藏藥甘露酥油丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

次仁旺姆 擁宗卓瑪

西藏自治區(qū)食品藥品檢驗所，西藏 拉薩 850000

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藥物研究

藏藥甘露酥油丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

次仁旺姆 擁宗卓瑪

西藏自治區(qū)食品藥品檢驗所，西藏 拉薩 850000

目的：建立藏藥甘露酥油丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：運(yùn)用薄層色譜法對樣品進(jìn)行鑒別；采用高效液相色譜法測定沒食子酸的含量：Waters Xselect C18(250 mm × 4.6 mm，5 μm)柱,流動相：甲醇-0.2%磷酸溶液(3∶97)，檢測波長270 nm；柱溫25℃；流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量10μL。結(jié)果：訶子、毛訶子、余甘子的薄層鑒別色譜圖斑點清晰，分離度好，陰性對照無干擾；沒食子酸濃度在0.5149～10.298μg范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系(R2=0.9999)，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性實驗的RSD<2%，平均加樣回收率為97.14%。結(jié)論：本研究制定甘露酥油丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為該品種的質(zhì)量控制提供了參考依據(jù)。

甘露酥油丸；高效液相色譜法；薄層色譜；沒食子酸

甘露酥油丸系藏族驗方，收載于1995年版《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》藏藥第一冊。甘露酥油丸具有滋補(bǔ)強(qiáng)身、延年益壽等作用，臨床用于氣血虧虛，精液衰損，心悸失眠，老年虛弱，肢體僵直，經(jīng)絡(luò)不利，虛損不足之癥[1]。在原標(biāo)準(zhǔn)中只有性狀，檢測方法有限，因此有必要對甘露酥油丸標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行研究，以建立全面完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Spectra system液相色譜儀(Waters公司)。Mettler XP205型(精密度為十萬分之一)和Mettler XP504(精密度為萬分之一)電子天平。

1.2 材料 沒食子酸對照品(批號：110831-200803，純度為90.1%，中國生物制品檢定研究院)；甘露酥油丸(西藏昌都光宇利民藥業(yè)有限責(zé)任公司)此次樣品收集到7批，見表1。 HPLC用色譜純乙腈和甲醇為Tieda產(chǎn)品，水為純凈水，其它試劑為分析純。

表1 甘露酥油丸樣品來源一覽表

2 薄層色譜鑒別

2.1 訶子薄層色譜鑒別[2]取本品5.0g，加無水乙醇30mL，加熱回流30min，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇5mL使溶解，通過中性氧化鋁柱(100～200目，5g，內(nèi)徑為1.5cm)用稀乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用水5mL溶解后通過C18(300mg)固相萃取小柱，用30%甲醇10mL洗脫，棄去30%甲醇液，再用甲醇10mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。取訶子對照藥材，按供試品溶液制備方法制備，即得對照藥材溶液。取缺訶子的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備，即得陰性樣品溶液。 按照中國藥典2015版通則0502)[3]試驗，分別吸取供試品溶液10μL和對照藥材溶液5μL，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以甲苯-冰醋酸-水(12 ∶10 ∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同的藍(lán)色斑點。見圖1。

2.2 毛訶子薄層色譜鑒別 取本品9.0g，加熱水20mL攪拌使溶解，離心，取上清液，加乙醇30mL，充分?jǐn)噭颍o置2h，濾過，濾液蒸至約10mL，攪勻，通過聚酰胺柱(30～60目，5g，內(nèi)徑為1.5cm，干法)，加水50mL洗脫，收集洗脫液，置水浴濃縮至約20mL，用醋酸乙酯提取2次，每次20mL，合并醋酸乙酯液，加水20mL，搖勻，放置分層，分取上層液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。另取毛訶子對照藥材1.0g，加熱水20mL煮沸，保持微沸30min，濾過，濾液置水浴濃縮至約10mL，用醋酸乙酯提取2次，每次15mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，即得對照藥材溶液。缺毛訶子的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備，即得陰性樣品溶液。按照中國藥典2015版通則0502[3]試驗，吸取上述兩種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-二氯甲烷-醋酸酯-甲醇(8∶5∶3∶2)為展開劑，展開，取出，晾干。在紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同的熒光斑點。見圖2。

