百令膠囊影響腎血管性高血壓患者Klotho基因和腎功能的機制分析*

陳少秀張秋芳何華瓊△

（1.湖北省十堰市太和醫(yī)院 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北 十堰 442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院，湖北 十堰 442000）

百令膠囊影響腎血管性高血壓患者Klotho基因和腎功能的機制分析*

陳少秀1張秋芳2何華瓊2△

（1.湖北省十堰市太和醫(yī)院 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北 十堰 442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院，湖北 十堰 442000）

目的 觀察百令膠囊對腎血管性高血壓（RVH）患者Klotho基因和腎功能的影響。方法 142例患者按入院先后順序隨機分為常規(guī)治療組72例和聯(lián)合治療組70例。常規(guī)治療組剔除介入和手術(shù)病例后進行保守治療；聯(lián)合治療組在此基礎(chǔ)上加服百令膠囊。兩組均于治療21 d時采血分析Klotho蛋白和Klotho-mRNA表達，檢測Klotho基因凋亡相關(guān)基因p21和p53表達，比較尿液中β2微球蛋白 （β2-MG）、尿微量白蛋白（mAlb）、尿白蛋白排泄率（UAER）、尿磷（UP）和靜脈血尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）、胱抑素C（Cys C）等指標；同時監(jiān)測收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）和心率（HR）。結(jié)果 聯(lián)合治療組總有效率為87.27%，優(yōu)于常規(guī)治療組的69.49%（P＜0.05）。兩組治療21 d后，SBP、DBP和HR與治療前均有不同程度的降低，但組間比較差別不大（P＞0.05）。常規(guī)治療組Klotho蛋白和Klotho-mRNA及凋亡相關(guān)基因p21和p53表達與治療前比較無明顯變化（均P＞0.05）。聯(lián)合治療組Klotho蛋白和Klotho-mRNA與治療前比較明顯上調(diào)，p21則下調(diào)，且優(yōu)于常規(guī)治療組（均P＜0.05），p53表達與治療前比較變化不大（P＞0.05）。兩組治療21 d后，SCr、BUN和Cys C與治療前比較均顯著下降（均P＜0.05），且聯(lián)合治療組SCr、BUN和Cys C與常規(guī)治療組比較下降更多（均P＜0.05）。兩組治療后UAER、β2-MG和mAlb與治療前比較均下降，而UP則增高（均P＜0.05），且聯(lián)合治療組的UAER、β2-MG、mAlb和UP改善均優(yōu)于常規(guī)治療組（均P＜0.05）。結(jié)論 百令膠囊通過上調(diào)K-mRNA表達，抑制腎小管上皮細胞凋亡相關(guān)基因p21表達，降低腎小管上皮細胞凋亡率，提高UP排泄而達到保護腎臟的作用，可明顯提高RVH的臨床療效。

腎血管性高血壓 百令膠囊 Klotho基因及凋亡相關(guān)基因p21 腎功能

腎血管性高血壓（RVH）屬于繼發(fā)性高血壓，占高血壓的3%～10%，死亡率高。RVH病因與腎血流量減少和腎缺血密切相關(guān)，患者多因一側(cè)和（或）雙側(cè)腎動脈狹窄造成腎血管阻塞并因此激活腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)而誘發(fā)血壓增高［1］。RVH患者腎間質(zhì)組織和結(jié)締組織增生，腎小球纖維化萎縮導(dǎo)致腎小球內(nèi)囊壓力升高，由于腎細小動脈狹窄引起腎臟血流灌注不足造成腎臟實質(zhì)性損害［2］。Klotho基因是一種新型抗衰老和腎臟保護性因子，通過調(diào)節(jié)鈣磷代謝和抗凋亡等保護腎臟［3-4］。多項研究表明，Klotho高表達可減緩腎臟損傷促進損傷腎小管內(nèi)皮修復(fù)，對延緩人類衰老和調(diào)整機體磷代謝中也起到重要作用［5］。p21和p53是重要的抑癌和抗細胞凋亡基因，參與RVH腎小管上皮細胞衰老的發(fā)生和病理改變［6］。由于Klotho主要在腎組織上表達，故Klotho表達下調(diào)也是腎損傷的標志。本研究試圖通過應(yīng)用百令膠囊治療RVH來分析其對RVH

