• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    心痛方對急性心肌梗死大鼠SERCA2a mRNA表達及心律失常的影響*

    2017-02-21 09:13:23歐陽過范金茹周斐然陳彤謝榮苑王建湘廖建萍
    中國中醫(yī)急癥 2017年1期
    關(guān)鍵詞:方組心痛中醫(yī)藥大學(xué)

    歐陽過范金茹周斐然陳 彤謝榮苑王建湘廖建萍

    (1.湖南中醫(yī)藥大學(xué),湖南 長沙410208;2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,湖南 長沙 410007)

    ·研究報告·

    心痛方對急性心肌梗死大鼠SERCA2a mRNA表達及心律失常的影響*

    歐陽過1范金茹2△周斐然2陳 彤2謝榮苑1王建湘2廖建萍2

    (1.湖南中醫(yī)藥大學(xué),湖南 長沙410208;2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,湖南 長沙 410007)

    目的 通過觀察心痛方對急性心肌梗死大鼠SERCA2a mRNA表達及心律失常的影響,探討心痛方防治急性心肌梗死后心律失常的療效機制。方法 40只SD大鼠分為假手術(shù)組、模型組、心痛方組、硫氮 酮組。采用結(jié)扎法制備心肌梗死模型,運用RT-PCR法測定SERCA2a mRNA表達,結(jié)扎后心電圖檢測心律失常。結(jié)果 心痛方組能顯著增加SERCA2a mRNA表達(P<0.05),降低心律失常發(fā)生率(P<0.05)。結(jié)論 心痛方對急性心肌梗死大鼠具有保護作用,其作用機制可能與增加SERCA2a mRNA的表達,從而降低心律失常發(fā)生有關(guān)。

    心痛方 急性心肌梗死 并發(fā)癥 鈣穩(wěn)態(tài) SERCA2a mRNA

    最新報告,2014年中國急性心肌梗死死亡率:城市55.32/10萬,農(nóng)村68.60/10萬[1],嚴(yán)重危害人類健康。其中,急性心肌梗死后發(fā)生的惡性心律失常是致死的重要并發(fā)癥之一[2]。因此,尋求能防治心肌梗死后心律失常的有效藥物,成為科研工作者面臨的重要課題。心痛方的前期臨床及實驗研究證實對冠心病療效確切,為進一步揭示其防治急性心肌梗死后心律失常的療效機制,本課題從鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)著手,對Ca2+通道相關(guān)基因SERCA2a mRNA進行了研究?,F(xiàn)報告如下。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 清潔級SD雄性大鼠40只,體質(zhì)量200~250 g,鼠齡8~10周,購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司,許可證號:SCXK(湘)2011-003。

    1.2 儀器與試劑 生物機能實驗系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司,BL-420F);動物人工呼吸機(浙江醫(yī)科大學(xué)儀器實驗廠,DH-140);熒光定量PCR儀(廠家ABI,Step One Plus);臺式高速冷凍離心機(Heal Force,Neofuge 15R);PCR試劑盒、PCR引物 (武漢谷歌生物試劑有限公司提供)。

    1.3 實驗藥物 心痛方中藥超微顆粒(柴胡、瓜蔞、川芎、桃仁、蒲黃、白芥子、郁金、九香蟲、甘草)購于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房,批號:681211。硫氮酮,湖南中達騖馬制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn),國藥準(zhǔn)字號:H20065734。

