• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    Y-box結(jié)合蛋白1過表達(dá)對(duì)肝內(nèi)膽管癌患者術(shù)后輔助化療預(yù)后的影響

    2017-02-22 06:07:38許曉勇宋育林
    臨床肝膽病雜志 2017年2期
    關(guān)鍵詞:胞核胞漿膽管癌

    劉 衡,姜 莉,許曉勇,夏 俊,宋育林

    (1安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 a.消化內(nèi)科; b.肝膽外科,合肥 230022;2 合肥市第三人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科,合肥 230022)

    Y-box結(jié)合蛋白1過表達(dá)對(duì)肝內(nèi)膽管癌患者術(shù)后輔助化療預(yù)后的影響

    劉 衡1a,姜 莉2,許曉勇1a,夏 俊1b,宋育林1a

    (1安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 a.消化內(nèi)科; b.肝膽外科,合肥 230022;2 合肥市第三人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科,合肥 230022)

    目的 探討Y-box結(jié)合蛋白(YB)1過表達(dá)與肝內(nèi)膽管癌患者術(shù)后輔助化療預(yù)后的關(guān)系。方法 收集2010年1月-2015年1月于安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院行手術(shù)治療并輔助術(shù)后化療的58例肝內(nèi)膽管癌患者的石蠟標(biāo)本。使用免疫組化方法檢測(cè)肝內(nèi)膽管癌組織中YB-1表達(dá)情況,使用噻唑藍(lán)方法檢測(cè)YB-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱藥物敏感性的改變。qPCR檢測(cè)YB-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞后多藥耐受基因表達(dá)改變情況。計(jì)量資料2組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析;計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn);Kaplan-Meier方法計(jì)算生存曲線,生存分析采用log-rank檢驗(yàn)。結(jié)果 58例患者中44例(75.9%)患者YB-1在肝內(nèi)膽管癌組織細(xì)胞胞漿中呈高表達(dá)(YB-1胞漿陽(yáng)性組),14例(24.1%)YB-1胞漿陰性(YB-1胞漿陰性組);44例YB-1胞漿陽(yáng)性患者中有18例(40.9%)癌組織的細(xì)胞中出現(xiàn)YB-1核染色陽(yáng)性(YB-1胞核陽(yáng)性組),其余40例為YB-1胞核陰性組。YB-1胞核陰性組患者術(shù)后輔助化療生存時(shí)間顯著長(zhǎng)于YB-1胞核陽(yáng)性組患者(63 個(gè)月 vs 28 個(gè)月,χ2=17.99,P<0.05)。對(duì)照質(zhì)粒組HCCC-9810對(duì)吉西他濱的半數(shù)抑制量(IC50)為0.054 μmol,YB-1過表達(dá)后pSG5-YB-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組IC50增加至0.460 μmol,較前者升高近10倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。pSG5-YB-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HCCC-9810細(xì)胞后,YB-1轉(zhuǎn)錄水平明顯升高(t=19.02,P<0.05)。HCCC-9810細(xì)胞在過表達(dá)YB-1之后多藥耐受蛋白(MDR)1、多藥耐受相關(guān)蛋白(MRP)1轉(zhuǎn)錄水均明顯升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為13.34、11.35,P值均<0.05)。結(jié)論 YB-1在大多數(shù)肝內(nèi)膽管癌組織中呈過表達(dá),其中YB-1胞核陽(yáng)性表達(dá)可能預(yù)示術(shù)后輔助化療效果不佳,與MDR1、MRP1多藥耐受基因表達(dá)后多藥耐受性的增加有關(guān)。

    膽道腫瘤; Y盒結(jié)合蛋白質(zhì)1; 藥物耐受性; 預(yù)后

    Y-box結(jié)合蛋白(Y-box binding protein,YB)1作為一種與目的基因啟動(dòng)子、增強(qiáng)子內(nèi)部Y-box序列(5’-CTGATTGGCCAA-3’)特異性結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子,可發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、遷移等多種重要的生物學(xué)功能[1]。YB-1作為一種可分泌的多功能蛋白,其生物學(xué)功能不僅與其自身結(jié)構(gòu)域有關(guān),亞細(xì)胞定位也是重要的決定因素[2]。生理情況下YB-1大多定位于細(xì)胞漿中,作為包裝信使核糖核蛋白體的功能蛋白,起到調(diào)節(jié)mRNA翻譯、穩(wěn)定性以及定位的作用[2]。當(dāng)細(xì)胞受到各種應(yīng)激因素刺激(如紫外線、加熱、抗腫瘤藥物、感染等)時(shí),YB-1可由胞漿轉(zhuǎn)移至胞核內(nèi),作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)多種基因表達(dá),同時(shí)還涉及DNA修復(fù)、復(fù)制以及前mRNA拼接[1-2]。目前關(guān)于YB-1在肝內(nèi)膽管癌中表達(dá)的研究尚少,本研究通過免疫組化檢測(cè)YB-1在肝內(nèi)膽管癌組織中的表達(dá)情況,并觀察YB-1過表達(dá)對(duì)肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌多藥耐受性的影響。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 收集2010年1月-2015年1月于安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院行手術(shù)治療并輔助術(shù)后化療的58例肝內(nèi)膽管癌患者的石蠟標(biāo)本,其中男32例,女26例,年齡41~77歲,中位發(fā)病年齡63歲。按照《2014 年美國(guó)肝膽胰學(xué)會(huì)共識(shí)聲明:肝內(nèi)膽管癌管理》[3]臨床分期標(biāo)準(zhǔn)分為:Ⅲ期37例,Ⅳ期21例。術(shù)后給予吉西他濱聯(lián)合順鉑治療27例,吉西他濱聯(lián)合環(huán)磷酰胺15例,單用環(huán)磷酰胺10例,使用其他化療藥物6例。隨訪截止日期為2015年12月30日,中位隨訪26個(gè)月,2例失訪(失訪率3.4%)。

