Preparation of EGFRvⅢ-targeted high molecular polymer nanoparticles with liquid perfluorocarbon and its targeting ability evaluation in vitro

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LIU Xujie1, WANG Zhigang4, PENG Zhiping1*(1.Department of Radiological Medicine, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China;2.Department of Ultrasound, Chongqing Maternity and Child Care Center, Chongqing 400010, China;3.Department of Electrocardiography, Chongqing Zhongshan Hospital, Chongqing 400013, China;4.Institute of Ultrasound Imaging, Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China)

·基礎(chǔ)與實(shí)驗(yàn)研究·

Preparation of EGFRvⅢ-targeted high molecular polymer nanoparticles with liquid perfluorocarbon and its targeting ability evaluation in vitro

HEYanqiong1,LIUShuang2,JINGShen1,HEYujia1,ZHANGNa3,

LIUXujie1,WANGZhigang4,PENGZhiping1*(1.DepartmentofRadiologicalMedicine,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China;2.DepartmentofUltrasound,ChongqingMaternityandChildCareCenter,Chongqing400010,China;3.DepartmentofElectrocardiography,ChongqingZhongshanHospital,Chongqing400013,China;4.InstituteofUltrasoundImaging,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400010,China)

Objective To prepare an epidermal growth factor receptor variant Ⅲ (EGFRvⅢ)-targeted high molecular polymer nanoparticles with liquid perfluorocarbon, in order to evaluate its physical properties and targeting ability in vitro. Methods The specificity of EGFRvⅢ monoclonal antibody (4G1) was confirmed by Western Blot and flow cytometry (FACS). The nanoparticles of macromolecule material with liquid fluorocarbon (P-NPs) were prepared by a double emulsion solvent evaporation method. The properties and distribution of P-NPs were observed by light microscope and scanning electron microscope, and its size and potential were determined by laser particle size instrument. The P-NPs were conjugated with 4G1 by EDC/NHS to prepare a targeted ultrasound contrast agent (P-NPs-4G1), which binding rate was detected by FACS. The ultrasound imaging was observed the transition performances after irradiation by low intensity focused ultrasound (LIFU). The targeting ability of P-NPs-4G1 was evaluated by FACS and confocal microscope in vitro. Results The average size and Zeta of P-NPs-4G1 were (563.8+60.3)nm and (-32.4±3.37)mV. The binding rate of P-NPs-4G1 were (97.37±1.57)%. After irradiation by LIFU in vitro, the imaging effect of P-NPs-4G1 was enhanced; P-NPs-4G1 can bind to F98npEGFRvⅢcells (EGFR-/EGFRvⅢ+), while could not bind to F98EGFRcells (EGFR+/EGFRvⅢ-). Conclusion P-NPs-4G1 prepared in this study, can specificity bind to EGFRvⅢ positive tumor cells. After irradiation by LIFU, the imaging effect of P-NPs-4G1 is enhanced in vitro.

Ultrasonic; Contrast media; Epidermal growth factor receptor variant Ⅲ; Liquid fluorocarbon; Nanoparticles