患者Klotho基因和腎功能影響機制?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 病例選擇 1）納入標準：RVH診斷標準參照《內(nèi)科學(xué)》［7］；無高血壓家族史的突發(fā)高血壓患者。均簽署知情同意書，同意接受本研究各種療法且無病例脫落。2）排除標準：診斷應(yīng)首先排除腎外性疾病，并結(jié)合泌尿系統(tǒng)疾病常規(guī)檢查，對不能確診者可以腎動脈血管造影進行鑒別診斷和排除。排除由RVH引起的繼發(fā)性高血壓患者；患者有嚴重神經(jīng)官能癥、精神病等原因無法表達自己主訴的；患者依從性差或不適合人選的；有藥癮、哺乳期或孕期婦女者。

1.2 臨床資料 選取筆者所在醫(yī)院于2015年1月至2016年2月收治的142例RVH患者，按入院先后順序隨機分為常規(guī)治療組72例和聯(lián)合治療組70例。常規(guī)治療組剔除介入6例和手術(shù)7例，保守治療59例。聯(lián)合治療組剔除介入7例，手術(shù)8例，保守治療55例。常規(guī)治療組59例，男性28例，女性31例；年齡（29.22±7.60）歲，確診RVH時間（1.06±0.37）年。聯(lián)合治療組55例，男性 21例，女性34例；年齡（33.67± 6.32）歲，確診RVH時間（0.95±0.69）年。兩組RVH患者確診病程、年齡、性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.3 治療方法 常規(guī)治療組RVH治療應(yīng)根據(jù)臨床診斷開展相應(yīng)手術(shù)措施根治，但無論是內(nèi)科保守治療或外科手術(shù)，其基礎(chǔ)治療均應(yīng)護腎降壓為主，飲食以低鹽、低脂肪為主，禁煙酒?？诜R來酸依那普利片降壓，

無尿者用速尿利尿。根據(jù)病情靜脈滴注前列地爾護腎，及時應(yīng)用糖皮質(zhì)激素抗炎。對于由患側(cè)血流量明顯減少或雙側(cè)腎動脈狹窄的患者可行腎動脈血運重建手術(shù)。腎動脈狹窄伴有狹窄后擴張者進行旁路手術(shù)，腎動脈開口、近端1/3動脈粥樣硬化斑塊、內(nèi)膜增生病變者行動脈血栓內(nèi)膜剝除術(shù)；左腎動脈狹窄性纖維肌肉增生病變者行脾、腎動脈吻合術(shù)；腎動脈狹窄超過2 cm病變者行病變組織切除及移植置換術(shù)；腎動脈狹窄大于50%的頑固性高血壓或不用降壓藥高血壓達Ⅲ級的采用支架術(shù)。聯(lián)合治療組在常規(guī)治療組治療基礎(chǔ)上加服百令膠囊（杭州中美華東制藥有限公司，規(guī)格4 g/粒，批號：20150910036），每日3次，每次3粒，飯后口服。兩組病例療程均為21 d。

1.4 療效標準 入院第21日對所有患者進行評估。治愈：臨床癥狀消失，尿素氮、肌酐等腎臟功能正常。顯效：臨床癥狀明顯改善，腎臟功能尿素氮、肌酐下降＞30%。有效：臨床癥狀明顯改善 ，腎臟功能尿素氮、肌酐下降＞10%≤30%。無效：臨床癥狀無改善，腎臟功能尿素氮、肌酐上升或癥狀加重?？傆行剩剑ㄖ斡龜?shù)+顯效例數(shù)）/總例數(shù)×100%。

1.5 觀察指標及方法 參照文獻［8］，常規(guī)檢查腎功能，每日常規(guī)測量收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）和心率（HR）并取均值，RT-PSCR法檢測人血Klotho蛋白和lothomRNA表達及Klotho基因凋亡相關(guān)基因p21和p53表達。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件處理。計量資料以（）表示，組間均數(shù)檢驗采用多因素方差分析，兩組比較采用LSD-t檢驗。計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗或雙向方差Cmh χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床療效比較 見表1。結(jié)果示，聯(lián)合治療組療效優(yōu)于常規(guī)治療組（P＜0.05）。