    1.2 材料與試劑 人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞株HCCC-9810購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù),培養(yǎng)于含10% FBS的RPMI1640培養(yǎng)基(購(gòu)自Gibco公司)中,置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自Invitrogen公司,pSG5-YB-1質(zhì)粒由德國(guó)奧托·馮·居里克大學(xué)Peter R Mertens教授惠贈(zèng),pSG5-Vector購(gòu)自Agilent公司,噻唑藍(lán)購(gòu)自碧云天生物科技研究所,高純度RNA提取試劑盒購(gòu)自Roche公司,第一鏈cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒和SYBR Green PCR熒光定量PCR試劑盒購(gòu)自TaKaRa公司,兔抗人YB-1單克隆抗體購(gòu)自Abcam公司,即用型兔超敏二步法免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑、二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑盒購(gòu)于北京中杉金橋生物科技有限公司。

    1.3 免疫組化方法 將石蠟標(biāo)本依次脫蠟、梯度水化、采用微波法進(jìn)行抗原修復(fù),1 mmol EDTA(pH 8.4)緩沖溶液微波抗原熱修復(fù)10 min,3%過氧化氫溶液沖洗,PBS清洗3次,山羊血清室溫封閉30 min,加入兔抗人YB-1單克隆抗體(1∶100),4 ℃濕盒過夜,PBS清洗3次,順序滴加兔超敏免疫組化試劑1、2并清洗,二氨基聯(lián)苯胺顯色,蘇木素復(fù)染,鹽酸酒精分化,中性樹膠封片。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照組,以已知的表達(dá)陽(yáng)性的組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照組。由2位高資歷的病理醫(yī)師進(jìn)行雙盲式閱片。在顯微鏡100倍視野下,每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)區(qū)域,YB-1主要定位于細(xì)胞質(zhì),呈黃色顆粒樣,其中部分病例還出現(xiàn)胞核染色陽(yáng)性。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞的比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量積分:陽(yáng)性細(xì)胞所占比例為0、1%~10%、11%~30%、31%~50%、51%~80%、81%~100%,依次計(jì)為0、1、2、3、4、5分;染色強(qiáng)度為:陰性、弱陽(yáng)性(淡黃色)、中等陽(yáng)性(棕黃色)和強(qiáng)陽(yáng)性(棕褐色),依次計(jì)為0、1、2、3分。免疫組化積分=陽(yáng)性細(xì)胞占比分?jǐn)?shù)×染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù),理論分值為0~15分,其中≥3分判定為陽(yáng)性表達(dá),0~2分判定為無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。

    1.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HCCC-9810細(xì)胞,采用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染法進(jìn)行YB-1過表達(dá)治療轉(zhuǎn)染,操作流程按照說明書進(jìn)行。48 h后取細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    1.5 肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱敏感性測(cè)定 分別取對(duì)照質(zhì)粒組及pSG5-YB-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的HCCC-9810細(xì)胞配制成1×105/ml的細(xì)胞懸液,以200 μl/孔接種于96孔,37 ℃孵育箱中培養(yǎng)6 h,使細(xì)胞貼壁。更換培養(yǎng)基后,按終濃度0.01、0.1、1、10、100 μmol分別向每組中加入吉西他濱,其中0 μmol組加入等體積PBS設(shè)為對(duì)照組。繼續(xù)培養(yǎng)48 h。采用噻唑藍(lán)方法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力,每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。采用GraphPad Prim 6軟件分別計(jì)算對(duì)照質(zhì)粒組、pSG5-YB-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組HCCC-9810對(duì)吉西他濱的半數(shù)抑制量(IC50)。

    1.6 qPCR檢測(cè) 分別提取對(duì)照質(zhì)粒組、pSG5-YB-1組HCCC-9810細(xì)胞RNA,轉(zhuǎn)錄合成cDNA,-20 ℃保存。多藥耐受蛋白(multi-drug resistance,MDR)1、多藥耐受相關(guān)蛋白(multi-drug resistant associate protein,MRP)1和乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)引物由上海生工生物技術(shù)工程服務(wù)有限公司合成,引物序列見表1。按照SYBR Green PCR熒光定量PCR試劑盒操作流程進(jìn)行操作。

