UPLC-MS/MS法測(cè)定人血漿中羅匹尼羅的濃度及其藥動(dòng)學(xué)研究Δ

黃晨蓉，許青青，繆麗燕（1.蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床藥理室，江蘇蘇州 15006；.蘇州大學(xué)藥學(xué)院，江蘇蘇州 15000）

UPLC-MS/MS法測(cè)定人血漿中羅匹尼羅的濃度及其藥動(dòng)學(xué)研究Δ

黃晨蓉1，2＊，許青青2，繆麗燕1#（1.蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床藥理室，江蘇蘇州 215006；2.蘇州大學(xué)藥學(xué)院，江蘇蘇州 215000）

目的：建立測(cè)定人血漿中羅匹尼羅濃度的方法，并用于藥動(dòng)學(xué)研究。方法：血漿樣品經(jīng)乙腈沉淀后，以阿替洛爾為內(nèi)標(biāo)，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。色譜柱為WatersACQUITY UPLC BEHAmide，流動(dòng)相為水（含10 mmol/L乙酸銨和0.1%甲酸）-乙腈（85∶15，V/V），流速為0.3 mL/min，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為5 μL。采用電噴霧離子源，以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式進(jìn)行正離子掃描，用于定量分析的離子對(duì)分別為m/z 261.2→114.1（羅匹尼羅）和m/z 267.2→145.0（內(nèi)標(biāo)）。選擇8例健康受試者，男、女各半，單次給予鹽酸羅匹尼羅片1.0 mg后，采用該法測(cè)定給藥前后羅匹尼羅的血藥濃度，采用WinNonlin 6.3軟件計(jì)算其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果：羅匹尼羅血藥濃度在0.02～2 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝0.997 3），批內(nèi)、批間RSD＜10%，準(zhǔn)確度為95.2%～99.7%，提取回收率為68.5%～79.9%，基質(zhì)效應(yīng)和稀釋效應(yīng)均不影響其血藥濃度的測(cè)定。8例健康受試者口服鹽酸羅匹尼羅片1.0 mg后，cmax為（2.1±0.5）ng/mL，tmax為（1.0±0.5）h，t1/2為（4.7±1.5）h，AUC0-36h為（14.7±6.0）ng·h/mL，AUC0-∞為（15.1±6.1）ng·h/mL；不同性別受試者主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、分析時(shí)間短，適用于人血漿中羅匹尼羅的濃度測(cè)定及藥動(dòng)學(xué)研究。

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；羅匹尼羅；血藥濃度；藥動(dòng)學(xué)

鹽酸羅匹尼羅（Ropinirole hydrochloride）為非麥角堿類多巴胺受體激動(dòng)藥，于1996年在英國(guó)上市，現(xiàn)已在多個(gè)國(guó)家臨床應(yīng)用于治療帕金森?。≒arkinson disease，PD）[1]。與傳統(tǒng)多巴胺受體激動(dòng)藥相比，鹽酸羅匹尼羅避免了因麥角結(jié)構(gòu)引起的嚴(yán)重纖維化不良反應(yīng)；同時(shí)，由于其與受體的高度選擇性，還可降低左旋多巴所致運(yùn)動(dòng)障礙的發(fā)生率；此外，鹽酸羅匹尼羅還具有神經(jīng)保護(hù)作用[2]。臨床研究顯示，鹽酸羅匹尼羅不論是單藥治療早期PD還是聯(lián)合左旋多巴治療晚期PD，均表現(xiàn)出較好的療效；且PD患者早期接受鹽酸羅匹尼羅的單藥治療還可推遲聯(lián)用左旋多巴的時(shí)間或減少其使用劑量，延遲PD并發(fā)癥的發(fā)生，長(zhǎng)期使用安全、有效，且耐受性較好[3-4]。目前，國(guó)內(nèi)外研究多采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法測(cè)定人血漿中羅匹尼羅的濃度，以乙酸乙酯、甲基叔丁醚等為溶劑，采用液-液萃取法處理血漿樣品，操作煩瑣且耗時(shí)[5-11]。故本試驗(yàn)在此基礎(chǔ)上，建立了一種快速、靈敏的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）法，并將其應(yīng)用于臨床藥動(dòng)學(xué)研究，為鹽酸羅匹尼羅Ⅱ期臨床試驗(yàn)方案的制訂提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Acquity UPLC儀、Xevo-TQS三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters公司）；XS105DU型分析天平（美國(guó)Mettler公司）；Allegra 64R型高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)Beckman公司）；Milli-Q型超純水儀（美國(guó)Millipore公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸羅匹尼羅對(duì)照品（美國(guó)Pharmacopeia公司，批號(hào)：F0J036，純度：99.5%）；阿替洛爾對(duì)照品（內(nèi)標(biāo)，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100117-201105，純度：99.8%）；鹽酸羅匹尼羅片（浙江華海藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：11813001，規(guī)格：1.0 mg/片）；甲醇、乙腈、甲酸為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜與質(zhì)譜條件

