• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    醬香大曲中產(chǎn)四甲基吡嗪細(xì)菌的分離鑒定及其功能性研究

    2017-02-16 07:08:24王曉丹朱國(guó)軍雷安亮胡鵬剛邱樹(shù)毅
    中國(guó)釀造 2017年1期
    關(guān)鍵詞:醬香型醬香吡嗪

    王曉丹,王 婧,朱國(guó)軍,雷安亮,胡鵬剛,邱樹(shù)毅*

    (1.貴州大學(xué)貴州省發(fā)酵工程與生物制藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州貴陽(yáng),550025;2.貴州珍酒釀酒有限責(zé)任公司,貴州遵義,563003;3.貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,貴州貴陽(yáng),550025;4.貴州大學(xué)釀酒與食品工程學(xué)院,貴州貴陽(yáng),550025)

    醬香大曲中產(chǎn)四甲基吡嗪細(xì)菌的分離鑒定及其功能性研究

    王曉丹1,3,4,王 婧1,4,朱國(guó)軍2,雷安亮2,胡鵬剛1,4,邱樹(shù)毅1,4*

    (1.貴州大學(xué)貴州省發(fā)酵工程與生物制藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州貴陽(yáng),550025;2.貴州珍酒釀酒有限責(zé)任公司,貴州遵義,563003;3.貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,貴州貴陽(yáng),550025;4.貴州大學(xué)釀酒與食品工程學(xué)院,貴州貴陽(yáng),550025)

    采用稀釋平板涂布法從醬香型白酒大曲中分離篩選出細(xì)菌菌株19株,模擬醬香型白酒生產(chǎn)發(fā)酵工藝,獲得2株固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物具有濃郁醬香氣味的菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201。結(jié)合菌株形態(tài)學(xué)觀察、生理生化實(shí)驗(yàn)和分子生物學(xué)方法,鑒定其為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)。研究發(fā)現(xiàn),菌株FBKL1.0199具有高產(chǎn)蛋白酶的特性,其中性蛋白酶活力達(dá)3 925.80 U/g,酸性蛋白酶活力也相對(duì)較高,達(dá)139.27 U/g。同時(shí),利用固相微萃取-氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201模擬白酒固態(tài)發(fā)酵的揮發(fā)性香味物質(zhì)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)其中吡嗪類(lèi)物質(zhì)相對(duì)含量較高,分別為46.01%和48.32%,且均以四甲基吡嗪為主,含量分別為44.11%和47.41%。分離得到的菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201可以作為產(chǎn)四甲基吡嗪的功能菌。

    醬香;功能細(xì)菌;四甲基吡嗪

    醬香型白酒中國(guó)白酒行業(yè)中的一大酒種,其獨(dú)特的釀造工藝、地理環(huán)境造就了醬香型白酒獨(dú)特的風(fēng)格特征。高溫制曲是醬香型酒特殊工藝之一,許多研究學(xué)者都認(rèn)為高溫大曲中的香氣,是醬香型白酒中醬香氣的主要來(lái)源之一[1]。

    四甲基吡嗪是白酒中的主要功能性成分之一,在不同香型白酒中普遍存在[2],國(guó)內(nèi)外酒類(lèi)的研究者也將這類(lèi)物質(zhì)看成是構(gòu)成酒類(lèi)風(fēng)味的重要成分之一。目前,在醬香型白酒中均檢測(cè)出較高濃度的吡嗪類(lèi)物質(zhì),其中以四甲基吡嗪為主,含量最高[3]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)醬香大曲中的細(xì)菌進(jìn)行分離純化培養(yǎng),旨在獲得產(chǎn)四甲基吡嗪的功能菌株。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 大曲

    醬香型大曲樣品:貴州某酒廠(chǎng)儲(chǔ)存6個(gè)月粉碎后的釀酒車(chē)間生產(chǎn)用曲。

    1.1.2 試劑

    細(xì)菌脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)提取試劑盒:上海捷瑞生物工程有限公司;其他所需試劑為市售分析純。

    1.1.3 培養(yǎng)基

    牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl5g,瓊脂15~20 g,蒸餾水1 000 mL,pH7.0~7.2。

    牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基:牛肉膏3 g,蛋白胨10 g,NaCl 5 g,蒸餾水1 000 mL,pH7.0~7.2。

    V-P培養(yǎng)基:蛋白胨5.0 g,葡萄糖5.0 g,NaCl 5.0 g,蒸餾水1 000 mL,pH7.0~7.2。

    糖發(fā)酵試驗(yàn)培養(yǎng)基:牛肉膏5 g,蛋白胨10 g,NaCl 3 g,NaHPO4·12H2O 2 g,0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液12 mL,1%糖,蒸餾水1 000 mL,pH7.4。

    檸檬酸鹽試驗(yàn)培養(yǎng)基:NaCl 5 g,MgSO4·7H2O 0.2 g,(NH4)2PO41 g,檸檬酸鈉5.0 g,K2HPO41g,瓊脂20 g,蒸餾水1 000 mL,0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液40 mL,pH6.8。

    淀粉營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基:牛肉膏2.0 g,蛋白17.5 g,淀粉1.5 g,瓊脂17.0 g,蒸餾水1 000 mL,pH7.0。

