基層疾控中心細菌性食物中毒檢驗及特點分析

王艷華

摘要：本文從建立預案、材料準備、人員培訓、現(xiàn)場調(diào)查、樣品采集與優(yōu)勢菌觀察、檢驗方法選擇等幾個方面為基層疾控中心如何做好細菌性食物中毒檢驗工作提出了一套系統(tǒng)規(guī)范的工作流程，對縮短細菌性食物中毒檢測周期及提高檢測率提供參考策略。

關鍵詞：細菌性食物中毒；基層疾控中心；檢驗；特點

食物中毒是一類影響嚴重的突發(fā)公共衛(wèi)生事件，其中細菌性食物中毒發(fā)生率居于首位。中國食源性疾病監(jiān)測網(wǎng)曾就1992～2001這10年間的13 個監(jiān)測地區(qū)的食源性疾病暴發(fā)事件的資料進行統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)涉及最廣的要屬由微生物引起的食源性疾病事件，占到了38.5%的高比例。副溶血性弧菌是細菌性食物中毒的主要病原菌，可占31.1%，除此之外還有沙門氏菌、變形桿菌，分別占到17.9%、14.0%[1]?；鶎蛹部刂行氖菆?zhí)行食物中毒檢驗任務的關鍵單位，但就目前而言，我國很多地區(qū)的基層疾控中心配備的先進檢驗設備都比較缺乏，比如熒光酶標免疫測試系統(tǒng)、全自動細菌鑒定儀等，仍然沿用傳統(tǒng)培養(yǎng)方法來對對細菌性食物中毒進行檢驗，但是具有較長的檢測周期，這就造成了處理突發(fā)公共衛(wèi)生事件的不及時性，跟不上人民群眾對安全衛(wèi)生服務的要求。進一步加強心細菌性食物中毒檢驗工作力度不僅是是 2003 年頒布的 《突發(fā)公共衛(wèi)生事件應急條例》的要求，更是基層疾控中心為人民群眾安全健康提供保障的道德舉措。

1建立預案

基層疾控中心實驗室切實制定出一套完善的食物中毒檢驗預案，對采樣需要用到的各種物材料資的準備、人員的培訓及分配、生物安全、病原菌的檢驗方法、儀器設備的檢查維護、培養(yǎng)基的制備、實驗室質(zhì)量控制與環(huán)境等各個方面做出明確的規(guī)定，確保工作責任有條不紊地落實。

2材料準備

實驗室須妥備各種樣品的采集材料、常用的診斷血清及培養(yǎng)基、生化試劑條或者微量生化管，同時也要儲備適量的不常用材料。

3人員培訓

每位檢驗人員必須清楚認識到食物中毒檢驗的重要性，提高對檢驗工作的重視度，爭取最快獲取結果。及時培訓，及時更新知識儲備，認識新出現(xiàn)的食物中毒病原菌，具備較高的專業(yè)素養(yǎng)勝任檢驗工作崗位，掌握食物中毒檢驗相關知識與技能，要對分子生物學技術等新技術及時學習與把握[2]。此外，還應擴充自身知識面，了解食品衛(wèi)生學、流行病學、傳染病學等相關知識。

4現(xiàn)場調(diào)查

檢驗人員應自覺積極得做好食物中毒的現(xiàn)場調(diào)查工作，對中毒患者的臨床癥狀、可能導致中毒的食物及病原菌、潛伏期、傳播途徑等進行觀察分析，收集患者的血、尿常規(guī)檢驗結果。通過詳細的調(diào)查分析，初步判斷出可能致病的病原菌，著重關注重點樣品。重癥患者的糞便往往能夠提供可疑菌落，著重關注可起到較滿意的效果。

5樣品采集與優(yōu)勢菌觀察

5.1樣品采集 在細菌性食物中毒檢驗中，樣品的質(zhì)量是檢驗結果取得成效的關鍵。應通過邊調(diào)查邊分析的形式來明確采集的樣品，以利于典型樣品的采集，且在調(diào)查分析過程中，通過檢驗人員與流調(diào)人員的合作交流能夠促使檢驗樣品及方法更為合理、科學。最好在患者用藥前進行樣品培養(yǎng)。

5.2優(yōu)勢菌觀察 采集的樣品包括液體樣品與固體樣品，前者直接涂片，后者先用生理鹽水磨勻后再進行涂片，革蘭染色，在鏡下觀察數(shù)量占優(yōu)勢的細菌，在暗視野下對細菌的動力進行觀察，根據(jù)染色反應、形態(tài)及動力判斷細菌種類，對下一步的檢驗工作提出指導基礎。

6檢驗方法選擇

6.1分離培養(yǎng) 運用符合國家標準的分離培養(yǎng)基來進行食物中毒病原菌的分離培養(yǎng)具有理想的效果，一直以來也都受用于基層疾控中心。但對工作經(jīng)驗不足的檢驗人員而言，在對多雜菌的目標菌進行處理時不易做到"百里挑一"，因此近些年我國開發(fā)并引進了很多新的分離培養(yǎng)基，如法國CHROMagar等顯色培養(yǎng)基已被引進我國且被證實特異性較好[3]。目前，O157：H7大腸埃希菌顯色培養(yǎng)基、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基、單核細胞增生性李斯特菌顯色培養(yǎng)基等顯色培養(yǎng)基在細菌性食物中毒檢驗方面都發(fā)揮了重要作用。鑒于食物中毒事件的發(fā)生率、成本以及各類細菌已具備的檢驗效能，以上這些顯色培養(yǎng)基在我國基層疾控中心中都應該配備齊全。此外，在金黃色葡萄球菌的選擇性分離方面，法國梅里埃公司生產(chǎn)的血漿凝固酶平板具有較顯著的效果，對于一些不能依靠國家標準GB/T4789-2003檢驗出的樣品都可有效分離出目標菌。

