冷的PBS沖洗細(xì)胞2次,離心去上清,加入含5%蛋白酶抑制劑的裂解液(RIPA強(qiáng)),置冰上裂解30 min,轉(zhuǎn)移蛋白液至已標(biāo)記的Eppendorf管中,超聲破碎后,10 000 r/min離心后取上清液,沸水變性5 min后,降至室溫,-20℃保存?zhèn)溆?。? μl蛋白進(jìn)行10%SDS-PAGE電泳,轉(zhuǎn)膜到0.2 μmol/L PVDF膜上,5%脫脂奶粉的1×TBST封閉1 h,去除封閉液,PBS漂洗2次,10 min/次。一抗(ERK1/2稀釋比例為1∶1 000,P-ERK1/2稀釋比例為1∶800,JNK稀釋比例為1∶1 000,P-JNK稀釋比例為1∶800,CyclinD1稀釋比例為1∶700,GAPDH稀釋比例為1∶2 000)4℃孵育過夜。1×TBST漂洗3次,10 min/次,HRP羊抗小鼠IgG及HRP羊抗兔IgG(二抗稀釋比例均為1∶2 000)室溫孵育1 h,1×TBST漂洗3次,10 min/次,BIO-RAD凝膠成像儀成像后,Quantity one軟件進(jìn)行平均光密度值(Mean optical dengsity,MOD)分析,計(jì)算相關(guān)因子蛋白水平表達(dá),實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    1.2.7 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MCF-7細(xì)胞遷移 將0.5 ml 5×105個(gè)/ml的MCF-7細(xì)胞接種于24孔板,培養(yǎng)24 h后,形成單層細(xì)胞。用10 μl移液槍頭在單層細(xì)胞上呈“一”字劃痕,用PBS洗3遍,然后加入所需的黃芩素或U0126,每組處理平行3個(gè)樣本。培養(yǎng)24 h后,顯微鏡下觀察黃芩素或U0126對(duì)MCF-7細(xì)胞遷移的影響。

    2 結(jié)果

    2.1 黃芩素或U0126抑制人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7

    細(xì)胞增殖 MCF-7細(xì)胞經(jīng)不同濃度的黃芩素、U0126處理24 h后,CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,黃芩素或U0126可顯著抑制MCF-7細(xì)胞增殖且具有濃度依賴性(P<0.05),見圖1。

    2.2 黃芩素或U0126阻滯人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞周期 與空白對(duì)照組和DMSO對(duì)照組相比,人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7經(jīng)20 μmol/L黃芩素處理24 h后,G0~G1期細(xì)胞比例明顯增多(P<0.05,圖2),S期細(xì)胞比例明顯下降(P<0.05,圖2),采用20 μmol/L黃芩素與10 μmol/L U0126聯(lián)合處理MCF-7細(xì)胞24 h后,S期細(xì)胞比例明顯降低(P<0.05,圖2)。此研究結(jié)果表明,黃芩素可顯著增加MCF-7細(xì)胞G1期細(xì)胞比例,降低S期細(xì)胞比例,U0126可顯著降低S期細(xì)胞比例。

    圖1 黃芩素或U0126抑制人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞增殖Fig.1 Baicalein or U0126 inhibited human breast cancer cell line MCF-7Note: *.P<0.05 vs control.

    圖2 黃芩素或U0126阻滯人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞周期Fig.2 Effect of Baicalein or U0126 on cell cycle of MCF-7Note: 1.Control;2.DMSO;3.Baicalein-20 μmol/L;4.20 μmol/L-baicalein+10 μmol/L-U0126;*.P<0.05 vs 1.

    2.3 黃芩素或U0126誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞凋亡 為進(jìn)一步探討黃芩素和U0126聯(lián)合抗乳腺癌的作用,我們鏡下觀察黃芩素/U0126對(duì)乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響。與空白對(duì)照組和DMSO組相比,不同濃度黃芩素處理MCF-7細(xì)胞24 h后, MCF-7細(xì)胞數(shù)量明顯減少,且隨著使用黃芩素濃度越高,乳腺癌細(xì)胞的數(shù)量減少越明顯(圖3)。

    2.4 TUNEL法檢測(cè)黃芩素或U0126誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞凋亡 與空白對(duì)照組和DMSO組相比,TUNEL實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7經(jīng)20 μmol/L黃芩素單獨(dú)處理24 h后,細(xì)胞凋亡現(xiàn)象明顯(P<0.05),MCF-7經(jīng)20 μmol/L黃芩素和10 μmol/L U0126聯(lián)合處理后,細(xì)胞凋亡現(xiàn)象更明顯(P<0.05)(圖4)。