    麩皮培養(yǎng)基[4]:麩皮15 g,15 mL水,攪拌均勻,121℃滅菌20 min。

    高粱小麥固體發(fā)酵培養(yǎng)基[5]:分別稱(chēng)取高粱與小麥各15 g,加入10 mL水,攪拌均勻,121℃滅菌20 min。

    1.2 儀器與設(shè)備

    YS100光學(xué)顯微鏡:日本尼康株式會(huì)社;S-3400N掃描電鏡:HITACHI(日立)公司;UV-2550紫外可見(jiàn)分光光度計(jì):日本島津公司;手動(dòng)固相微萃?。╯olid-phase microextraction,SPME)裝置:美國(guó)Supelco公司;HP6890/5975C氣相色譜-質(zhì)譜(gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)聯(lián)用儀:美國(guó)安捷倫公司。

    1.3 方法

    1.3.1 菌株的分離純化

    在無(wú)菌條件下稱(chēng)取樣品大曲10 g,加入已滅菌的生理鹽水90 mL,搖床振蕩30 min混勻制備成菌懸液。再?gòu)闹腥【鷳乙? mL加入無(wú)菌生理鹽水,10倍稀釋?zhuān)鸫蜗♂屩?0-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7,從不同稀釋倍數(shù)的菌懸液中取0.2 mL涂布接種于平皿上,其中10-4和10-7倍各做3個(gè)平行,10-5和10-6倍各做5個(gè)平行,35℃倒置培養(yǎng)1 d[6]。將平皿上長(zhǎng)勢(shì)良好且菌落形態(tài)上有較大差異的細(xì)菌采用平板劃線(xiàn)法將其純化,然后接入固體斜面培養(yǎng)基上,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.2 菌株模擬固態(tài)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)

    在無(wú)菌條件下,將菌株接到牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上,35℃倒置培養(yǎng)24 h后,然后從平板上的單菌落挑取一環(huán)移至液體培養(yǎng)基中,35℃搖床培養(yǎng)24 h制備成菌懸液。以10%的接種量將菌懸液加到高粱小麥固體發(fā)酵培養(yǎng)基中,按照35℃→40℃→45℃→50℃→55℃的24 h梯度升溫靜置培養(yǎng)5 d[5]。對(duì)照組為接入不含細(xì)菌的液體培養(yǎng)液,培養(yǎng)方法相同。菌株固態(tài)發(fā)酵完成后,對(duì)其發(fā)酵產(chǎn)物從酸味、醬味和異味等三個(gè)方面進(jìn)行感官評(píng)價(jià),篩選出醬香味較濃郁的進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

    1.3.3 功能菌株的鑒定

    菌株形態(tài)學(xué)觀察:將篩選出產(chǎn)醬香味較濃郁的細(xì)菌在平板上活化,再以點(diǎn)接法接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上,觀察其單菌落形態(tài)。染色后顯微鏡觀察其菌體形態(tài)。

    菌株生理生化實(shí)驗(yàn):按《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[7]及《一般細(xì)菌常用鑒定方法》[8]對(duì)細(xì)菌進(jìn)行生理生化試驗(yàn)。

    菌株分子生物學(xué)鑒定:根據(jù)細(xì)菌DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū),采用細(xì)菌16S rDNA通用PCR引物27f(5′-AGAGTTT GATCCTGGCTCAG-3′)和1 492r(5′-GGT-TACCTTGTTACGACTT-3′)進(jìn)行擴(kuò)增,在25.0 μL聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)反應(yīng)體系中,加上、下游引物1 492r和27f各1.0 μL,Mix 12.5 μL,細(xì)菌DNA 2.0 μL,ddH2O 8.5 μL。PCR擴(kuò)增條件為初始變性94℃、5 min,然后變性94℃、0.5 min,退火55℃、0.5 min,復(fù)性72℃、1.5 min,30個(gè)循環(huán),最后延伸72℃、10 min。取2 μL DNA溶液于1%瓊脂糖凝膠100 V電泳40 min左右。

    測(cè)序由上海生物工程有限公司完成,采用16S r DNA測(cè)序方法對(duì)菌株進(jìn)行分子鑒定。所得測(cè)序結(jié)果輸入美國(guó)國(guó)家生物信息技術(shù)中心(national center of biotechnology information,NCBI)數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST比對(duì),用Neighbor-Joining構(gòu)建目標(biāo)菌的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

    1.3.4 菌株功能性研究實(shí)驗(yàn)

    產(chǎn)蛋白酶活性研究:模擬生產(chǎn)發(fā)酵工藝,將篩選出的菌株做菌種產(chǎn)蛋白酶性能實(shí)驗(yàn)。先將菌株接到牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上,35℃倒置培養(yǎng)24 h后,從平板上的單菌落挑取一環(huán)移至液體培養(yǎng)基中,35℃搖床培養(yǎng)24 h制備成菌懸液。以10%的接種量將菌懸液加到麩皮培養(yǎng)基中。按照35℃、45℃、55℃,24 h梯度升溫靜置培養(yǎng)3 d[9]。稱(chēng)取10 g固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物于250 mL三角瓶中,加入90 mL蒸餾水,40℃水浴鍋中水浴1 h,其中每隔15 min攪拌一次,經(jīng)濾紙過(guò)濾后獲得粗酶液。分別配制乙酸乙酸鈉緩沖液(pH 3.0)和磷酸緩沖液(pH 7.2),測(cè)定其酸性和中性蛋白酶活力。

    1.3.5 測(cè)定方法

    采用福林-酚法測(cè)蛋白酶活力,具體操作步驟參見(jiàn)商業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10317—1999《蛋白酶活力測(cè)定法》。