表皮生長(zhǎng)因子受體突變體Ⅲ(epidermal growth factor receptor variant Ⅲ， EGFRvⅢ)是表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor， EGFR)最常見(jiàn)的一種缺失突變體，由于編碼EGFR的外顯子2-7缺失，導(dǎo)致外顯子1和8融合并在結(jié)合位點(diǎn)產(chǎn)生一個(gè)新的甘氨酸，其表達(dá)產(chǎn)物可在不依賴配體的情況下激活酪氨酸激酶產(chǎn)生自體磷酸化，并激活下游信號(hào)傳導(dǎo)通路產(chǎn)生級(jí)聯(lián)反應(yīng)，引起細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤發(fā)生[1]。研究[2]發(fā)現(xiàn)，EGFRvⅢ在40%～50%的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中高表達(dá)，在乳腺癌、腎癌、卵巢癌、子宮頸癌和前列腺癌中也普遍表達(dá)[3-4]。目前認(rèn)為EGFRvⅢ僅表達(dá)于腫瘤組織，在正常組織中不表達(dá)，且腫瘤惡性程度越高，其表達(dá)水平也越高。因此，腫瘤EGFRvⅢ表達(dá)的檢測(cè)，是惡性腫瘤診斷和靶向治療的理想靶點(diǎn)[5]。本研究旨在以EGFRvⅢ為靶點(diǎn)，制備靶向EGFRvⅢ包裹液態(tài)氟碳的高分子納米球(P-NPs-4G1)，并在EGFRvⅢ陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞株上驗(yàn)證P-NPs-4G1體外靶向結(jié)合能力，以期為表達(dá)EGFRvⅢ的腫瘤提供一種有效的超聲分子影像學(xué)檢測(cè)手段。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 細(xì)胞株 大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞F98EGFR(EGFR+/EGFRvⅢ-)、F98npEGFRvⅢ(EGFR-/EGFRvⅢ+)，購(gòu)自美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)。

1.1.2 試劑 聚乳酸羥基乙酸共聚物(PLGA，聚合比50∶50，岱罡生物科技有限公司)；液態(tài)全氟戊烷(PFP，百靈威科技有限公司)；聚乙烯醇(PVA，Sigma-Aldrich)；NHS/EDC(Sigma-Aldrich)；抗EGFRvⅢ單克隆抗體：4G1(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部同位素研究中心惠贈(zèng))；抗β-actin單克隆抗體(ImmunoWay)；DyLight488-山羊抗鼠IgG(Abbkine)；DiI(碧云天生物科技有限公司)；異丙醇、二氯甲烷(川東化工有限公司)。

1.1.3 儀器及耗材 聲震儀(Sonic)；高速分散均質(zhì)機(jī)(XHF-D)；Olympus TH4-200倒置熒光顯微鏡；激光粒徑測(cè)量?jī)x(ZEN3600，Malvern)；低強(qiáng)度聚焦超聲(low-intensity focused ultrasound, LIFU)治療儀(重慶醫(yī)科大學(xué)超聲分子影像學(xué)研究所)；掃描電子顯微鏡(JSM-7800F)；激光共聚焦掃描顯微鏡(Leica TCSSP5 II)；超聲診斷儀(MyLab90，Esaote)；

1.2方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及4G1抗體靶向特異性的驗(yàn)證 采用DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)F98EGFR和F98npEGFRvⅢ細(xì)胞，取對(duì)數(shù)期細(xì)胞，0.05%胰酶消化后離心，加入適量RIPA裂解液，提取細(xì)胞蛋白，BCA法進(jìn)行蛋白定量。取蛋白質(zhì)樣品(20 μg總蛋白量/泳道)加入適量上樣緩沖液，100℃煮沸5 min，8% SDS-PAGE電泳后轉(zhuǎn)印至聚偏二氟乙烯(Polyvinylidenefluoride， PVDF)膜上，5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，按1∶500(抗體:工作液)加入4G1，4℃孵育過(guò)夜，TBST洗滌多次。按1∶1 000加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗，室溫孵育1 h，TBST洗滌數(shù)次。ECL發(fā)光試劑顯色于X膠片。采用ImageLab凝膠圖像分析系統(tǒng)掃描膠片，以內(nèi)參的面積灰度值與實(shí)驗(yàn)組比較進(jìn)行半定量分析。另取對(duì)數(shù)期細(xì)胞，0.05%胰酶消化后計(jì)數(shù)，取2.0×106個(gè)細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組加入6 μg 4G1，對(duì)照組加入等量IgG抗體，室溫孵育1 h，PBS洗滌離心3次(1 000 rpm，3 min)，按1∶1 000加入DyLight 488-山羊抗鼠二抗，室溫孵育30 min，PBS洗滌離心3次后重懸，進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。