    2 結(jié)果

    2.1 免疫組化結(jié)果

    2.1.1 YB-1蛋白在肝內(nèi)膽管癌組織中的表達(dá) 58例患者中44例(75.9%)患者YB-1在肝內(nèi)膽管癌組織細(xì)胞胞漿中呈高表達(dá)(YB-1胞漿陽(yáng)性組),14例(24.1%)YB-1胞漿陰性(YB-1胞漿陰性組);58例患者中18例(40.9%)癌組織的細(xì)胞中出現(xiàn)YB-1核染色陽(yáng)性(YB-1胞核陽(yáng)性組,均為胞漿陽(yáng)性),其余40例為YB-1胞核陰性組。因此,YB-1在本研究的肝內(nèi)膽管癌樣本中主要存在3種表達(dá)模式:YB-1胞漿陰性/胞核陰性(圖1a,b)、YB-1胞漿陽(yáng)性/胞核陰性(圖1c,d)和YB-1胞漿陽(yáng)性/胞核陽(yáng)性(圖1e,f)。結(jié)合臨床資料分析發(fā)現(xiàn),Ⅳ期(21例)肝內(nèi)膽管癌組織中YB-1胞漿陽(yáng)性表達(dá)率(18/21,85.7%)高于Ⅲ期患者(26/37,70.3%),但2者間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。YB-1胞漿、胞核陽(yáng)性表達(dá)率在不同性別、年齡、臨床分期組間比較差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05)(表2)。

    2.1.2 YB-1不同表達(dá)模式與術(shù)后輔助化療患者預(yù)后的關(guān)系 生存分析顯示,YB-1胞漿陽(yáng)性組患者中位生存期為46個(gè)月,YB-1胞漿陰性組患者中位生存期為55個(gè)月,2組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(圖2);YB-1胞核陽(yáng)性組患者中位生存期僅28個(gè)月,但YB-1胞核陰性組中位生存期為63個(gè)月,2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=17.99,P<0.05)(圖3)。

    表1 引物序列

    表2 YB-1表達(dá)與肝內(nèi)膽管癌臨床參數(shù)的關(guān)系

    圖1 YB-1在肝內(nèi)膽管癌組織中的表達(dá) a,b:YB-1胞漿陰性/胞核陰性; c,d:YB-1胞漿陽(yáng)性/胞核陰性; e,f:YB-1胞漿陽(yáng)性/胞核陽(yáng)性

    圖2 YB-1胞漿陽(yáng)性組與陰性組患者術(shù)后輔助化療預(yù)后分析

    圖3 YB-1胞核陽(yáng)性組與陰性組患者術(shù)后輔助化療預(yù)后分析

    2.2 YB-1過表達(dá)對(duì)肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞吉西他濱藥物敏感性的影響 對(duì)照質(zhì)粒組HCCC-9810對(duì)吉西他濱的IC50為0.054 μmol,YB-1過表達(dá)后pSG5-YB-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組IC50增加至0.460 μmol,較前者升高近10倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(圖4)。

    2.3 PCR結(jié)果 pSG5-YB-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HCCC-9810細(xì)胞后,YB-1轉(zhuǎn)錄水平明顯升高(t=19.02,P<0.05),提示YB-1過表達(dá)實(shí)驗(yàn)成功。HCCC-9810細(xì)胞在過表達(dá)YB-1之后MDR1、MRP1轉(zhuǎn)錄水均明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為13.34、11.35,P值均<0.05),BCRP轉(zhuǎn)錄水平雖有升高趨勢(shì),但與YB-1過表達(dá)前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(圖5)。

    圖4 YB-1過表達(dá)對(duì)肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞吉西他濱藥物敏感性的影響 *P<0.05

    圖5 YB-1過表達(dá)對(duì)肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞MDR1、MRP1和BCRPmRNA表達(dá)的影響 *P<0.05

    3 討論

    肝內(nèi)膽管癌是一種惡性度極高的原發(fā)肝臟腫瘤,手術(shù)是目前唯一可能治愈的手段[4]。然而由于本病早期癥狀不典型,大多數(shù)患者確診時(shí)已失去手術(shù)機(jī)會(huì)。因此,對(duì)于大部分無(wú)法手術(shù)的進(jìn)展期患者來(lái)說,化療成為唯一可能改善患者預(yù)后的治療手段,但療效卻不容樂觀[4-5]。腫瘤細(xì)胞常出現(xiàn)多藥耐受性表型,是化療失敗的主要原因[6]。其中腫瘤細(xì)胞高表達(dá)藥物外排泵蛋白將細(xì)胞內(nèi)抗腫瘤藥物排至細(xì)胞外是其形成多藥耐受性表型的重要機(jī)制之一[7]。