    2.5 黃芩素或U0126對(duì)MCF-7早期凋亡和晚期凋亡的影響 為進(jìn)一步確認(rèn)黃芩素/U0126影響細(xì)胞凋亡的具體過程,我們利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) MCF-7細(xì)胞經(jīng)20 μmol/L黃芩素單獨(dú)處理24 h后,MCF-7細(xì)胞的早期凋亡和晚期凋亡情況,結(jié)果顯示黃芩素處理MCF-7細(xì)胞組與空白組或者DMSO組相比,早期凋亡和晚期凋亡均顯著增多(P<0.05),MCF-7細(xì)胞經(jīng)20 μmol/L黃芩素和10 μmol/L U0126聯(lián)合處理后,與兩者單獨(dú)處理組相比,早期凋亡和晚期凋亡均顯著增多(P<0.05)。此研究結(jié)果表明,黃芩素和U0126均可誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7早期凋亡和晚期凋亡,且二者具有協(xié)同效應(yīng)(圖5)。

    2.6 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)黃芩素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞遷移的影響 與空白對(duì)照組和DMSO組相比,人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7經(jīng)20 μmol/L黃芩素處理0、1、3和6 h后,劃痕實(shí)驗(yàn)表明,細(xì)胞遷移距離受到明顯抑制(P<0.05)。此研究結(jié)果表明,黃芩素可顯著抑制人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7遷移能力(圖6)。

    圖3 黃芩素誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞數(shù)量減少Fig.3 Effect of Baicalein on number of MCF-7 cells in human breast cancer cell lineNote: *.P<0.05 vs control.

    圖4 黃芩素或U0126誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞凋亡Fig.4 Baicalein or U0126 induced MCF-7 apoptosis in human breast cancer cell lineNote: 1.Control;2.DMSO;3.Baicalein-20 μmol/L-24 h;4.Baicalein-20 μmol/L+U0126-10 μmol/L;*.P<0.05 vs 1.

    圖5 黃芩素或U0126對(duì)MCF-7早期凋亡和晚期凋亡的影響Fig.5 Effect of baicalein or U0126 on early apoptosis and late apoptosis of MCF-7Note: 1.Control;2.DMSO;3.Baicalein-20 μmol/L-24 h;4.Baicalein-20 μmol/L+U0126-10 μmol/L;*.P<0.05 vs 1.

    圖6 黃芩素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞遷移的影響Fig.6 Effect of baicalein on migration of MCF-7 cells in human breast cancer cell lineNote: *.P<0.05 vs baicalein 0 μmol/L.

    圖7 黃芩素或U0126降低MCF-7凋亡抑制蛋白活性及表達(dá)水平Fig.7 Effect of baicalein or U0126 on inhibition of MCF-7 apoptosis and expression level in human breast cancer cell lineNote: 1.Control;2.Control+DMSO;3.Baicalein-20 μmol/L;4.U0126-10 μmol/L;5.Baicalein-20 μmol/L+U0126-10 μmol/L;*.P<0.05 vs 1.

    2.7 黃芩素/U0126體外抗乳腺癌的分子機(jī)制 為探討黃芩素與U0126抑制MCF-7細(xì)胞增殖的分子機(jī)制,我們利用Western blot檢測(cè) ERK1/2、JNK蛋白的磷酸化情況,利用Real-time PCR和Western blot 檢測(cè)周期、增殖相關(guān)的蛋白CyclinD1表達(dá)水平,結(jié)果顯示,與對(duì)照組以及黃芩素/U0126單獨(dú)處理MCF-7細(xì)胞組相比,黃芩素與U0126聯(lián)合作用MCF-7細(xì)胞24 h可以明顯降低ERK1/2、JNK蛋白的磷酸化水平以及CyclinD1的mRNA和蛋白水平(圖7)。

    3 討論

    乳腺癌在乳腺疾病中是常見的惡性腫瘤,致死率較高。乳腺癌的惡性增殖、凋亡以及遷移是多基因參與的、復(fù)雜的病理學(xué)過程,因此探究乳腺癌的增殖、凋亡和遷移的分子機(jī)制,尋找乳腺癌的新療法具有重要意義。

    黃芩素和U0126具有明顯的抗癌作用,前期研究表明黃芩素作為一種中藥,通過增加凋亡相關(guān)蛋白Bax表達(dá),抑制CDC2激酶活性等多種途徑抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[11]。U0126通過特異性抑制ERK信號(hào)通路活性誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[8]。我們的研究表明黃芩素/U0126可以抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞株的增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡且具有濃度依賴性,二者聯(lián)合使用組,相對(duì)于單獨(dú)使用組,誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的作用更加顯著。

    已有研究報(bào)道,高轉(zhuǎn)移傾向乳腺癌細(xì)胞和組織中,ERK1/2的表達(dá)水平和磷酸化水平增高[12]。ERK1/2的磷酸化激活是細(xì)胞周期進(jìn)入S期的關(guān)鍵,它促進(jìn)細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)化,從而促進(jìn)細(xì)胞增殖[13]。CyclinD1是經(jīng)典Wnt/β-catenin信號(hào)通路的下游靶基因,可促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入S期,Halleskog等[14]報(bào)道ERK1/2可促進(jìn)β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核,從而調(diào)控CyclinD1的表達(dá),進(jìn)而影響乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞周期改變。這與本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致:黃芩素/U0126可以降低ERK1/2和JNK的磷酸化水平,進(jìn)一步調(diào)控其信號(hào)通路下游分子CyclinD1,降低其表達(dá)水平。CyclinD1作為周期相關(guān)蛋白,表達(dá)量降低阻滯細(xì)胞進(jìn)入S期,從而導(dǎo)致S期細(xì)胞所占比例降低同時(shí)G1期細(xì)胞增多。