色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH Amide（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相：水（含10 mmol/L乙酸銨和0.1%甲酸）-乙腈（85∶15，V/V）；流速：0.3 mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：5 μL。

采用電噴霧離子源（Electrospray ionization，ESI），以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（Multiple reaction monitoring，MRM）模式掃描，正離子方式檢測(cè)。毛細(xì)管電壓：1.34 kV；錐孔電壓：70 V；碰撞電壓：20 eV；脫溶劑溫度：500℃；脫溶劑氣流速：1 000 L/h；錐孔氣流速：150 L/h。用于定量分析的離子對(duì)分別為：m/z 261.2→114.1（羅匹尼羅）和m/z 267.2→145.0（內(nèi)標(biāo)）。

2.2 溶液的制備

精密稱取鹽酸羅匹尼羅對(duì)照品11.40 mg（相當(dāng)于羅匹尼羅9.998 mg），置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，得羅匹尼羅質(zhì)量濃度為1 mg/mL的貯備液，置于4℃冰箱中保存。用50%乙腈稀釋成相應(yīng)質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，備用。

另精密稱取內(nèi)標(biāo)對(duì)照品10.26 mg，置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，得質(zhì)量濃度為1.026 mg/mL的內(nèi)標(biāo)貯備液；取上述內(nèi)標(biāo)貯備液適量，用50%乙腈稀釋成質(zhì)量濃度為500 ng/mL的內(nèi)標(biāo)溶液，置于4℃冰箱中保存，備用。

2.3 血漿樣品處理

精密吸取空白血漿0.1 mL，加入50%乙腈10 μL，加入內(nèi)標(biāo)溶液（500 ng/mL）10 μL，加入乙腈0.1 mL，渦旋振蕩1 min，在4℃下，以19 722×g離心10 min，取上清液100 μL至進(jìn)樣瓶中，進(jìn)樣分析。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 專屬性考察 在“2.1”項(xiàng)條件下，內(nèi)源性雜質(zhì)對(duì)待測(cè)物無(wú)干擾，羅匹尼羅和內(nèi)標(biāo)的峰形較好，分離完全，保留時(shí)間分別約為1.2和1.0 min。典型色譜圖見圖1。

圖1 典型MRM色譜圖Fig 1 Typical MRM chromatograms

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與定量下限的考察 精密吸取空白血漿、羅匹尼羅標(biāo)準(zhǔn)工作液各適量，配制成質(zhì)量濃度分別為0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2 ng/mL的血漿樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以待測(cè)物質(zhì)量濃度（c）為橫坐標(biāo)、待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值（f）為縱坐標(biāo)，采用加權(quán)最小二乘法（權(quán)重系數(shù)w＝1/c2）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為f＝31.239 7c+50.890 5（r＝0.997 3）。結(jié)果顯示，羅匹尼羅的血藥濃度在0.02～2 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其定量下限為0.02 ng/mL（批內(nèi)RSD＜20%）。

2.4.3 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn) 分別配制羅匹尼羅低、中、高質(zhì)量濃度（0.05、0.2、1.5 ng/mL，下同）的質(zhì)控（QC）樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法處理，每質(zhì)量濃度取6樣本分析，連續(xù)測(cè)定3批，根據(jù)當(dāng)批標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣品的測(cè)得質(zhì)量濃度，考察方法的精密度與準(zhǔn)確度，結(jié)果見表1。