    固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物GC-MS分析:取篩選出菌株經(jīng)模擬固態(tài)發(fā)酵后的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行GC-MS分析,取樣品約1 g,置于4 mL固相微萃取儀采樣瓶中,插入裝有2 cm-50/30 μm DVB/CAR/PDMSStableFlex纖維頭的手動(dòng)進(jìn)樣器,在100℃左右頂空萃取30 min取出,快速移出萃取頭并立即插入氣相色譜儀進(jìn)樣口(溫度250℃)中,熱解吸3 min進(jìn)樣。

    氣相色譜條件:色譜柱為ZB-5MSI5%Phenyl-95%Di-Methylpolysiloxane(30 m×0.25 mm×0.25 μm)彈性石英毛細(xì)管柱,柱溫45℃(保留2 min),以4℃/min升溫至220℃,保持2 min;汽化室溫度250℃;載氣為高純He(99.999%);柱前壓7.62psi,載氣流量1.0 mL/min;不分流進(jìn)樣;溶劑延遲時(shí)間1.5 min。

    質(zhì)譜檢測(cè)條件:電離方式為電子電離(electronic ionization,EI)源,離子源溫度230℃,四極桿溫度150℃,電子能量70 eV,發(fā)射電流34.6 μA,倍增器電壓1 125 V,接口溫度280℃,質(zhì)量掃描范圍20~450 amu。

    定性定量方法:對(duì)總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索及核對(duì)Nist2005和Wiley275標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖,確定了揮發(fā)性化學(xué)成分,用峰面積歸一化法測(cè)定了各化學(xué)成分的相對(duì)含量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 菌株的分離純化

    通過(guò)平板稀釋涂布法,從醬香大曲中分離得到19株菌落形態(tài)上有較大差異的細(xì)菌,所得結(jié)果如表1所示。

    表1 細(xì)菌菌落形態(tài)描述Table 1 Morphological description of bacterial colonies

    由表1可知,通過(guò)菌落觀察能夠得到19株形態(tài)有明顯區(qū)別的菌株,用于下一步固態(tài)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)的發(fā)酵菌株。

    2.2 菌株模擬固態(tài)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)

    菌株固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物感官評(píng)定如表2所示。

    由表2可知,細(xì)菌進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵完成后,經(jīng)感官初步評(píng)定篩選出醬香較突出的菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    表2 菌株固態(tài)發(fā)酵感官評(píng)定結(jié)果Table 2 Sensory evaluation results of strains solid-state fermentation

    2.3 菌株的鑒定

    2.3.1 菌株形態(tài)學(xué)觀察

    對(duì)篩選出的FBKL1.0199和FBKL1.0201以點(diǎn)接法接種進(jìn)行培養(yǎng),觀察其菌落形態(tài),結(jié)果如圖1所示。菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201經(jīng)染色后,其細(xì)胞形態(tài)均為桿狀,如圖2所示。

    圖1 菌株FBKL1.0199(A)和菌株FBKL1.0201(B)的菌落形態(tài)Fig.1 Colony morphology of strain FBKL1.0199(A)and FBKL1.0201(B)

    圖2 菌株FBKL1.0199(A)和菌株FBKL1.0201(B)細(xì)胞形態(tài)Fig.2 Cell morphology of strain FBKL1.0199(A)and FBKL1.0201(B)

    2.3.2 生理生化實(shí)驗(yàn)

    菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201生理生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示。

    表3 菌株生理生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 3 Physiological and biochemical tests results of strains

    由表3可知,菌株FBKL1.0199和菌株FBKL1.0201接觸酶反應(yīng)呈陽(yáng)性,V-P實(shí)驗(yàn)呈陽(yáng)性,能利用葡萄糖、甘露糖產(chǎn)酸,可利用檸檬酸鹽,兼性厭氧。參照《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[7]和《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[8],初步認(rèn)定菌株FBKL1.0199和菌株FBKL1.0201為芽孢桿菌屬(Bacillussp.),利用分子生物學(xué)手段對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定。

    2.3.3 分子生物學(xué)鑒定

    采用16S rDNA測(cè)序方法對(duì)菌株FBKL1.0199和FBKL 1.0201菌株進(jìn)行分子鑒定,對(duì)DNA進(jìn)行序列擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),PCR擴(kuò)增片段長(zhǎng)度約為1500bp。將所得測(cè)序結(jié)果輸入NCBI中進(jìn)行BLAST比對(duì),用Neighbor-Joining法構(gòu)建目標(biāo)菌的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),結(jié)果見(jiàn)圖3,根據(jù)比對(duì)結(jié)果菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201與地衣芽孢桿菌相似性達(dá)到99%,結(jié)合菌落形態(tài)及生理生化實(shí)驗(yàn),將其鑒定為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)。

    圖3 菌株FBKL1.0199、FBKL1.0201系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.3 Phylogenetic tree of strain FBKL1.0199 and FBKL1.0201

    2.4 菌株功能性試驗(yàn)

