柚皮苷對(duì)胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織中SOD和NO水平的影響*

賀 敏，秦建設(shè)，呂武賓,姜興鵬△

(1.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校中醫(yī)系 404120;2.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校附屬醫(yī)院針灸科，重慶 404100)

柚皮苷對(duì)胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織中SOD和NO水平的影響*

賀 敏1，秦建設(shè)1，呂武賓2,姜興鵬2△

(1.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校中醫(yī)系 404120;2.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校附屬醫(yī)院針灸科，重慶 404100)

目的 觀察柚皮苷對(duì)乙酸型胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織中超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)水平的影響，探討柚皮苷對(duì)胃潰瘍的治療作用。方法 60只SPF級(jí)SD大鼠分成6組，即正常組，模型組，柚皮苷低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)劑量組和蘭索拉唑組(3mg/kg)。采用改良Okabe法制作乙酸型胃潰瘍模型。造模后次日開始給藥，每天1次，連續(xù)給藥1周后處死大鼠，采集標(biāo)本，檢測(cè)血清與胃黏膜組織液中SOD和NO水平。結(jié)果 柚皮苷具有明顯的抗?jié)冏饔?。與模型組相比，柚皮苷中、高劑量組大鼠血清及胃黏膜組織液中SOD和NO水平明顯升高(P<0.05)，相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯(P<0.05)。結(jié)論 柚皮苷具有顯著的抗胃潰瘍作用，其作用機(jī)制可能與提高血清及胃黏膜組織中SOD和NO的水平有關(guān)。

橙皮苷；胃潰瘍；超氧化物歧化酶;一氧化氮

柚皮苷(naringin)即柚皮素-7-O-新橙皮糖苷，又稱柚苷、柚皮素，是一種雙氫黃酮類化合物，是骨碎補(bǔ)、陳皮、枳實(shí)、青皮等中藥的主要有效成分之一?，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)其具有抗病毒、鎮(zhèn)痛、抗過敏及改善局部微循環(huán)和營(yíng)養(yǎng)供給的性能，其較強(qiáng)的抗炎、抗氧化能力已被證實(shí)[1]。2013年，柚皮苷被國(guó)家批準(zhǔn)作為一類新藥進(jìn)入臨床試驗(yàn)。大量藥物成分分析研究顯示，對(duì)胃潰瘍有治療作用的很多中成藥，如健脾舒胃凝膠、胃蘇顆粒、胃炎靈顆粒等中均檢測(cè)出含有大量的柚皮苷成分[2-4]。但是，有關(guān)柚皮苷對(duì)胃潰瘍的治療作用研究文獻(xiàn)比較少見。本文旨在研究柚皮苷對(duì)胃潰瘍大鼠胃黏膜損傷的保護(hù)作用，特別是對(duì)超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)水平的影響，進(jìn)一步闡明柚皮苷的藥理作用，為治療胃潰瘍提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 柚皮苷(編號(hào)：101291319，Sigma公司)，蘭索拉唑片(規(guī)格：15mg，批號(hào)：120623，重慶科瑞制藥有限公司)，柚皮苷用羚甲基纖維素納(CMC)制成100%柚皮苷懸濁液。Bio-TekELX800多功能酶標(biāo)儀(美國(guó))，H-1850R湘儀高速離心機(jī)。

1.2 方法

1.2.1 分組 清潔級(jí)4月齡SD大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量180～200g，由第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(渝)2012-0005。將大鼠分為正常組，模型組，柚皮苷低劑量、中劑量、高劑量組，蘭索拉唑組，每組10只。

1.2.2 模型制備 用改良Okabe法制作乙酸型胃潰瘍模型[5-6]。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后禁食不禁水24h。以10%的水合氯醛腹腔注射進(jìn)行麻醉，在劍突下沿正中線作2～3cm的正中切口，打開腹腔，將胃輕輕拉出，用1.0mL注射器在胃前壁胃小彎角切跡下方刺入漿膜下注入0.1mL100%的乙酸，以出現(xiàn)白點(diǎn)為度，然后用細(xì)棉簽將溢出乙酸吸凈，用含生理鹽水清洗，將胃小心地納入腹腔，逐層縫合創(chuàng)口。術(shù)后當(dāng)日給大鼠自由飲水，次日開始自由飲食。

