• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    響應(yīng)面法優(yōu)化蛇床子中蛇床子素的酶法提取工藝

    2017-02-15 19:51:31寧娜??韓建軍??胡宇莉鄒宗堯?
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年8期
    關(guān)鍵詞:蛇床子提取

    寧娜??+韓建軍??+胡宇莉++鄒宗堯??+郁建生

    摘要:采用蛇床子素作為原料,通過酶法從蛇床子中提取蛇床子素,并以蛇床子素提取率為指標(biāo),研究料液比、酶種類、酶用量等因素的影響。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,選取酶用量、酶解溫度、酶解時(shí)間以及酶解pH值進(jìn)行了4因素3水平的Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)。結(jié)果表明,最優(yōu)提取條件為料液比 1 g ∶[KG-*3]30 mL、酶用量(纖維素酶 ∶[KG-*3]果膠酶=1 ∶[KG-*3]1)10.4 mg/g、酶解溫度46 ℃、酶解時(shí)間125 min、酶解pH值4.6,在此條件下蛇床子素的提取率可達(dá)95.13 %。

    關(guān)鍵詞:蛇床子;蛇床子素;復(fù)合酶;提?。豁憫?yīng)曲面法

    中圖分類號(hào): R284.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼:

    文章編號(hào):1002-1302(2016)08-0169-05

    床子為傘形科植物蛇床[Cnidium monnieri (L.) Cuss.]的干燥成熟果實(shí),具有燥濕祛風(fēng)、殺蟲止癢、溫腎壯陽之功效,臨床上用于陰癢帶下、宮冷不孕等癥[1]。蛇床子中含有香豆素類[2]、酚苷類[3]、揮發(fā)油[4]等多種化學(xué)成分,其中蛇床子素是蛇床子藥材的質(zhì)控成分[1]。體內(nèi)藥理研究表明蛇床子素具有抗炎[5]、神經(jīng)保護(hù)[6]、降血糖[7]等活性。

    目前已報(bào)道的從蛇床子中提取蛇床子素的方法主要有乙醇回流法[8-9]、超聲法[10]、微波法[11]等。生物酶解技術(shù)是通過生物酶破壞植物細(xì)胞壁從而促進(jìn)有效成分提取,該方法具有提取效率高、反應(yīng)條件溫和、專一性強(qiáng)且易于控制等優(yōu)點(diǎn)[12-14]。現(xiàn)在越來越多的研究將生物酶解技術(shù)應(yīng)用于中藥有效成分的提取中,以達(dá)到提高有效成分的提取率、縮短提取時(shí)間、減少提取溶劑用量等目的[15-17]。采用生物酶解技術(shù)提取蛇床子中蛇床子素的研究尚未見報(bào)道。本研究采用生物酶提取蛇床子中蛇床子素成分,并通過響應(yīng)面法優(yōu)化該提取工藝,為蛇床子中蛇床子素的工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。

    1材料與方法

    1.1試劑與儀器

    蛇床子藥材購于河北安國中藥材市場(chǎng),經(jīng)鑒定為傘形科植物蛇床子[Cnidium monnieri (L.) Cuss.]的干燥成熟果實(shí);蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)品購自中國食品藥品檢定研究院;纖維素酶(酶活性為22 000 U/g)購自寧夏和氏璧生物技術(shù)有限公司;水為重蒸水,乙腈為色譜純,其他試劑均為分析純。

    Agilent 1100高效液相色譜儀(手動(dòng)進(jìn)樣器、在線脫氣機(jī)、四元泵、DAD檢測(cè)器和Agilent ChemStation 色譜工作站),美國Agilent公司生產(chǎn);SK8200H 超聲清洗器,上??茖?dǎo)超聲儀器有限公司生產(chǎn);pHS-3C精密pH計(jì),上海光學(xué)儀器廠生產(chǎn);METTLER AE240型十萬分之一電子天平,德國梅特勒公司生產(chǎn);RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,上海亞榮生化儀器廠生產(chǎn);DK-S26電熱恒溫水浴鍋,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司生產(chǎn);FZ102微型植物粉碎機(jī),天津泰斯特儀器有限公司生產(chǎn)。