    1.4 分組與造模 SD大鼠40只按體質(zhì)量分層后,再按隨機表隨機分組,分為假手術(shù)組、模型組、心痛方組、硫氮 酮組,每組10只。以結(jié)扎冠狀動脈前降支建立大鼠急性心肌梗死模型[3-4]。穿線或結(jié)扎后即刻記錄心電圖,以左室前壁呈紫紺或Ⅱ?qū)?lián)S-T段弓背向上抬高大于0.1 mV并持續(xù)0.5 h以上,并于結(jié)扎點下心肌顏色改變?yōu)榻Y(jié)扎成功標(biāo)志(S-T段無改變者淘汰)。假手術(shù)組僅開胸,不結(jié)扎。40只大鼠,手術(shù)中模型組死亡1只,造模后用藥前假手術(shù)組、硫氮 酮組、心痛方組各死亡1只,每組納入實驗大鼠為9只。造模用藥后假手術(shù)組大鼠未出現(xiàn)心律失常及死亡;模型組7只發(fā)生心律失常(其中5例室性早搏,1例室速,1例室顫),3只大鼠死亡;硫氮 酮組6只發(fā)生心律失常(其中2例室性早搏,2例房性心律失常,1例傳導(dǎo)阻滯,1例室速),2只大鼠死亡;心痛方組1只發(fā)生心律失常 (室速),1只大鼠死亡,其中死亡大鼠均發(fā)生了心律失常。1.5 給藥方法 手術(shù)后給藥7 d(前3 d給藥同時予青霉素鈉肌注抗感染),均采用灌胃法給藥,以60 kg人為標(biāo)準(zhǔn),參照劑量-體表面積換算方法計算大鼠給藥量,藥物劑量按大鼠1 mL/100 g灌胃容量配制,心痛方組采用中藥超微顆粒沖調(diào)成湯劑,濃縮后以1.08 g/kg的劑量給藥,硫氮 酮組以2.61 mg/kg的劑量配好藥液灌胃,模型組和假手術(shù)組均予以等量生理鹽水灌服,每天1次,連續(xù)7 d,于第7天灌胃30 min后處死大鼠。

    1.6 標(biāo)本采集與檢測 1)RT-PCR法測定SERCA2a mRNA表達。取左心室心?。ńY(jié)扎缺血及壞死區(qū)域)約50 mg,將其剪碎,放入1 mL的Trizo液中,用1‰DEPC水浸泡過的電動勻漿器勻漿,Trizo法提取RNA,參考AMV逆轉(zhuǎn)錄酶說明書進行逆轉(zhuǎn)錄。根據(jù)基因庫基因序列,以Primer5軟件進行設(shè)計SERCA2a mRNA和β-actin引物:SERCA2a引物,上游5′-AGATAGCGGG CATACTG-3′,下游5′-TCTATCGCCCGTATGAC-3′,擴增片段長592 bps;β-actin引物,上游5′-CACTATC GGCAATGAGCG-3′,下游5′-GTGATAGCCGTTACTC GC-3′,擴增片段長223 bps。通過凝膠圖像分析儀實行吸光度掃描來觀察條帶的灰度強弱,SERCA2a mRNA吸光度值同GAPDH吸光度的比值來表示結(jié)果。2)大鼠心律失常、死亡的觀察。觀察大鼠心律失常、死亡的發(fā)生:常規(guī)記錄在第1次在造模(或假手術(shù))成功后給藥前;第2次在給藥后第7天,大鼠處死前。并根據(jù)實際情況隨時記錄。

    1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理。所有實驗數(shù)據(jù)以()表示,多組間均數(shù)比較用單因素方差分析,率的比較采用χ2檢驗,兩者相關(guān)關(guān)系分析采用秩相關(guān)Kendall法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 心痛方對急性心肌梗死大鼠心肌內(nèi) SERCA2a mRNA表達的影響 見表1。與假手術(shù)組比較,模型組、硫氮 酮組、心痛方組ERCA2a mRNA表達均減少(P<0.05或P<0.01)。與模型組比較,硫氮 酮組、心痛方組ERCA2a mRNA表達增加(P<0.01),與硫氮 酮組比較,心痛方組ERCA2a mRNA表達增高(P<0.05)。30只大鼠SERCA2a mRNA PCR擴增曲線見圖1。

    表1 心痛方對大鼠急性心肌梗死大鼠SERCA2a mRNA表達的影響()

    表1 心痛方對大鼠急性心肌梗死大鼠SERCA2a mRNA表達的影響()

    與假手術(shù)組比較,△P<0.05,△△P<0.01;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01;與硫氮 酮組比較,#P<0.05。下同。

    組別 n SERCA2a mRNA假手術(shù)組 9模型組 6硫氮酮組 7 1.56±0.23 0.69±0.14△△1.07±0.16△△**心痛方組 81.32±0.17△**#