1.2.3 給藥方法 造模次日開始給藥：模型組給予生理鹽水1mL/100g灌胃；柚皮苷低劑量組給予50mg/kg灌胃；柚皮苷中劑量組給予100mg/kg灌胃；柚皮苷高劑量組給予200mg/kg灌胃；蘭索拉唑組給予3mg/kg蘭索拉唑。每天 1 次，連續(xù)給藥 1 周。正常組正常飲食。

1.2.4 標(biāo)本采集與處理 給藥1周后，所有組別大鼠禁食24h后，進(jìn)行腹腔麻醉，開腹采用腹主動(dòng)脈取血方法收集血液標(biāo)本，取血后室溫靜置1h后3 500r/min離心10min，吸出上層血清存放在-85 ℃冰箱保存。胃黏膜用組織勻漿器勻漿后離心，吸出上層澄清液存放在-85 ℃冰箱保存。

1.2.5 觀測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.5.1 血清SOD水平檢測(cè) 采用WST-1法檢測(cè)血清SOD水平。按試劑盒要求設(shè)定對(duì)照孔、對(duì)照空白孔、測(cè)定孔和測(cè)定空白孔，分別加樣品、雙蒸水、酶工作液、酶稀釋液、底物應(yīng)用液后，37 ℃孵育反應(yīng)20min。用多功能酶標(biāo)儀(Bio-TekELX800，美國(guó))在450nm波長(zhǎng)測(cè)定光密度值(OD值)。依據(jù)公式計(jì)算樣品中SOD水平。

1.2.5.2 血清NO水平檢測(cè) 采用一步法，按試劑盒要求設(shè)定空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和測(cè)定孔，分別加雙蒸水，20mol/L亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液，樣品，顯色劑后，靜置15min。用多功能酶標(biāo)儀(Bio-TekELX800，美國(guó))在550nm波長(zhǎng)測(cè)定各孔吸光度值(A值)，依據(jù)計(jì)算公式得出各樣本NO水平。

2 結(jié) 果

2.1 胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織SOD的變化 與模型組相比，柚皮苷低、中、高劑量給藥組與蘭索拉唑組大鼠血清及胃黏膜組織中SOD水平均升高，但柚皮苷中劑量、高劑量組效果明顯(P<0.05)。相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯(P<0.05)，見表1。

表1 各組大鼠血清及胃黏膜組織液中SOD水平的變化

a：P<0.01，與正常組比較；b：P<0.05，與模型組比較；c：P<0.05，與蘭索拉唑組比較；d：P<0.05，與柚皮苷低劑量組比較。

2.2 胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織NO的變化 與模型組相比，柚皮苷中、高劑量組與蘭索拉唑組大鼠血清及胃黏膜組織中NO水平均升高，但柚皮苷中、高劑量組效果明顯(P<0.05)。相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯(P<0.05)，見表2。

表2 各組大鼠血清及胃黏膜組織液中NO水平

a：P<0.01，與正常組比較；b：P<0.05，與模型組比較；c：P<0.05，與蘭索拉唑組比較；d：P<0.05，與低劑量組比較。

3 討 論

胃潰瘍是臨床常見的消化道疾病，各種物理和化學(xué)因素刺激、機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)及病原菌的感染導(dǎo)致胃黏膜損傷，誘發(fā)或加劇潰瘍病的發(fā)生[7-8]。大量研究表明，胃潰瘍產(chǎn)生與修復(fù)是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，是多種細(xì)胞、生長(zhǎng)因子及細(xì)胞外基質(zhì)相互作用的結(jié)果，而胃黏膜防御屏障功能下降，防御保護(hù)因子減少是形成胃潰瘍的重要病理基礎(chǔ)之一。SOD是存在于體內(nèi)抑制和防御自由基損傷的重要抗氧化酶之一，胃潰瘍發(fā)生過程中氧自由基損傷是重要因素之一，大量試驗(yàn)研究表明，SOD活性下降、抗氧化能力降低，導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激反應(yīng)，是胃潰瘍產(chǎn)生的重要機(jī)制[9]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，柚皮苷能明顯提升胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜中SOD水平，隨著用藥劑量的增加，其作用效果愈明顯，相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯。

