43例白血病患者FLT3基因和NPM1基因突變的臨床研究

楊曉哲

(濮陽市人民醫(yī)院 血液內(nèi)科 河南 濮陽 457000)

·臨床研究·

43例白血病患者FLT3基因和NPM1基因突變的臨床研究

楊曉哲

(濮陽市人民醫(yī)院 血液內(nèi)科 河南 濮陽 457000)

目的 研究43例白血病(AML)患者FLT3基因和NPM1基因突變的臨床特點(diǎn)。方法 選取2013年1月至2015年1月濮陽市人民醫(yī)院血液科收治的43例成人AML患者為研究對象，初診時(shí)收集其骨髓單個(gè)核細(xì)胞，采用基因組DNA-PCR方法分別擴(kuò)增其FLT3和NPM1基因，并用毛細(xì)管電泳方法分析NPM1基因第12外顯子突變，瓊脂糖凝膠電泳分析FLT3基因突變，觀察患者基因突變特征并隨訪1 a了解其預(yù)后。結(jié)果 43例患者初診AML患者中共檢出FLT3+AML 30例(69.77%)，其中正常核型AML 22例(81.48%)顯著高于異常核型AML 8例(50.00%)(P<0.05)；共檢出NPM1+AML 28例(65.12%)，其中正常核型AML 21例(77.78%)顯著高于異常核型AML 7例(43.75%)(P<0.05)。FLT3+AML患者完全緩解率與無復(fù)發(fā)率顯著高于FLT3-AML患者(P<0.05)；NPM1+AML患者完全緩解率與總生存率顯著高于NPM1-AML患者(P<0.05)。結(jié)論 AML患者FLT3和NPM1基因突變發(fā)生率較高，是較為常見的子學(xué)異常，且NPM1和FLT3基因突變與臨床特點(diǎn)及預(yù)后密切相關(guān)。

AML；FLT3基因；NPM1基因；突變

AML是一組起源于造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，與遺傳學(xué)的改變密切相關(guān)，具有高度異質(zhì)性，其發(fā)病基礎(chǔ)是基因突變引起細(xì)胞增殖、分化、凋亡途徑的改變[1]；AML伴有嚴(yán)重的凝血功能障礙，極易引發(fā)致命性出血，早期死亡率極高。目前在AML患者中發(fā)現(xiàn)了多種基因突變，而近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，NPM1(核仁磷酸蛋白)突變、FLT3(FMS樣酪氨酸激酶3基因內(nèi)部串聯(lián)重復(fù))突變可作為成人AML患者制定治療方案以及評估預(yù)后的分子標(biāo)記物[2-3]。因此，檢測FLT3基因、NPM1基因突變對AML患者治療、預(yù)后及相關(guān)研究有重要意義。本文以濮陽市人民醫(yī)院43例成人AML患者為研究對象，進(jìn)一步分析FLT3基因和NPM1基因突變的臨床特點(diǎn)，以期為AML患者的治療、預(yù)后及相關(guān)實(shí)踐提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2015年1月濮陽市人民醫(yī)院血液科收治的43例成人AML患者為研究對象，均符合2007年《血液病診斷和療效標(biāo)準(zhǔn)》(第3版)確定的AML診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，且經(jīng)病理學(xué)確診，所有患者及其家屬對本研究知情且同意，本研究經(jīng)濮陽市人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。其中男19例，女24例；年齡為19～53歲，平均(32.42±10.70)歲；按FAB標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分型：M1 9例、M2 9 例、M3 6例、M4 5例、M5 2例、M6 2例；正常核型AML 27例，異常核型AML 16例。

1.2 研究方法

1.2.1 治療方法 43例患者均住院接受治療，根據(jù)患者實(shí)際情況主要采用以下方案：①全反式維甲酸(ATRA)、亞砷酸(ATO)或兩者聯(lián)合治療；②標(biāo)準(zhǔn)DA方案化療；③減量DA方案化療或CAG等預(yù)激方案化療。

1.2.2 基因突變檢測方法 ①FLT3基因突變：PCR反應(yīng)擴(kuò)增FLT3基因，涵蓋基因外顯子14和15，引物正義鏈：5’-GCAATTTAGGT ATGAAAGCCAGC-3’；反義鏈：5’-CTTTCAGCATTTTGA CGGCAACC-3’；在5 μl PCR產(chǎn)物于20 g/L瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，出現(xiàn)>329 bp的DNA 條帶為FLT3+標(biāo)本。②NPM1基因突變：擴(kuò)增NPM1基因第12外顯子，擴(kuò)增產(chǎn)物長度329 bp；引物正義鏈：5’T YAACTCTCTGGTGGTACAATGAA-3’；反義鏈：5’TGITACAGAAATGAAATAAGACGG-3’；在5’端標(biāo)記FAM基羧基熒光素；PCR總體系25 μl，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性min，35個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸6 min。1 μl PCR產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳，在215 bp峰之后出現(xiàn)額外峰為NPM1+標(biāo)本。