2.3 余甘子薄層色譜鑒別 取本品9.0g，加熱水20mL攪拌使溶解，離心，取上清液，加乙醇30mL，充分?jǐn)噭?，靜置2h，濾過，濾液蒸至約10mL，攪勻，通過聚酰胺柱(30～60目，5g，內(nèi)徑為1.5cm,干法)，加水50mL洗脫，收集洗脫液，置水浴濃縮至約20mL，用醋酸乙酯提取2次，每次20mL，合并醋酸乙酯液，加水20mL，搖勻，放置分層，分取上層液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。另取余甘子對照藥材1.0g，加熱水20mL煮沸，保持微沸30min，濾過，濾液置水浴濃縮至約10mL，用醋酸乙酯提取2次，每次15mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為對照藥材溶液。取缺余甘子的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備，即得陰性樣品溶液。按照中國藥典2015版通則0502[3]試驗，吸取上述兩種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(9∶9∶3∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至淺黃色斑點出現(xiàn)，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同的熒光斑點。見圖3。

3 含量測定

3.1 色譜條件 色譜柱：Waters Xselect C18(250mm × 4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-0.2%磷酸溶液(3∶97)；檢測波長270nm；柱溫25℃；流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量10μL。用紫外檢測器檢測。在此色譜條件下，沒食子酸和其它組分均能達(dá)到分離。樣品中沒食子酸保留時間與對照品保留時間一致。見圖4。

3.2 供試品溶液的制備 取供試品，剪碎，取約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加50%甲醇溶液25mL，精密稱定重量，超聲處理30min，冷卻至室溫，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.3 對照品溶液的制備 取沒食子酸對照品25.7451mg，用50%甲醇溶解，定容于50mL的容量瓶中，得對照溶液0.5149mg /mL。

3.4 線性范圍的考察 精密吸取沒食子酸對照品溶液(0.5149mg/mL)各1、2、4、8、16、20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，得到相應(yīng)的峰面積。以沒食子酸對照品濃度為X坐標(biāo)，以相應(yīng)峰面積為Y坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理，得回歸方程Y=3E+06X+44703，沒食子酸線性范圍為0.5149～10.298μg，R2=0.9999 (n=6)。見圖5。

3.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，計算精密度，結(jié)果6次測定值的RSD低于2%，表明該方法精密度良好。

3.6 重復(fù)性試驗 精密吸取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，共6次，記錄色譜圖，6次測定值的相RSD低于2%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液10μL，在上述色譜條件下在0、1、2、8、16、24h測得沒食子酸的峰面積，計算其RSD低于2%，表明樣品在24h內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性。

3.8 加樣回收試驗 取已知含量的供試品(沒食子酸的含量為5.3740mg/g)6份，分別精密加入對照品溶液(含沒食子酸的量0.5149mg/mL)5.0mL，再照供試品溶液的制備法提取，按確定的測定方法進(jìn)行測定，計算回收率，結(jié)果表明：回收率在95%～105%之間，該方法回收率良好。見表2。

表2 沒食子酸加樣回收試驗結(jié)果

3.9 樣品測定 按上述提取方法和色譜條件，對7批次的甘露酥油丸進(jìn)行了含量測定，測得每批樣品中沒食子酸的含量。以平均含量下浮20%作為本品的含量限度標(biāo)準(zhǔn)，故暫定本品每克沒食子酸不得少于5.20mg/g。見表3。

表3 7批供試品測定結(jié)果

4 討論

參考相關(guān)文獻(xiàn)[4]訶子、毛訶子、余甘子的主要成分均為沒食子酸，故采取高效液相色譜法測定沒食子酸總量。

訶子、毛訶子、余甘子的薄層鑒別[2,5]。經(jīng)過多次試驗，在薄層色譜行為的重現(xiàn)性良好，專屬性強(qiáng)，Rf值適中，分離效果好，因此可以將此方法定為甘露酥油丸的定性鑒別。

取沒食子酸對照品溶液適量，采集200～400nm波長間紫外吸收光譜，發(fā)現(xiàn)其在270nm 有最大吸收。且沒食子酸對照品色譜峰與其它峰達(dá)到良好的基線分離，雜質(zhì)干擾少，峰形好。

[1]衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(藏藥第一冊)[S]. 1995.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(第一部) [S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(第四部) [S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：103.

[4]中華本草編委會.中華本草·藏藥卷[M].上海:上海科技出版社, 2002.

[5]衛(wèi)生部藥典委員會. 中華人民共和國藥典中藥薄層色譜彩色圖集[M].廣州:廣東科技出版社，1993.

(編輯：穆麗華)

2016-10-20

次仁旺姆(1979-)，女，藏族，本科，主管藥師，從事藥品檢驗及藏藥標(biāo)準(zhǔn)提高工作。E-mail:58509834@qq.com

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