6.2生化試驗 雙歧索引法是傳統(tǒng)的生化鑒定方法，不僅處理繁復且檢測周期也長，在需要"應急"處理的突發(fā)事件面前具有很大的局限性[4]。目前，數(shù)碼法已得到應用，腸桿菌科細菌生化編碼鑒定系統(tǒng)、rRNA 第Ⅰ超科細菌數(shù)值編碼鑒定系統(tǒng)、弧菌科細菌生化編碼鑒定系統(tǒng)等都是常用的細菌性食物中毒檢驗的生化試驗方法。

6.3血清學凝集試驗 在血清學凝集實驗中，確保血清的有效性十分關鍵，一旦效價不佳或者吸收不充分便會嚴重影響檢驗結果出錯。如果血清不凝或是凝集的結果不符合判定的應符合某一細菌的形態(tài)、培養(yǎng)、生化時，這時不可輕易對結論進行否定，而是應通過其它批號或其它生物制品所的血清進行對照。值得一提的是，在鑒定副溶血弧菌及志賀氏菌的過程中應該對K抗原的阻斷凝集予以特別關注，除了比較熟悉的 K抗原與Vi抗原之外，M抗原和 O5抗原在沙門氏菌的鑒定中具有阻斷凝集作用。

7討論

傳統(tǒng)的分離鑒定方法是根據(jù)國家標準而來，是基層疾控中心檢驗細菌性食物中毒的一條"金標準"，雖然如此，由于其具有不易克服的較長的檢測周期，造成了處理突發(fā)公共衛(wèi)生事件的不及時性，跟不上人民群眾對安全衛(wèi)生服務的要求。當前半自動或全自動細菌鑒定儀已經(jīng)進入了一些條件較好的基層疾控中心，無需再面對檢測周期長的問題。同時也出來了一些入全自動熒光酶標免疫測試系統(tǒng)、免疫膠體金技術、聚合酶聯(lián)反應及核酸擴增技術等具有快速、 靈敏、特異優(yōu)點的敏細菌鑒定方法，然后尚未得到國家標準的認可，使得法律效力不足[5]，因此研制出一種病原菌檢驗方法基本完全滿足靈敏、特異、效力的優(yōu)點是當前迫切之需。

目前，在細菌性食物中毒檢驗中，副溶血弧菌、 沙門氏菌、金黃色葡萄球菌霍亂弧菌、志賀氏菌是基層疾控中心主要開展的幾個項目，通常情況下，如果上述細菌未被檢出多以不了了之結束，造成了食物中毒檢驗的缺口。因此，要使食品安全衛(wèi)生與疾病防控得到充分保障就必須要進一步擴大細菌的檢驗范圍。目前，致病性大腸埃希氏菌的檢測已變得比較成熟，方法比較簡單；單核細胞增生性李斯特菌的檢測工作最大的障礙就是其繁瑣的檢驗方法，可先純培養(yǎng)后送上級疾控機構進行檢驗；變形桿菌檢驗仍缺少國家標準，一般都以參考《變形桿菌食物中毒診斷標準及處理原則 WS/T 9-1996》來處理[6]。筆者建議基層疾控中心有必要也將以上三種細菌作為細菌性食物中毒中的必檢項目。

在基層疾控中心實際的細菌性食物中毒處理工作中，最大的問題就是不能很好地把握傳染源以及傳播途徑、范圍，這給消滅、切斷、控制流程工作造成了不小的麻煩。目前，脈沖場凝膠電泳儀已在條件比較好的基層疾控中心中有所配置，可將病原菌進行特異性的分型，據(jù)此明確細菌的傳播途徑，為防控細菌性食物中毒事件提供了十分顯著的技術支持，然后設備操作復制、費用昂貴，尚不能在各個基層疾控中心中推廣應用開來。這就對低成本的分型技術的研制開發(fā)提出了迫切的要求。

參考文獻：

[1]滕毅，鐘廷國，李義，等.基層疾控中心細菌性食物中毒檢驗探討[J]. 現(xiàn)代預防醫(yī)學，2010，5（18）：939-940，944.

[2]劉漢偉，馬寧.基層疾控中心處置食品安全事故中存在問題及對策的探討[J].預防醫(yī)學論壇，2010，5（25）：474-476.

[3]郭玉梅，秦麗云，徐保紅，等.2003至2012年石家莊地區(qū)細菌性食物中毒病原菌特征研究[J].微生物學雜志，2013，5（16）：73-77.

[4]何金林，夏鐵瑛，陳燕，等.基層疾控中心細菌性食物中毒檢驗探索[J].中國預防醫(yī)學雜志，2006，7（5）：392-393.

[5]劉小敏，張勇，莫浩聯(lián)，等.深圳市福田區(qū)2011～2012年細菌性食物中毒病原菌檢測分析[J].中國熱帶醫(yī)學，2014，01（9）：62-63，85.

[6]李汝期，明儒成.細菌性和真菌性食物中毒調(diào)查及檢驗[J].河南預防醫(yī)學雜志，2014，5（7）：440-443.

編輯/丁一