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    SLE結(jié)合GC-MS法測(cè)定葡萄酒中氨基甲酸乙酯

    2017-02-16 07:08:39張萬(wàn)利梁新紅冉軍艦孫俊良莫海珍
    中國(guó)釀造 2017年1期
    關(guān)鍵詞:二氯甲烷乙酯甲酸

    張萬(wàn)利,梁新紅*,冉軍艦,孫俊良,莫海珍

    (河南科技學(xué)院食品學(xué)院,河南新鄉(xiāng)453003)

    SLE結(jié)合GC-MS法測(cè)定葡萄酒中氨基甲酸乙酯

    張萬(wàn)利,梁新紅*,冉軍艦,孫俊良,莫海珍

    (河南科技學(xué)院食品學(xué)院,河南新鄉(xiāng)453003)

    建立了固液萃?。⊿LE)結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)法測(cè)定葡萄酒中氨基甲酸乙酯(EC)含量的檢測(cè)方法。以硅藻土為吸附劑,二氯甲烷為萃取溶劑,對(duì)葡萄酒中氨基甲酸乙酯進(jìn)行萃取。結(jié)果表明,二氯甲烷用量為70 mL,酒樣中乙醇體積分?jǐn)?shù)低于12%,萃取效果最佳。EC在200~1 600 μg/L范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好(R2=0.997 9)。加標(biāo)回收率為91.30%~99.90%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.26%~1.98%,方法的精密度RSD值為1.61%~3.06%。表明該方法準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性和精密度良好,適合用于葡萄酒樣品中EC含量的檢測(cè)。

    固液萃?。粴庀嗌V-質(zhì)譜聯(lián)用法;葡萄酒;氨基甲酸乙酯

    葡萄酒釀造過(guò)程中,瓜氨酸和尿素等物質(zhì)和乙醇自發(fā)反應(yīng)會(huì)生成致癌物氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)[1-2],其為2A類(lèi)致癌物[3],加拿大、美國(guó)等國(guó)家對(duì)葡萄酒中EC含量規(guī)定了限量標(biāo)準(zhǔn),世界衛(wèi)生組織提議世界各國(guó)規(guī)定酒類(lèi)飲料中EC的限量標(biāo)準(zhǔn)。

    目前,葡萄酒中EC含量的檢測(cè)多采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(gas chromatography-mass spectrography,GC-MS)法[4-5]。應(yīng)用GC-MS方法檢測(cè)食品中痕量成分的前處理過(guò)程不僅耗時(shí)、操作過(guò)程繁瑣,而且較易引入分析誤差,因此,選用的樣品前處理方法直接影響到GC-MS儀器分析的成本、準(zhǔn)確性和實(shí)用性。樣品前處理方法主要有液/液萃取(liquid liquidextraction,LLE)、固相萃取(solidphaseextraction,SPE)、固相微萃?。╯olid phase microextraction,SPME)等[6-11]。

    液/液萃取是傳統(tǒng)的GC分析的前處理方法,其操作過(guò)程簡(jiǎn)單,但因作為萃取劑的有機(jī)溶劑和水相存在乳化現(xiàn)象,分析結(jié)果的精密度及準(zhǔn)確度均較低。固相萃取法是基于液相色譜理論的一種分離純化方法,雖然沒(méi)有出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,但萃取劑消耗量大[6,14-15]。固相微萃取方法簡(jiǎn)便、快速且不需萃取溶劑,但方法的精密度和準(zhǔn)確度較低[8-9]。因此前處理方法中減少萃取溶劑消耗量且提高檢測(cè)結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度是GC-MS檢測(cè)中亟待解決的重要關(guān)鍵問(wèn)題。固液萃取是將具有高效、高選擇性和吸附性的硅藻土和待測(cè)樣品混合均勻,置入玻璃色譜層析柱中,然后用萃取溶劑以一定的速率進(jìn)行洗脫目標(biāo)檢測(cè)物的方法。目前,少見(jiàn)固液萃取應(yīng)用于GC-MS分析前處理方法的文獻(xiàn)報(bào)道。