    2.4.1 產(chǎn)蛋白酶活性研究

    白酒生產(chǎn)中,蛋白酶是至關(guān)重要的一種酶,可將原料中的粗蛋白降解成各種氨基酸,使得大曲中的氨基酸種類(lèi)和數(shù)量增多。豐富的氨基酸是微生物通過(guò)代謝合成四甲基吡嗪的前體物質(zhì)。同時(shí),蛋白酶在白酒的釀造過(guò)程中可以促進(jìn)微生物繁殖以及分解蛋白質(zhì)、降解微生物菌體蛋白等多種功能,高活力的蛋白酶可以提高白酒的產(chǎn)量和質(zhì)量[10-15]。因此對(duì)菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201進(jìn)行產(chǎn)蛋白酶活性研究,其產(chǎn)酶活力如表4所示。

    表4 蛋白酶活力測(cè)定結(jié)果Table 4 Determination results of protease activity

    由表4可以看出,菌株FBKL1.0199其產(chǎn)蛋白酶能力優(yōu)于FBKL1.0201,兩株菌產(chǎn)中性蛋白酶的能力均優(yōu)于酸性蛋白酶,菌株FBKL1.0199中性蛋白酶活力高達(dá)3 925.80 U/g,酸性蛋白酶活力也相對(duì)較高,達(dá)139.27 U/g,菌株FBKL 1.0199具有高產(chǎn)蛋白酶的特性。

    2.4.2 固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物GC-MS分析

    對(duì)菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201進(jìn)行了模擬發(fā)酵實(shí)驗(yàn),通過(guò)固相微萃取與GC-MS聯(lián)用技術(shù),對(duì)其發(fā)酵產(chǎn)物的揮發(fā)性香味成分進(jìn)行了測(cè)定,其檢測(cè)結(jié)果如圖4、表5和表6所示。

    圖4 菌株FBKL1.0199(A)和菌株FBKL1.0201(B)發(fā)酵產(chǎn)物揮發(fā)性成分GC-MS分析總離子流色譜圖Fig.44 Totalion chromatograms of volatile components in fermentation products of strain FBKL1.0199(A) and FBKL1.0201 (B) by GC-MS

    由圖4A、表5可知,菌株FBKL1.0199發(fā)酵產(chǎn)物中,吡嗪類(lèi)化合物相對(duì)百分含量最高,達(dá)到了46.01%,其中以四甲基吡嗪為主,含量為44.11%。其次是酮類(lèi)化合物,含量為29.95%,其中以3-羥基-2-丁酮(乙偶姻)為主,含量為19.547%。醇類(lèi)化合物百分含量為13.27%,以1,3-丁二醇為主,含量為10.814%。酚類(lèi)物質(zhì)含量為2.57%,醛類(lèi)物質(zhì)含量為0.50%,酯類(lèi)物質(zhì)含量為0.22%,沒(méi)有酸類(lèi)物質(zhì),還有一些其他的烷烴類(lèi)和雜環(huán)類(lèi)和未測(cè)定出的化合物,總含量為7.48%。

    表5 菌株FBKL1.0199發(fā)酵產(chǎn)物GC-MS成分分析結(jié)果Table 5 Analysis results of components in the fermentation products of strain FBKL1.0199 by GC-MS

    由圖4B、表6可知,菌株FBKL1.0201發(fā)酵產(chǎn)物所測(cè)揮發(fā)性成分中,吡嗪類(lèi)化合物含量最高,達(dá)48.32%,以四甲基吡嗪為主,含量達(dá)47.41%。其次是酮類(lèi)物質(zhì),含量為30.42%,以2,3-戊二酮主,含量達(dá)21.75%,乙偶姻含量?jī)H為0.172%。醇類(lèi)物質(zhì)含量為10.98%,2,3-丁二醇和1,3-丁二醇為主。酚類(lèi)物質(zhì)含量為1.71%。其他物質(zhì)占6.34%。

    表6 菌株FBKL1.0201發(fā)酵產(chǎn)物GC-MS成分分析結(jié)果Table 6 Analysis results of components in the fermentation products of strain FBKL1.0201 by GC-MS

    綜合以上結(jié)果,菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201發(fā)酵產(chǎn)物揮發(fā)性成分中吡嗪類(lèi)物質(zhì)含量都較高,均以四甲基吡嗪為主。結(jié)合固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物感官評(píng)價(jià),其發(fā)酵產(chǎn)物醬香濃郁,因此,可將菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201作為重要的產(chǎn)四甲基吡嗪功能菌。

    3 結(jié)論

    通過(guò)稀釋涂布法,從醬香大曲中分離得到19株菌落形態(tài)上有較大差異的細(xì)菌。模擬醬香型白酒生產(chǎn)發(fā)酵工藝,通過(guò)梯度升溫發(fā)酵,獲得兩株固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物具有濃郁醬香氣味的菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201。結(jié)合菌株形態(tài)學(xué)觀察、生理生化實(shí)驗(yàn)和分子生物學(xué)方法,鑒定其為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)。

    菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201產(chǎn)蛋白酶活性研究發(fā)現(xiàn),兩株菌產(chǎn)中性蛋白酶的能力均優(yōu)于酸性蛋白酶。菌株FBKL1.0199中性蛋白酶活力高達(dá)3 925.80 U/g,酸性蛋白酶活力也相對(duì)較高,達(dá)139.27 U/g,菌株FBKL1.0199具有高產(chǎn)蛋白酶的特性。菌株FBKL1.0201中性蛋白酶活力達(dá)1 377.23 U/g,不產(chǎn)酸性蛋白酶。

    對(duì)菌株FBKL1.0199和FBKL1.0201固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中的揮發(fā)性成分采用GC-MS檢測(cè),發(fā)現(xiàn)其固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中吡嗪類(lèi)物質(zhì)相對(duì)含量非常高,以四甲基吡嗪為主。同時(shí),結(jié)合固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物感官評(píng)價(jià),其發(fā)酵產(chǎn)物醬香濃郁,這與醬香型白酒中醬香風(fēng)味的特征性成分以吡嗪類(lèi)等物質(zhì)為主的說(shuō)法相符。

    [1]王婧,王曉丹,邱樹(shù)毅,等.醬香型白酒釀造體系風(fēng)格特征形成探究[J].釀酒,2015,4(4):99-104.