    1.2試驗(yàn)方法

    1.2.1HPLC法測(cè)定蛇床子素的含量

    1.2.1.1色譜條件Agiletn Zorbax SB-C18柱(5 μm,4.6 ×250.0 mm2);流動(dòng)相:乙腈/水(65/35,V/V);流速:1.0 mL/min;柱溫:30 ℃;檢測(cè)波長:322 nm;進(jìn)樣量:10 μL。該色譜條件下理論塔板數(shù)以蛇床子素峰計(jì)算不低于3 000。該色譜條件下測(cè)定蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)品及蛇床子藥材得到的色譜圖見圖1。

    1.2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱定蛇床子素對(duì)照品 12.5 mg 置于25 mL容量瓶中,并用無水乙醇定容至刻度,搖勻,分別精確量取此溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL至10 mL容量瓶中,并用無水乙醇定容至刻度,搖勻。分別精密吸取上述所配制的對(duì)照品溶液各10 μL注入液相色譜儀,按照上述色譜條件測(cè)定。以測(cè)得的峰面積y為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品的進(jìn)樣濃度x(μg/mL)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。蛇床子素質(zhì)量濃度在5~50 μg/mL 范圍時(shí),線性方程為y=18 467.46x-3 362.07,相關(guān)系數(shù)r=0.999 7,線性良好。

    1.2.1.3蛇床子藥材中蛇床子素的含量測(cè)定本研究所用的蛇床子藥材按照《中國藥典》2010版一部蛇床子項(xiàng)下方法進(jìn)行含量測(cè)定,表明本試驗(yàn)中所用蛇床子藥材中蛇床子素的含量為1. 65%。

    1.2.2蛇床子素的提取及提取率的計(jì)算取干燥的蛇床子藥材用中藥材粉碎機(jī)粉碎,過40目篩,取10 g 蛇床子粉末加入一定量的生物酶后,再按照一定的料液比加入蒸餾水,在一定溫度、pH值條件下酶解一定時(shí)間后,過濾,收集提取液,并將所得提取液濃縮后,用無水乙醇定容至100 mL,備用。用移液管精密吸取上述定容后的蛇床子提取液0.7 mL轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中,加無水乙醇定容至刻度,搖勻,所得溶液經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜過濾后,取續(xù)濾液10 μL按照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,并根據(jù)峰面積計(jì)算蛇床子素的提取率。蛇床子素提取率的計(jì)算公式:蛇床子素提取率=提取出的蛇床子素質(zhì)量/蛇床子藥材中蛇床子素質(zhì)量×100%。

    2結(jié)果與分析

    2.1單因素試驗(yàn)

    2.1.1酶種類對(duì)蛇床子素提取率的影響準(zhǔn)確稱取10 g蛇床子粉末,加300 mL 蒸餾水,分別加入酶用量為10 mg/g的纖維素酶、果膠酶、復(fù)合酶(纖維素酶 ∶[KG-*3]果膠酶=2 ∶[KG-*3]1、1 ∶[KG-*3]1、1 ∶[KG-*3]2),在酶解pH值為5.0、酶解溫度為50 ℃的條件下酶解時(shí)間120 min后,過濾,收集濾液,并計(jì)算蛇床子素提取率,結(jié)果見圖2。

    由圖2可知,與單一酶相比,由不同比例的纖維素酶和果膠酶組合成的復(fù)合酶對(duì)蛇床子中蛇床子素均有較好的提取效果。當(dāng)纖維素酶和果膠酶按1 ∶[KG-*3]1組合用于酶解提取時(shí),蛇床子素的提取率最高,因此選用復(fù)合酶(纖維素酶 ∶[KG-*3]果膠酶=1 ∶[KG-*3]1)提取蛇床子素。

    2.1.2料液比對(duì)蛇床子素提取率的影響準(zhǔn)確稱取10 g蛇床子粉末,按照不同料液比(1 ∶[KG-*3]10、1 ∶[KG-*3]20、1 ∶[KG-*3]30、1 ∶[KG-*3]40、1 ∶[KG-*3]50,g ∶[KG-*3]mL)加入蒸餾水,在復(fù)合酶(纖維素酶 ∶[KG-*3]果膠酶=1 ∶[KG-*3]1)用量為10 mg/g、酶解pH值為5.0、酶解溫度為50 ℃的條件下酶解時(shí)間120 min后,過濾,收集濾液,并計(jì)算蛇床子素提取率,結(jié)果見圖3。