1.2.2P-NPs及P-NPs-4G1的制備及性質(zhì)檢測(cè) 稱取50 mg PLGA和適量DiI溶解于2 ml二氯甲烷中，充分溶解后加入適量PFP，置于冰浴中，聲震儀聲振3 min；加入8 ml 4% PVA溶液，均質(zhì)機(jī)均質(zhì)5 min，在磁力攪拌器上揮發(fā)二氯甲烷3～5 h，雙蒸水洗滌離心2次(9 000 rpm，5 min)，制得DiI標(biāo)記的P-NPs，4℃冰箱保存；取適量DiI標(biāo)記的P-NPs用MES緩沖液(0.1 mol/L，pH 5.5)重懸，加入適量的EDC/NHS(質(zhì)量比EDC∶NHS=1∶3)，4℃、150 rpm搖床上孵育2 h，雙蒸水洗滌離心2次去除未反應(yīng)的EDC/NHS，用MES緩沖液(0.1 mol/L，pH 8.0)重懸至適宜濃度，加入60 μl 4G1，4℃、150 rpm搖床上孵育過(guò)夜，雙蒸水洗滌離心多次后制得DiI標(biāo)記的P-NPs-4G1。光鏡及掃描電鏡觀察形態(tài)及分布；Malvern激光粒徑測(cè)量?jī)x檢測(cè)粒徑和Zeta電位。取500 μl DiI標(biāo)記的P-NPs-4G1，加入5 μl DyLight 488-山羊抗鼠二抗，4℃孵育1 h，洗滌離心2次后PBS重懸，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定二者連接率，共聚焦顯微鏡檢測(cè)P-NPs與4G1的連接情況。

1.2.3 P-NPs-4G1體外相變實(shí)驗(yàn) 將適宜濃度的P-NPs-4G1滴在放有載玻片的加熱板上，設(shè)置加熱板溫度，在光鏡下連續(xù)、動(dòng)態(tài)觀察P-NPs-4G1隨加熱板溫度升高而發(fā)生相變的情況。另取適量P-NPs-4G1置于凝膠模塊中，LIFU輻照3 min(功率7 W)，超聲診斷儀(機(jī)械指數(shù)0.7)記錄LIFU輻照前后P-NPs-4G1在B模式及造影模式下的顯像圖。

1.2.4 P-NPs-4G1體外靶向結(jié)合實(shí)驗(yàn) 取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的F98EGFR及F98npEGFRvⅢ細(xì)胞，0.05%胰酶消化后計(jì)數(shù)，取1.5×103個(gè)細(xì)胞接種至共聚焦培養(yǎng)皿，待細(xì)胞完全貼壁后，加入500 μl濃度為1 mg/ml DiI標(biāo)記的P-NPs-4G1共孵育1 h，4%多聚甲醛固定20 min，DAPI染核10 min，共聚焦顯微鏡觀察DiI標(biāo)記的P-NPs-4G1與細(xì)胞結(jié)合情況；另取1.5×106個(gè)細(xì)胞，加入等量DiI標(biāo)記的P-NPs-4G1，室溫孵育2 h，PBS洗滌離心(5000 rpm，3 min)2次后重懸，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)P-NPs-4G1與細(xì)胞特異性結(jié)合情況。

2 結(jié)果

2.1 4G1的靶向特異性 Western Blot結(jié)果顯示：4G1可特異性地與EGFRvⅢ蛋白結(jié)合出現(xiàn)免疫印跡條帶，而不與野生型EGFR蛋白結(jié)合；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)示：4G1可與F98npEGFRvⅢ細(xì)胞特異性結(jié)合，而不與F98EGFR細(xì)胞結(jié)合。見(jiàn)圖1。

圖1 4G1的靶向特異性檢測(cè) A.Western Blot結(jié)果； B.F98EGFR細(xì)胞靶向性； C.F98npEGFRvⅢ細(xì)胞靶向性 (P2：未與4G1結(jié)合的細(xì)胞所占比例；P3：與4G1結(jié)合細(xì)胞所占比例) 圖2 共聚焦顯微鏡觀察4G1與P-NPs的連接 A.P-NPs-4G1外殼呈紅色； B.連接熒光二抗后P-NPs-4G1呈綠色； C.融合后呈黃色