    圖1 各組大鼠SERCA2a mRNA PCR擴增曲線

    2.2 心痛方對急性心肌梗死大鼠并發(fā)心律失常、死亡的影響 見表2。與假手術(shù)組比較,模型組及硫氮 酮組心律失常發(fā)生率明顯增高(P<0.01),心痛方組心律失常發(fā)生率無明顯差異(P>0.05)。與模型組比較,心痛方組心律失常發(fā)生率明顯降低(P<0.05),硫氮 酮組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與硫氮 酮組比較,心痛方組心律失常發(fā)生率明顯降低(P<0.05)。各組死亡率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

    表2 心痛方對大鼠急性心肌梗死大鼠并發(fā)死亡、心律失常的影響n(%)

    2.3 急性心肌梗死大鼠SERCA2a mRNA表達與心律失常相關(guān)性分析 未發(fā)生心律失常大鼠SERCA2a mRNA基因表達為(1.37±0.28)高于心律失常組的(0.79± 0.20)(P<0.05),心律失常與SERCA2a mRNA基因表達呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)。

    3 討 論

    冠心病屬中醫(yī)“胸痹心痛”范疇,病機為本虛標(biāo)實,虛實夾雜。急性心肌梗死時以邪盛標(biāo)實(痰瘀)為主,后期發(fā)展多因?qū)嵵绿?,虛實夾雜,痰飲瘀血交阻常常引發(fā)心悸。研究發(fā)現(xiàn)[5-7],中藥能有效防治急性心肌梗死后心律失常發(fā)生。

    心律失常是急性心肌梗死常見的并發(fā)癥之一[8-9],具有較高的死亡率。研究提示,其發(fā)病的過程可能是鈣穩(wěn)態(tài)失衡,Na2+-Ca2+交換誘導(dǎo)細胞產(chǎn)生動作電位,從而引起心臟的異常電信號傳導(dǎo)或收縮[10]。心肌Ca2+濃度增加可能是急性心肌缺血早期室性心律失常的主要機制[11]。SERCA是心肌肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶,主要保持細胞內(nèi)Ca2+濃度的穩(wěn)定,當(dāng)SERCA2a表達增強時,鈣超載減少,因而對心肌具有明顯的保護作用[12]。本研究提示,大鼠心肌梗死后發(fā)生了SERCA2a活性變化,硫氮 酮組及心痛方組可增加SERCA2a活性。心律失常組大鼠SERCA2a mRNA表達明顯低于未發(fā)生心律失常組,提示心律失常發(fā)生與SERCA2a活性密切相關(guān),兩者關(guān)系呈負(fù)直線相關(guān)。此外,與模型組比較,心痛方組能減少大鼠心律失常發(fā)生率。綜上可知,心痛方組能通過增加SERCA2a活性,從而減少心律失常發(fā)生。

    心痛方是臨床上治療不穩(wěn)定型心絞痛的有效驗方,臨床療效確切,前期動物實驗從炎癥反應(yīng)通路證實心痛方能縮小大鼠心肌梗死面積,抑制PLT-WBC相互反應(yīng),從而對受損心肌有保護作用[13-15]。方中以柴胡、栝蔞為君藥,柴胡遵“木郁達之”之旨,疏肝解郁,栝蔞清熱化痰,寬胸散結(jié),二藥相合,一以治肝兼治痰瘀,一以治痰散結(jié)兼以疏肝,共奏肝心并治之功;川芎、桃仁、蒲黃為臣,川芎搜肝氣、補肝血、潤肝燥;桃仁活血,生血,緩肝也;蒲黃導(dǎo)瘀結(jié)而治氣血凝滯之痛,三者并用活血化瘀通絡(luò)止痛;白芥子、郁金為佐藥輔佐君藥及臣藥,白芥子能利氣豁痰、除寒暖中,郁金能行氣解郁、泄血破瘀;九香蟲為使藥,一者取其引經(jīng)搜剔之功,二者取其活血不礙脾胃之妙;甘草調(diào)和諸藥。全方共奏理氣化瘀、豁痰通絡(luò)止痛之功效。綜上所述,心痛方的疏肝豁痰祛瘀法可能改變了心肌梗死后冠脈的微環(huán)境,通過提高SERCA2a活性,調(diào)節(jié)鈣穩(wěn)態(tài),從而降低心肌梗死后心律失常發(fā)生,減少死亡。

    [1] 陳偉偉,高潤霖,劉力生,等.《中國心血管病報告2015》概要[J].中國循環(huán)雜志,2016,31(6):521-528.