    本研究結(jié)果顯示,YB-1在75.9%肝內(nèi)膽管癌組織中高表達(dá),主要表達(dá)于癌細(xì)胞胞漿,其中有40.9%合并胞核陽(yáng)性表達(dá)。Yasen等[8]在肝細(xì)胞癌組織中發(fā)現(xiàn),YB-1染色陽(yáng)性率為89%(73/83),其中11.0%(8/73)還同時(shí)存在YB-1胞核染色陽(yáng)性。肝癌中YB-1胞漿高表達(dá)與腫瘤門靜脈侵犯和更晚的臨床分期有關(guān)。但在本研究中,肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞YB-1陽(yáng)性表達(dá)與患者年齡、性別和臨床分期無(wú)顯著相關(guān)性。這可能與本研究的納入對(duì)象以中晚期患者為主有關(guān)。進(jìn)一步生存分析顯示,YB-1胞核表達(dá)與肝內(nèi)膽管癌術(shù)后輔助化療預(yù)后不佳明顯相關(guān),而單純YB-1胞漿表達(dá)與患者預(yù)后無(wú)明顯相關(guān)性。因此,肝內(nèi)膽管癌組織中出現(xiàn)YB-1胞核陽(yáng)性表達(dá)提示患者術(shù)后輔助化療預(yù)后不佳,與Yasen等[8]獲得的結(jié)果相似。

    既往研究[2]顯示,YB-1蛋白過表達(dá)能夠增加腫瘤多藥耐受性。本研究YB-1過表達(dá)后HCCC-9810細(xì)胞對(duì)吉西他濱的IC50升高約10倍,提示過表達(dá)YB-1蛋白后肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱的藥物耐受性明顯增加。同時(shí),HCCC0-9810過表達(dá)YB-1后MDR1和MRP1 mRNA水平均明顯升高。Shen等[9]在構(gòu)建的5-氟尿嘧啶耐藥肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞株中也發(fā)現(xiàn),MDR1和MRP1 mRNA表達(dá)水平明顯升高,而使用小干擾RNA抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路后,MDR1 mRNA表達(dá)水平隨之降低,細(xì)胞株的耐藥性也得到逆轉(zhuǎn)。在乳腺癌、卵巢癌、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤等相關(guān)研究[10-13]中,YB-1過表達(dá)或核轉(zhuǎn)移與MDR1表達(dá)水平增加明顯相關(guān)。因此,本研究結(jié)果表明YB-1蛋白過表達(dá)后可能誘導(dǎo)MDR1、MRP1基因表達(dá),增加肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞多藥耐受性,從而導(dǎo)致術(shù)后輔助化療效果不佳。然而在一項(xiàng)結(jié)腸癌細(xì)胞的研究[14]中卻發(fā)現(xiàn),過高熱誘導(dǎo)YB-1核轉(zhuǎn)移雖然能夠上調(diào)MDR1 mRNA水平,但對(duì)細(xì)胞耐藥性似乎并無(wú)明顯影響,這提示除YB-1途徑外,其他機(jī)制可能也參與了細(xì)胞多藥耐藥性的產(chǎn)生。

    [1] LYABIN DN,ELISEEVA IA,OVCHINNIKOV LP.YB-1 protein:functions and regulation[J].Wiley Interdiscip Rev RNA,2014,5(1):95-110.

    [2] ELISEEVA IA,KIM ER,GURYANOV SG,et al.Y-box-binding protein 1 (YB-1) and its functions[J].Biochemistry (Mosc),2011,76(13):1402-1433.

    [3] ZHOU X,ZANG H,LIU HL.An excerpt of intrahepatic cholangiocarcinoma:expert consensus statement[J].J Clin Hepatol,2015,31(10):1584-1587.(in Chinese) 周霞,臧紅,劉鴻凌.《2014 年美國(guó)肝膽胰學(xué)會(huì)共識(shí)聲明:肝內(nèi)膽管癌管理》摘譯[J].臨床肝膽病雜志,2015,31(10):1584-1587.

    [4] RAZUMILAVA N,GORES GJ.Classification,diagnosis,and management of cholangiocarcinoma[J].Clin Gastroenterol Hepatol,2013,11(1):13-21.

    [5] WANG X,LI XC.Research advances in palliative treatment of cholangiocarcinoma[J].J Clin Hepatol,2016,32(5):1022-1025.(in Chinese) 王荇,李相成.膽管癌姑息治療的研究進(jìn)展[J].臨床肝膽病雜志,2016,32(5):1022-1025.

    [6] KACHALAKI S,EBRAHIMI M,MOHAMED KHOSROSHAHI L,et al.Cancer chemoresistance; biochemical and molecular aspects:a brief overview[J].Eur J Pharm Sci,2016,89:20-30.

    [7] LI W,ZHANG H,ASSARAF YG,et al.Overcoming ABC transporter-mediated multidrug resistance:molecular mechanisms and novel therapeutic drug strategies[J].Drug Resist Updat,2016,27:14-29.

    [8] YASEN M,KAJINO K,KANO S,et al.The up-regulation of Y-box binding proteins (DNA binding protein A and Y-box binding protein-1) as prognostic markers of hepatocellular carcinoma[J].Clin Cancer Res,2005,11(20):7354-7361.

    [9] SHEN DY,ZHANG W,ZENG X,et al.Inhibition of Wnt/beta-catenin signaling downregulates P-glycoprotein and reverses multi-drug resistance of cholangiocarcinoma[J].Cancer Sci,2013,104(10):1303-1308.

    [10] FUJITA T,ITO K,IZUMI H,et al.Increased nuclear localization of transcription factor Y-box binding protein 1 accompanied by up-regulation of P-glycoprotein in breast cancer pretreated with paclitaxel[J].Clin Cancer Res,2005,11 (24 Pt 1):8837-8844.