表1 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果（）Tab 1 Results of precision and accuracy tests（）

表1 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果（）Tab 1 Results of precision and accuracy tests（）

理論質(zhì)量濃度，ng/mL準(zhǔn)確度，% 0.05 0.2 1.5批內(nèi)精密度（n＝6）測(cè)得質(zhì)量濃度，ng/mL 0.046±0.002 0.185±0.013 1.425±0.916 RSD，% 5.3 7.2 6.4批間精密度（n＝3）測(cè)得質(zhì)量濃度，ng/mL 0.050±0.005 0.190±0.013 1.467±0.986 RSD，% 9.1 6.7 6.7 99.7 95.2 97.8

由表1可見，各質(zhì)量濃度QC樣品的批內(nèi)RSD分別為5.3%、7.2%和6.4%，批間RSD分別為9.1%、6.7%和6.7%，準(zhǔn)確度為95.2%～99.7%，精密度與準(zhǔn)確度均符合相關(guān)指導(dǎo)原則的基本要求[12]。

2.4.4 提取回收率試驗(yàn) 分別配制羅匹尼羅低、中、高質(zhì)量濃度的QC樣品各6份，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣測(cè)定，得相應(yīng)色譜峰峰面積（A1）；取空白血漿適量，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，加入相應(yīng)質(zhì)量濃度的羅匹尼羅標(biāo)準(zhǔn)工作液，使最終質(zhì)量濃度與前者相對(duì)應(yīng)，進(jìn)樣測(cè)定，得相應(yīng)色譜峰峰面積（A2）。提取回收率（%）＝A1/A2× 100%。結(jié)果顯示，各質(zhì)量濃度QC樣品羅匹尼羅的提取回收率分別為68.5%、77.7%和79.9%；內(nèi)標(biāo)的提取回收率為68.3%，RSD＜15%（n＝6）。

2.4.5 基質(zhì)效應(yīng) 取空白血漿適量，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，加入相應(yīng)質(zhì)量濃度的羅匹尼羅標(biāo)準(zhǔn)工作液和內(nèi)標(biāo)溶液適量，進(jìn)樣測(cè)定，得相應(yīng)色譜峰峰面積（C）；另取同體積相應(yīng)質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液和內(nèi)標(biāo)溶液，以氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)昧鲃?dòng)相復(fù)溶，使最終質(zhì)量濃度與前者相對(duì)應(yīng)，進(jìn)樣測(cè)定，得相應(yīng)色譜峰峰面積（B）。基質(zhì)效應(yīng)（%）＝C/B×100%。結(jié)果顯示，各質(zhì)量濃度QC樣品羅匹尼羅的基質(zhì)效應(yīng)分別為81.1%、92.1%和94.3%，內(nèi)標(biāo)的基質(zhì)效應(yīng)為93.0%，表明基質(zhì)效應(yīng)不影響羅匹尼羅血藥濃度的測(cè)定[12]。

2.4.6 稀釋效應(yīng) 配制質(zhì)量濃度為3 ng/mL的血漿樣品共6份，用空白血漿以體積比1∶1的比例稀釋后，按“2.3”項(xiàng)下方法處理，進(jìn)樣測(cè)定，考察各樣品的稀釋可靠性，計(jì)算各樣品測(cè)得質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度的偏差。結(jié)果顯示，各樣品的偏差為7.2%～12.7%，符合相關(guān)指導(dǎo)原則基本要求[12]。

2.4.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 配制羅匹尼羅低、中、高質(zhì)量濃度的QC樣品，分別于室溫放置6 h、經(jīng)歷3次凍融（每次冷凍保存的時(shí)間＞12 h）、－80℃放置45 d后，按“2.3”項(xiàng)下方法處理，進(jìn)樣測(cè)定，考察各樣品的穩(wěn)定性；同時(shí)考察各樣品按“2.3”項(xiàng)下方法處理后于自動(dòng)進(jìn)樣器（10℃）中放置24 h的穩(wěn)定性。計(jì)算各樣品的測(cè)得質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度的偏差。結(jié)果顯示，各樣品的偏差為－9.8%～11.7%，RSD＜15%，表明其在上述條件下穩(wěn)定性良好。

