不同培養(yǎng)條件對(duì)瞿麥誘導(dǎo)愈傷組織的影響

李興桃+任佼佼

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，山西太谷 030801）

摘 要 試驗(yàn)以瞿麥葉片為材料，通過對(duì)其進(jìn)行不同消毒時(shí)間，不同激素配比濃度和不同光照條件處理，探究瞿麥組織培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)條件。試驗(yàn)結(jié)果表明：酒精浸泡30s、NaClO浸泡15min的處理可以極大降低外植體的污染率和褐化率；MS+1.0mg/L6·BA+0.4 mg/L NAA的培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率最高，為90%；接種后先暗培養(yǎng)25d，然后在光照下進(jìn)行培養(yǎng)的外植體，其愈傷組織比接種后直接在光照條件下培養(yǎng)的外植體要出現(xiàn)的快且生長狀況較好。

關(guān)鍵詞 瞿麥；組織培養(yǎng)；消毒時(shí)間；激素配比濃度；光照

中圖分類號(hào)：S567.239 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.24.068

瞿麥（Dianthus superbus L）為石竹科石竹屬多年生草本植物，近年來，由于其花觀賞價(jià)值高，抗性強(qiáng)，開始應(yīng)用在園林綠化上。瞿麥的繁殖方式多樣，但傳統(tǒng)繁殖技術(shù)很難在較短的時(shí)間內(nèi)獲得大量性狀整齊的優(yōu)質(zhì)種苗[1]。本試驗(yàn)通過對(duì)瞿麥組培材料進(jìn)行不同的滅菌時(shí)間，激素配比，光照條件的處理，選擇出最佳的培養(yǎng)條件，促進(jìn)優(yōu)良變異品種的開發(fā)利用。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)材料為太谷縣窯子頭的野生瞿麥，2014年引種到山西農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)田。

1.2 方法

在組織培養(yǎng)過程中，外植體的消毒、培養(yǎng)基激素的配比和接種后的培養(yǎng)條件對(duì)組培成功都有很大的影響[2-3]。這些因素會(huì)導(dǎo)致外植體生理生化狀態(tài)和愈傷組織的改變[4]。

1.2.1 消毒處理

取幼嫩的瞿麥葉片作為外植體，用75%的酒精浸泡30s后，再用濃度為0.5%的NaClO分別浸泡12、15、18min，接種后進(jìn)行培養(yǎng)并統(tǒng)計(jì)外植體的污染率、褐化率。

污染率=（污染的葉片數(shù)/接種的葉片數(shù)）×100%

褐化率=（褐化的葉片數(shù)/接種的葉片數(shù)）×100%[5-6]。

1.2.2 激素處理

選用MS（4、74g/L）為愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行激素NAA和6-BA組合的雙因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)（見表1）。觀察愈傷組織的誘導(dǎo)情況并記錄愈傷組織生長狀況。

愈傷組織誘導(dǎo)率=（出愈苗數(shù)/接種數(shù)）×100%[7-9]

1.2.3 光照處理

分別對(duì)培養(yǎng)基（MS+1.0mg/L 6·BA+0.4mg/LNAA）進(jìn)行光照處理和黑暗處理：Ⅰ、接種后直接進(jìn)行光照；Ⅱ、接種后進(jìn)行黑暗處理，25d后給予光照。

表1 培養(yǎng)基激素濃度配比

處理組 激素 濃度/（mg/L） 激素 濃度/（mg/L）

1 6-BA 0 NAA 0

2 6-BA 0 NAA 0.2

③ 6-BA 0 NAA 0.4

④ 6-BA 0 NAA 0.6

⑤ 6-BA 0.5 NAA 0

⑥ 6-BA 0.5 NAA 0.2

⑦ 6-BA 0.5 NAA 0.4

⑧ 6-BA 0.5 NAA 0.6

⑨ 6-BA 1.0 NAA 0

⑩ 6-BA 1.0 NAA 0.2

? 6-BA 1.0 NAA 0.4

? 6-BA 1.0 NAA 0.6

? 6-BA 1.5 NAA 0

? 6-BA 1.5 NAA 0.2

? 6-BA 1.5 NAA 0.4

? 6-BA 1.5 NAA 0.6

2 結(jié)果與分析

2.1 消毒時(shí)間對(duì)瞿麥葉片污染率和褐化率的影響

由表2可知，適當(dāng)?shù)难娱L消毒時(shí)間可以在一定程度上降低外植體的污染率，外植體消毒15min比12min污染率下降了16.67%。褐化率和消毒時(shí)間是呈正相關(guān)的，消毒18min比消毒15min褐化率增長了32.22%。由此可見，用0.5%的NaClO浸泡瞿麥葉片15min消毒效果最好。