    [11] XU W,ZHOU L,QIN R,et al.Nuclear expression of YB-1 in diffuse large B-cell lymphoma:correlation with disease activity and patient outcome[J].Eur J Haematol,2009,83(4):313-319.

    [12] ODA Y,OHISHI Y,BASAKI Y,et al.Prognostic implications of the nuclear localization of Y-box-binding protein-1 and CXCR4 expression in ovarian cancer:their correlation with activated Akt,LRP/MVP and P-glycoprotein expression[J].Cancer Sci,2007,98(7):1020-1026.

    [13] VAIMAN AV,STROMSKAYA TP,RYBALKINA EY,et al.Intracellular localization and content of YB-1 protein in multidrug resistant tumor cells[J].Biochemistry (Mosc),2006,71(2):146-154.

    [14] STEIN U,JüRCHOTT K,WALTHER W,et al.Hyperthermia-induced nuclear translocation of transcription factor YB-1 leads to enhanced expression of multidrug resistance-related ABC transporters[J].J Biol Chem,2001,276(30):28562-28569.

    引證本文:LIU H,JIANG L,XU XY,et al.Effect of Y-box binding protein 1 overexpression on the prognosis of patients with intrahepatic cholangiocarcinoma undergoing postoperative adjuvant chemotherapy[J].J Clin Hepatol,2017,33(2):324-328.(in Chinese)

    劉衡,姜莉,許曉勇,等.Y-box結(jié)合蛋白1過表達(dá)對(duì)肝內(nèi)膽管癌患者術(shù)后輔助化療預(yù)后的影響[J].臨床肝膽病雜志,2017,33(2):324-328.

    (本文編輯:林 姣)

    Effect of Y-box binding protein 1 overexpression on the prognosis of patients with intrahepatic cholangiocarcinoma undergoing postoperative adjuvant chemotherapy

    LIUHeng,JIANGLi,XUXiaoyong,etal.

    (DepartmentofGastroenterology,TheFirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei230022,China)

    Objective To investigate the association between Y-box binding protein 1 (YB-1) overexpression and the prognosis of patients with intrahepatic cholangiocarcinoma (ICC) undergoing postoperative adjuvant chemotherapy.Methods The paraffin-embedded specimens were collected from 58 patients with ICC who underwent surgical treatment and postoperative adjuvant chemotherapy in The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University from January 2010 to January 2015.Immunohistochemistry was used to measure the expression of YB-1 in ICC tissue; after ICC cells were transfected with YB-1 plasmid,the thiazolyl blue method was used to observe the change in gemcitabine sensitivity,and qPCR was used to observe the changes in the expression of multidrug resistance genes.The independent samplest-test was used for comparison of continuous data between two groups and a one-way analysis of variance was used for comparison of continuous data between multiple groups; the chi-square test was used for comparison of categorical data between groups.The Kaplan-Meier method was used to calculate survival rates and the log-rank test was used for survival difference analysis.Results Among the 58 patients,44 (75.9%) had high expression of YB-1 in the cytoplasm of ICC cells (cytoplasm YB-1 positive group) and 14 (24.1%) had no expression of YB-1 in the cytoplasm of ICC cells (cytoplasm YB-1 negative group).Of all patients in the cytoplasm YB-1 positive group,18 (40.9%) also had positive nuclear expression of YB-1 (nuclear YB-1 positive group); the other 40 patients had no nuclear expression of YB-1 (nuclear YB-1 negative group).The nuclear YB-1 negative group had a significantly longer survival time than the nuclear YB-1 positive group (63 months vs 28 months,χ2=17.99,P<0.05).In the control plasmid group,the half-maximal inhibitory concentration (IC50) of gemcitabine in HCCC-9810 cells was 0.054 μmol,and in the pSG5-YB-1 plasma transfection group,IC50increased to 0.460 μmol after YB-1 overexpression,which was 10 times higher than that in control plasmid group (P<0.05).There was a significant increase in the YB-1 transcriptional level after HCCC-9810 cells were transfected with pSG5-YB-1 plasmids (t=19.02,P<0.05).After YB-1 overexpression,HCCC-9810 cells had significant increases in the transcriptional levels of multidrug resistance protein 1 (MDR1) and multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1) (t=13.34 and 11.35,bothP<0.05).Conclusion YB-1 overexpression can be found in most ICC tissues,and nuclear positive expression of YB-1 may indicate the poor effect of postoperative adjuvant chemotherapy,which may be associated with the increase in multidrug resistance after the expression of MDR1 and MRP1.

    biliary tract neoplasms; Y-box-binding protein 1; drug tolerance; prognosis

    10.3969/j.issn.1001-5256.2017.02.026

    2016-09-26;

    2016-10-12。

    2016年度安徽省高校省級(jí)科學(xué)研究項(xiàng)目(KJ2016A337)