    由圖3可知,料液比小于1 g ∶[KG-*3]30 mL時(shí),蛇床子素提取率隨著溶劑用量的增加而增大。當(dāng)料液比為1 g ∶[KG-*3]30 mL時(shí)蛇床子素提取率達(dá)到最大,此后隨著溶劑用量的進(jìn)一步增加,蛇床子素提取率呈下降趨勢(shì)。這是由于過多的溶劑會(huì)使提取溶液中生物酶的有效濃度降低,同時(shí),提取溶劑用量過大也會(huì)增加后續(xù)濃縮過程的工作量。因此提取溶劑的料液比選定為1 g ∶[KG-*3]30 mL。

    2.1.3酶用量對(duì)蛇床子素提取率的影響準(zhǔn)確稱取10 g蛇床子粉末,加300 mL 蒸餾水,加入一定量的由纖維素與果膠酶按1 ∶[KG-*3]1組合成的復(fù)合酶(6、8、10、12、14 mg/g),在酶解pH值為5.0、酶解溫度為50 ℃的條件下酶解時(shí)間120 min后,過濾,收集濾液,并計(jì)算蛇床子素提取率,結(jié)果見圖4。

    由圖4可知,酶用量在6~10 mg/g時(shí),蛇床子素提取率隨酶用量的增加而明顯升高,當(dāng)酶用量超過10 mg/g時(shí),蛇床子素提取率增加的趨勢(shì)有所平緩。因此酶用量宜選擇在 10 mg/g 左右。

    2.1.4酶解溫度對(duì)蛇床子素提取率的影響準(zhǔn)確稱取10 g蛇床子粉末,加300 mL 蒸餾水,復(fù)合酶(纖維素酶 ∶[KG-*3]果膠酶=1 ∶[KG-*3]1)用量為10 mg/g、酶解pH值為5.0,在一定酶解溫度(30、40、50、60、70 ℃)下酶解120 min后,過濾,收集濾液,并計(jì)算蛇床子素提取率,結(jié)果見圖5。

    由圖5可知,當(dāng)酶解溫度低于50 ℃時(shí),蛇床子素提取率隨著酶解溫度的升高而增加,當(dāng)酶解溫度達(dá)到50 ℃時(shí),蛇床子素提取率達(dá)到最大。隨著酶解溫度的進(jìn)一步升高,蛇床子素提取率有所下降。這是因?yàn)榈陀谏锩傅淖钸m溫度時(shí),溫度升高可促進(jìn)生物酶活性的增強(qiáng),而高于生物酶的最適溫度時(shí)可引起酶蛋白的變性,從而降低生物酶的催化活力。因此酶解溫度宜選擇在50 ℃左右。

    2.1.5酶解時(shí)間對(duì)蛇床子素提取率的影響準(zhǔn)確稱取10 g蛇床子粉末,加300 mL 蒸餾水,在復(fù)合酶(纖維素酶 ∶[KG-*3]果膠酶=1 ∶[KG-*3]1)用量為10 mg/g、酶解pH值為5.0、酶解溫度為 50 ℃ 的條件下酶解一定時(shí)間(60、120、180、240、300 min)后,過濾,收集濾液,并計(jì)算蛇床子素提取率,結(jié)果見圖6。

    由圖6可知,酶解時(shí)間在60~120 min時(shí),蛇床子素提取率隨著酶解時(shí)間延長而明顯升高。當(dāng)酶解時(shí)間超過120 min時(shí),蛇床子素提取率增加的趨勢(shì)有所平緩。因此酶解時(shí)間宜選在120 min左右。

    2.1.6酶解pH值對(duì)蛇床子素提取率的影響準(zhǔn)確稱取 10 g 蛇床子粉末,加300 mL蒸餾水,復(fù)合酶(纖維素酶 ∶[KG-*3]果膠酶=1 ∶[KG-*3]1)用量為10 mg/g、酶解pH值為5.0、酶解溫度為50 ℃,在一定pH值(3.0、4.0、5.0、6.0、7.0)的條件下酶解120 min后,過濾,收集濾液,并計(jì)算蛇床子素提取率,結(jié)果見圖7。