    本研究采用SLE前處理方法對(duì)葡萄酒樣品進(jìn)行萃取,結(jié)合GC-MS法檢測(cè)葡萄酒中EC含量。以期快速準(zhǔn)確測(cè)定葡萄酒中EC含量,為葡萄酒質(zhì)量控制提供技術(shù)方法。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    葡萄酒樣品:市售;氨基甲酸乙酯(純度>99%)、丙酮(色譜純,純度≥99.9%)、乙醇(色譜純,純度≥99.8%):美國(guó)Sigma-Aldrich公司;氨基甲酸丙酯(n-propyl carbamate,nPC)(純度>98%):美國(guó)Sigma公司;Celite 545 coarse硅藻土:美國(guó)Fluka公司;二氯甲烷(分析純):上海恒岳化工科技有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Thermo Trace GC ultra-DSQ GC-MS:美國(guó)Finnigan公司;DB-WAX毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm):美國(guó)安捷倫公司;SENCO W201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:上海申生科技有限公司。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 EC模式溶液和nPC內(nèi)標(biāo)溶液的配制[14]

    將一定量的EC和nPC標(biāo)準(zhǔn)品分別溶于色譜級(jí)丙酮中,分別配制成10 000 μg/L的EC丙酮溶液和nPC丙酮溶液,備用。分別取4.0 mL 10 000 μg/L的EC丙酮溶液和8.0 mL 10 000 μg/L的nPC丙酮溶液,充分混勻,然后用蒸餾水稀釋至100 mL,稀釋后溶液即為EC模式溶液,溶液中EC和nPC含量分別為0.4 μg/mL和0.8 μg/mL。

    取含量為10 000 μg/L的nPC丙酮溶液8 mL,用蒸餾水稀釋至100 mL,即為800 μg/L的nPC內(nèi)標(biāo)溶液。

    1.3.2 SLE操作方法及EC標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

    EC-nPC標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:用蒸餾水將EC丙酮溶液(10.0 μg/mL)和nPC丙酮溶液(10.0 μg/mL)進(jìn)行稀釋?zhuān)玫揭韵虏煌康腅C-nPC標(biāo)準(zhǔn)溶液:0.2μg/mLEC+0.8μg/mL nPC、0.4 μg/mL EC+0.8 μg/mL nPC、0.8 μg/mL EC+0.8 μg/mL nPC和1.6 μg/mL EC+0.8 μg/mL nPC。

    SLE操作方法及EC標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制:取各含量的EC-nPC標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 mL于燒杯中,與19.0 mL蒸餾水混合均勻,緩慢加入20.0 g硅藻土,充分?jǐn)嚢杈鶆?。將混合好的EC-nPC-硅藻土混合物裝入玻璃色譜層析柱中,用二氯甲烷進(jìn)行洗脫,二氯甲烷流速為2 mL/min,洗脫液用蒸餾燒瓶進(jìn)行收集。洗脫液收集完畢,用10.0 g無(wú)水硫酸鈉除去洗脫液中的水分,備用。

    除去水分后的洗脫液在30℃下用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮,蒸餾燒瓶中洗脫液濃縮至4.0 mL后移至KD濃縮瓶中,用2.0 mL二氯甲烷潤(rùn)洗蒸餾燒瓶,潤(rùn)洗液完全轉(zhuǎn)入KD瓶中,KD瓶中溶液在30℃下濃縮至1.0 mL后,完全移入1.0 mL離心管中。各梯度濃縮液進(jìn)行GC-MS分析。以EC含量為橫坐標(biāo)(x),EC-nPC的峰面積比值為縱坐標(biāo)(y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),獲得EC標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程。

    葡萄酒樣品中EC的含量根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程和濃縮倍數(shù)計(jì)算,計(jì)算公式如下:

    式中:X為葡萄酒樣品中EC含量,μg/L;x為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)獲得的EC含量,μg/mL;n為濃縮倍數(shù)。

    1.3.3 GC-MS分析參數(shù)[6]

    氣相色譜分析條件:DB-WAX毛細(xì)管色譜柱(30 m× 0.25 mm×0.25 μm);進(jìn)樣口溫度190℃,柱溫程序:初溫40℃,保持2min,然后以10℃/min升至180℃,保持0.5min,再以50℃/min的速度升至220℃,保持4 min。載氣為高純氦氣(純度>99.999%),流速1.0 mL/min,不分流進(jìn)樣,進(jìn)樣量1.0 μL。