    劉衡(1982-),男,主治醫(yī)師,博士,主要從事慢性肝病臨床和基礎(chǔ)研究。

    宋育林,電子信箱:ylsongcn@163.com。

    R735.8; Q513

    A

    1001-5256(2017)02-0324-05

    猜你喜歡
    胞核胞漿膽管癌
    四川華鳊外周血液及血細(xì)胞發(fā)生的觀察
    肝臟里的膽管癌
    肝博士(2022年3期)2022-06-30 02:49:00
    B7-H4在肝內(nèi)膽管癌的表達(dá)及臨床意義
    進(jìn)行性多灶性白質(zhì)腦病
    乳頭狀腦膜瘤
    CT及MRI對(duì)肝內(nèi)周圍型膽管癌綜合診斷研究
    高齡老年抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體相關(guān)性血管炎性腎衰竭患者1例報(bào)道
    胞漿小滴、過量殘留胞漿與男性生育之間的關(guān)系
    CXCL12在膽管癌組織中的表達(dá)及意義
    肺組織胞漿菌病一例
    最近手机中文字幕大全| 亚洲成人手机| 亚洲五月色婷婷综合| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲精品456在线播放app| 青春草国产在线视频| 性色av一级| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 青春草国产在线视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产av精品麻豆| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国国产精品蜜臀av免费| 老司机亚洲免费影院| 老熟女久久久| 国产伦理片在线播放av一区| 一区二区三区精品91| 亚洲欧洲日产国产| 国产精品熟女久久久久浪| 久久久久久人妻| 久久亚洲国产成人精品v| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产成人91sexporn| 久久97久久精品| 五月天丁香电影| 三级国产精品片| h视频一区二区三区| 国产av码专区亚洲av| 91国产中文字幕| 一级毛片电影观看| 午夜激情av网站| 黄色欧美视频在线观看| 国产成人精品久久久久久| 视频区图区小说| 国产精品三级大全| 男人爽女人下面视频在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 天天影视国产精品| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产精品成人在线| 国产精品女同一区二区软件| 国产精品久久久久久精品电影小说| 蜜桃国产av成人99| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲美女黄色视频免费看| 欧美另类一区| 少妇 在线观看| 一级爰片在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 黄色怎么调成土黄色| 日日摸夜夜添夜夜爱| 伊人亚洲综合成人网| 少妇 在线观看| 黄片播放在线免费| 亚洲精品av麻豆狂野| 成人无遮挡网站| 国产黄片视频在线免费观看| 一本久久精品| 国产色爽女视频免费观看| 国产精品.久久久| av免费观看日本| 青青草视频在线视频观看| 韩国av在线不卡| 亚洲丝袜综合中文字幕| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲精品乱久久久久久| 国产精品嫩草影院av在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 丁香六月天网| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品成人在线| 久久影院123| 国产精品一区www在线观看| 国产色婷婷99| .国产精品久久| 3wmmmm亚洲av在线观看| 丝袜美足系列| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 免费大片黄手机在线观看| 国产一区二区三区av在线| 国产片内射在线| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| av黄色大香蕉| 美女中出高潮动态图| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 飞空精品影院首页| 妹子高潮喷水视频| 青春草视频在线免费观看| 国产淫语在线视频| 不卡视频在线观看欧美| 人体艺术视频欧美日本| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 伦精品一区二区三区| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产 一区精品| 国产精品免费大片| 91久久精品国产一区二区成人| a级毛片免费高清观看在线播放| 一本色道久久久久久精品综合| 99热国产这里只有精品6| 国产国语露脸激情在线看| 一级毛片 在线播放| 国产精品免费大片| 精品国产国语对白av| 亚洲欧美清纯卡通| 国产成人a∨麻豆精品| 99久国产av精品国产电影| 婷婷色综合www| 高清欧美精品videossex| 国国产精品蜜臀av免费| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 欧美日韩亚洲高清精品| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲国产精品999| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 中文字幕人妻丝袜制服| 大话2 男鬼变身卡| 人成视频在线观看免费观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 成人免费观看视频高清| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产在线一区二区三区精| 高清在线视频一区二区三区| 特大巨黑吊av在线直播| 人妻少妇偷人精品九色| 三级国产精品片| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲欧美成人精品一区二区| 精品一区二区三卡| 国产精品久久久久久久久免| av在线app专区| 高清毛片免费看| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲综合精品二区| 97在线视频观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产黄片视频在线免费观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 成人二区视频| 精品一品国产午夜福利视频| 国产精品不卡视频一区二区| 99视频精品全部免费 在线| 久久久亚洲精品成人影院| 少妇人妻 视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 亚洲,一卡二卡三卡| 久久久久精品性色| kizo精华| videosex国产| 高清午夜精品一区二区三区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 免费av不卡在线播放| 日韩av在线免费看完整版不卡| 婷婷色麻豆天堂久久| 成人国产av品久久久| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲中文av在线| 国产成人精品久久久久久| 成人国产麻豆网| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 亚洲精品自拍成人| 亚洲精品色激情综合| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲第一av免费看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 成年人午夜在线观看视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 美女大奶头黄色视频| 亚洲精品乱久久久久久| 