    2響應(yīng)面分析響應(yīng)曲面陡峭程度可反映各個(gè)因素及因素交互作用對(duì)蛇床子素提取率影響的強(qiáng)弱。由圖8可知,在各個(gè)因素中,酶用量對(duì)蛇床子素提取率的影響最大,酶解pH值的影響次之,酶解溫度和酶解時(shí)間的影響均較?。唤换プ饔弥?,酶用量與酶解溫度、酶解溫度和酶解pH值的交互作用對(duì)蛇床子素提取率影響較強(qiáng),而酶用量與酶解時(shí)間、酶用量與酶解pH值、酶解溫度與酶解時(shí)間、酶解時(shí)間與酶解pH值交互作用的影響較弱,與上述方差分析結(jié)果一致。

    2.2.3最佳工藝條件及模型驗(yàn)證經(jīng)過Design-Expert 8.0.6 軟件分析,結(jié)合單因素試驗(yàn)結(jié)果,得到酶法提取蛇床子中蛇床子素的最佳工藝條件為料液比 1 g ∶[KG-*3]30 mL、酶用量(纖維素酶 ∶[KG-*3]果膠酶=1 ∶[KG-*3]1)10.44 mg/g、酶解溫度45.99 ℃、酶解時(shí)間124.64 min、酶解pH值4.58,蛇床子中蛇床子素的理論提取率為95.43%。為驗(yàn)證方法的可行性,采用上述條件對(duì)蛇床子中蛇床子素進(jìn)行提取,考慮到試驗(yàn)操作的可控性,將得到的優(yōu)化條件修正為料液比1 g ∶[KG-*3]30 mL、酶用量(纖維素酶 ∶[KG-*3]果膠酶=1 ∶[KG-*3]1)10.4 mg/g、酶解溫度46 ℃、酶解時(shí)間 125 min、酶解pH值4.6,進(jìn)行3組平行試驗(yàn),測(cè)定蛇床子素的實(shí)際平均提取率為95.13 %,試驗(yàn)結(jié)果與模型預(yù)測(cè)相對(duì)誤差僅為 0.3%,較為接近,驗(yàn)證了響應(yīng)曲面法回歸模型的合理性。通過本試驗(yàn)結(jié)果與已經(jīng)報(bào)道的文獻(xiàn)結(jié)果[8-11]對(duì)比,可知生物酶解技術(shù)可有效提高蛇床子中蛇床子素的提取率,不僅可減少有機(jī)溶劑的使用,同時(shí)極大地縮短了提取時(shí)間,可為工業(yè)生產(chǎn)提供參考。

    3結(jié)論

    通過單因素試驗(yàn)、Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及響應(yīng)面分析,得到優(yōu)化的酶法提取蛇床子中蛇床子素的工藝提取條件為料液比1 g ∶[KG-*3]30 mL、酶用量(纖維素酶 ∶[KG-*3]果膠酶=1 ∶[KG-*3]1)10.4 mg/g、酶解溫度46 ℃、酶解時(shí)間125 min、酶解pH值 4.6,在此條件下蛇床子素的提取率可達(dá)95.13 %,

    參考文獻(xiàn):

    [1]國家藥典委員會(huì). 中國藥典(一部)[M]. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:295-296.

    [2]Lee T H,Chen Y C,Hwang T L,et al. New coumarins and anti-inflammatory constituents from the fruits of Cnidium monnieri[J]. International Journal of Molecular Sciences,2014,15(6):9566-9578.

    [3]Kim S B,Chang B Y,Han S B,et al. A new phenolic glycoside from Cnidium monnieri fruits[J]. Natural Product Research,2013,27(21):1945-1948.

    [4]Chen Q H,Li P,Yuan F J,et al. Identification and quantification of the volatile constituents in Cnidium monnieri using supercritical fluid extraction followed by GC-MS[J]. Journal of Separation Science,2009,32(2):252-257.

    [5]Wang X L,Shang X,Cui Y,et al. Osthole inhibits inflammatory cytokine release through PPAR α/γ-mediated mechanisms in LPS-stimulated 3T3-L1 adipocytes[J]. Immunopharmacology and Immunotoxicology,2015,37(2):185-192.

    [6]Chen Z W,Mao X X,Liu A M,et al. Osthole,a natural coumarin improves cognitive impairments and BBB dysfunction after transient global brain ischemia in C57 BL/6J mice:involvement of Nrf2 pathway[J]. Neurochemical Research,2015,40(1):186-194.

    [7]Lee W H,Wu H H,Huang W J,et al. N-hydroxycinnamide derivatives of osthole ameliorate hyperglycemia through activation of AMPK and p38 MAPK[J]. Molecules,2015,20(3):4516-4529.