表1 兩組臨床療效比較（n）

2.2 兩組治療前后心功能比較 見表2。兩組治療21 d后，SBP、DBP和HR與治療前均有不同程度降低（P＜0.05），但組間比較差別不大（P＞0.05）。

2.3 兩組治療前后Klotho基因及凋亡相關(guān)基因p21和p53表達水平比較 見表3。結(jié)果示，常規(guī)治療組Klotho蛋白和Klotho-mRNA及凋亡相關(guān)基因p21和p53表達與治療前比較無明顯變化（均P＞0.05）。聯(lián)合治療組Klotho蛋白和Klotho-mRNA與治療前比較明顯上調(diào)，p21則下調(diào)，且優(yōu)于常規(guī)治療組（均P＜0.05），p53表達與治療前比較變化不大（P＞0.05）。

表2 兩組治療前后心功能比較（）

表2 兩組治療前后心功能比較（）

與本組治療前比較，*P＜0.05；與常規(guī)治療組治療后比較，△P＜0.05。下同。

組別 時間 HR（次/min）SBP（mmHg）DBP（mmHg）聯(lián)合治療組治療前 10.79±10.76（n＝55） 治療后 83.19±9.75*常規(guī)治療組治療前 99.82±9.47 182.63±22.37 119.81±19.26 138.22±10.27*89.97±11.23*184.51±20.79 120.56±17.07（n＝59） 治療后 86.60±10.14*140.71±17.03*101.22±10.65*

表3 兩組治療前后Klotho基因及凋亡相關(guān)基因p21和p53表達水平比較（）

表3 兩組治療前后Klotho基因及凋亡相關(guān)基因p21和p53表達水平比較（）

組 別 時 間p21灰度值 p53灰度值 Klotho蛋白灰度值 Klotho-mRNA灰度值聯(lián)合治療組 治療前（n＝55） 治療后常規(guī)治療組 治療前15.02±1.37 10.79±1.09 69.34±6.291 79.57±6.21 6.22±0.26*△11.22±0.75 116.76±17.19*△106.16±14.15*△12.39±1.67 9.38±0.67 67.73±7.02 77.02±9.28（n＝59） 治療后11.71±1.07 9.77±1.07 71.89±5.22 81.81±13.23

2.4 兩組治療前后腎功能比較 見表4。兩組治療21 d后，肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）和胱抑素 C（Cys C）與治療前比較均顯著下降（均P＜0.05），且聯(lián)合治療組SCr、BUN和Cys C與常規(guī)治療組比較下降更多（均P＜0.05）。

表4 兩組治療前后腎功能比較（）

表4 兩組治療前后腎功能比較（）

組別 時間 Cys C（mg/L）SCr（μmol/L） BUN（mmol/L）聯(lián)合治療組 治療前 4.02±0.47（n＝55） 治療后 0.93±0.10*△常規(guī)治療組 治療前 3.79±0.33 172.24±24.37 29.21±5.99 91.03±10.69*△4.33±0.25*△169.57±20.72 30.57±5.21（n＝59） 治療后 1.62±0.17*109.22±12.24*7.01±0.39*

2.5 兩組治療前后尿液檢查結(jié)果比較 見表5。兩組治療后UAER、β2-MG和mAlb與治療前比較均下降，而UP則增高 （均P＜0.05），且聯(lián)合治療組的UAER、β2-MG、mAlb和UP改善均優(yōu)于常規(guī)治療組 （均P＜0.05）。

表5 兩組治療前后尿液檢查結(jié)果比較（）

表5 兩組治療前后尿液檢查結(jié)果比較（）

組 別 時間 β2-MG（mg/L） mAlb（mg/mmol·Cr）UAER（μg/min）UP（g/24 h）聯(lián)合治療組 治療前（n＝55） 治療后常規(guī)治療組 治療前2.01±0.55 9.77±0.59 180.77±30.24 0.44±0.10 0.28±0.05*△0.54±0.13*△4.02±0.35*△1.41±0.08*△1.97±0.61 9.01±0.98 185.27±32.47 0.37±0.07（n＝59） 治療后0.63±0.07*1.32±0.52*8.82±0.93*0.90±0.05*