    [2]李曉霞,李晶晶,張秀紅.汾酒大曲中高產(chǎn)四甲基吡嗪菌株的篩選與鑒定[J].食品與機(jī)械,2016,31(6):49-51.

    [3]吳建峰.白酒中四甲基吡嗪全程代謝機(jī)理研究[D].無(wú)錫:江南大學(xué),2013.

    [4]徐佳,邱樹(shù)毅,周鴻翔,等.醬香大曲中可培養(yǎng)的冠突散囊菌的初步研究[J].中國(guó)釀造,2016,35(6):55-59.

    [5]周劍麗,黃平,楊國(guó)華,等.麩曲醬香白酒自動(dòng)化通風(fēng)制曲技術(shù)的應(yīng)用及工藝總結(jié)[J].中國(guó)釀造,2016,35(9):138-140.

    [6]杜連祥.工業(yè)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社,1992:14-19.

    [7]R.E.布坎南,N.E.吉本斯.伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)[M].北京:科學(xué)出版社,1984:23-29.

    [8]中國(guó)科學(xué)院微生物研究所細(xì)菌分類(lèi)組.一般細(xì)菌常用鑒定方法[M].北京:科學(xué)出版社,1978:35-44.

    [9]連賓,王乃亮,秦京,等.高溫制曲產(chǎn)香與嗜熱細(xì)菌活動(dòng)關(guān)系的初步研究[J].貴州科學(xué),1990(1):48-51.

    [10]李杰,吳婷,馬南,等.白曲霉酸性蛋白酶在黑曲霉中表達(dá)[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2016(5):29-35.

    [11]袁慶云.醬香型白酒發(fā)酵過(guò)程中微生物的功能研究[J].釀酒,2016,39(4):15-20.

    [12]張榮.產(chǎn)醬香功能細(xì)菌的篩選及其特征風(fēng)味化合物的研究[D].無(wú)錫:江南大學(xué),2009.

    [13]趙興秀,何義國(guó),趙長(zhǎng)青,等.產(chǎn)醬香功能菌的篩選及其風(fēng)味物質(zhì)研究[J].食品工業(yè)科技,2016,37(6):196-200.

    [14]黃家?guī)X,廖妍儼,孫棣,等.頂空固相微萃取-氣相色譜法檢測(cè)白酒中吡嗪類(lèi)化合物[J].中國(guó)釀造,2016,35(8):163-168.

    [15]班世棟,等.醬香型大曲中具產(chǎn)酶功能霉菌的分離篩選[J].釀酒,2014,41(4):31-35.

    Isolation and identification of functional bacteria with high yield of tetramethyl pyrazine from Moutai-flavor high-temperatureDaqu

    WANG Xiaodan1,3,4,WANG Jing1,4,ZHU Guojun2,LEI Anliang2,HU Penggang1,4,QIU Shuyi1,4*(1.Guizhou Provincial Key Laboratory of Fermentation Engineering and Biological Pharmacy,Guizhou University,Guiyang 550025,China; 2.Guizhou Zhenjiu Brewing Co.,Ltd.,Zunyi 563003,China;3.School of Life Sciences,Guizhou University,Guiyang 550025,China; 4.School of Liquor and Food Engineering,Guizhou University,Guiyang 550025,China)

    By the methods of spread plate from Moutai-flavor high-temperatureBaijiu Daqu,19 bacterial strains were isolated and screened.Two strains of FBKL1.0199 and FBKL1.0201 with rich Moutai-flavor were obtained by simulation of the Moutai-flavorBaijiu(liquor)fermentation process.Combining with the morphology,physiology of strain with biochemical and molecular biology,the strain was identified asBacillus licheniformis.It was found that strain FBKL1.0199 had the characteristics of high yield protease,the protease activity was as high as 3 925.80 U/g, and the acid protease activity was also relatively high,reaching 139.27 U/g.At the same time,the volatile flavor compounds produced by strains FBKL1.0199 and FBKL1.0201 were analyzed using HS-SPME and GC-MS.Results showed that the fermentation products had high relative content of pyrazine compounds,which was 46.01%and 48.32%,respectively.The primary components were tetramethyl pyrazine,and the contents were 44.11%and 47.41%,the strains FBKL1.0199 and FBKL1.0201 can be used as the functional bacteria for tetramethyl pyrazine production.