    [8]鄧洪,谷丹丹,陽勇,等. 蛇床子中蛇床子素提取工藝的優(yōu)化[J]. 華西藥學(xué)雜志,2013,28(1):106-107.

    [9]張力力,黃靜,張琦. 響應(yīng)曲面法優(yōu)化蛇床子中蛇床子素的提取工藝[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī),2014(9):45-49.[ZK)]

    [10]王銳,楊婧,謝國梁,等. 超聲法聯(lián)合表面活性劑提取蛇床子中蛇床子素的研究[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥,2013,24(3):603-604.

    [11]路強(qiáng),王雅梅,王喜明. 蛇床子素提取方法的研究[J]. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2010,31(2):298-300.

    [12]高鐿萌,徐愿堅(jiān),杜洪飛,等. 中藥提取新技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 世界科學(xué)技術(shù):中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2014(4):890-894.

    [13]蔡延渠,朱盛山,李潤萍,等. 新型提取聯(lián)用技術(shù)在中藥提取中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 中成藥,2011,33(5):863-866.

    [14]劉明言,王幫臣. 用于中藥提取的新技術(shù)進(jìn)展[J]. 中草藥,2010,41(2):169-175.

    [15]程軒軒,郭楚楚,周鳳燕,等. 響應(yīng)面法優(yōu)化廣金錢草中總黃酮的酶法提取工藝[J]. 華西藥學(xué)雜志,2015,30(1):70-73.

    [16]何艾,李維國,竇志浩,等. 纖維素酶輔助提取沉香葉黃酮及其抗氧化活性測(cè)定[J]. 食品科技,2015,40(5):233-237.

    [17]王曉林,鐘方麗,薛健飛,等. 酶法提取刺玫果總黃酮工藝研究[J]. 北方園藝,2015,39(4):136-139.