    質(zhì)譜分析條件:電子電離(electron ionization,EI)離子源,離子源溫度220℃;電子能量70 eV;接口溫度220℃;電子倍增電壓1 568 V;檢測(cè)離子m/z 62、74、89,定量離子m/z 62;溶劑延遲10 min。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 二氯甲烷用量對(duì)EC萃取的影響

    選擇二氯甲烷為萃取溶劑,對(duì)模式溶液中EC萃取后進(jìn)行GC-MS分析,考察二氯甲烷用量為50~90 mL時(shí)對(duì)EC萃取效果的影響,結(jié)果如圖1所示。

    圖1 二氯甲烷用量對(duì)EC萃取效果的影響(n=3)Fig.1 Effect of dichloromethane dosage on EC extraction efficiency (n=3)

    由圖1可知,隨著二氯甲烷用量增加,EC-nPC峰面積比值迅速上升,這是因?yàn)殡S著二氯甲烷用量的增加,EC-nPC-硅藻土混合物中更多的EC被二氯甲烷萃取出來(lái)。但當(dāng)二氯甲烷用量由70 mL增至90 mL時(shí),EC-nPC峰面積比值變化不顯著(P<0.05),表明EC-nPC-硅藻土混合物中EC已經(jīng)完全被二氯甲烷萃取。與李華等[6]報(bào)道的固相萃取前處理方法相比較,SLE方法中二氯甲烷用量減少了150.00%。因此,選擇70 mL二氯甲烷作為萃取溶劑。

    2.2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)模式溶液中EC萃取的影響

    研究表明,檢測(cè)酒精飲料中EC含量時(shí),乙醇對(duì)EC檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精確度均有較大影響[15]。因此,向模式溶液中添加乙醇,考察乙醇體積分?jǐn)?shù)為3%~21%時(shí)對(duì)模式溶液中EC萃取效果的影響,結(jié)果如圖2所示。

    由圖2可知,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為3%~12%時(shí),EC-nPC峰面積比值在(0.528±0.031)~(0.532±0.041)范圍內(nèi)變化,且差異不顯著(P>0.05),隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)繼續(xù)升高,EC-nPC峰面積比值開(kāi)始下降,可能是因?yàn)橐掖己虴C對(duì)硅藻土的競(jìng)爭(zhēng)吸附,也可能是乙醇會(huì)包裹EC形成微膠團(tuán),導(dǎo)致EC的揮發(fā)性降低。因此,應(yīng)用SLE對(duì)葡萄酒樣進(jìn)行萃取時(shí),酒樣乙醇體積分?jǐn)?shù)應(yīng)低于12%,如果酒樣中乙醇體積分?jǐn)?shù)高于12%,應(yīng)對(duì)酒樣進(jìn)行適當(dāng)稀釋。

    圖2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)EC萃取效果的影響(n=3)Fig.2 Effect of ethanol content on EC extraction efficiency(n=3)

    2.3 EC標(biāo)準(zhǔn)品及樣品GC-MS色譜圖

    在葡萄酒EC含量檢測(cè)時(shí),EC的總離子掃描質(zhì)譜中,特征離子m/z 62為葡萄酒中EC含量檢測(cè)的定量離子。依據(jù)1.3.3的方法,分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品和葡萄酒樣品進(jìn)行GC-MS分析,獲得EC的總離子流色譜圖如圖3所示。

    圖3 標(biāo)準(zhǔn)溶液(a)及葡萄酒樣(b)中EC總離子流色譜圖Fig.3 Total ions chromatograms of EC in standard solution(a)and wine sample(b)

    由圖3可知,標(biāo)準(zhǔn)品和葡萄酒樣品中EC保留時(shí)間分別為13.31 min和13.34 min,分離效果較好,峰形良好,雜峰干擾少,可以用于實(shí)際樣品中EC含量的檢測(cè)。

    2.4 EC標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制

    按照1.3.2操作方法,二氯甲烷用量為70 mL,應(yīng)用SLE方法對(duì)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液中EC進(jìn)行萃取,并進(jìn)行GC-MS分析,以EC含量為橫坐標(biāo)(x),EC-nPC的峰面積比值為縱坐標(biāo)(y),繪制EC標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),結(jié)果見(jiàn)圖4。