圖3 流式細(xì)胞術(shù)測(cè)4G1與P-NPs連接率 (P2：未連接4G1的P-NPs所占比例；P3：連接4G1的P-NPs所占比例) 圖4 光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡下的P-NPs-4G1的形態(tài)特征 A. 光學(xué)顯微鏡觀察(×600); B.掃描電鏡觀察(×10 000)

圖5 激光粒徑儀檢測(cè)P-NPs-4G1粒徑和電位 A.粒徑; B.Zeta電位

2.2 4G1與P-NPs耦聯(lián)情況 共聚焦顯微鏡下可見(jiàn)P-NPs-4G1外殼呈紅色，連接熒光二抗后的P-NPs-4G1呈綠色，融合通道下兩種熒光疊加呈黃色，表明4G1成功連接到P-NPs表面；流式細(xì)胞術(shù)測(cè)得4G1與P-NPs的連接率為(97.37±1.57)%。見(jiàn)圖2、3。

2.3 P-NPs-4G1的基本特征 光學(xué)顯微鏡觀察P-NPs-4G1形態(tài)規(guī)則，分散良好；掃描電鏡下見(jiàn)P-NPs-4G1呈球形或類球形，表面光滑，形態(tài)規(guī)則；P-NPs-4G1粒徑為(563.8±60.3)nm，Zeta電位電位為(-32.4±3.37)mV。見(jiàn)圖4、5。

2.4 P-NPs-4G1體外相變 光學(xué)顯微鏡下連續(xù)動(dòng)態(tài)觀察加熱板上P-NPs相變情況，加熱板溫度為43.8℃時(shí)，開(kāi)始有微氣泡產(chǎn)生，溫度升高至70℃，微氣泡產(chǎn)生增多并聚集，持續(xù)6～8 min后，微氣泡開(kāi)始出現(xiàn)破裂。采用超聲診斷儀采集P-NPs-4G1在B模式及造影模式下的初始狀態(tài)和LIFU輻照相變后的圖像：LIFU輻照后造影模式下顯像效果顯著增強(qiáng)，通過(guò)灰度分析軟件比較相變前后超聲圖像的平均回聲強(qiáng)度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖6、7。

2.5 P-NPs-4G1的體外靶向能力 激光共聚焦顯微鏡下觀察P-NPs-4G1與腫瘤細(xì)胞的靶向結(jié)合能力顯示：F98npEGFRvⅢ細(xì)胞周圍可見(jiàn)大量P-NPs-4G1聚集，而F98EGFR細(xì)胞周圍無(wú)P-NPs-4G1聚集；流式細(xì)胞術(shù)測(cè)得P-NPs-4G1與F98npEGFRvⅢ細(xì)胞特異性結(jié)合率達(dá)(94.68±1.06)%，而不與F98EGFR細(xì)胞特異性結(jié)合。見(jiàn)圖8、9。

圖6 光學(xué)顯微鏡觀察熱相變(×10) A.加熱前； B.43.6℃時(shí)，P-NPs開(kāi)始相變產(chǎn)生微氣泡(箭)； C.溫度升高至70℃，相變P-NPs增多聚集并破裂(箭)

圖7 超聲診斷儀采集圖像 A.P-NPs-4G1輻照前顯像圖; B.P-NPs-4G1經(jīng)LIFU輻照后顯像圖 圖8 共聚焦顯微鏡觀察P-NPs-4G1與細(xì)胞的靶向結(jié)合 A.P-NPs-4G1與F98EGFR細(xì)胞未結(jié)合; B.P-NPs-4G1與F98npEGFRvⅢ細(xì)胞特異性結(jié)合 圖9 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)P-NPs-4G1與細(xì)胞的結(jié)合 A.P-NPs-4G1與F98EGFR; B.P-NPs-4G1與F98npEGFRvⅢ