    [2] 肖麗婷,王小康.中醫(yī)辨證聯(lián)合利多卡因治療急性心肌梗死心律失常患者的臨床療效[J].遼寧中醫(yī)雜志,2014,41(12):2615-2617.

    [3] 黃紹湘,路超,李峰,等.大鼠心肌梗死模型的建立[J].遼寧中醫(yī)雜志,2014,41(3):586-588.

    [4] 陳學(xué)娟,范金茹,廖建萍,等.冠脈結(jié)扎法大鼠心肌梗死模型的改進[J].中國中醫(yī)急癥,2014,23(10):1806-1807.

    [5] 劉建和,楊成龍,蘇聯(lián)軍,等.柴胡三參膠囊對缺血性心律失常大鼠模型心肌細胞HERG K~+通道蛋白的研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2016,36(6):16-19.

    [6] 劉錦霞,劉建和.柴胡三參膠囊治療室性期前收縮35例臨床觀察[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報,2015,21(9):63-65.

    [7] 趙梅,郭振豐,李天時,等.丹參酮ⅡA對大鼠實驗性心肌梗死心律失常機制研究[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2016,36(17):1452-1455.

    [8] Mani S,Kristian DT,Magnus AJ,et al.Beta-Adrenoceptor stimulation reveals Ca2+waves and sarcoplasmic reticulum Ca2+depletion in left ventricular cardiomyocytes from post-infarction rats with and without heart failure[J].Plos One,2016,11(4):e0153887.

    [9] Aurora AB,Mahmoud AI,Luo X,et al.MicroRNA-214 protects the mouse heart from ischemic injury by controlling Ca2+overload and cell death[J].Journal of Clinical Investigation,2012,122(4):1222-1232.

    [10]Bourgonje Vincent JA,Vos Marc A,Ozdemir Semir,et al. Com-bined Na(+)/Ca(2+)exchanger and L-type calcium channel block as a potential strategy to suppress arrhythmias and maintain ventricular function[J].Circulation Arrhythmia and electrophysiology,2013,62.

    [11]銘慧,尹永強,康毅,等.?;撬徭V對缺氧/復(fù)氧致大鼠心肌細胞鈣離子通道異常的影響[J].中國藥理學(xué)通報,2014,30(10):1367-1372.

    [12]徐曼,逯星竹,畢學(xué)苑,等.肌漿網(wǎng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣調(diào)控在心血管疾病中的研究進展[J].心臟雜志,2015,27(2):216-220.

    [13]熊杜,范金茹,陳彤,等.心痛方對急性心肌梗死大鼠血漿ICAM-1、VCAM-1的影響[J].中醫(yī)藥通報,2015,14(6):66-68.

    [14]范金茹,那奕文,劉小瑗,等.PS/PSGL-1在冠心病合并頸動脈粥樣斑塊痰瘀互阻證中的作用[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2015,33(1):104-107.

    [15]范金茹,汪艷娟,陳彤,等.從黏附分子層面探究心痛方治療急性心肌梗死痰瘀互結(jié)氣郁證的機制[J].中國中醫(yī)急癥,2015,24(10):1710-1712.

    Effect of Xintongfang on the Expression of SERCA2a mRNA and Arrhythmia in Acute Myocardial Infarction Rats

    OUYANG Guo,F(xiàn)AN Jinru,ZHOU Feiran,et al.
    Hunan University of Chinese Medicine,Hunan,Changsha 410208,China.

    Objective:To observe the effect of Xintongfang on the expression of SERCA2a mRNA and arrhythmia in acute myocardial infarction rats to explore the therapeutic mechanism of Xintongfang on arrhythmia after acute myocardial infarction.Methods:40 SD rats were randomly divided into sham operation group,model group,Xintongfang group and diltiazem control group.Acute myocardial infarction model was established by coronary artery ligation method.Expression of SERCA2a mRNA was observed by RT-PCR method and arrhythmia was detected by ECG.Results:The expression of SERCA2a mRNA was obviously increased in Xintongfang group(P<0.05);and also the incidence of arrhythmia was decreased(P<0.05).Conclusion:Xintongfang has a protective effect on acute myocardial infarction in rats.The mechanism of the effect may be related to its increasing of expression of SERCA2a mRNA in rat,which can help decrease the incidence of arrhythmia.