2.4.8 質(zhì)量控制 分別配制羅匹尼羅低、中、高質(zhì)量濃度的QC樣品，與每個(gè)分析批的待測(cè)樣品同時(shí)測(cè)定，計(jì)算各QC樣品測(cè)得質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度的偏差。結(jié)果顯示，各批QC樣品測(cè)定結(jié)果的偏差均＜15%，符合生物樣品定量分析的基本要求[12]。

2.5 藥動(dòng)學(xué)研究

2.5.1 研究對(duì)象 選擇8例健康受試者，男性、女性各4例，平均年齡（25.5±1.7）歲，平均身高（1.7±0.1）m，平均體質(zhì)量（60.3±7.4）kg，平均體質(zhì)量指數(shù)（21.4±1.9）kg/m2。受試者試驗(yàn)前心電圖、血壓、血尿常規(guī)、肝腎功能檢查均正常，無(wú)藥物過敏史，無(wú)慢性疾病史；試驗(yàn)前1個(gè)月及試驗(yàn)期間未使用過其他藥物。受試期間統(tǒng)一清淡飲食，忌煙、酒及含藥物、咖啡因的飲料，不食用影響肝藥酶的水果及飲料。本試驗(yàn)方案經(jīng)蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，受試者均知情同意并簽署知情同意書。

2.5.2 單劑量藥動(dòng)學(xué)研究 本試驗(yàn)采用開放、單中心、單劑量臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)，給藥劑量為1.0 mg。受試者隔夜禁食，于次日晨起空腹口服鹽酸羅匹尼羅片1.0 mg，以200 mL溫水送服，給藥后2 h內(nèi)不飲水，4 h后統(tǒng)一進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)餐。分別于給藥前及給藥后0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0和36.0 h采集前臂靜脈血4 mL，置肝素抗凝管中，以2 352×g離心10 min，分離血漿，置于－80℃冰箱中冷凍保存，待測(cè)。

采用UPLC-MS/MS法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)受試者體內(nèi)羅匹尼羅的血藥濃度。若血藥濃度超過了線性范圍上限，則將樣品用空白血漿以體積比1∶1的比例稀釋，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，重新測(cè)定。采用WinNonlin 6.3軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，采用SPSS 16.0軟件處理所得數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

8例健康受試者單劑量口服鹽酸羅匹尼羅片后的平均藥-時(shí)曲線見圖2，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2。

圖2 8例健康受試者單劑量口服鹽酸羅匹尼羅片后的平均藥-時(shí)曲線（n＝8）Fig 2 Mean plasma concentration-time curve in 8 healthy volunteers after a single oral dose of Ropinirole hydrochloride tablets（n＝8）

表2 主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（）Tab 2 Main pharmacokinetic parameters（）

表2 主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（）Tab 2 Main pharmacokinetic parameters（）

參數(shù)cmax，ng/mL tmax，h t1/2，h AUC0-36h，ng·h/mL AUC0-∞，ng·h/mL男性（n＝4）2.0±0.5 1.1±0.7 4.5±0.7 15.1±7.0 15.3±7.1女性（n＝4）2.2±0.5 1.0±0.4 5.0±2.2 14.3±5.9 14.9±6.0合計(jì)（n＝8）2.1±0.5 1.0±0.5 4.7±1.5 14.7±6.0 15.1±6.1

由表2可見，男性受試者和女性受試者主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示性別對(duì)其主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)無(wú)明顯影響。

8例受試者中，有7例受試者發(fā)生藥品不良事件，其中惡心6例、頭暈4例、嘔吐1例、多汗2例，均發(fā)生在給藥后40～60 min，其中1例受試者在給藥后142 min時(shí)再次出現(xiàn)頭暈，并在70 min內(nèi)自行痊愈。1例受試者出現(xiàn)尿白細(xì)胞升高，經(jīng)醫(yī)師診斷為異常，具有臨床意義，6 d后恢復(fù)正常。未見其他嚴(yán)重不良事件發(fā)生。