    猜你喜歡
    蛇床子提取
    蛇床子素滲透泵控釋片制備工藝的優(yōu)化及其體外釋藥行為
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:18:38
    現(xiàn)場(chǎng)勘查中物證的提取及應(yīng)用
    土壤樣品中農(nóng)藥殘留前處理方法的研究進(jìn)展
    中學(xué)生開展DNA“細(xì)”提取的實(shí)踐初探
    淺析城市老街巷景觀本土設(shè)計(jì)元素的提取與置換
    蝦蛄殼中甲殼素的提取工藝探究
    科技視界(2016年22期)2016-10-18 17:02:00
    1%蛇床子素水乳劑在煙葉中的殘留消解動(dòng)態(tài)
    環(huán)保新型緩蝕劑發(fā)展?fàn)顩r與展望
    科技視界(2015年25期)2015-09-01 15:33:38
    蛇床子素-TPGS固體分散體制備研究
    中藥蛇床子臨床應(yīng)用概述
    国产爱豆传媒在线观看 | or卡值多少钱| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 久久国产精品影院| 亚洲在线自拍视频| 99久久精品国产亚洲精品| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲国产精品999在线| 国产人伦9x9x在线观看| 国产高清视频在线观看网站| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 久久亚洲真实| 嫩草影视91久久| 免费观看精品视频网站| 国产伦人伦偷精品视频| 国产精品久久久久久久电影 | 美女 人体艺术 gogo| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产成人av激情在线播放| 亚洲av熟女| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 神马国产精品三级电影在线观看 | 国产私拍福利视频在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 久久久久亚洲av毛片大全| 老汉色∧v一级毛片| 午夜激情av网站| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 成人手机av| 久久亚洲真实| 午夜福利免费观看在线| 精品国产美女av久久久久小说| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 悠悠久久av| 国产精品乱码一区二三区的特点| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 精品欧美一区二区三区在线| 国内精品久久久久久久电影| 欧美成狂野欧美在线观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产精品免费一区二区三区在线| 午夜福利欧美成人| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 老司机靠b影院| 亚洲熟女毛片儿| 免费在线观看完整版高清| 午夜福利在线在线| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 免费无遮挡裸体视频| 国产熟女xx| 免费在线观看日本一区| 国产激情偷乱视频一区二区| 正在播放国产对白刺激| 成人18禁在线播放| 高清在线国产一区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 午夜激情福利司机影院| 亚洲成人久久爱视频| 久9热在线精品视频| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲精华国产精华精| 69av精品久久久久久| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲av电影在线进入| 免费高清视频大片| 久久久久久久久久黄片| 国产av一区二区精品久久| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产成人系列免费观看| 国产一区二区在线观看日韩 | 黄频高清免费视频| 99国产综合亚洲精品| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 长腿黑丝高跟| 国产精品av视频在线免费观看| 国产高清激情床上av| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久精品人妻少妇| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 香蕉久久夜色| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 久久久国产成人精品二区| cao死你这个sao货| 久久亚洲真实| 亚洲精品久久国产高清桃花| 老鸭窝网址在线观看| 色播亚洲综合网| 制服丝袜大香蕉在线| 一夜夜www| 午夜亚洲福利在线播放| 丝袜美腿诱惑在线| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 极品教师在线免费播放| 极品教师在线免费播放| 黄色视频,在线免费观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 五月玫瑰六月丁香| 欧美黑人欧美精品刺激| 两人在一起打扑克的视频| 国产成人av教育| 日本一区二区免费在线视频| 久久九九热精品免费| 免费搜索国产男女视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲人成77777在线视频| 欧美性猛交黑人性爽| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲无线在线观看| 天堂√8在线中文| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 岛国视频午夜一区免费看| 免费电影在线观看免费观看| 国产欧美日韩一区二区三| 国产一区在线观看成人免费| av中文乱码字幕在线| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲成人久久性| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 一级毛片高清免费大全| 国产在线精品亚洲第一网站| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲成人久久性| 国产一区二区在线av高清观看| 九九热线精品视视频播放| 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲最大成人中文| av中文乱码字幕在线| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲真实伦在线观看| 午夜福利18| 国产不卡一卡二| 日韩精品免费视频一区二区三区| 他把我摸到了高潮在线观看| 在线免费观看的www视频| 国产精品,欧美在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 一个人免费在线观看的高清视频| 露出奶头的视频| 欧美zozozo另类| 最近最新中文字幕大全免费视频| 日本a在线网址| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 一区二区三区国产精品乱码| 中文字幕av在线有码专区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 一本综合久久免费| 国语自产精品视频在线第100页| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久香蕉精品热| 亚洲全国av大片| 亚洲美女黄片视频| 国产不卡一卡二| 精品国产美女av久久久久小说| 美女黄网站色视频| 1024香蕉在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲18禁久久av| 90打野战视频偷拍视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 色播亚洲综合网| 成年人黄色毛片网站| 欧美黄色淫秽网站| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久人妻av系列| 韩国av一区二区三区四区| 日本熟妇午夜| av福利片在线观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 嫩草影视91久久| 男人舔女人下体高潮全视频| 91麻豆精品激情在线观看国产| videosex国产| 