超臨界二氧化碳法萃取桑葉中總黃酮工藝研究

石仝雨, 繆偉偉, 王志雄,3*

1.上海理工大學(xué)醫(yī)療器械與食品學(xué)院, 上海 200093; 2.日本國(guó)立大阪大學(xué), 大阪 565-087, 日本; 3.上海健康醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院, 上海 200093

超臨界二氧化碳法萃取桑葉中總黃酮工藝研究

石仝雨1, 繆偉偉2,3, 王志雄1,3*

1.上海理工大學(xué)醫(yī)療器械與食品學(xué)院, 上海 200093; 2.日本國(guó)立大阪大學(xué), 大阪 565-087, 日本; 3.上海健康醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院, 上海 200093

為了探索超臨界二氧化碳法萃取桑葉中總黃酮提取的最佳方案，利用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)，依次用響應(yīng)面法考查萃取壓強(qiáng)、萃取溫度、萃取時(shí)間以及夾帶劑無(wú)水乙醇的流速對(duì)桑葉中總黃酮得率的影響，優(yōu)選出桑葉黃酮類化合物在使用超臨界萃取裝置時(shí)提取的最佳工藝。結(jié)果顯示：響應(yīng)面法的最佳萃取條件為：壓力26 MPa，溫度50℃,時(shí)間3 h，流速2.5 mL/min,最佳條件下總黃酮得率為6.21%±0.05%。

桑葉;超臨界萃取技術(shù);總黃酮得率;曲面相應(yīng)法

桑葉是我國(guó)傳統(tǒng)中藥之一，為桑屬(Morus)植物桑樹(shù)(MorusalbaL.)的葉子，載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，中醫(yī)又稱“神仙草”、“鐵扇子”。 桑葉性味苦甘、寒，甘可以益血，寒可以涼血。甘寒相合，故下氣而益陰，又能止咳，有補(bǔ)益之功。主治風(fēng)熱感冒、肺熱燥咳、頭暈頭疼、目赤暈花等癥[1,2]，因此桑葉作為一種治療藥，其化學(xué)成分以及藥理作用成為當(dāng)今研究者討論的重點(diǎn)[3]。桑葉中主要的活性物質(zhì)是桑葉黃酮，許多學(xué)者圍繞桑葉黃酮的開(kāi)發(fā)和利用做了大量工作，當(dāng)前萃取桑葉中總黃酮的方法主要有水浸法、回流提取法、超聲提取法和索氏提取法等[4～6]。相對(duì)于其他萃取方法而言，超臨界二氧化碳流體(supercritical CO2fluid extraction，SFE-CO2)萃取方法是一種新興技術(shù)，目前在國(guó)際上應(yīng)屬于最先進(jìn)的物理萃取分離技術(shù)；該方法主要利用高滲透性和高溶解能力來(lái)提取分離成分，其用到的溶劑是二氧化碳，以二氧化碳作為溶劑，與一般的萃取方法相比，超臨界二氧化碳萃取在速度上和范圍上更占優(yōu)勢(shì)。目前已有多種中藥材中的黃酮類物質(zhì)采用超臨界CO2萃取的相關(guān)報(bào)道[7]，但目前尚無(wú)采用相應(yīng)曲面方法優(yōu)化桑葉黃酮提取工藝的報(bào)道。本文運(yùn)用響應(yīng)面法分析超臨界萃取中桑葉總黃酮提取的關(guān)鍵因素，并獲得其最佳提取條件，以期為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用桑葉中的總黃酮成分提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料、藥品與耗材 桑葉干粉(日本野姬和株式會(huì)社)；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(上海金穗生物公司)，含量不低于98%；無(wú)水乙醇、九水硝酸鋁(上海金穗生物)、氫氧化鈉、亞硝酸鈉(上海金穗生物)均為分析純；二氧化碳(純度99.999%)；0.45 μm過(guò)濾器；石英比色杯。