丝袜美足系列| 国产一级毛片在线| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 亚洲av在线观看美女高潮| 99re6热这里在线精品视频| 中文天堂在线官网| 久久精品国产自在天天线| 国产精品免费大片| 99久久精品国产国产毛片| 午夜精品国产一区二区电影| 久久久欧美国产精品| 国产免费一级a男人的天堂| 蜜臀久久99精品久久宅男| 啦啦啦在线观看免费高清www| 视频中文字幕在线观看| 精品人妻熟女av久视频| av线在线观看网站| 欧美人与善性xxx| freevideosex欧美| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产免费一区二区三区四区乱码| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲精品,欧美精品| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 黄色一级大片看看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 久久午夜综合久久蜜桃| av电影中文网址| 18禁动态无遮挡网站| 99re6热这里在线精品视频| 日本与韩国留学比较| 少妇的逼好多水| 春色校园在线视频观看| 少妇 在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产成人精品久久久久久| 18禁在线播放成人免费| 极品少妇高潮喷水抽搐| 日本与韩国留学比较| 国产在视频线精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲综合色惰| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产毛片在线视频| 在线观看三级黄色| 亚洲国产精品国产精品| 国产精品成人在线| 国产成人aa在线观看| 久久久久久久久久久免费av| 国产综合精华液| 国产色爽女视频免费观看| 成人手机av| 婷婷色综合www| 91精品三级在线观看| 久久久久久伊人网av| 国产 精品1| 性高湖久久久久久久久免费观看| 七月丁香在线播放| 卡戴珊不雅视频在线播放| 久久久久久久亚洲中文字幕| 午夜日本视频在线| 精品一区在线观看国产| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产黄频视频在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 免费高清在线观看日韩| 中文字幕最新亚洲高清| 久久婷婷青草| 女人精品久久久久毛片| 嘟嘟电影网在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 高清欧美精品videossex| 国产成人freesex在线| 精品午夜福利在线看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 99久国产av精品国产电影| 国产一区二区三区综合在线观看 | 女人精品久久久久毛片| 亚洲情色 制服丝袜| 美女国产高潮福利片在线看| 三上悠亚av全集在线观看| 91精品三级在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 男人操女人黄网站| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲中文av在线| 成人国产av品久久久| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 黄色毛片三级朝国网站| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 91久久精品电影网| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 少妇被粗大猛烈的视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 亚洲成色77777| 亚洲欧洲日产国产| 久久久国产欧美日韩av| av福利片在线| 少妇 在线观看| 免费观看在线日韩| 91精品国产国语对白视频| 久久亚洲国产成人精品v| 久久人人爽人人爽人人片va| 欧美精品高潮呻吟av久久| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产片特级美女逼逼视频| 五月开心婷婷网| a级毛片免费高清观看在线播放| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 中国国产av一级| 日韩电影二区| 大码成人一级视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 这个男人来自地球电影免费观看 | 欧美最新免费一区二区三区| 黄片播放在线免费| 亚洲无线观看免费| 亚洲精品国产色婷婷电影| 日本91视频免费播放| 又大又黄又爽视频免费| 如何舔出高潮| 超色免费av| a 毛片基地| 国产有黄有色有爽视频| 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美人与善性xxx| 国产亚洲最大av| av在线老鸭窝| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 热re99久久精品国产66热6| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 在线观看免费高清a一片| 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久久精品94久久精品| 国产av一区二区精品久久| 欧美精品国产亚洲| 久久久久久久久久久丰满| 美女主播在线视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美日韩视频精品一区| 久久精品久久久久久久性| 日韩av不卡免费在线播放| 久久国内精品自在自线图片| 久久人妻熟女aⅴ| 99九九在线精品视频| 免费看光身美女| 一级二级三级毛片免费看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 欧美另类一区| 蜜桃在线观看..| 欧美国产精品一级二级三级| 秋霞伦理黄片| a级毛片免费高清观看在线播放| 97在线人人人人妻| 国产伦精品一区二区三区视频9| 少妇熟女欧美另类| 午夜日本视频在线| 久久精品夜色国产| 婷婷色麻豆天堂久久| 简卡轻食公司| 久久热精品热| 精品人妻熟女av久视频| 男女啪啪激烈高潮av片| 黄色视频在线播放观看不卡| 美女大奶头黄色视频| 精品一区二区三区视频在线| 天天操日日干夜夜撸| 在现免费观看毛片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 精品少妇内射三级| 亚洲av二区三区四区| 一区二区三区四区激情视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 九色成人免费人妻av| av在线老鸭窝| 大码成人一级视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 一区二区av电影网| 国产深夜福利视频在线观看| 久久久久久久久大av| 亚洲av在线观看美女高潮| 少妇人妻 视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 看非洲黑人一级黄片| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日韩中字成人| 久久久久久人妻| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 全区人妻精品视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 99久国产av精品国产电影| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 老司机影院成人| 欧美三级亚洲精品| 99久国产av精品国产电影| 欧美三级亚洲精品| 亚洲国产色片| 久久久亚洲精品成人影院| 精品人妻熟女av久视频| 2022亚洲国产成人精品| 