    圖4 氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig.4 Standard curve of ethyl carbamate

    由圖4可知,標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程為y=0.607 7x+0.011 2,相關(guān)系數(shù)為R2=0.997 9,結(jié)果表明,在0.2~1.6 μg/mL范圍內(nèi),EC含量和EC-nPC的峰面積比值呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

    2.5 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

    取葡萄酒樣品,分別加入20 μg/L、40 μg/L、60 μg/L的EC標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照1.3.2處理方法,采用GC-MS進(jìn)行檢測(cè)。計(jì)算加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD),樣品加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

    表1 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=3)Table 1 Results of adding standard recovery rate tests(n=3)

    由表1可知,EC的加標(biāo)回收率為91.30%~99.90%,RSD值為1.26%~1.98%,表明方法準(zhǔn)確度較高,可以用于檢測(cè)葡萄酒中EC含量的檢測(cè)。

    2.6 方法精密度試驗(yàn)

    取EC含量分別為0.2 μg/mL、0.4 μg/mL、0.8 μg/mL、1.6 μg/mL的溶液,根據(jù)建立的測(cè)定條件,分別測(cè)定6次,計(jì)算4個(gè)溶液樣品的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD),結(jié)果見(jiàn)表2。

    表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=6)Table 2 Results of precision tests(n=6)

    由表2可知,應(yīng)用建立的方法測(cè)定4個(gè)樣品溶液中EC含量,測(cè)定結(jié)果的RSD在1.61%~3.06%,表明該方法的精密度較好。

    2.7 葡萄酒中氨基甲酸乙酯的測(cè)定

    應(yīng)用所建立的方法測(cè)定6個(gè)葡萄酒樣品中氨基甲酸乙酯的含量,結(jié)果見(jiàn)表3。

    表3 葡萄酒中EC含量檢測(cè)結(jié)果Table 3 Determination results of EC content in wine

    由表3可知,利用SLE前處理結(jié)合GC-MS方法檢測(cè)不同類(lèi)型的葡萄酒中EC含量,檢測(cè)值在(8.29±0.32)~(35.96±0.95)μg/L,說(shuō)明該方法能夠用于不同類(lèi)型葡萄酒中EC含量的檢測(cè)。測(cè)定的6個(gè)葡萄酒樣品中,其中5個(gè)樣品的EC含量低于加拿大衛(wèi)生與預(yù)防部門(mén)規(guī)定的30 μg/L。

    3 結(jié)論

    本研究建立了SLE前處理結(jié)合GC-MS檢測(cè)葡萄酒中EC含量新方法。應(yīng)用固液萃取法萃取葡萄酒中EC時(shí)二氯甲烷用量為70 mL,酒樣中乙醇體積分?jǐn)?shù)低于12%,萃取效果最佳。EC含量在0.2~1.6 μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好(R2=0.997 9)。加標(biāo)回收率為91.30%~99.90%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.26%~1.98%。方法的精密度RSD值為1.61%~3.06%。SLE方法準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好。建立的葡萄酒中EC含量檢測(cè)方法不出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,有機(jī)溶劑用量少,方法準(zhǔn)確可靠,可用于葡萄酒樣品中EC含量的檢測(cè),對(duì)葡萄酒質(zhì)量控制具有重要意義。

    [1]ZIMMERLI B,SCHLATTER J.Ethyl carbamate:analytical methodology,occurrence,formation,biological activity and risk assessment[J]. Mutat Res,1991,259:325-350.

    [2]WU D H,LI X M,SHEN C,et al.Decreased ethyl carbamate generation during Chinese rice wine fermentation by disruption of CAR1 in an industrial yeast strain[J].Int J Food Microbiol,2014,180:19-23.

    [3]AMERICA S.Alcoholic beverage consumption and ethyl carbamate: IARC monographs on the evaluation of carcinogenic risks to humans[R]. Lyon,France:International Agency for Research on Cancer(IARC), 2010.

    [4]RIACHI L G,SANTOS,MOREIRA R F A,et al.A review of ethyl carbamate and polycyclic aromatic hydrocarbon contamination risk in cacha a and other Brazilian sugarcane spirits[J].Food Chem,2014,149: 159-169.