1.1.2 儀器 紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)(756P上海光譜儀器有限公司制造)；超臨界二氧化碳流體萃取設(shè)備(美國(guó)Waters公司)；恒溫水浴箱(CV-420，上海恒一精密儀器有限公司)；超純水系統(tǒng)(RE-100，上海本昂科學(xué)儀器有限公司)；電子天平(FA2104，上海舜宇恒平)。

1.2 工藝線路

稱重干燥后的桑葉粉2 g，裝入超臨界萃取裝置的萃取釜中，以無(wú)水乙醇作為夾帶劑。在本試驗(yàn)中通過(guò)改變相關(guān)的萃取參數(shù)，完成相關(guān)萃取，獲得總黃酮提取液，并且計(jì)算得總黃酮提取率。具體步驟：桑葉→干燥→稱重→超臨界萃取→總黃酮提取液→測(cè)定總黃酮提取率。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確稱取干燥恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5.0 mg 置于50 mL 容量瓶中，用無(wú)水乙醇超聲溶解，搖勻，定容至50 mL，使之成為濃度為100 μg/mL 的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作為貯備液備用。精密量取上述溶液0、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，置于10 mL 容量瓶。加5%亞硝酸鈉水溶液0.3 mL，放置6 min，加10%硝酸鋁0.3 mL，混勻后放置6 min，加入1%氫氧化鈉溶液4 mL，混勻，放置15 min后，加無(wú)水乙醇定容至10 mL，靜置15 min，等待顯色后用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，試劑空白為參比，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，510 nm 處的吸光度為縱坐標(biāo)作圖,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[8,9](圖1)。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線Fig.1 Rutin standard solution curve.

利用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，算出回歸方程為：y=0.0123x，R2=0.9994。

1.4 總黃酮提取率計(jì)算

量取1 mL桑葉提取液于10 mL容量瓶，按繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的步驟顯色，直接于510 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，根據(jù)相關(guān)公式，計(jì)算總黃酮提取率。

C:提取液總黃酮的濃度(mg/mL)；V:提取液定容后的體積(mL)；m:稱取得樣品桑葉干粉的質(zhì)量(mg)。

1.5 單因素實(shí)驗(yàn)

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[10～12]和美國(guó)Waters公司二氧化碳萃取儀器的使用說(shuō)明，得到影響調(diào)整總黃酮得率的主要因素有萃取溫度、壓強(qiáng)、萃取時(shí)間和夾帶劑流速。在本研究采用這4個(gè)因素水平進(jìn)行單因素試驗(yàn)，分別考察各因素對(duì)桑葉黃酮得率的影響，具體各因素水平設(shè)置如表1所示。

表1 單因素試驗(yàn)因素及水平

1.6 響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

按照最佳單因素條件，根據(jù)中心組合(Box-Behnken)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理采用4因素3水平的響應(yīng)曲面法對(duì)各個(gè)因素的顯著性和交互作用進(jìn)行分析，優(yōu)化總黃酮得率結(jié)果，對(duì)桑葉提取總黃酮工藝條件進(jìn)行分析和優(yōu)化。具體因素編碼及因素水平見(jiàn)表2。

表2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)因素編碼及因素水平

1.7 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析

通過(guò)SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理，通過(guò)Design expert 8.0.6軟件進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)的設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)分析，采用Sigmaplot 10.0和Excel 2007作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

根據(jù)表1中的單因素試驗(yàn)因素及水平所得結(jié)果見(jiàn)圖2。萃取溫度45℃、提取時(shí)間2.5 h、萃取壓強(qiáng)為35 MPa和夾帶劑流速為2.5 mL/min為各單因素的最大響應(yīng)值。故在下文中以此為基礎(chǔ)條件，設(shè)計(jì)因素水平，進(jìn)行提取工藝的優(yōu)化。

2.2 響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 黃酮得率條件擬合 根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)分析,選取萃取時(shí)間、萃取壓強(qiáng)、夾帶劑流速、萃取溫度4 個(gè)因素,運(yùn)用Design-Expert 8.0.6.0 軟件設(shè)計(jì)兩水平因子實(shí)驗(yàn),篩選顯著因素;接著通過(guò)爬坡實(shí)驗(yàn)逼近最大響應(yīng)區(qū);然后運(yùn)用Design-Expert 8.0.0.6軟件設(shè)計(jì)中心組合實(shí)驗(yàn),建立提取模型,預(yù)測(cè)最佳提取條件和黃酮得率[13～15]。因素編碼及因素水平見(jiàn)表3。

