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    梔子苷改善缺氧缺血性腦損傷新生大鼠的運(yùn)動功能并抑制炎癥反應(yīng)

    2017-02-23 11:05:08謝五元
    醫(yī)學(xué)信息 2016年35期
    關(guān)鍵詞:炎性反應(yīng)

    謝五元

    摘要:目的 觀察梔子苷對缺氧缺血性腦損傷(HIBD)新生大鼠皮層TNF-α和IL-6等炎性因子表達(dá)的影響,探討梔子苷對缺氧缺血性腦損傷的保護(hù)作用機(jī)制。方法 按照Rice法制作新生大鼠HIBD模型。24只健康新生7d SD大鼠隨機(jī)分為對照組、HIBD模型組、梔子苷治療組,每組8只。造模成功后,懸掛試驗(yàn)評價大鼠的運(yùn)動功能;ELISA法檢測各組大鼠皮層TNF-α和IL-6表達(dá)水平。結(jié)果 與對照組比較,HIBD模型組大鼠和梔子苷治療組大鼠表現(xiàn)出明顯的運(yùn)動功能落后(P<0.01),與HIBD模型組比較,梔子苷治療組大鼠運(yùn)動功能明顯改善(P<0.01);HIBD模型組大鼠和梔子苷治療組大鼠皮層TNF-α和IL-6表達(dá)均較對照組增高(P<0.01),但梔子苷治療組表達(dá)較HIBD模型組顯著降低(P<0.01)。結(jié)論 梔子苷可能通過降低HIBD大鼠皮層TNF-α和IL-6表達(dá),抑制腦內(nèi)炎性反應(yīng),發(fā)揮腦保護(hù)作用。

    關(guān)鍵詞:子苷;缺氧缺血性腦損傷;炎性反應(yīng)

    缺氧缺血性腦損傷(hypoxic ischemic brain damage, HIBD)是新生兒期最危險的疾病之一,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,目前尚無特異性療法。梔子苷是中藥梔子的主要成分,是一種天然的抗炎抗氧化物質(zhì),在抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤及在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和心腦血管疾病的治療中都有一定的作用[1]。但梔子苷對新生大鼠HIBD是否有保護(hù)作用,目前國內(nèi)外鮮少報道。本研究通過建立新生大鼠HIBD模型,檢測皮層TNF-α和IL-6的表達(dá)變化,探討梔子苷干預(yù)后對HIBD的影響及其可能的機(jī)制,從而為梔子苷更合理有效的應(yīng)用于臨床治療HIBD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論指導(dǎo)。

    1 資料與方法

    1.1一般資料 24只健康新生7d SD大鼠購自河南省實(shí)驗(yàn)動物中心,體重(12.36±1.57)g,雌雄不拘;梔子苷;TNF-α和IL-6 ELISA試劑盒。

    1.2方法

    1.2.1 HIBD模型制備及分組 24只新生7 d的SD大鼠隨機(jī)分為對照組、HIBD模型組和梔子苷治療組。采用Rice方法[2]行左側(cè)頸總動脈分離并結(jié)扎及缺氧2 h制作HIBD模型,對照組只分離左側(cè)頸總動脈,不結(jié)扎,不缺氧。梔子苷治療組于造模成功后即刻給予腹腔注射梔子苷(25 mg/kg),1次/d,連續(xù)7 d;HIBD模型組于造模成功后與對照組一同腹腔注射梔子苷等等量的生理鹽水。各組大鼠術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)。各組大鼠分別于術(shù)后第7 d行為學(xué)檢測,然后斷頭取腦,進(jìn)行生化指標(biāo)的檢測。

    1.2.2運(yùn)動功能評價 懸掛試驗(yàn):首先將大鼠放在鼠籠的蓋子上,輕搖籠蓋,使大鼠抓握籠蓋,然后將籠蓋倒置,大鼠會緊緊抓住籠蓋以防墜落。用秒表測定大鼠從籠蓋倒置到大鼠墜落的時間。