    [5]HUANG Z,WU X D,WU P G.Validation(inhouse and collaboratory)of the quantification method for ethyl carbamate in alcoholic beverages and soy sauce by GC/MS[J].Food Chem,2013,141:4161-4165.

    [6]李華,馮麗丹,梁新紅.固相萃取結(jié)合GC/MS法測(cè)定葡萄酒中氨基甲酸乙酯[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2008,27(1):62-66.

    [7]LIU H,ZHANG M,GUO Y.Solid-phase extraction of flavonoids in honey samples using carbamate-embedded triacontyl-modified silica sorbent [J].Food Chem,2016,204:6-61.

    [8]梁新紅,李華.固相微萃取法檢測(cè)葡萄酒中氨基甲酸乙酯含量[C]//鄭州:第十屆中國(guó)科協(xié)年會(huì),2008,9.

    [9]LECA J M,PEREIA V,PEREIA A C,et al.Rapid and sensitive methodology for determination of ethyl carbamate in fortified wines using microextraction by packed sorbent and gas chromatography with mass spectrometric detection[J].Anal Chim Acta,2014,811:29-35.

    [10]劉偉,孫謙,范軍,等.多維氣相/氣質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定葡萄酒中的氨基甲酸乙酯[J].中國(guó)釀造,2016,35(4):154-158.

    [11]HUANG Z,PAN X D,WU P G,et al.Validation(in-house and collaboratory)of the quantification method for ethyl carbamate in alcoholic beverages and soy sauce by GC-MS[J].Food Chem,2013,141(4): 4161-4165.

    [12]夏強(qiáng),唐利,梁如,等.影響SPE-GC/MS法檢測(cè)發(fā)酵食品中氨基甲酸乙酯因素的研究[J].食品工業(yè)科技,2014,35(10):66-70.

    [13]王健,艾濤波,岳清洪.固相萃取和同位素內(nèi)標(biāo)法檢測(cè)白酒中氨基甲酸乙酯[J].中國(guó)釀造,2015,34(1):115-117.

    [14]CANAS B J,JOE F L,DIACHENKO G W,et al.Determination of ethyl carbamate in alcoholic beverages and soy sauce by chromatography with mass selective detection:collaborative study[J].J AOAC Int, 1994,77:1530-1536.

    [15]LACHENMEIER D W,NERLICH U,KUBALLA T.Automated determination of ethyl carbamate in stone-fruit spirits using headspace solid-phase microextraction and gas chromatography-tandem mass spectrometry[J].J Chromatogr A,2006,1108(1):116-120.

    Determination of ethyl carbamate in wine by SLE combined with GC-MS

    ZHANG Wanli,LIANG Xinhong*,RAN Junjian,SUN Junliang,MO Haizhen(School of Food Science,Henan Institute of Science and Technology,Xinxiang 453003,China)

    The determination method of ethyl carbamate(EC)in wine was established by SLE combined with GC-MS.Using diatomite as adsorbent, dichloromethane as extraction solution,the EC in wine was extracted.The results showed that the optimum extraction conditions were as follow: dichloromethane dosage 70 ml,ethanol content in wine<12%.EC had a good linear relationship in range of 200-1 600 μg/L(R2=0.997 9),the adding standard recovery rate was 91.30%-99.90%,and relative standard deviation(RSD)was 1.26%-1.98%.The RSD of method precision was 1.61%-3.06%.Due to high accurate,good reproducibility and accuracy,the method could be used for the determination of EC content in wine.

    solid liquid extraction;GC-MS;wine;ethyl carbamate

    TS261.7

    0254-5071(2017)01-0176-04

    10.11882/j.issn.0254-5071.2017.01.037

    2016-07-26

    河南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(142102110127);河南省教育廳自然科學(xué)研究資助計(jì)劃項(xiàng)目(14A550010);河南省高??萍紕?chuàng)新團(tuán)隊(duì)支持計(jì)劃項(xiàng)目(16IRTSTHN007)

    張萬(wàn)利(1991-),男,碩士研究生,研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。

    *通訊作者:梁新紅(1971-),女,副教授,博士,研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。

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