3 討 論

冬蟲夏草具有“保肺益腎、止血化痰”之功效，含有多種氨基酸、多糖、核苷及甾醇類等化學(xué)成份，其中蟲草多糖具有護腎、抗炎及增強免疫力等作用［9-11］。臨床使用的百令膠囊是冬蟲夏草菌經(jīng)發(fā)酵制成蟲草菌粉，具有抗炎、抗脂質(zhì)過氧和調(diào)節(jié)機體免疫功能作用，并且能改善衰竭腎功能、增加腎血流量而達到護腎養(yǎng)生的目的［12］。

Klotho基因是一種新型的腎臟保護性因子，具有抗衰老作用，高血壓病致腎損害主要在腎小球，而腎小管上皮細胞凋亡在腎小管間質(zhì)病變的發(fā)生發(fā)展中也起重要作用。p21基因位于p53基因下游，是細胞周期素依賴性激酶抑制因子，它不僅對細胞有直接影響，且似乎控制著其他與衰變和疾病有關(guān)的若干基因，兩者為抑癌基因，為抗調(diào)亡因子［13-14］。觀察發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合治療組Klotho蛋白和Klotho-mRNA表達上調(diào)，p21表達下調(diào)，這說明百令膠囊對于抑制腎小管間質(zhì)病變和腎小管上皮細胞凋亡具有一定的作用，且聯(lián)合治療組UP排泄明顯提高，這對于保護腎功能起到至關(guān)重要的作用，因為UP主要從腎排泄，磷代謝紊亂也是腎臟疾病發(fā)病并造成腎功能損害的重要環(huán)節(jié)，UP排泄提高可減少腎功能損害。聯(lián)合治療組UAER、β2-MG和mAlb優(yōu)于常規(guī)治療組，顯示百令膠囊在治療RVH時可在基礎(chǔ)治療的基礎(chǔ)上擴張腎動脈，在改善微循環(huán)，增加腎血流量及腎小球濾過率等方面具有肯定作用，這有利于降低腎小管對SCr、BUN的重吸收［15］。Cys C主要反應(yīng)腎組織的炎癥反應(yīng)程度，在腎組織出現(xiàn)炎癥反應(yīng)時明顯增高，Cys C應(yīng)與百令膠囊減少炎性遞質(zhì)產(chǎn)生，抑制腎小管橫紋肌溶解，保護腎小管細胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整，以減輕腎臟實質(zhì)的損害，降低蛋白尿進而改善腎功能有關(guān)［16］。

綜上所述，百令膠囊通過上調(diào)Klotho蛋白和K-mRNA表達，抑制腎小管上皮細胞凋亡相關(guān)基因p21表達，降低腎小管上皮細胞凋亡率而實現(xiàn)腎臟保護作用，可明顯提高RVH的臨床療效。

［1］ 王磊，于芳，魏新偉，等．腎血管性和原發(fā)性高血壓患者動態(tài)血壓和動態(tài)心電圖的差異性分析［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)生，2015，53（35）：26-28.

［2］ 張遠慧.腎血管性高血壓［J］．新醫(yī)學(xué)，2006，35（5）：285-289.

［3］ 蔣雄京.RVH治療新進展［J］．中國實用內(nèi)科雜志，2012，32（1）：12-13.

［4］ 劉其鋒，葉建明，李莎莎，等．Klotho抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)減輕UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化的實驗研究［J］．中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2015，16（3）：203-206.

［5］ 趙洪剛，張遵城.Klotho在腎臟損傷疾病中的作用研究進展［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2015，44（15）：2139-2212.

［6］ 李開龍，何婭妮，杜曉蘭，等.P53-P21-R b信號通路在缺血再灌注損傷后期腎小管上皮細胞衰老中的作用［J］.醫(yī)學(xué)研究雜志，2008，37（12）：78-84.

［7］ 王海燕.泌尿系統(tǒng)疾病［M］.北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2005：198-192.

［8］ 林海仁，麥振華，粱國強，等.百令膠囊聯(lián)合硝苯地平緩釋片對高血壓合并慢性腎功能不全患者血清胱抑素C及24 h尿蛋白定量水平的影響［J］.四川醫(yī)學(xué)，2015，36（6）：869-872.