    Xintongfang;Acute myocardial infarction;Complication;Calcium homeostasis;SERCA2a mRNA

    R285.5

    A

    1004-745X(2017)01-0030-03

    10.3969/j.issn.1004-745X.2017.01.009

    2016-10-17)

    湖南省自然科學(xué)基金項目(13jj5031);湖南省教育廳科學(xué)研究項目(16A159)

    △通信作者(電子郵箱:fanjr218@sina.com)

    猜你喜歡
    方組心痛中醫(yī)藥大學(xué)
    《山西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報》征稿簡則
    門純德臨證思維淺析——從時間醫(yī)學(xué)角度探究“聯(lián)合方組”作用機制
    《江中中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報》簡介
    祛痰、化瘀和祛痰化瘀方對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞增殖及凋亡功能的影響?
    心痛不如行動
    心理與健康(2017年3期)2017-05-30 10:48:04
    活血益氣方及其拆方對大鼠心肌梗死邊緣區(qū)Spred1及血管新生的影響
    中醫(yī)藥大學(xué)本科生流行病學(xué)教學(xué)改革初探
    補腎解毒方對輻射小鼠外周血白細胞及脾臟NF-κBp65的影響
    湖北中醫(yī)藥大學(xué)
    心痛的感覺
    少先隊活動(2014年6期)2015-03-18 11:19:33
    国产精品一区二区免费欧美| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 一本精品99久久精品77| 男女视频在线观看网站免费| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲成人久久性| 熟女电影av网| 国产亚洲精品av在线| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 欧美3d第一页| 久9热在线精品视频| 一区二区三区免费毛片| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 天堂动漫精品| 我的女老师完整版在线观看| 国产真实伦视频高清在线观看 | 久久精品影院6| 久久久久久久久大av| 日韩人妻高清精品专区| 日本黄色视频三级网站网址| 日韩精品中文字幕看吧| av专区在线播放| 校园春色视频在线观看| 一本久久中文字幕| 听说在线观看完整版免费高清| 成人国产一区最新在线观看| 内射极品少妇av片p| 日本在线视频免费播放| 人妻少妇偷人精品九色| 69人妻影院| 精品午夜福利在线看| 午夜免费成人在线视频| 一个人看的www免费观看视频| 老司机福利观看| 精品一区二区三区视频在线| 国产高清有码在线观看视频| 免费高清视频大片| 3wmmmm亚洲av在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 全区人妻精品视频| 亚洲,欧美,日韩| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产av一区在线观看免费| 一级毛片久久久久久久久女| 中文资源天堂在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 中文亚洲av片在线观看爽| 波野结衣二区三区在线| 免费av不卡在线播放| 又紧又爽又黄一区二区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产色爽女视频免费观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 欧美高清性xxxxhd video| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产中年淑女户外野战色| 国产日本99.免费观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久热精品热| 黄色一级大片看看| 国产探花极品一区二区| 老司机深夜福利视频在线观看| 又爽又黄a免费视频| 欧美高清性xxxxhd video| 黄色丝袜av网址大全| 国产成人a区在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 窝窝影院91人妻| 中文字幕av在线有码专区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 直男gayav资源| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲国产精品久久男人天堂| 久久久久久久久久久丰满 | 啦啦啦观看免费观看视频高清| 精品一区二区三区av网在线观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国内精品久久久久久久电影| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 51国产日韩欧美| 一区二区三区高清视频在线| 精品一区二区三区人妻视频| 国产一级毛片七仙女欲春2| 一区二区三区激情视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 韩国av在线不卡| 成人性生交大片免费视频hd| 可以在线观看的亚洲视频| videossex国产| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲最大成人手机在线| 久久午夜亚洲精品久久| 人妻少妇偷人精品九色| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 午夜免费激情av| 春色校园在线视频观看| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲最大成人手机在线| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 