    促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡是治療癌癥的策略之一。Bcl-2家族蛋白由抑制細(xì)胞凋亡蛋白(Bcl-2、Bcl-x/L)和促進(jìn)細(xì)胞凋亡蛋白(Bax、Bad等)組成,兩者相互作用調(diào)控細(xì)胞凋亡[15]。已有研究報(bào)道,ERK激酶活化后可調(diào)節(jié)線粒體途徑引起的凋亡[16]。本研究結(jié)果表明:不同濃度的黃芩素和U0126處理MCF-7細(xì)胞后,降低ERK1/2和JNK的磷酸化水平,促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡,包括早期凋亡和晚期凋亡。

    癌癥惡性轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致高致死率的重要原因,乳腺癌最常發(fā)生轉(zhuǎn)移的部位有骨轉(zhuǎn)移(肋骨、胸骨等)、肺及胸膜轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移和腦轉(zhuǎn)移[17]。目前,已經(jīng)研制了多種癌癥抗轉(zhuǎn)移藥物,如血小板凝集抑制劑、血管生成抑制因子、內(nèi)皮穩(wěn)定因子、干擾素-α和其他化學(xué)藥物[18],但由于藥物的局限性,尋找新型抗轉(zhuǎn)移的藥物是十分必要的。黃芩素聯(lián)合小分子抑制劑U0126可以顯著抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7的遷移作用,這為二者在臨床使用提供重要的理論依據(jù)。

    綜上所述,黃芩素和U0126可通過調(diào)控ERK1/2和JNK信號(hào)通路,顯著抑制人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移,因此二者有望用于乳腺癌臨床治療。

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    [收稿2016-08-08]

    (編輯 倪 鵬)

    Anti-cancer by baicalein combined with U0126 on human breast cancer in vitro

    ANHong-Yuan,XIANGChuan-Nan,YUXiao-Lan,TANGXiao-Ping,ZHANGYu-Jiao,XIAJi-Yi.

    TheDepartmentofBreastSurgery,SichuanProvinceLuzhouPeople′sHospital,Luzhou646000,China

    Objective:To investigate the effects and mechanisms of anti-cancer by bacailein combined with U0126 on human breast cancer in vitro.Methods: The human breast cancer cell line MCF-7 was treated by baicalein,U0126 and baicalein combined with U0126 respectively.CCK8 assay measured cell proliferation of MCF-7;flow cytometry tested the cell cycle and apoptosis of MCF-7;microscopy observed the amount;TUNEL assay evaluated the apoptosis of MCF-7;Western blot detected the protein level of proliferation and apoptosis related protein;scratch assay measured the ability of migration.Results: Human breast cancer cell line MCF-7 was treated by baicalein or U0126 at different concentration for 24 h,CCK8 assay suggested that both of them can dramatically inhibit MCF-7 proliferation in a dose-dependent way (P<0.05).Compared to the blank and DMSO groups,the human breast cancer cell line MCF-7 was treated with baicalein for 24 h,the cellular rate at G0-G1 phase increased a lot (91%) (P<0.05),while the cellular rate at S phase reduced dramatically (P<0.05),cell apoptosis increased dramatically by microscopy and TUNEL assay(P<0.05),the level of ERK1/2,CyclinD1 and JNK reduced quickly (P<0.05).Compared to the baicalein group,MCF-7 was treated by baicalein combined with U0126,the cellular rate at S phase decreased remarkably (P<0.05),apoptosis was much obvious (P<0.05),the phosphorylation level of ERK1/2 and JNK reduced a lot (P<0.05),and the proliferation accelerator CyclinD1 highly decreased (P<0.05);the scratch assay demonstrated that cell migration was dramatically inhibited when MCF-7 was treated by 20 μmol/L baicalein(P<0.05).Conclusion: Both of baicalein and U0126 can inhibit the proliferation and migration,induce the apoptosis of human breast cancer cell line MCF-7 through decreasing the level of ERK,JNK and CyclinD1.Baicalein and U0126 can provide some novel avenues to treat breast cancer in clinic.

    Baicalein;U0126;Human breast cancer cell line MCF-7;Apoptosis

    安宏元(1985年-),女,在讀碩士,醫(yī)師,主要從事乳腺癌的機(jī)制研究。

    及指導(dǎo)教師:夏紀(jì)毅(1979年-),男,碩士,高級(jí)實(shí)驗(yàn)師,主要從事腫瘤的分子機(jī)制研究,E-mail:xjyi0615@163.com。

    R73

    A

    1000-484X(2017)02-0206-06

    ①本文為四川省科技廳項(xiàng)目(14JC01353-LH67)和四川省瀘州市科技局項(xiàng)目(2014-S-44)。

    ②西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院婦產(chǎn)科,瀘州646000。

    ③西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心,瀘州646000。

    ④西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科,瀘州646000。

    ⑤西南醫(yī)科大學(xué)信息與工程學(xué)院現(xiàn)代教育技術(shù)中心,瀘州646000。

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