3 討論

EGFR及其介導(dǎo)的信號(hào)通路在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中有重要作用。但EGFR的表達(dá)不穩(wěn)定，常出現(xiàn)基因擴(kuò)增或重排而導(dǎo)致基因突變，使腫瘤細(xì)胞表面的抗原表型發(fā)生改變。其中EGFRvⅢ是最常見(jiàn)的突變體之一。EGFRvⅢ的表達(dá)可影響腫瘤的多種生物學(xué)特性，包括腫瘤細(xì)胞的增殖能力、侵襲和遷移能力、致瘤能力等，且均與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。EGFRvⅢ的表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞侵襲遷移能力及致瘤性明顯增強(qiáng)[6]。腫瘤組織表達(dá)EGFRvⅢ后其抗輻射的能力也增強(qiáng)，因此腫瘤患者常出現(xiàn)術(shù)后放化療抵抗，使EGFRvⅢ陽(yáng)性腫瘤的治療成為一個(gè)難題[7]。此外，EGFRvⅢ表達(dá)與惡性腫瘤的預(yù)后也密切相關(guān)：對(duì)術(shù)后生存期超過(guò)1年的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者，腫瘤組織中EGFRvⅢ陽(yáng)性表達(dá)率越高則其復(fù)發(fā)率越高、預(yù)后也越差[8]。因此，對(duì)腫瘤EGFRvⅢ表達(dá)的檢測(cè)，有助于腫瘤的診斷及診斷后制定合理的個(gè)體化治療方案和藥物選擇。目前，針對(duì)EGFRvⅢ的檢測(cè)手段主要有免疫組化、MR、核醫(yī)學(xué)顯像等[9]，由于免疫組化是一種有創(chuàng)檢測(cè)，MR和核醫(yī)學(xué)顯像目前還處于實(shí)驗(yàn)階段且價(jià)格昂貴，同時(shí)核醫(yī)學(xué)顯像還存在輻射等不足。因此，需有一種簡(jiǎn)便、易行、經(jīng)濟(jì)、無(wú)創(chuàng)、安全、高效的檢測(cè)手段。

靶向超聲分子影像學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)便易行，可動(dòng)態(tài)、實(shí)時(shí)、重復(fù)地對(duì)靶組織進(jìn)行觀察并多次成像[10-12]，同時(shí)又可設(shè)計(jì)多模態(tài)、單靶點(diǎn)、多靶點(diǎn)等多種不同超聲分子探針，成為近年來(lái)國(guó)內(nèi)外超聲相關(guān)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)[13-14]。目前，靶向超聲分子造影劑的成膜材料主要有磷脂和納米高分子材料兩類。其中，有研究[15]已將不同顯像分子、特殊基團(tuán)和靶向藥物等與納米材料連接，制備出具有多功能的納米粒。高分子液態(tài)氟碳納米粒是納米生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域最具代表性的納米粒之一，PLGA包裹的液態(tài)氟碳納米粒除具有理化性質(zhì)穩(wěn)定、體內(nèi)可降解、降解產(chǎn)物安全無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)[16]，還可自由穿過(guò)血管內(nèi)皮間隙到達(dá)腫瘤組織周圍，并可在一定條件下發(fā)生液氣相轉(zhuǎn)變，形成微氣泡以增強(qiáng)超聲顯像效果，從而實(shí)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞甚至亞細(xì)胞水平的靶向超聲分子顯像[17-18]。

本研究采用表面帶有大量羧基的PLGA-COOH材料為外殼包裹液態(tài)氟碳，制成液態(tài)氟碳納米粒(P-NPs)，可與表面帶有氨基的單克隆抗體等生物活性物質(zhì)通過(guò)共價(jià)鍵耦聯(lián)。所用4G1(北京大學(xué)同位素研究中心研制并已申請(qǐng)專利)是一種抗EGFRvⅢ的單克隆抗體，本研究證實(shí)4G1對(duì)EGFRvⅢ具有良好的靶向性，可與EGFRvⅢ表達(dá)陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞特異性結(jié)合。本研究通過(guò)EDC/NHS將4G1與P-NPs耦聯(lián)制得P-NPs-4G1，發(fā)現(xiàn)其在體外可與EGFRvⅢ陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞特異性結(jié)合，聲熱作用下能發(fā)生液氣相轉(zhuǎn)變，進(jìn)而進(jìn)行靶向超聲分子顯像，為后期EGFRvⅢ陽(yáng)性腫瘤體內(nèi)靶向超聲分子顯像，以及靶向載藥治療均奠定了良好的基礎(chǔ)。今后將通過(guò)裸鼠腫瘤模型對(duì)P-NPs-4G1體內(nèi)靶向超聲分子顯像進(jìn)行研究。

