殼聚糖沒(méi)食子酸衍生物酶法催化條件優(yōu)化及抗氧化活性和細(xì)胞毒性

吳 昊，王藝穎，甄天元，羅 丹，張 瀟，楊紹蘭，王成榮*

殼聚糖沒(méi)食子酸衍生物酶法催化條件優(yōu)化及抗氧化活性和細(xì)胞毒性

吳 昊，王藝穎，甄天元，羅 丹，張 瀟，楊紹蘭，王成榮*

（青島農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東 青島 266109）

利用漆酶、辣根過(guò)氧化物酶在均相和非均相反應(yīng)體系中催化殼聚糖與沒(méi)食子酸反應(yīng)，以增強(qiáng)殼聚糖的抗氧化性。研究酶種類、反應(yīng)體系pH值、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、酶用量和底物的質(zhì)量比等因素對(duì)產(chǎn)物接枝率的影響。利用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)確定的最適反應(yīng)條件為反應(yīng)pH 4.5、反應(yīng)溫度25 ℃、反應(yīng)時(shí)間5 h、沒(méi)食子酸與殼聚糖的質(zhì)量比3∶1、漆酶用量4 U，此條件下衍生物的接枝率為65.2%。對(duì)衍生物分別進(jìn)行體外抗氧化活性和細(xì)胞毒性檢測(cè)，結(jié)果表明，在相同添加量的情況下，衍生物的抗氧化性顯著高于未改性的殼聚糖，而且產(chǎn)物無(wú)細(xì)胞毒性。

酶；殼聚糖沒(méi)食子酸衍生物；抗氧化；細(xì)胞毒性

殼聚糖（chitosan，CTS）是甲殼素脫乙酰基后得到的一種無(wú)毒的、生物可降解多糖，廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)、醫(yī)藥、化妝品和廢水處理等方面[1]。CTS的抗氧化能力主要來(lái)自于氨基上N的螯合能力以及氨基和羥基較弱的給電子能力，被稱為次級(jí)型抗氧化劑[2]。由于CTS僅能溶于稀酸，故限制了CTS的應(yīng)用，因此，對(duì)CTS進(jìn)行改性，在提高其溶解度的同時(shí)賦予其新的特性，已成為研究開發(fā)CTS應(yīng)用的方向之一[3]。

沒(méi)食子酸（gallic acid，GA）是一種從植物（特別是綠茶）中提取的天然酚類抗氧化劑，具有較強(qiáng)的清除自由基和抗氧化作用，GA作為初始型抗氧化劑，可以很好地提供氫原子或電子以抑制氧化鏈的反應(yīng)[4]，但是GA作為小分子抗氧化劑的穩(wěn)定性較差，在高溫、光照等條件下易分解。有效的方法是將這些小分子共價(jià)結(jié)合到配體上，以增強(qiáng)它的穩(wěn)定性[5]。已有研究者采用化學(xué)方法將其結(jié)合到CTS分子上來(lái)增強(qiáng)CTS的抗氧化性[6-7]和GA的穩(wěn)定性，但化學(xué)方法存在著反應(yīng)步驟多、專一性差等特點(diǎn)，隨著人們環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)，作為綠色化學(xué)研究的一個(gè)重要部分，生物催化劑酶用于高分子的合成及改性正成為一個(gè)新的研究熱點(diǎn)。

漆酶（EC1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，在果汁加工、生物漂白、物質(zhì)合成和廢水處理等方面被廣泛應(yīng)用，它利用銅離子特有的氧化還原能力氧化酚類和芳香類化合物，利用自由基反應(yīng)機(jī)理完成4 個(gè)電子的轉(zhuǎn)移，同時(shí)將分子氧還原成水[8]。酚類化合物是典型的漆酶底物，它的氧化還原電勢(shì)較低，可以允許電子傳遞給Cu（Ⅰ），反應(yīng)過(guò)程中，酚被氧化成苯氧自由基，根據(jù)反應(yīng)條件的不同，可以進(jìn)一步通過(guò)自由基偶合反應(yīng)發(fā)生聚合或重排生成苯醌。漆酶可以使酚型結(jié)構(gòu)單元失去一個(gè)電子形成酚氧游離基，進(jìn)而形成醌型結(jié)構(gòu)[9]，醌可以與CTS上的氨基基團(tuán)產(chǎn)生化學(xué)鍵連接，目前普遍認(rèn)為醌與氨基通過(guò)席夫堿或邁克爾加成反應(yīng)機(jī)理發(fā)生共價(jià)作用。

辣根過(guò)氧化物酶（horse radish peroxidase，HRP）是應(yīng)用較廣泛的一種酶制劑，是一種含鐵卟啉輔基的糖蛋白復(fù)合酶[10]，對(duì)底物具有光譜選擇性，能催化氧化漆酶所不能催化的一元酚和一元胺[11]且具有特殊的催化效果，在H2O2的存在下，能夠使苯胺類物質(zhì)或酚類的單體發(fā)生聚合反應(yīng)，在單體氨基、羥基的鄰、對(duì)位發(fā)生交聯(lián)[12]。在酶促反應(yīng)中通常把過(guò)氧化氫作為HRP的底物，在有供氫體存在時(shí)，二者反應(yīng)快且專一，被視作理想的催化組合。HRP易于提取、價(jià)格低廉、性能穩(wěn)定、耐熱性好且活性很少受損失，因此適于催化CTS與GA的聚合。