3 討論

在色譜條件優(yōu)化過程中，筆者考察了Waters ACQUITY UPLC BEHAmide（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）及不同規(guī)格的Waters ACQUITY UPLC BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm和100 mm×2.1 mm，1.7 μm）等色譜柱。結(jié)果顯示，相比于BEH C18，BEH Amide可得到更好的色譜峰形。在選擇流動(dòng)相時(shí)，筆者考察了0.1%甲酸水溶液、10 mmol/L乙酸銨水溶液和水（含10 mmol/L乙酸銨和0.1%甲酸）對(duì)檢測(cè)的影響。結(jié)果顯示，后者可得到較好的峰形，且響應(yīng)值最大，故選擇其作為水相。

在質(zhì)譜條件優(yōu)化過程中，對(duì)羅匹尼羅母離子和子離子進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)正離子模式響應(yīng)強(qiáng)，故采用正離子檢測(cè)模式。在質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化過程中，根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度將羅匹尼羅的定量離子對(duì)確定為m/z 261.2→114.1，錐孔電壓和碰撞電壓分別確定為70 V和20 eV。在相同檢測(cè)條件下，篩選了多種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)（如奧美拉唑、氟氯西林、阿替洛爾等），根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度及與羅匹尼羅色譜峰的分離度，最終確定內(nèi)標(biāo)為阿替洛爾，其定量離子對(duì)為m/z 267.2→145.0，錐孔電壓為70 V，碰撞電壓為20 eV。

在血漿樣品處理方法的篩選中，筆者嘗試了蛋白沉淀法和液-液萃取法，發(fā)現(xiàn)蛋白沉淀法可有效去除蛋白；而以乙酸乙酯、甲基叔丁醚等為溶劑的液-液萃取法[8-9]，雖然也能有效去除蛋白，但是操作煩瑣且耗時(shí)，不利于大批量樣本處理。因此，本試驗(yàn)最終選擇簡(jiǎn)單易行的蛋白沉淀法，與文獻(xiàn)報(bào)道的方法[5-11]比較，該法重復(fù)性良好，內(nèi)源性物質(zhì)干擾較少，可滿足生物樣本快速批量檢測(cè)的需求。

對(duì)本試驗(yàn)建立的UPLC-MS/MS法進(jìn)行方法學(xué)考察，結(jié)果顯示，在“2.1”項(xiàng)條件下，羅匹尼羅和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別約為1.2和1.0 min，峰形良好，不受血漿中內(nèi)源性物質(zhì)的干擾；羅匹尼羅的血藥濃度在0.02～2 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，批內(nèi)、批間RSD＜10%；提取回收率、基質(zhì)效應(yīng)和稀釋效應(yīng)等均符合生物樣品定量分析的基本要求[12]，且穩(wěn)定性良好。

羅匹尼羅是一種非麥角堿類的多巴胺受體激動(dòng)藥，目前國(guó)外臨床研究多在患者中開展，且根據(jù)藥物的不用劑型設(shè)計(jì)不同的給藥方案。藥品說(shuō)明書指出，該藥普通片劑成人初始劑量為0.25 mg，tid，每周向上調(diào)整，即第1周劑量為0.25 mg，tid；第2周劑量為0.5 mg，tid；第3周劑量為0.75 mg，tid；第4周劑量為1.0 mg，tid，劑量最高可增加至3.0 mg，tid。常用維持日劑量為3～9 mg，最大日劑量為24 mg。而以健康受試者為研究對(duì)象的臨床試驗(yàn)，國(guó)內(nèi)已有文獻(xiàn)報(bào)道[13]，其劑量低于臨床常用劑量，為單次口服1.0 mg，未見相關(guān)不良事件。因此，本試驗(yàn)將低于臨床常用劑量且文獻(xiàn)報(bào)道安全的1.0 mg設(shè)定為給藥劑量，開展單劑量、單中心藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)。結(jié)果顯示，8例健康受試者（男、女各半）單次口服鹽酸羅匹尼羅1.0 mg后的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為cmax（2.1±0.5）ng/mL、t1/2（4.7±1.5）h、tmax（1.0±0.5）h，且性別對(duì)主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)無(wú)明顯影響（P＞0.05）。試驗(yàn)過程中，有7例受試者發(fā)生藥品不良事件，包括惡心、頭暈、嘔吐、多汗、尿白細(xì)胞升高等，醫(yī)師綜合判斷可能與藥物相關(guān)，臨床應(yīng)予以重視。