1.2.3 隨訪 通過門診、電話、視頻等方式對患者進(jìn)行隨訪，時(shí)間為1 a。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察患者基因突變發(fā)生情況及預(yù)后。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，定性資料的組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基因突變發(fā)生情況 43例患者初診AML患者中共檢出FLT3+AML 30例(69.77%)；其中正常核型AML 22例(81.48%)顯著高于異常核型AML 8例(50.00%)(P<0.05)；共檢出NPM1+AML 28例(65.12%)，其中正常核型AML 21例(77.78%)顯著高于異常核型AML 7例(43.75%)(P<0.05)。見表1。

表1 43例患者基因突變發(fā)生情況[n(%)]

2.2 預(yù)后情況FLT3+AML患者完全緩解率與無復(fù)發(fā)率顯著高于FLT3-AML患者(P<0.05)；NPM1+AML患者完全緩解率與總生存率顯著高于NPM1-AML患者(P<0.05)。見表2。

表2 43例患者預(yù)后情況[n(%)]

注：與FLT3-比較，aP<0.05；與NPM1-比較，bP<0.05。

3 討論

AML往往伴有嚴(yán)重的凝血功能障礙，常常引發(fā)致命性出血，顱內(nèi)出血是患者出血性死亡的最主要原因，并且致命性出血通常發(fā)生在誘導(dǎo)治療的早期。AML出血導(dǎo)致死亡的原因主要有[5-6]：血小板及其功能異常，首先表現(xiàn)為血小板減少及血小板生成障礙，進(jìn)而表現(xiàn)為血小板的黏附、聚集及釋放功能異常，臨床表現(xiàn)為出血明顯、止血困難等；凝血和纖溶指標(biāo)均升高，血小板和凝血因子消耗，導(dǎo)致血栓形成和組織缺血；大量異常的白血病細(xì)胞增生浸潤，使血管內(nèi)皮損傷，血管通透性增高而導(dǎo)致大量出血；白血病細(xì)胞纖維蛋白(原)溶解及凝血因子等降解引發(fā)出血等。

FLT3和NPM1基因是AML患者突變頻率較高的基因，國內(nèi)外臨床實(shí)踐與研究中常將這兩個(gè)基因推薦為基本檢測項(xiàng)目，特別在染色體核型正常的患者，檢測FLT3和NPM1基因突變是公認(rèn)的可幫助判斷治療效果及預(yù)后的指標(biāo)，在成人AML中，染色體核型正常的患者約占40%，其預(yù)后有明顯的異質(zhì)性。FLT3是Ⅲ型受體酪氨酸激酶的一種，在骨髓中僅表達(dá)于造血干細(xì)胞，正常生理情況下當(dāng)配體與FLT3的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合時(shí)，可誘發(fā)FLT3二聚體化，介導(dǎo)一系列細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)，導(dǎo)致細(xì)胞增殖、活化；若FLT3基因發(fā)生突變，會發(fā)生非配體依賴性FLT3自身磷酸化，破壞正常血細(xì)胞的增殖分化、凋亡，從而引發(fā)白血病[7]。NPM1又稱為核仁磷酸蛋白B23或核仁間質(zhì)蛋白，是位于核仁顆粒區(qū)的主要蛋白分子之一，能穿梭于核仁、核質(zhì)和胞質(zhì)之間，參與核糖體前體運(yùn)輸和合成及中心體的復(fù)制，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞的周期進(jìn)程和增殖發(fā)育，其是白血病發(fā)生的始動因素[8]。

本文研究結(jié)果顯示，43例患者初診AML患者中共檢出FLT3+AML 30例(69.77%)；其中正常核型AML 22例(81.48%)顯著高于異常核型AML 8例(50.00%)；共檢出NPM1+AML 28例(65.12%)，其中正常核型AML 21例(77.78%)顯著高于異常核型AML 7例(43.75%)；FLT3+AML患者完全緩解率與無復(fù)發(fā)率顯著高于FLT3-AML患者，NPM1+AML患者完全緩解率與總生存率顯著高于NPM1-AML患者。結(jié)果數(shù)據(jù)表明，不同AML核型FLT3基因和NPM1基因突變存在差異，F(xiàn)LT3和NPM1基因突變對成人AML患者預(yù)后有一定的預(yù)測價(jià)值；本文結(jié)果NPM1+、FLT3-、NPM1+、NPM1-預(yù)后情況數(shù)值差異不夠明顯，可能與提供的例數(shù)較少有關(guān)，因此相關(guān)研究有待提供大規(guī)模數(shù)據(jù)進(jìn)行深入論證。

綜上所述，NPM1和FLT3基因突變是AML患者臨床較為常見的基因突變，其與患者臨床特點(diǎn)及預(yù)后有密切的相關(guān)性。

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10.3969/j.issn.1004-437X.2017.02.010

2016-06-26)