圖2 單因素試驗(yàn)結(jié)果Fig.2 Results of single factor experiment.A:萃取壓力對(duì)總黃酮提取率的影響; B:萃取溫度對(duì)總黃酮提取率的影響; C:夾帶劑流速對(duì)總黃酮提取率的影響; D:萃取時(shí)間對(duì)總黃酮提取率的影響

實(shí)驗(yàn)號(hào)A萃取壓力B萃取溫度C萃取時(shí)間D夾帶劑流速總黃酮得率(mg/mL)110106．162-10-105．733-10015．77401106．1850-1106．13610015．87701-105．89801015．949-10106．0010-1-1005．791111006．021200116．101300005．931400005．9615010-15．911610-105．8817-100-15．71180-1015．891900-115．8320100-15．8921-11005．83220-10-15．9323001-16．062400-1-15．83250-1-105．84261-1005．90

由表4 可知,萃取時(shí)間和萃取壓力對(duì)黃酮得率影響極顯著(P<0.01)，溫度、流速對(duì)黃酮得率影響不顯著(P>0. 05)。比較各因素的P值，可知各單因素對(duì)黃酮得率的影響程度大小依次為：萃取時(shí)間>萃取壓力>萃取溫度>夾帶劑流速。

2.2.2 擬合模型的建立 從圖3A和圖3B可知，實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷母鳉埐罨痉植冀Y(jié)果表明，經(jīng)方法分析對(duì)總黃酮得率建立的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜆O在同一條直線上，與失擬分析相一致，圖3B的殘差預(yù)測(cè)也極顯著(P<0.01)。從模型分析顯著性可以明確看到該實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷谋憩F(xiàn)各殘差點(diǎn)在零點(diǎn)直線兩側(cè)不均勻分布，通過(guò)兩個(gè)的建立是具有可靠性的。失擬項(xiàng)P=0.479 4>0.05，不顯著；失擬項(xiàng)圖對(duì)比可知，純誤差值為0.000 45，數(shù)值比較小，通過(guò)相關(guān)數(shù)據(jù)的分析可知該實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷臄M合程度較好，試驗(yàn)誤差較小，從分析值來(lái)看，分析本模型具有重要的作用。

模型方程回歸系數(shù)及其顯著性檢驗(yàn)見(jiàn)表4，結(jié)果表明：模型一次項(xiàng)A、C顯著，B、D 不顯著；二次項(xiàng)A2、C2、D2顯著；其余各項(xiàng)不顯著。因此各個(gè)具體試驗(yàn)因素與響應(yīng)值都不是線性關(guān)系。

通過(guò)軟件對(duì)于實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ瓦M(jìn)行分析，并且采用Y作為因變量，采用R1為總黃酮提取量，A、B、C、D分別代表萃取壓力、萃取溫度、萃取時(shí)間、流速。得到回歸方如下：

表4 4因素3水平實(shí)驗(yàn)方差分析表

圖3 總黃酮提取率殘差分布(A)與預(yù)測(cè)分布(B)示意圖Fig.3 Residual(A) and predict distribution(B) diagram of flavonoids extraction yield.A.殘差分布示意圖;B.預(yù)測(cè)分布示意圖

R1= 5.95+0.066A+0.019B+0.14C+5.833E-003D-5.000E-0.03AB+2.500E-0.03 AC-0.020AD+0.018BC+5.000E-0.03BD+2.500E-0.03CD+0.088A2+0.014 B2+0.072 C2-0.043 D2

2.2.3 響應(yīng)曲面結(jié)果分析 通過(guò)模型方程所作的響應(yīng)曲面圖及其等高線，結(jié)果見(jiàn)圖4。采樣時(shí)間比對(duì)總黃酮得率的影響最顯著，其次是萃取壓力，并且各個(gè)因素之間的交互作用并不顯著。