表2 不同消毒時(shí)間對(duì)瞿麥葉片污染率和褐化率的影響

時(shí)間/min 污染率/% 褐化率/%

12 36.67 17.78

15 20.00 21.11

18 16.67 53.33

2.2 不同激素配比對(duì)瞿麥葉片愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

愈傷組織體積大，結(jié)構(gòu)疏松且顏色淺的為生長良好；體積小，結(jié)構(gòu)緊密且顏色深的為生長差[7]。本試驗(yàn)中，誘導(dǎo)5d后開始產(chǎn)生愈傷組織，10d后愈傷組織明顯。由表3知，6-BA和NAA對(duì)愈傷組織的生長都起著促進(jìn)作用，1.0mg/L6-BA和0.4mg/L NAA處理下，誘導(dǎo)率最高，愈傷組織的生長狀況最佳。當(dāng)NAA濃度為0.4mg/L，葉片愈傷組織誘導(dǎo)率較其他處理高，由此可見，NAA對(duì)瞿麥葉片愈傷組織的誘導(dǎo)起主要作用。

表3 不同激素配比對(duì)瞿麥葉片愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

處理組 誘導(dǎo)率/% 愈傷組織生長情況

16.67 差

30.00 差

③ 73.33 差

④ 60.00 差

⑤ 63.33 差

⑥ 53.33 良好

⑦ 86.67 好

⑧ 56.67 良好

⑨ 43.33 差

⑩ 76.67 良好

? 90.00 好

? 70.00 好

? 50.00 差

? 46.67 良好

? 80.00 好

? 83.33 好

2.3 不同光照處理對(duì)瞿麥葉片愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

光照對(duì)植物的細(xì)胞、組織、器官的生長和分化有著至關(guān)重要的作用，光照下愈傷組織極易分化形成維管組織而不能形成大量的愈傷組織，避光培養(yǎng)條件下有利于愈傷組織的積累[10-11]。由表4可知，處理Ⅱ的愈傷組織出現(xiàn)時(shí)間、生長狀況均優(yōu)于處理Ⅰ，且愈傷組織誘導(dǎo)率明顯高于處理Ⅰ。

表4 不同光照條件對(duì)瞿麥葉片愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

光照處理 誘導(dǎo)率/% 愈傷生長狀況

Ⅰ 72 愈傷出現(xiàn)慢，生長狀況較差

Ⅱ 87 愈傷出現(xiàn)快，生長狀況好

3 討論

外植體消毒時(shí)間長短，直接影響到外植體的成活率[12]。本試驗(yàn)中，采用75%酒精消毒30 s，0.5%的NaClO消毒

15 min，可以達(dá)到較好的消毒效果；當(dāng)0.5%的NaClO處理時(shí)間延長，會(huì)降低外植體的活性，導(dǎo)致死亡率升高。激素的配比對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)有著明顯的影響[13]。本試驗(yàn)中，0.4mg/LNAA和1.0mg/L6-BA條件下，愈傷組織的誘導(dǎo)率最高。由此可見，NAA和6-BA的濃度不宜過高或過低。

黑暗條件對(duì)愈傷組織的產(chǎn)生有明顯促進(jìn)作用[10]，本試驗(yàn)中，外植體先在黑暗條件下培養(yǎng)25d后再給予光照，愈傷組織的誘導(dǎo)率和生長狀況都優(yōu)于直接在光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)。

參考文獻(xiàn)

[1]李欣，姜忠君.賞藥兼用瞿麥栽培技術(shù)[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（1）：103.

[2]韋三立.花卉組織培養(yǎng)[M].北京：中國林業(yè)出版社，2001.

[3]譚文澄，戴策剛.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].北京：中國林業(yè)出版社，1991.

[4]曹孜義，劉國民.試用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程[M].蘭州：甘肅科學(xué)技術(shù)出版社，1996.

[5]劉慶昌，吳國良.植物細(xì)胞組織培養(yǎng)教程[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2003.

[6]加古舜治.園藝植物的器官與組織培養(yǎng)[M].鄭州：河南科技出版社，1987.

[7]奚元齡，顏昌敬.植物細(xì)胞培養(yǎng)手冊(cè)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1992.

[8]裘文達(dá).園藝植物組織培養(yǎng)[M].上海：上海技術(shù)出版社，1986.

[9]謝從華.柳俊.植物細(xì)胞工程[M].北京：高等教育出版社，2004.

[10]倪德祥.光在植物培養(yǎng)中的調(diào)控作用[J].自然雜志，1986，9（3）：35-40.

[11]文濤，梁莉，曾楊，等.不同光照強(qiáng)度對(duì)虎杖愈傷組織的影響[J].中國中藥雜志，2007，32（13）：1277-1280.

[12]魯旭東.植物組織培養(yǎng)中褐變的發(fā)生與防止[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù)，1999，19（4）：9.

[13]韓得元.植物生長調(diào)節(jié)劑原理及應(yīng)用[M].北京：科學(xué)技術(shù)出版社，1997.

（責(zé)任編輯：劉昀）