本試驗(yàn)僅初步考察了單次口服鹽酸羅匹尼羅片后在健康人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特性，在后續(xù)試驗(yàn)中，本課題組將進(jìn)一步開展以PD患者為研究對(duì)象的多劑量、多中心藥動(dòng)學(xué)研究，以期為鹽酸羅匹尼羅片后續(xù)臨床試驗(yàn)給藥方案的制訂提供理論依據(jù)。

（本研究經(jīng)原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)，臨床試驗(yàn)批件號(hào)：2012L00005）

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Determination of Ropinirole in Human Plasma by UPLC-MS/MS and Its Pharmacokinetic Study

HUANG Chenrong1，2，XU Qingqing2，MIAO Liyan1（1.Dept.of Clinical Pharmacology，the First Affiliated Hospital of Soochow University，Jiangsu Suzhou 215006，China；2.College of Pharmacy，Soochow University，Jiangsu Suzhou 215000，China）

UPLC-MS/MS；Ropinirole；Plasma concentration；Pharmacokinetics

R945

A

1001-0408（2017）02-0177-05

2016-05-20

2016-11-01）

（編輯：張?jiān)拢?/p>

國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（No.81503159）

＊副主任藥師，碩士。研究方向：臨床藥學(xué)。電話：0512-67780467。E-mail：chrishuangcr@163.com

#通信作者：主任藥師，教授，博士生導(dǎo)師，博士。研究方向：臨床藥學(xué)。電話：0512-67780467。E-mail：miaolysuzhou@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.02.09

ABSTRACTOBJECTIVE：To develop a method for the determination of ropinirole in human plasma and pharmacokinetic study. METHODS：After precipitated with acetonitrile，using atenolol as internal standard，plasma sample was determined by UPLC-MS/ MS.The separation was performed on Waters ACQUITY UPLC BEH Amide column with mobile phase consisted of water（containing 10 mmol/L ammonium acetate and 0.1%formic acid）-acetonitrile（85∶15，V/V）at flow rate of 0.3 mL/min.The column temperature was set at 40℃，and sample size was 5 μL.The analyses were carried out by ESI under MRM model in positive mode.The mass transition ion-pairs were as follows：m/z 261.2→114.1（ropinirole）and m/z 267.2→145.0（internal standard）.8 healthy volunteers were selected with a gender ratio of half to half，and were given Ropinirole hydrochloride tablets 1.0 mg.Plasma concentrations of ropinirole were determined before and after medication.The pharmacokinetic parameters were calculated by WinNonlin 6.3 software.RESULTS：The linear range of ropinirole were 0.02-2 ng/mL（r＝0.997 3）with RSDs of inter-batch and intra-batch＜10%；accuracy ranged 95.2%-99.7%，and extraction recoveries ranged 68.5%-79.9%.Both matrix effects and dilution effects didn’t influence the determination of plasma concentration.The main pharmacokinetic parameters of ropinirole in 8 healthy volunteers after oral administration of Ropinirole hyolrocholride tablets 1.0 mg were as follows：cmaxwas（2.1±0.5）ng/mL，tmaxwas（1.0±0.5）h，t1/2was（4.7±1.5）h，AUC0-36hwas（14.7±6.0）ng·h/mL，AUC0-∞was（15.1±6.1）ng·h/mL.There was no statistical significance in main pharmacokinetic parameters between different gender（P＞0.05）.CONCLUSIONS：The method is simple，sensitive and less time-consuming.It is suitable for the plasma concentration determination and pharmacokinetic study of ropinirole in human.