圖4 各因素影響桑葉黃酮得率的響應(yīng)曲面Fig.4 Response surface of each factor on flavonoids yield in mulberry leaves.A:提取率=f(A,B)的響應(yīng)面; B:提取率=f(A,C)的響應(yīng)面; C:提取率=f(A,D)的響應(yīng)面; D:提取率=f(B,C)的響應(yīng)面; E:提取率=f(C,D)的響應(yīng)面; F:提取率=f(B,D)的響應(yīng)面

2.3 最優(yōu)提取條件的選擇

根據(jù)Design-Expert 8.0.5 軟件可以優(yōu)化最佳方案，最佳的提取率方案為壓力26 MPa，溫度50℃，時(shí)間3 h，流速2.5 mL/min,預(yù)期的總黃酮得率6.22%。

為了驗(yàn)證該模型的準(zhǔn)確性，在不同的提取條件下進(jìn)行了6組驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(均選擇在實(shí)驗(yàn)的范圍之內(nèi)，3組實(shí)驗(yàn)按照得到的最優(yōu)條件進(jìn)行，另外3組隨機(jī)選擇)。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)值與預(yù)測(cè)值的相關(guān)系數(shù)都大于0.98，并且差異不顯著(P>0.05)，證明該模型能較好地用于桑葉提取總黃酮物質(zhì)的的預(yù)測(cè)及評(píng)價(jià)。最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下得到的總黃酮提取率結(jié)果為6.21%±0.05%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Design-Expert 8.0.5軟件的優(yōu)化理論預(yù)測(cè)值比較誤差為4.6%，可以證明采用響應(yīng)曲面法優(yōu)化得到的提取條件參數(shù)基本準(zhǔn)確可靠，具有一定的實(shí)用價(jià)值。

3 討論

本試驗(yàn)采用響應(yīng)面法通過(guò)構(gòu)建二次回歸模型,建立了總黃酮提取率和相關(guān)的萃取因素之間的方程，根據(jù)響應(yīng)曲面對(duì)總黃酮的提取影響因素分析得到，即萃取時(shí)間>萃取壓強(qiáng)>萃取溫度>夾帶劑流速，最后采用方程確定最佳提取工藝最優(yōu)工藝為萃取壓強(qiáng)為26 MPa，萃取溫度為50℃，萃取時(shí)間為3 h，流速為2.5 mL/h，此條件下，總黃酮提取率可達(dá)6.21%。

現(xiàn)在對(duì)于桑葉中的總黃酮提取方法主要有回流提取法、超聲提取法、微波提取法和索氏提取法[13～15]等。其中回流提取法操作方法相對(duì)復(fù)雜，并且由于不同種類的桑葉總黃酮含量和具體成分不同，需要不斷改變萃取劑和液料比得到最佳的實(shí)驗(yàn)條件，工藝流程相對(duì)復(fù)雜。超聲提取法、微波提取法加劇了體系中分子的碰撞頻率，使黃酮類分子容易從桑葉內(nèi)部擴(kuò)散到萃取溶劑中，但是會(huì)使桑葉中的細(xì)胞膜和細(xì)胞壁破裂，使提取溶劑進(jìn)入細(xì)胞，溶解并釋放出細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)，導(dǎo)致植物細(xì)胞內(nèi)部分黃酮類物質(zhì)產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)分解，降低總黃酮提取率。超聲提取法會(huì)產(chǎn)生比較明顯的超聲-熱效應(yīng)，但是如果超過(guò)了最適合的值之后，則有可能導(dǎo)致一些熱敏感的黃酮物質(zhì)在提取過(guò)程中分解或產(chǎn)生異構(gòu)化反應(yīng)，從而降低了總黃酮得率。索氏提取法需要消耗比較多的時(shí)間，同時(shí)由于桑葉中的黃酮類物質(zhì)極性較大，故采用索氏提取法提取桑葉總的總黃酮，其總黃酮得率普遍較低。