    Moutai-flavor;functional bacteria;tetramethyl pyrazine

    TS261.1

    0254-5071(2017)01-0055-06

    10.11882/j.issn.0254-5071.2017.01.011

    2016-02-10

    貴州省工業(yè)攻關(guān)項(xiàng)目(黔科合GZ字[2014]3012);貴州省省校合作計(jì)劃項(xiàng)目(黔科合LH字[2014]7672)

    王曉丹(1980-),女,工程師,博士,研究方向?yàn)閼?yīng)用生物技術(shù)。

    *通訊作者:邱樹(shù)毅(1963-),男,教授,博士,研究方向?yàn)閼?yīng)用生物技術(shù)。

    猜你喜歡
    醬香型醬香吡嗪
    論茅臺(tái)鎮(zhèn)醬香酒發(fā)展前景及投資分析報(bào)告
    中脈名酒事業(yè)部 領(lǐng)航醬香白酒之旅
    醬香永存
    微生物技術(shù)在醬香型白酒生產(chǎn)中應(yīng)用
    電子舌在不同輪次醬香型白酒區(qū)分識(shí)別中的應(yīng)用
    醬香大鯢皮膚泡制酒對(duì)腸道微生物的影響
    茅臺(tái)醬香型酒糟和酒曲脂溶性成分及抗菌活性研究
    醬香型白酒理化指標(biāo)的Logistic模型
    濃香型“山莊老酒”中吡嗪類(lèi)物質(zhì)的分析研究
    4H,8H-雙呋咱并[3,4-b:3',4'-e]吡嗪的合成及熱性能
    久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产成年人精品一区二区| 欧美人与善性xxx| 在线播放无遮挡| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 | 亚洲久久久久久中文字幕| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 热99在线观看视频| 久久久久久久精品吃奶| 一级av片app| 色视频www国产| 日本一本二区三区精品| a级一级毛片免费在线观看| 国产乱人伦免费视频| 国产男靠女视频免费网站| 久久人人爽人人爽人人片va| 男人和女人高潮做爰伦理| 日本在线视频免费播放| 亚洲成a人片在线一区二区| 欧美中文日本在线观看视频| 91在线观看av| 成人国产一区最新在线观看| 色综合站精品国产| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 日本一二三区视频观看| 深夜精品福利| 色噜噜av男人的天堂激情| 22中文网久久字幕| 一区二区三区免费毛片| 国产高清有码在线观看视频| 久久久久久久精品吃奶| a级毛片免费高清观看在线播放| 九色成人免费人妻av| 亚洲av免费在线观看| 色5月婷婷丁香| 久久久久久久久久成人| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 免费无遮挡裸体视频| 国产高清不卡午夜福利| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美日韩乱码在线| 最新在线观看一区二区三区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 91久久精品国产一区二区三区| 最近在线观看免费完整版| 国产在视频线在精品| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 一个人免费在线观看电影| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 久久久精品大字幕| 三级国产精品欧美在线观看| 国产av不卡久久| 国产亚洲精品久久久com| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲国产精品合色在线| 免费看a级黄色片| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产人妻一区二区三区在| 黄色欧美视频在线观看| 国产精品一区二区性色av| 丰满人妻一区二区三区视频av| 色综合站精品国产| 国产亚洲精品av在线| 欧美在线一区亚洲| av视频在线观看入口| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 中文字幕熟女人妻在线| 欧美一区二区亚洲| 中国美女看黄片| 国产精品一区www在线观看 | 免费看光身美女| 国产极品精品免费视频能看的| 高清日韩中文字幕在线| 国产精品久久久久久av不卡| 老女人水多毛片| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产精品一区www在线观看 | 毛片一级片免费看久久久久 | 日本五十路高清| 色综合站精品国产| 又爽又黄无遮挡网站| av在线亚洲专区| 亚洲真实伦在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 三级毛片av免费| 国产精品人妻久久久久久| 久久精品人妻少妇| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲人成网站在线播| 亚洲av五月六月丁香网| 精品一区二区免费观看| 成年人黄色毛片网站| 久久久精品大字幕| 久久久午夜欧美精品| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产精品一区www在线观看 | 69av精品久久久久久| 欧美中文日本在线观看视频| 日韩精品中文字幕看吧| 一进一出好大好爽视频| 男人和女人高潮做爰伦理| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产午夜福利久久久久久| 88av欧美| 免费在线观看成人毛片| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 麻豆国产97在线/欧美| 国产伦一二天堂av在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久久精品大字幕| 亚洲天堂国产精品一区在线| 热99在线观看视频| 久久久午夜欧美精品| 久久这里只有精品中国| 久久人人爽人人爽人人片va| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲欧美日韩高清专用| 最近最新中文字幕大全电影3| 成人国产综合亚洲| 12—13女人毛片做爰片一| 97超视频在线观看视频| 亚洲七黄色美女视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 在线免费观看不下载黄p国产 | 日韩人妻高清精品专区| 有码 亚洲区| 成人午夜高清在线视频| 精品免费久久久久久久清纯| 午夜免费激情av| 最新在线观看一区二区三区| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 亚洲国产色片| 国产av一区在线观看免费| 日韩国内少妇激情av| 22中文网久久字幕| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲 国产 在线| 国产精品久久久久久精品电影| 最近视频中文字幕2019在线8| videossex国产| 国产视频内射| 啦啦啦韩国在线观看视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 变态另类丝袜制服| 观看美女的网站| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 久久99热6这里只有精品| 国产综合懂色| 在线播放无遮挡| h日本视频在线播放| 日本成人三级电影网站| 成人特级黄色片久久久久久久| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲欧美清纯卡通| 国产成人aa在线观看| 观看免费一级毛片| 国产午夜精品论理片| 我的老师免费观看完整版| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 日本免费a在线| 1024手机看黄色片| 99精品久久久久人妻精品| 国产真实乱freesex| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 国产精品免费一区二区三区在线| 日本免费a在线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产精品电影一区二区三区| 99视频精品全部免费 在线| 