綜上所述，本研究成功制備的P-NPs-4G1靶向超聲造影劑，可特異性地與EGFRvⅢ陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞相結(jié)合，體外聲致相變后可顯著增強(qiáng)超聲顯像效果，有望成為一種用于EGFRvⅢ陽(yáng)性腫瘤檢測(cè)的新型靶向超聲造影劑。

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國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金(81501520)、國(guó)家自然科學(xué)基金重慶科學(xué)技術(shù)基金(cstc2015jcyjA10021)。

何燕瓊(1991—)，女，四川南部人，在讀碩士。研究方向：腫瘤放射治療的生物效應(yīng)。E-mail: joanheyq0706@hotmail.com

彭志平，重慶醫(yī)科大學(xué)放射醫(yī)學(xué)教研室，400016。E-mail: pzp888@aliyun.com

2016-08-28

2016-11-11

靶向EGFRvⅢ包裹液態(tài)氟碳的高分子納米球的制備及其體外靶向能力的評(píng)價(jià)

何燕瓊1，劉 雙2，景 珅1，何雨佳1，張 娜3，劉旭杰1，王志剛4，彭志平1*

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)放射醫(yī)學(xué)教研室，重慶 400016；2.重慶市婦幼保健院超聲科，重慶 400010；3.重慶市人民醫(yī)院中山院區(qū)心電圖室，重慶 400013；4.重慶醫(yī)科大學(xué)超聲影像學(xué)研究所，重慶 400010)

超聲學(xué)；造影劑；表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體突變體Ⅲ；液態(tài)氟碳；納米球

TB559

A

1672-8475(2017)01-0039-06

目的 制備靶向表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體突變體Ⅲ(EGFRvⅢ)并包裹液態(tài)氟碳高分子納米球，評(píng)價(jià)其性質(zhì)和體外靶向結(jié)合能力。方法 采用Western Blot和流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證抗EGFRvⅢ單克隆抗體(4G1)的特異性；雙乳化溶劑揮發(fā)法制備包裹液態(tài)氟碳的高分子納米球(P-NPs)，光鏡和掃描電鏡觀察其形態(tài)及分布；激光粒徑儀檢測(cè)其粒徑及電位；碳二亞胺法耦聯(lián)4G1制備P-NPs-4G1，流式細(xì)胞術(shù)觀察二者連接情況；超聲觀察其體外經(jīng)低強(qiáng)度聚焦超聲(LIFU)致相變后的表現(xiàn)；流式細(xì)胞術(shù)和共聚焦顯微鏡檢測(cè)P-NPs-4G1體外靶向結(jié)合能力。結(jié)果 P-NPs-4G1粒徑為(563.8±60.3)nm，Zeta電位為(-32.4±3.37)mV；4G1與P-NPs的連接率為(97.37±1.57)%；P-NPs-4G1在體外經(jīng)LIFU輻照后可增強(qiáng)其顯像效果；體外靶向?qū)嶒?yàn)證實(shí)P-NPs-4G1可與F98npEGFRvⅢ(EGFR-/EGFRvⅢ+)細(xì)胞特異性結(jié)合，且不與F98EGFR(EGFR+/EGFRvⅢ-)細(xì)胞結(jié)合。結(jié)論 本研究成功制備P-NPs-4G1，經(jīng)體外LIFU輻照后可顯著增強(qiáng)超聲顯像效果，同時(shí)可與F98npEGFRvⅢ細(xì)胞特異性結(jié)合。

10.13929/j.1672-8475.201608036