    1.2.3 ELISA法檢測各組大鼠皮層TNF-α和IL-6表達(dá)水平

    0.8%戊巴比妥鈉麻醉大鼠,經(jīng)4%多聚甲醛心臟灌流,快速取出全腦,冰浴分離出大鼠大腦皮層,1:10勻漿,4℃,10000 r/min,離心10 min,取上清液。實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照ELISA法說明書步驟進(jìn)行。

    1.3統(tǒng)計學(xué)處理 采用 SPSS 19.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較分析,計量資料以標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組間比較行單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1各組大鼠運(yùn)動功能測試結(jié)果 與對照組(10.12±2.47)比較,HIBD模型組大鼠(4.39±0.96)和梔子苷治療組大鼠(5.92±1.27)的平均懸掛持續(xù)時間均明顯減少(P<0.01),與HIBD模型組比較,梔子苷治療組大鼠懸掛持續(xù)時間明顯延長(P<0.01)。

    2.2各組大鼠皮層TNF-α和IL-6的表達(dá) ELISA結(jié)果顯示,HIBD模型組大鼠和梔子苷治療組大鼠皮層TNF-α和IL-6表達(dá)均較對照組增高(P<0.01),但梔子苷治療組表達(dá)較HIBD模型組顯著降低(P<0.01),見表1。

    3 討論

    新生兒缺氧缺血性腦損傷(hypoxic ischemic brain damage, HIBD)是由于圍產(chǎn)期窒息引起的部分或者完全缺氧,導(dǎo)致胎兒或新生兒腦損傷性疾病,會造成不同程度的認(rèn)知、運(yùn)動障礙[3]。本實(shí)驗(yàn)室采用Rice法制備HIBD大鼠模型,術(shù)后采用懸掛試驗(yàn)檢測大鼠行為,發(fā)現(xiàn)HIBD模型組大鼠運(yùn)動功能明顯下降,表明我們造模成功。

    HIBD發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜,近些年研究表明,腦內(nèi)炎癥反應(yīng)在腦損傷的發(fā)生過程中起到重要作用,而皮層區(qū)與感覺運(yùn)動功能關(guān)系密切,故本研究以皮層為切入點(diǎn),檢測炎性因子的表達(dá),以進(jìn)一步探討HIBD的發(fā)病機(jī)制和治療措施。

    中醫(yī)藥毒副作用相對比較小,在臨床治療腦缺血方面有著很大的優(yōu)勢。梔子苷是從中藥梔子中提取出的環(huán)烯醚萜苷類物質(zhì),易通過血腦屏障,目前其在治療腦部疾病方面受到越來越多的關(guān)注。研究表明,梔子苷可通過抑制細(xì)胞凋亡、抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)、清除自由基、抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化、抑制炎癥反應(yīng)等途徑減輕或改善各種原因引起的腦損傷過程[4]。

    本研究采用梔子苷對HIBD大鼠模型進(jìn)行干預(yù)治療,結(jié)果發(fā)現(xiàn)TNF-α和IL-6在HIBD大鼠腦組織中的表達(dá)均較對照組增高,梔子苷治療后顯著降低,表明梔子苷可以通過抑制TNF-α和IL-6的表達(dá),抑制腦內(nèi)炎癥,對HIBD大鼠發(fā)揮腦保護(hù)作用,是一種有效的神經(jīng)保護(hù)劑。

    參考文獻(xiàn):

    [1]游偉良,平其能,孫敏捷,等. 梔子苷的藥理學(xué)研究新進(jìn)展[J]. 藥學(xué)進(jìn)展,2012, 36(4): 158-162.

    [2]Rice JE 3rd, Vannucci RC, Brierley JB. The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat[J]. Ann Neurol, 1981, 09(2): 131-141.

    [3]劉合營,黃友敏,周永勤. 缺氧缺血性腦病患兒內(nèi)脂素和VE-cadherin的變化[J]. 中華全科醫(yī)學(xué),2011, 9(9): 1455-1457.

    [4]Liu W, Li G, H?lscher C, Li L. Neuroprotective effects of geniposide on Alzheimer's disease pathology[J].Rev Neurosci, 2015, 26(4): 371-383.

    編輯/周蕓霏

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