99热6这里只有精品| 麻豆国产av国片精品| 欧美一级a爱片免费观看看| av天堂中文字幕网| 少妇被粗大猛烈的视频| 露出奶头的视频| 久久久色成人| 精品午夜福利视频在线观看一区| 日韩一区二区视频免费看| 两个人的视频大全免费| av国产免费在线观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产精品久久久久久av不卡| 国产单亲对白刺激| 亚洲午夜理论影院| 亚洲成人久久性| 国产高清视频在线观看网站| 欧美成人一区二区免费高清观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 午夜激情欧美在线| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久久久久久亚洲中文字幕| 在线播放无遮挡| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 91久久精品国产一区二区成人| 一本一本综合久久| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产伦一二天堂av在线观看| av在线蜜桃| 日韩欧美三级三区| 成人午夜高清在线视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲人成网站在线播| 国产色婷婷99| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲自拍偷在线| 国产精品精品国产色婷婷| 国产成人aa在线观看| 日本一本二区三区精品| 美女免费视频网站| 三级毛片av免费| h日本视频在线播放| 国产精品三级大全| 免费黄网站久久成人精品| 一区二区三区高清视频在线| 男女视频在线观看网站免费| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 国产一区二区三区在线臀色熟女| 最好的美女福利视频网| 国产精品,欧美在线| 床上黄色一级片| 一区二区三区免费毛片| 在线看三级毛片| 人人妻人人看人人澡| 成人国产综合亚洲| eeuss影院久久| 狠狠狠狠99中文字幕| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产美女午夜福利| 精品久久久久久久久久免费视频| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 白带黄色成豆腐渣| 国产不卡一卡二| 91久久精品国产一区二区成人| 免费在线观看日本一区| 国产不卡一卡二| 能在线免费观看的黄片| 国产视频一区二区在线看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲国产精品sss在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 国产精品亚洲美女久久久| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美中文日本在线观看视频| 日韩精品青青久久久久久| 欧美成人一区二区免费高清观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久人人爽人人爽人人片va| 级片在线观看| 精品久久久久久久久亚洲 | 少妇人妻一区二区三区视频| 一进一出抽搐动态| 动漫黄色视频在线观看| 国产精品久久视频播放| 日韩国内少妇激情av| 少妇的逼好多水| 亚洲不卡免费看| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 老熟妇仑乱视频hdxx| 在线观看美女被高潮喷水网站| 成人美女网站在线观看视频| 一进一出好大好爽视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 日韩av在线大香蕉| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 欧美bdsm另类| 欧美中文日本在线观看视频| 日韩人妻高清精品专区| 国产欧美日韩一区二区精品| 在线天堂最新版资源| 69人妻影院| 免费人成在线观看视频色| 久久99热这里只有精品18| 99热这里只有是精品在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| 少妇的逼好多水| 在线观看午夜福利视频| 无遮挡黄片免费观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国内精品久久久久久久电影| 国产精品不卡视频一区二区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 免费人成视频x8x8入口观看| 十八禁国产超污无遮挡网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久精品综合一区二区三区| 51国产日韩欧美| 免费av观看视频| 免费看a级黄色片| 亚洲av熟女| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 亚洲美女搞黄在线观看 | 国产不卡一卡二| x7x7x7水蜜桃| 亚洲精品亚洲一区二区| 熟女人妻精品中文字幕| 身体一侧抽搐| 久久九九热精品免费| 赤兔流量卡办理| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 97人妻精品一区二区三区麻豆| bbb黄色大片| 日本黄色视频三级网站网址| 俺也久久电影网| 欧美不卡视频在线免费观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 18+在线观看网站| 亚洲熟妇熟女久久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国内精品久久久久久久电影| 久久欧美精品欧美久久欧美| 乱系列少妇在线播放| 久久香蕉精品热| 日韩av在线大香蕉| 欧美不卡视频在线免费观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲中文日韩欧美视频| 成年女人永久免费观看视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 99热只有精品国产| 国产色爽女视频免费观看| 精品国产三级普通话版| 99久国产av精品| 亚洲真实伦在线观看| 国产美女午夜福利| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美中文日本在线观看视频| 美女大奶头视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 22中文网久久字幕| 亚洲人与动物交配视频| 在线观看av片永久免费下载| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 91久久精品电影网| 精品一区二区三区视频在线| 国产高清视频在线播放一区| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲专区中文字幕在线| 简卡轻食公司| 日韩一本色道免费dvd| 精品欧美国产一区二区三| 国产熟女欧美一区二区| 禁无遮挡网站| 国产一级毛片七仙女欲春2| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 久久6这里有精品| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美人与善性xxx| 俄罗斯特黄特色一大片| 老司机深夜福利视频在线观看| 91久久精品国产一区二区三区| 日韩一区二区视频免费看| 99在线人妻在线中文字幕| 黄色欧美视频在线观看| 精品午夜福利在线看| 十八禁国产超污无遮挡网站| 波多野结衣高清作品| 十八禁国产超污无遮挡网站| 欧美精品国产亚洲| 一本精品99久久精品77| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲经典国产精华液单| 国产不卡一卡二| 成人无遮挡网站| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日日啪夜夜撸| 日本免费a在线| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产av在哪里看| 日韩高清综合在线| 成人永久免费在线观看视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久久久九九精品影院| 免费一级毛片在线播放高清视频| 一级a爱片免费观看的视频| 1024手机看黄色片| 看十八女毛片水多多多| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 日韩欧美在线二视频| av国产免费在线观看| 久99久视频精品免费| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产成人影院久久av| 亚洲中文字幕日韩| 久久久国产成人免费| 国产高清视频在线播放一区| 韩国av在线不卡| 免费看a级黄色片| 麻豆av噜噜一区二区三区| 亚洲真实伦在线观看| 国产69精品久久久久777片| 午夜免费成人在线视频| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美日本亚洲视频在线播放| 亚洲欧美精品综合久久99| 少妇被粗大猛烈的视频| 又爽又黄a免费视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 国产日本99.