NO不僅具有抗氧化作用，還是重要的胃黏膜保護(hù)因子，其主要通過以下機(jī)制發(fā)揮作用：(1)舒張血管平滑肌直接擴(kuò)張血管，增加胃黏膜血流，從而改善胃黏膜微循環(huán)；(2)改善受損胃黏膜的血管通透性，維持血管壁的完整性[10]；(3)拮抗內(nèi)皮素-1(ET-1)的縮血管作用[11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，柚皮苷能明顯提升胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜中NO的水平，隨著用藥劑量的增加，其作用效果愈明顯，相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯。

柚皮苷是一種在植物界廣泛存在的天然單體化合物，現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)其具有抗病毒、鎮(zhèn)痛、抗過敏、改善局部微循環(huán)和營(yíng)養(yǎng)供給的性能。其較強(qiáng)的抗炎、抗氧化能力已被證實(shí)[1]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，柚皮苷具有明顯的促進(jìn)胃潰瘍愈合作用，且治療效果與蘭索拉唑無明顯差異。柚皮苷的作用機(jī)制可能是通過刺激胃黏膜細(xì)胞，促進(jìn)黏膜保護(hù)因子SOD及NO分泌，提高SOD及NO水平，加快胃黏膜的增殖與修復(fù)，從而達(dá)到保護(hù)胃黏膜，預(yù)防和治療胃潰瘍的作用。

[1]時(shí)雪峰．柚皮苷提取純化及其降血糖活性研究[D]．南寧：廣西醫(yī)科大學(xué)，2008．

[2]牛曉靜，魯靜，段曉穎，等．HPLC同時(shí)測(cè)定健脾舒胃凝膠中甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨5種成分水平[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015，21(2)：77-79．

[3]楊佳靜，薛佳，周華方，等．HPLC法同時(shí)測(cè)定胃蘇顆粒中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的水平[J]．中國(guó)藥房，2014，25(4)：372-374．

[4]張?jiān)伱?，陳曉峰，姚莉萍．HPLC法測(cè)定無糖型胃炎靈顆粒中柚皮苷的水平[J]．安徽醫(yī)藥，2014，18(6)：1045-1047．

[5]OkabeS,AmagaseK.Anoverviewofaceticacidulcermodels-thehistoryandstateoftheartofpepticulcerresearch[J].BiolPharmBull,2005,28(8):1321-1341.

[6]才麗平，蔣寧，曲怡，等．“毒熱證”胃潰瘍大鼠模型的制備與評(píng)價(jià)[J]．中華中醫(yī)藥雜志，2011，26(3)：501-504．

[7]LiuXH,ZhaoLG,LiangJ,etal.Componentanalysisandstructureidentificationofactivesubstancesforanti-gastriculcereffectsinradixastragalibyliquidchromatographyanntandemmassspectromeltry[J].JChromatogrBAnalytTechnolBiomedLifeSci,2014(960):43-51.

[8]陳月，曲連悅，李曉赫，等．蘭索拉唑治療胃潰瘍4周和8周愈合率的療效評(píng)價(jià)[J]．中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011，31(23)：1956-1960．

[9]王海燕，劉亞明，李海燕，等．高良姜對(duì)胃潰瘍小鼠模型血清NO,SOD及MDA的影響[J]．中華中醫(yī)藥雜志，2011，26(7)：1640-1642．

[10]杜勇，趙偉春，沈文文，等．腹水草抗大鼠乙酸型胃潰瘍的作用及其對(duì)NO,iNOS和VEGF表達(dá)的影響[J]．浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，10(37)：1151-1155．

[11]林潔，文穎娟．加味左金湯對(duì)胃潰瘍大鼠血清NO及胃黏膜EGF,EGFR表達(dá)的影響[J]．中國(guó)中醫(yī)急癥，2013，11(22)：1836-1838．

?驗(yàn)交流·

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.02.026

重慶市教育委員會(huì)科學(xué)技術(shù)研究資助項(xiàng)目(KJ131805)。

賀敏(1980-)，講師，碩士，主要從事中醫(yī)藥治療脾胃疾病方面研究?！?/p>

E-mail：657537946@qq.com。

R

B

1671-8348(2017)02-0230-03

2016-07-10

2016-10-11)