一区二区三区四区激情视频 | 99热这里只有是精品50| 亚洲在线观看片| 国产精品野战在线观看| av在线亚洲专区| 白带黄色成豆腐渣| 熟女电影av网| 欧美一区二区精品小视频在线| 三级国产精品欧美在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲中文字幕日韩| 免费观看在线日韩| 1000部很黄的大片| 精品人妻1区二区| 日韩精品有码人妻一区| 男人舔女人下体高潮全视频| АⅤ资源中文在线天堂| 国产精品女同一区二区软件 | 99热这里只有是精品50| 国产综合懂色| 老女人水多毛片| 午夜久久久久精精品| 国产探花在线观看一区二区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 99热这里只有精品一区| av黄色大香蕉| 精品国内亚洲2022精品成人| 麻豆一二三区av精品| 色5月婷婷丁香| 韩国av一区二区三区四区| 国产探花极品一区二区| 成年版毛片免费区| 亚洲成人久久性| 欧美+亚洲+日韩+国产| 精品人妻视频免费看| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产成年人精品一区二区| or卡值多少钱| 69av精品久久久久久| 男插女下体视频免费在线播放| 一个人免费在线观看电影| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 最近中文字幕高清免费大全6 | 国内精品宾馆在线| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲人成伊人成综合网2020| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 久久九九热精品免费| 国产成人av教育| 99久国产av精品| 亚洲久久久久久中文字幕| 免费观看精品视频网站| 内射极品少妇av片p| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲综合色惰| 国产成年人精品一区二区| 国产精品日韩av在线免费观看| 丰满乱子伦码专区| 免费人成视频x8x8入口观看| 午夜激情福利司机影院| 亚洲第一电影网av| 少妇的逼水好多| av天堂中文字幕网| 嫩草影视91久久| avwww免费| 日日撸夜夜添| 国产精品日韩av在线免费观看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 日韩强制内射视频| 欧美黑人巨大hd| 国产麻豆成人av免费视频| 精品久久久久久成人av| 精品久久久噜噜| 婷婷亚洲欧美| 精品人妻视频免费看| 精品久久久噜噜| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产色婷婷99| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲中文字幕日韩| 美女免费视频网站| 亚洲综合色惰| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 精品久久久久久久末码| 亚洲欧美激情综合另类| 日韩欧美在线二视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产老妇女一区| 亚洲专区国产一区二区| 久久久午夜欧美精品| 一进一出好大好爽视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲av一区综合| 一边摸一边抽搐一进一小说| 99精品久久久久人妻精品| 久久精品国产亚洲av天美| 免费观看精品视频网站| 91在线观看av| 国产免费一级a男人的天堂| eeuss影院久久| 黄色视频,在线免费观看| 男人的好看免费观看在线视频| 精品欧美国产一区二区三| 婷婷丁香在线五月| 日日夜夜操网爽| 在线观看66精品国产| 亚洲欧美日韩无卡精品| 成年女人永久免费观看视频| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲欧美激情综合另类| 99热精品在线国产| 亚洲av二区三区四区| av中文乱码字幕在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 一区二区三区免费毛片| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 精品日产1卡2卡| 尾随美女入室| 午夜福利高清视频| 久久久久久久久大av| 日本免费a在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 成人鲁丝片一二三区免费| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久久久久久亚洲中文字幕| 婷婷亚洲欧美| 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲国产欧美人成| 日韩高清综合在线| 久久草成人影院| 午夜视频国产福利| 人妻夜夜爽99麻豆av| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久久精品欧美日韩精品| 1024手机看黄色片| 一本精品99久久精品77| 少妇高潮的动态图| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 午夜精品在线福利| 校园春色视频在线观看| 国产探花极品一区二区| 国产三级中文精品| www.