免费观看| 最好的美女福利视频网| 亚洲精品456在线播放app | 午夜精品一区二区三区免费看| 十八禁网站免费在线| 老女人水多毛片| 五月玫瑰六月丁香| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 成年女人永久免费观看视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 观看美女的网站| 欧美激情久久久久久爽电影| 日韩高清综合在线| 99久久久亚洲精品蜜臀av| bbb黄色大片| 国产av在哪里看| 免费看日本二区| 少妇人妻精品综合一区二区 | 成人美女网站在线观看视频| 丰满乱子伦码专区| 老司机深夜福利视频在线观看| 丝袜美腿在线中文| 在线a可以看的网站| 国产亚洲av嫩草精品影院| 日韩欧美 国产精品| 日本一二三区视频观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产一区二区三区av在线 | 波野结衣二区三区在线| 一级毛片久久久久久久久女| 美女被艹到高潮喷水动态| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 听说在线观看完整版免费高清| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 | 51国产日韩欧美| av在线蜜桃| 久久久久国内视频| 黄色配什么色好看| 制服丝袜大香蕉在线| 国产综合懂色| 国产私拍福利视频在线观看| 在线看三级毛片| 中文字幕av成人在线电影| 午夜免费激情av| 搞女人的毛片| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产精品永久免费网站| www日本黄色视频网| 国产精华一区二区三区| 国产在线男女| 婷婷色综合大香蕉| www.www免费av| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久午夜福利片| 日日夜夜操网爽| 午夜影院日韩av| www.www免费av| 色综合婷婷激情| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产成人影院久久av| 久久久久久久久中文| av国产免费在线观看| 春色校园在线视频观看| 色综合婷婷激情| 婷婷六月久久综合丁香| 人妻少妇偷人精品九色| 特级一级黄色大片| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 成人国产综合亚洲| 久久精品影院6| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 在线观看免费视频日本深夜| 成年女人永久免费观看视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产三级在线视频| 麻豆av噜噜一区二区三区| 日日啪夜夜撸| 在线观看午夜福利视频| 在线国产一区二区在线| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲不卡免费看| 亚洲精品成人久久久久久| 国内精品久久久久久久电影| 久久久午夜欧美精品| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久精品国产亚洲网站| 22中文网久久字幕| 麻豆国产av国片精品| 国产视频一区二区在线看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 成年女人看的毛片在线观看| 午夜福利在线观看吧| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 一个人免费在线观看电影| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 在现免费观看毛片| 日韩精品中文字幕看吧| 欧美一区二区国产精品久久精品| 色尼玛亚洲综合影院| 精品人妻1区二区| 国产精华一区二区三区| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 日韩欧美三级三区| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产高清视频在线播放一区| 欧美黑人巨大hd| 韩国av一区二区三区四区| 国产成年人精品一区二区| 欧美成人免费av一区二区三区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 中亚洲国语对白在线视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 天堂动漫精品| 精品久久久久久成人av| 国产三级中文精品| 日本一二三区视频观看| 国产精品国产高清国产av| 综合色av麻豆| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 3wmmmm亚洲av在线观看| 精品无人区乱码1区二区| 不卡一级毛片| 亚洲精华国产精华精| 91狼人影院| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲第一电影网av| 久久国产乱子免费精品| 51国产日韩欧美| 欧美日韩黄片免| 精品久久久久久久末码| 国产伦一二天堂av在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 真实男女啪啪啪动态图| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲色图av天堂| 国产伦人伦偷精品视频| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 国产高清激情床上av| 麻豆av噜噜一区二区三区| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲欧美清纯卡通| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 日韩欧美免费精品| 日韩欧美在线乱码| 波多野结衣高清作品| 久久久久精品国产欧美久久久| 黄片wwwwww| 一级av片app| 午夜免费成人在线视频| 久99久视频精品免费| 欧美日韩黄片免| 午夜免费激情av| av天堂中文字幕网| 色播亚洲综合网| 少妇熟女aⅴ在线视频| 免费看美女性在线毛片视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 欧美三级亚洲精品| 最近最新免费中文字幕在线| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 欧美一区二区亚洲| 在线播放无遮挡| or卡值多少钱| 成人精品一区二区免费| 少妇的逼好多水| 午夜精品一区二区三区免费看| 我的女老师完整版在线观看| 国产av一区在线观看免费| 一区福利在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| av国产免费在线观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产精品福利在线免费观看| 国产日本99.免费观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美日韩黄片免| 亚洲av免费高清在线观看| av.在线天堂| 亚洲最大成人手机在线| 麻豆成人av在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 波野结衣二区三区在线| 嫩草影院入口| 一级黄色大片毛片| 久久午夜福利片| 日本成人三级电影网站| 日韩高清综合在线| 亚洲中文字幕日韩| 国产亚洲精品久久久com|