相對(duì)而言，超臨界CO2萃取方法具有能夠在較低溫度條件下實(shí)現(xiàn)桑葉中總黃酮物質(zhì)的高效提取、萃取液中保留了多種具有生理活性的總黃酮成分、萃取物無(wú)有機(jī)溶劑殘留、流程簡(jiǎn)單、操作相對(duì)簡(jiǎn)單、可保護(hù)桑葉總黃酮中熱敏性物質(zhì)不受破壞等特點(diǎn)。而本方法具有準(zhǔn)確、可靠、可重復(fù)性強(qiáng)等特點(diǎn)，為提高桑葉中總黃酮的提取率提供了參考價(jià)值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，采用CO2超臨界技術(shù)萃取桑葉中的黃酮類物質(zhì)，提取溫度和壓力是需要考慮的重要因素之一[13～16]。這是因?yàn)樘岣咻腿囟群蛪簭?qiáng)雖然有利于生物活性物質(zhì)從植物細(xì)胞中釋放出來(lái)，但是如果超過(guò)了最適合的值之后，則有可能導(dǎo)致一些壓敏、熱敏感的黃酮物質(zhì)在提取過(guò)程中分解或是產(chǎn)生異構(gòu)化反應(yīng)[17]。目前已經(jīng)有研究表明，在高溫高壓條件下總黃酮中的部分物質(zhì)的異構(gòu)化進(jìn)程大大地加快[18]。萃取時(shí)間也是影響黃酮提取率的一個(gè)重要因素，在一定的萃取溫度、萃取壓力下，實(shí)驗(yàn)得到的桑葉總黃酮提取率隨著萃取時(shí)間的增加而增加，但是增加萃取時(shí)間會(huì)增加夾帶劑的消耗，同時(shí)增加儀器的損耗，故設(shè)定萃取時(shí)間需要綜合考慮，以獲得更好的經(jīng)濟(jì)效應(yīng)。相比其他參數(shù)而言，夾帶劑流速對(duì)黃酮得率影響最不顯著(P=0.528 4)，故在實(shí)際的生產(chǎn)中，可以適當(dāng)降低夾帶劑流速，降低生產(chǎn)成本。

[1] 中國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[C].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015,297-298.

[2] Doss S, Chakraborti S, Chattopadhyay S,etal.. Physiological and biochemical characteristics associated with leaf retention in mulberry (Morusspp.)[J]. Open J. Genet., 2011,1:27-33.

[3] 宿樹(shù)蘭，段金廒，歐陽(yáng)臻，等. 我國(guó)桑屬(Morus) 藥用植物資源化學(xué)研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)現(xiàn)代中藥，2012，14 (7):1-6.

[4] Doss S， Chakraborti S, Roychowdhuri S,etal.. Variability, heritability and genetic advance in mulberry (Morusspp.) for growth and yield attributes[J]. Agric. Sci., 2012,3:208-213.

[5] Mohammad I, Hamayun K, Mohibullah S，etal.. Chemical composition and antioxidant activity of certainMorusspecies[J]. J. Zhejiang Univ. Sci.B(Biomed. Biotechnol.),2010，11(12): 973-980.

[6] 孫 蓮，孟 磊，閻 超，等.桑葉的降血糖活性成分和藥理作用[J].中草藥，2002，33(5)：471.

[7] 孫 玲. 桑葉的化學(xué)成分、 研究方法及藥理活性研究進(jìn)展[J].臨床合理用藥，2012,5(28)：178-179.

[3] 王志雄，高劍文，繆偉偉.桑葉對(duì)腫瘤血管生成的影響[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014,11(25)：22-25.

[4] 張麗潔，張 志. 桑葉的藥理作用及臨床應(yīng)用[J].中醫(yī)中藥，2010,17(29)：80-81.

[5] 朱自強(qiáng).超臨界流體技術(shù)原理和應(yīng)用[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000.

[7] Ye W. Development features of supercritical(ultra-supercritical) technology in the world and experiences we can learn[J]. J. Power Energy Engin., 2016,4:1-3.