色视频.com| 亚洲av熟女| 午夜激情福利司机影院| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲av二区三区四区| 婷婷六月久久综合丁香| 最近中文字幕高清免费大全6 | 欧美高清性xxxxhd video| 窝窝影院91人妻| 身体一侧抽搐| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲,欧美,日韩| 村上凉子中文字幕在线| 嫩草影院精品99| 春色校园在线视频观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 | 国产精品国产三级国产av玫瑰| 免费大片18禁| 亚洲人与动物交配视频| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 美女大奶头视频| a级毛片a级免费在线| 亚洲最大成人手机在线| 又爽又黄a免费视频| 又紧又爽又黄一区二区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 男女之事视频高清在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲专区中文字幕在线| 床上黄色一级片| 精品一区二区三区视频在线| eeuss影院久久| 麻豆国产97在线/欧美| 国产淫片久久久久久久久| 99热精品在线国产| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久精品影院6| 麻豆国产av国片精品| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲 国产 在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产视频内射| netflix在线观看网站| 亚洲真实伦在线观看| or卡值多少钱| 美女 人体艺术 gogo| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 免费av不卡在线播放| 色噜噜av男人的天堂激情| 日韩欧美免费精品| 欧美3d第一页| 老司机深夜福利视频在线观看| 22中文网久久字幕| 五月玫瑰六月丁香| 男女视频在线观看网站免费| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 中文字幕av在线有码专区| 日韩精品青青久久久久久| 最近视频中文字幕2019在线8| www.www免费av| 日韩欧美国产在线观看| 欧美人与善性xxx| 国产真实伦视频高清在线观看 | 日本在线视频免费播放| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产亚洲欧美98| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久香蕉精品热| 久久久久久久久久黄片| 最后的刺客免费高清国语| 人妻久久中文字幕网| 黄色一级大片看看| 久久亚洲精品不卡| 春色校园在线视频观看| 亚洲在线观看片| 91久久精品电影网| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 免费大片18禁| 欧美另类亚洲清纯唯美| 小说图片视频综合网站| 免费高清视频大片| 在线免费观看不下载黄p国产 | 精品一区二区免费观看| 春色校园在线视频观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 69av精品久久久久久| 亚洲人成网站在线播| 一级黄色大片毛片| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 午夜久久久久精精品| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产不卡一卡二| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 成年女人看的毛片在线观看| 香蕉av资源在线| 在线免费十八禁| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 免费高清视频大片| 一本久久中文字幕| 国产综合懂色| 大型黄色视频在线免费观看| 波多野结衣高清作品| 一进一出抽搐动态| 欧美高清成人免费视频www| 日日啪夜夜撸| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产精品久久电影中文字幕| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 日韩欧美 国产精品| 精品久久久久久久久av| bbb黄色大片| 日本熟妇午夜| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 成熟少妇高潮喷水视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久精品国产自在天天线| 啪啪无遮挡十八禁网站| 99久久成人亚洲精品观看| 日韩欧美 国产精品| 日本爱情动作片www.在线观看 | 亚洲一区高清亚洲精品| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲av免费高清在线观看| 国产色婷婷99| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚州av有码| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 一级黄片播放器| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 精品一区二区免费观看| 可以在线观看的亚洲视频| 国产探花极品一区二区| 国产精品免费一区二区三区在线| 精品人妻熟女av久视频| 在线播放无遮挡| 少妇被粗大猛烈的视频| 俺也久久电影网| 尾随美女入室| 99久久精品热视频| 国内精品久久久久久久电影| 在线a可以看的网站| 哪里可以看免费的av片| 麻豆av噜噜一区二区三区| 亚洲美女搞黄在线观看 | 99久久精品国产国产毛片| 性插视频无遮挡在线免费观看| 88av欧美| 精品久久国产蜜桃| 99riav亚洲国产免费| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 伦精品一区二区三区| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲精品一区av在线观看| 色播亚洲综合网| 成人综合一区亚洲| 国产精品无大码| 春色校园在线视频观看| 尾随美女入室| 丰满的人妻完整版| x7x7x7水蜜桃| 欧美最新免费一区二区三区| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲精品456在线播放app | 日韩欧美免费精品| 99久久成人亚洲精品观看| 最好的美女福利视频网| 久久午夜福利片| 免费av观看视频| 色综合亚洲欧美另类图片| 99热这里只有是精品在线观看| 赤兔流量卡办理| 精品国产三级普通话版| 简卡轻食公司| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 