成人午夜高清在线视频| 日韩大码丰满熟妇| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 一本久久中文字幕| 毛片女人毛片| 国产麻豆成人av免费视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲成av人片在线播放无| 婷婷精品国产亚洲av| 在线观看www视频免费| 国产三级黄色录像| 两个人免费观看高清视频| www.999成人在线观看| 制服丝袜大香蕉在线| 一边摸一边抽搐一进一小说| 99精品久久久久人妻精品| 最新在线观看一区二区三区| √禁漫天堂资源中文www| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 777久久人妻少妇嫩草av网站| 999精品在线视频| avwww免费| 国产黄色小视频在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 热99re8久久精品国产| 久久久久精品国产欧美久久久| 麻豆一二三区av精品| 成人国产综合亚洲| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲美女黄片视频| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲九九香蕉| 高清毛片免费观看视频网站| 99热6这里只有精品| 精品久久久久久久久久免费视频| 岛国在线观看网站| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 精品乱码久久久久久99久播| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国内精品久久久久久久电影| 一级毛片女人18水好多| 中文资源天堂在线| 悠悠久久av| 少妇被粗大的猛进出69影院| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 男人的好看免费观看在线视频 | 久久久久久九九精品二区国产 | 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 免费电影在线观看免费观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产日本99.免费观看| 黄色丝袜av网址大全| 不卡av一区二区三区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久这里只有精品中国| or卡值多少钱| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产久久久一区二区三区| 一本综合久久免费| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 一进一出好大好爽视频| 亚洲五月天丁香| 国产亚洲欧美98| 中文字幕久久专区| 国产精品亚洲一级av第二区| 美女午夜性视频免费| 黄色视频,在线免费观看| 成人av在线播放网站| 国产av一区在线观看免费| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| ponron亚洲| 国产精品免费一区二区三区在线| 51午夜福利影视在线观看| 午夜激情福利司机影院| 怎么达到女性高潮| 亚洲专区国产一区二区| 国产成人系列免费观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 日韩av在线大香蕉| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 叶爱在线成人免费视频播放| 18美女黄网站色大片免费观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 中文亚洲av片在线观看爽| 黄色丝袜av网址大全| 精品国内亚洲2022精品成人| 757午夜福利合集在线观看| 国产高清视频在线播放一区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 麻豆国产97在线/欧美 | 99久久国产精品久久久| 观看免费一级毛片| 欧美不卡视频在线免费观看 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 精品第一国产精品| 国产乱人伦免费视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 天堂√8在线中文| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产激情久久老熟女| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 免费在线观看完整版高清| 精品欧美国产一区二区三| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 精品电影一区二区在线| av在线天堂中文字幕| 美女扒开内裤让男人捅视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产午夜精品久久久久久| 日本一区二区免费在线视频| 岛国在线观看网站| 久久久水蜜桃国产精品网| av片东京热男人的天堂| 天天一区二区日本电影三级| 两个人免费观看高清视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 中文字幕久久专区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 午夜亚洲福利在线播放| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 一区二区三区激情视频| 哪里可以看免费的av片| 两人在一起打扑克的视频| 国产黄片美女视频| 国产高清视频在线观看网站| 精品一区二区三区四区五区乱码| 少妇熟女aⅴ在线视频| netflix在线观看网站| 婷婷精品国产亚洲av| av有码第一页| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| xxxwww97欧美| 亚洲精品在线观看二区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 日本黄色视频三级网站网址| 丝袜人妻中文字幕| 国产精品国产高清国产av| 亚洲性夜色夜夜综合| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 美女扒开内裤让男人捅视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| aaaaa片日本免费| 日韩欧美 国产精品| 又大又爽又粗| 久久国产精品影院| 国产精品 国内视频| 国产熟女xx| 国产精品日韩av在线免费观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲avbb在线观看| www日本黄色视频网| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 一边摸一边抽搐一进一小说| 成年版毛片免费区| 夜夜爽天天搞| 国语自产精品视频在线第100页| 免费看美女性在线毛片视频| 一本综合久久免费| 制服丝袜大香蕉在线| 亚洲av片天天在线观看| 久久久久久大精品| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 1024香蕉在线观看| 最新美女视频免费是黄的| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 91麻豆av在线| 国产一区二区在线观看日韩 | 九九热线精品视视频播放| 一级毛片女人18水好多| 亚洲精品美女久久av网站| 久久久久久久久免费视频了| 五月玫瑰六月丁香| 怎么达到女性高潮| 变态另类丝袜制服| 国产av麻豆久久久久久久| 五月玫瑰六月丁香| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 一级毛片精品| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 日日夜夜操网爽| 亚洲男人天堂网一区| 国产av一区在线观看免费| 国产主播在线观看一区二区| www.