青春草国产在线视频| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲精品第二区| 久久久午夜欧美精品| 人妻系列 视频| 亚洲精品自拍成人| 国产69精品久久久久777片| 中文欧美无线码| 亚洲成人一二三区av| 亚洲熟女精品中文字幕| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日本wwww免费看| 自线自在国产av| 亚洲国产av影院在线观看| 自线自在国产av| 亚洲怡红院男人天堂| 高清在线视频一区二区三区| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲av福利一区| 欧美一级a爱片免费观看看| 精品午夜福利在线看| 日韩电影二区| 久久影院123| 亚洲,欧美,日韩| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产精品不卡视频一区二区| 天美传媒精品一区二区| 亚洲经典国产精华液单| 免费观看的影片在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 99久久精品国产国产毛片| 高清黄色对白视频在线免费看| 春色校园在线视频观看| 中文天堂在线官网| 国产精品一二三区在线看| 男人操女人黄网站| 国产乱人偷精品视频| 日韩大片免费观看网站| 成年女人在线观看亚洲视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 久久国产精品大桥未久av| 国产在视频线精品| 国产永久视频网站| 99热6这里只有精品| 只有这里有精品99| 久久久久久久国产电影| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 天天影视国产精品| 日韩强制内射视频| 一个人看视频在线观看www免费| 男女高潮啪啪啪动态图| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲精品第二区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 亚洲人成网站在线播| 日本色播在线视频| 亚洲少妇的诱惑av| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 99久久精品一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 国产成人freesex在线| 嫩草影院入口| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲五月色婷婷综合| 哪个播放器可以免费观看大片| 丰满饥渴人妻一区二区三| 26uuu在线亚洲综合色| 涩涩av久久男人的天堂| 精品久久国产蜜桃| 欧美+日韩+精品| 国产成人a∨麻豆精品| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 91精品伊人久久大香线蕉| 精品久久蜜臀av无| 夜夜爽夜夜爽视频| 夫妻午夜视频| 久久鲁丝午夜福利片| 最后的刺客免费高清国语| 免费观看av网站的网址| 人妻少妇偷人精品九色| 男人操女人黄网站| 国产乱人偷精品视频| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 老女人水多毛片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 中文字幕久久专区| 国产男女内射视频| 亚洲精品一二三| xxxhd国产人妻xxx| 中文字幕人妻丝袜制服| 一级黄片播放器| 制服诱惑二区| 亚洲人成网站在线播| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚州av有码| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久青草综合色| 国产高清不卡午夜福利| 美女国产高潮福利片在线看| 在线观看免费日韩欧美大片 | 亚洲伊人久久精品综合| 欧美精品高潮呻吟av久久| 一本色道久久久久久精品综合| 午夜福利视频在线观看免费| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲性久久影院| 91久久精品国产一区二区成人| 色94色欧美一区二区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 91国产中文字幕| 亚洲av在线观看美女高潮| 色哟哟·www| 91精品一卡2卡3卡4卡| 久久97久久精品| 永久网站在线| 99热全是精品| 日韩制服骚丝袜av| 国产高清三级在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 婷婷色综合www| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 美女中出高潮动态图| 黑人欧美特级aaaaaa片| 插逼视频在线观看| 秋霞在线观看毛片| 亚洲综合色惰| 18+在线观看网站| 美女内射精品一级片tv| av网站免费在线观看视频| 国产精品久久久久久精品古装| 日韩精品有码人妻一区| 一个人免费看片子| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 国产精品一区二区在线不卡| 老司机影院毛片| 国产精品99久久99久久久不卡 | 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产男女内射视频| 国产精品.久久久| 国产精品一区www在线观看| 少妇丰满av| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 欧美性感艳星| 国产精品久久久久久久电影| 人妻系列 视频| 桃花免费在线播放| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲,一卡二卡三卡| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产成人精品婷婷| av有码第一页| 久久精品夜色国产| 美女国产视频在线观看| 尾随美女入室| 免费观看的影片在线观看| 日本av免费视频播放| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲色图综合在线观看| 满18在线观看网站| 晚上一个人看的免费电影| xxx大片免费视频| 国产欧美亚洲国产| 精品一区二区三区视频在线| 最新中文字幕久久久久| 人妻 亚洲 视频| 午夜福利视频精品| 亚洲av国产av综合av卡| 伊人久久国产一区二区| 国产片内射在线| 精品国产露脸久久av麻豆| 人妻系列 视频| 97超视频在线观看视频| 欧美+日韩+精品| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久久久久久精品精品| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美另类一区| 熟女电影av网| 丝袜在线中文字幕| √禁漫天堂资源中文www| 国产免费现黄频在线看| 少妇熟女欧美另类| 久久久久视频综合| www.av在线官网国产| a 毛片基地| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| av视频免费观看在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 91国产中文字幕| 亚洲三级黄色毛片| 国产精品久久久久久av不卡| 视频在线观看一区二区三区| 久久久国产欧美日韩av| 久久精品久久精品一区二区三区| 久久99一区二区三区| 亚洲美女搞黄在线观看| 伦理电影免费视频| 插逼视频在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 夫妻午夜视频| 熟女电影av网| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产在线视频一区二区| 丝袜脚勾引网站| 美女主播在线视频| 日韩视频在线欧美| 国产精品久久久久久av不卡| 两个人的视频大全免费| 老熟女久久久| 99国产综合亚洲精品| 水蜜桃什么品种好| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 人妻 亚洲 视频| 春色校园在线视频观看|