［9］ 宋艷麗，郭俐宏，朱克剛，等.百令膠囊對大鼠急性腎缺血再灌注損傷的保護作用［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2012，43（1）：25-27.

［10］周芳，張梅，李龍珠，等.冬蟲夏草菌粉對大鼠實驗性腎臟缺血/再灌注后VEGF及腎功能影響［J］.浙江臨床醫(yī)學(xué)，2015，10（9）：1678-1680.

［11］李英，陳德森，李莉，等.阿拓莫蘭聯(lián)合百令膠囊治療糖尿病腎病合并高血壓的臨床研究［J］.世界中醫(yī)藥，2014，9（3）：311-315.

［12］Juniku-Shkololli A，Manxhuka-Kerliu S，Ahmetaj H，et al. Expression of immunohisto chemical markers of progression in pre-cancerous and cance rous human colon：correlation with serum vitamin D levels［J］.Anticancer Res，2015，35（3）：1513-1520.

［13］藺昕燕，賈玉紅，郭連英，等.p53-p21通路在動脈血管平滑肌細胞衰老中的作用研究［J］.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2015，37（4）：339-344.

［14］肖云，陶立堅，Damu Tang，等.p21和p53在腎間質(zhì)纖維化大鼠中表達的研究［J］.中國醫(yī)師雜志，2010，12（2）：145-148.

［15］趙衛(wèi)東.百令膠囊減輕急性腎損傷的實驗研究［J］.吉林醫(yī)學(xué)，2011，32（11）：2083-2085.

［16］唐瑭，陳德森，彭吉霞，等.前列地爾聯(lián)合百令膠囊治療急性腎損傷435例臨床研究［J］.世界中醫(yī)藥，2014，9（6）：754-758.

Mechanism Analysis of the Effect of Bailing Capsule on Klotho Gene and Renal Function in Patients with Renal Vascular Hypertension

CHEN Shaoxiu，ZHANG Qiufang，HE Huaqiong.
Shiyan Taihe Hospital，Affiliated Hospital of Hubei Medical College，Hubei，Shiyan 442000，China.

Objective：To observe the clinical effect of treating renal vascular hypertension（RVH），and to analyse the mechanism of the effect of Bailing Capsule on Klotho gene and renal function.Methods：142 cases of RVH were randomly divided into routine treatment group and combined treatment group according to the order of admission.The conventional therapy group was treated with conservative treatment except for the cases that needed intervention and operation treatment.The combination therapy group was given Bailing Capsule on the basis of the conventional therapy group.In 21 days of treatment，blood analysis of Klotho protein，Klotho-mRNA expression，and apoptosis associated genes such as p21 and p53 expression were done.Urine beta 2 microspheres protein（β2-MG），urinary microalbumin（mAlb），urinary albumin excretion rate（UAER），urine phosphorus（UP），venous blood urea nitrogen（BUN），creatinine（SCR），Cystatin C（Cys C）and other indicators were compared.At the same time，systolic blood pressure（SBP）and diastolic blood pressure（DBP），heart rate（HR）were monitored.Results：After 21 days of treatment，the expression of Klotho protein and Klotho-mRNA was up regulated and the expression of p21 was down regulated in the combination treatment group.Compared with the conventional treatment group，the result was（P＜0.05）.Urinary mAlb，beta 2-MG，UAER decreased，BUN，Cys C and SCr decreased significantly，UP increased，the total efficiency was significantly improved in the combination treatment group.Compared with the conventional treatment group，the result was（P＜0.05）.The comparison result of the expression of SBP，DBP，HR and p53 between the two groups was（P＞0.05）.Conclusion：By increasing K-mRNA expression，Bailing Capsule inhibits the expression of p21 gene related to apoptosis of renal tubular epithelialcells，decreases the rate of apoptosis of renal tubular epithelial cells，slightly increases excretion and reaches the kidney protective effect.It can significantly improve the RVH clinical curative effect.

Renal vascular hypertension；Bailing Capsule；Klotho gene and apoptosis related gene p21；Renal function

R544.1

A

1004-745X（2017）01-0109-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.01.034

2016-05-05）

湖北省教育廳重點項目（D20122402）

△通信作者（電子郵箱：ccssxcjob@163.com）