精华液| av在线播放免费不卡| 特大巨黑吊av在线直播| 在线观看一区二区三区| 色av中文字幕| 草草在线视频免费看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产一区在线观看成人免费| 欧美极品一区二区三区四区| www日本黄色视频网| 精品欧美一区二区三区在线| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲国产中文字幕在线视频| 丰满的人妻完整版| 中文在线观看免费www的网站 | 国产av麻豆久久久久久久| 哪里可以看免费的av片| 亚洲精品av麻豆狂野| 免费高清视频大片| 真人做人爱边吃奶动态| 成在线人永久免费视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 深夜精品福利| 啦啦啦观看免费观看视频高清| www.999成人在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲国产欧美网| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 韩国av一区二区三区四区| 听说在线观看完整版免费高清| 色综合婷婷激情| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 欧美日韩国产亚洲二区| 18禁美女被吸乳视频| 日本熟妇午夜| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产乱人伦免费视频| 两个人视频免费观看高清| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 日本a在线网址| www日本在线高清视频| а√天堂www在线а√下载| 亚洲国产精品合色在线| 一边摸一边抽搐一进一小说| 精品国产亚洲在线| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 我的老师免费观看完整版| 久久香蕉激情| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产日本99.免费观看| 亚洲av熟女| 韩国av一区二区三区四区| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 久久香蕉国产精品| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 九色成人免费人妻av| 国产99久久九九免费精品| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 麻豆一二三区av精品| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 色精品久久人妻99蜜桃| 欧美日韩精品网址| 午夜福利视频1000在线观看| 国产高清视频在线播放一区| xxxwww97欧美| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 长腿黑丝高跟| 亚洲国产欧美网| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产高清视频在线观看网站| 一区二区三区国产精品乱码| 黄频高清免费视频| 亚洲专区国产一区二区| 欧美色视频一区免费| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产熟女xx| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产精品98久久久久久宅男小说| 桃红色精品国产亚洲av| 久久久久久九九精品二区国产 | 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 成人三级黄色视频| 日韩欧美在线二视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 中文字幕av在线有码专区| av视频在线观看入口| 亚洲专区国产一区二区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 五月伊人婷婷丁香| 99热这里只有是精品50| 最近视频中文字幕2019在线8| 国内精品一区二区在线观看| 两性夫妻黄色片| 99国产极品粉嫩在线观看| 99热这里只有精品一区 | 我要搜黄色片| 免费看美女性在线毛片视频| 午夜激情av网站| 精品欧美国产一区二区三| 欧美日本亚洲视频在线播放| 正在播放国产对白刺激| 视频区欧美日本亚洲| 国产精品亚洲美女久久久| 母亲3免费完整高清在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 日韩欧美三级三区| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久精品成人免费网站| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产激情久久老熟女| 天堂√8在线中文| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久九九热精品免费| 99国产极品粉嫩在线观看| 成人18禁在线播放| 亚洲国产欧美人成| 白带黄色成豆腐渣| 精品欧美国产一区二区三| 久久久国产欧美日韩av| 两个人看的免费小视频| 黄色视频,在线免费观看| 一级黄色大片毛片| 三级毛片av免费| 日韩精品免费视频一区二区三区| 日日夜夜操网爽| 亚洲一码二码三码区别大吗| 12—13女人毛片做爰片一| 中出人妻视频一区二区| 一二三四社区在线视频社区8| 搞女人的毛片| 久久午夜亚洲精品久久| 搡老岳熟女国产| 午夜精品一区二区三区免费看| 一个人免费在线观看电影 | 国产高清视频在线观看网站| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 午夜免费激情av| 国产亚洲精品第一综合不卡| 两个人看的免费小视频| 男女之事视频高清在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 国产精品亚洲av一区麻豆| 丰满人妻一区二区三区视频av | 桃色一区二区三区在线观看| 国产精品,欧美在线| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 午夜福利在线在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲九九香蕉| 亚洲国产高清在线一区二区三| 午夜激情福利司机影院| 99久久精品热视频| 黑人操中国人逼视频| www.www免费av| 日本五十路高清| 亚洲天堂国产精品一区在线| 长腿黑丝高跟| 亚洲色图av天堂| 十八禁人妻一区二区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 嫩草影院精品99| 麻豆成人av在线观看| 午夜精品在线福利| 好男人电影高清在线观看| 精品久久蜜臀av无| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产黄片美女视频| 欧美日韩一级在线毛片| 国产三级中文精品| 中文字幕最新亚洲高清| 1024香蕉在线观看| 中文资源天堂在线| 久久午夜亚洲精品久久| 好男人电影高清在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 一区二区三区激情视频| 操出白浆在线播放| 国产又色又爽无遮挡免费看| 中文字幕高清在线视频| 一本久久中文字幕| 在线观看66精品国产| x7x7x7水蜜桃| 亚洲av美国av| 黄色毛片三级朝国网站| 1024视频免费在线观看| 亚洲自拍偷在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久久精品欧美日韩精品| 精品一区二区三区视频在线观看免费| bbb黄色大片| 国产欧美日韩一区二区三| 久久精品国产综合久久久| 五月玫瑰六月丁香| 男女那种视频在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产午夜福利久久久久久| 国产v大片淫在线免费观看| 黄片小视频在线播放| 亚洲国产精品合色在线| 夜夜爽天天搞| 国产精品影院久久| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产三级黄色录像| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| www国产在线视频色| av欧美777| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 麻豆国产av国片精品| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产99久久九九免费精品| 麻豆av在线久日| 999久久久精品免费观看国产| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲中文字幕日韩| 最近在线观看免费完整版| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久久国产成人免费| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲欧美日韩东京热| 久久性视频一级片|