99热这里只有精品一区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 我要搜黄色片| 99热精品在线国产| 亚洲成人中文字幕在线播放| 99riav亚洲国产免费| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 一本一本综合久久| 欧美不卡视频在线免费观看| 长腿黑丝高跟| 少妇人妻精品综合一区二区 | 午夜福利在线在线| 久久午夜福利片| 免费av观看视频| 亚洲av成人av| 亚洲图色成人| 村上凉子中文字幕在线| 久久九九热精品免费| 免费无遮挡裸体视频| a级毛片a级免费在线| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲欧美清纯卡通| 黄色一级大片看看| 国产精品精品国产色婷婷| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产三级在线视频| 亚洲av免费高清在线观看| 一个人看的www免费观看视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 欧美极品一区二区三区四区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 日本一二三区视频观看| 99久久九九国产精品国产免费| 欧美精品国产亚洲| 日本在线视频免费播放| 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲国产色片| 又紧又爽又黄一区二区| 狠狠狠狠99中文字幕| 免费av观看视频| 五月玫瑰六月丁香| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产美女午夜福利| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲黑人精品在线| 中国美白少妇内射xxxbb| 国国产精品蜜臀av免费| 99热这里只有是精品50| 久久亚洲精品不卡| 啦啦啦啦在线视频资源| 男人舔奶头视频| 99精品久久久久人妻精品| 又紧又爽又黄一区二区| 两个人视频免费观看高清| 国产午夜精品论理片| 有码 亚洲区| 亚洲在线观看片| 高清日韩中文字幕在线| 直男gayav资源| 色噜噜av男人的天堂激情| 免费看av在线观看网站| 此物有八面人人有两片| 久9热在线精品视频| 在线天堂最新版资源| 成人午夜高清在线视频| 国产成人一区二区在线| 国产一区二区激情短视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产 一区精品| 国产日本99.免费观看| 中文字幕av成人在线电影| 成年人黄色毛片网站| 精品福利观看| 日韩av在线大香蕉| 国内精品一区二区在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 可以在线观看毛片的网站| 天堂动漫精品| 久久人妻av系列| 高清日韩中文字幕在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 午夜免费成人在线视频| 国产精品一区www在线观看 | 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产伦在线观看视频一区| 久久久精品欧美日韩精品| 真人做人爱边吃奶动态| 国产精品一区二区三区四区久久| 校园春色视频在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 免费在线观看成人毛片| 亚洲 国产 在线| 精品一区二区三区视频在线| 久久精品91蜜桃| 日韩欧美精品免费久久| 欧美激情久久久久久爽电影| 两个人视频免费观看高清| 欧美激情国产日韩精品一区| 极品教师在线免费播放| 在线播放无遮挡| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产色婷婷99| 亚洲自偷自拍三级| 天堂影院成人在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产亚洲精品久久久com| 全区人妻精品视频| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲黑人精品在线| 黄色一级大片看看| 69人妻影院| 亚洲最大成人中文| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产主播在线观看一区二区| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产精品福利在线免费观看| 久久久久性生活片| 亚洲真实伦在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲精品在线观看二区| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲经典国产精华液单| 国模一区二区三区四区视频| 国产精品1区2区在线观看.| 99久久无色码亚洲精品果冻| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 舔av片在线| 欧美人与善性xxx| 色综合站精品国产| 人人妻人人看人人澡| 我要看日韩黄色一级片| 国产精品亚洲美女久久久| 69人妻影院| 少妇熟女aⅴ在线视频| 男女之事视频高清在线观看| 免费av观看视频| 成年女人永久免费观看视频| 午夜视频国产福利| or卡值多少钱| 伦精品一区二区三区| 一区二区三区四区激情视频 | 在线观看美女被高潮喷水网站| 在线播放无遮挡| 亚洲性夜色夜夜综合| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 观看美女的网站| 欧美激情国产日韩精品一区| av视频在线观看入口| 婷婷亚洲欧美| 岛国在线免费视频观看| 成年版毛片免费区| 亚洲五月天丁香| av.在线天堂| 人妻少妇偷人精品九色| 午夜免费成人在线视频| 色视频www国产| 一区福利在线观看| 亚洲在线自拍视频| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 乱人视频在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 99riav亚洲国产免费| 老熟妇仑乱视频hdxx| 欧美中文日本在线观看视频| 婷婷六月久久综合丁香|