[8] Ma B, Cui F, Zhang Y. Rapid analysis of morusin from ramulus mori by HPLC-DAD, its distribution in vivo and differentiation in the cultivated mulberry species[J]. Food Nutr. Sci., 2013, 4(2):189-194.

[9] Rima M B, Dipti B P. RP-HPLC method for simultaneous estimation of montelukast sodium and desloratadine in combined dosage form[J/OL]. Pharmatutor, http://gnu.inflibnet.ac.in/bitstream/123456789/986/1/45.pdf,2013.

[10] Luik H, Luik L, Palu V,etal.. Applicability of static supercritical carbon dioxide extraction in biogeochemical characterization of oil shales[J]. Am. J. Anal. Chem., 2014,5 (3):173-180.

[11] Allawzi M, Al-Otoom A, Allaboun H,etal.. CO2supercritical fluid extraction of jordanian oil shale utilizing different co-solvents[J]. Fuel Proc. Technol., 2011, 92(10):2016-2023.

[12] Carulo M. Use of SFC in extraction of adaptogens from Brazilian plants[J]. Am. J. Anal. Chem.2012, 3(12A):977-982.

[13] Al-Asheh S, Allawzi M, Al-Otoom A,etal.. Supercritical fluid extraction of useful compounds from sage[J]. Nat. Sci., 2012,4:544-551.

[14] Vuong Q V, Golding J B, Stathopoulos C E,etal.. Optimizing conditions for the extraction of catechins from green tea using hot water[J]. J. Separ. Sci., 2011, 34(21):3099-3106.

[15] 何 晶，錢斐瑩，鄒 培，等.不同提取方法對(duì)桑葉中蘆丁含量的影響研究[J].廣東化工，2016，43(17)：18-19.

[16] 李佳慧,拱健婷,趙麗瑩,等.黃蜀葵花總黃酮提取工藝[J].國(guó)際藥學(xué)研究雜志,2016(2)：370-373.

[17] 馬澤剛,袁小紅,徐春霞,等.費(fèi)約果葉片總黃酮的提取工藝研究[J].食品研究與開(kāi)發(fā),2016(9): 79-82.

[18] 錢亞琴, 劉漢清, 莊 煒. SFE-CO2萃取技術(shù)在中藥提取分離中的應(yīng)用[J]. 南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 20(4): 254-256.

Study on Supercritical Carbon Dioxide Extraction of Total Flavonoids from Mulberry Leaves

SHI Tongyu1, MIAO Weiwei2,3, WANG Zhixiong1,3*

1.SchoolofMedicalInstrumentandFoodEngineering,UniversityofShanghaiforScienceandTechnology,Shanghai200093,China; 2.OsakaUniversity,Osaka565-0871,Japan; 3.SchoolofPhamacy,ShanghaiUniversityofMedicineandHealthScience,Shanghai200093,China

To explore the optimal plan of extracting total flavone from mulberry leaves through the method of supercritical carbon dioxide, this research utilized supercritical carbon dioxide extraction technology and applies response surface method to examine the influence of extraction pressure, extraction temperature, extraction time and flow velocity of entrainer absolute ethyl alcohol on yield of total flavone in mulberry leaves, and selected the optimal technology that mulberry leaves flavonoids extract using supercritical fluid extraction device. The results indicated that, the optimal extraction condition of response surface method was as follows: pressure in optimal extraction plan was 26 MPa, temperature was 50℃, time was 3 hours, and flow velocity was 2.5 mL/min. The predicted total flavone yield under optimal condition was 6.21%±0.05%.

mulberry; supercritical carbon dioxide extraction; flavonoid yield; corresponding method of curved surface

2016-10-18; 接受日期：2016-12-01

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81402030)資助。

石仝雨，碩士研究生,研究方向?yàn)樯镝t(yī)學(xué)工程。E-mail:styshlg@126.com。*通信作者：王志雄,高級(jí)工程師,研究方向?yàn)樯镝t(yī)學(xué)工程。E-mail:wangzx@sumhs.edu.cn

10.3969/j.issn.2095-2341.2017.01.13