本實(shí)驗(yàn)以CTS和GA為原料，利用漆酶與HRP為催化劑催化二者合成，通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)考察最適反應(yīng)條件，以接枝率和溶解度為考察指標(biāo)得出最適酶種類和反應(yīng)方法，并在此基礎(chǔ)上對(duì)產(chǎn)物的體外抗氧化活性和細(xì)胞毒性進(jìn)行研究，旨在為CTS-GA衍生物的酶法制備和應(yīng)用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

CTS（脫乙酰度為90.8%） 青島云宙生物科技有限公司；GA 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；漆酶（由米曲霉制得，酶活力1 000 U/g）、HRP（酶活力300 U/mg） Solarbio專業(yè)分子試劑生產(chǎn)商；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

AR 2140電子分析天平（萬(wàn)分位） 奧豪斯國(guó)際商貿(mào)有限公司；81-2恒溫磁力攪拌器 國(guó)華電器有限公司；pH計(jì) 瑞士Mettler Toledo公司；真空循環(huán)水式真空泵 鄭州科工貿(mào)有限公司；真空冷凍干燥機(jī) 德國(guó)Marin Christ公司；Elx808型自動(dòng)酶標(biāo)儀 美國(guó)Bio-Tek公司；MCO-18AIC型CO2培養(yǎng)箱 日本Sanyo公司；CKX-41型倒置顯微鏡 日本Olympus公司；SW-CJ-1FD型單人單面超凈化工作臺(tái) 蘇州凈化設(shè)備有限公司。

1.3 方法

1.3.1 接枝率的測(cè)定

用線性電位滴定法[13]測(cè)定CTS自由氨基含量，按下式計(jì)算接枝率：

式中：D0為接枝前CTS的自由氨基含量；D1為接枝后CTS-GA衍生物的自由氨基含量；D為未處理CTS的自由氨基含量。

1.3.2 接枝反應(yīng)酶和方法的選擇

1.3.2.1 均相方法

將1.0 g CTS粉末溶于100 mL pH 4.5的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液中，攪拌至完全溶解后按質(zhì)量比3∶1的量加入GA，繼續(xù)攪拌，溶解完全后分別加入同等酶活的漆酶和HRP，于25 ℃氣浴搖床中反應(yīng)8 h，反應(yīng)完成后加無(wú)水乙醇醇沉24 h，抽濾，將產(chǎn)物溶于超純水中，透析24 h，每隔8 h換一次水，冷凍干燥后得CTS-GA衍生物。

1.3.2.2 非均相方法

取一定質(zhì)量的CTS薄膜溶于pH 6.5的乙酸-乙酸鈉緩沖液中，按質(zhì)量比為3∶1的量加入GA，攪拌均勻后加入同等酶活的漆酶和HRP，于25 ℃氣浴搖床中反應(yīng)8 h，反應(yīng)結(jié)束后將CTS-GA膜取出烘干至質(zhì)量恒定。

1.3.3 溶解度測(cè)定

取20 mg干燥至質(zhì)量恒定的CTS-GA溶解于50 mL蒸餾水中，氣浴搖床中振蕩溶解24 h，目測(cè)溶解情況，將不溶解的樣品過(guò)濾干燥后稱量質(zhì)量，比較前后質(zhì)量差，計(jì)算溶解度。

1.3.4 單因素試驗(yàn)

接枝反應(yīng)方法和酶種類確定后，測(cè)定制備得到的CTS-GA接枝率。固定其他條件，分別考察反應(yīng)pH（2.7～4.5）、反應(yīng)時(shí)間（1～8 h）、反應(yīng)溫度（25～55 ℃）、漆酶用量（1～20 U）和GA與CTS的質(zhì)量比（1∶1～6∶1）對(duì)接枝率的影響。

1.3.5 正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，為了獲得制備CTS-GA的最適條件，利用正交試驗(yàn)法，以反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、漆酶用量和GA與CTS質(zhì)量比（GA/CTS）為4 個(gè)考察因素，選取3 個(gè)水平進(jìn)行試驗(yàn)。采用L9（34）正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，確定反應(yīng)的最適條件。因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1，每組試驗(yàn)重復(fù)3 次。

表1 正交試驗(yàn)因素與水平Table1 Factors and their levels used in orthogonal array design

1.3.6 DPPH自由基清除能力測(cè)定

參照楊娜等[14]的方法測(cè)定。

1.3.7 羥自由基（·OH）清除能力測(cè)定

參照朱慶麟等[15]的方法，采用水楊酸法。

1.3.8 超氧陰離子自由基（O2－·）清除能力測(cè)定

參照趙強(qiáng)忠等[16]的方法，采用鄰苯三酚自氧化法。

1.3.9 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

參照張林樸等[17]的方法，采用MTT比色法檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞為大鼠成纖維細(xì)胞。用酶標(biāo)儀檢測(cè)樣本孔的吸光度A，計(jì)算各組在490 nm波長(zhǎng)吸光度，計(jì)算相對(duì)增殖率后，按表2所列標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)其細(xì)胞毒性。

表2 細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)Table2 Criteria for cytotoxicity evaluation

1.4 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為3 次實(shí)驗(yàn)的平均值，采用Origin 8.5繪圖，SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 接枝反應(yīng)酶種類及方法的確定

表3 不同酶種類及反應(yīng)方法對(duì)CTS-GA接枝率和溶解度的影響Tabel 3 Effect of different types of enzymes and different grafting methods on grafting ratio and solubility of CTS-GA

由表3可以看出，利用漆酶催化反應(yīng)，采用均相方法可以使CTS獲得較高的接枝率。采用非均相方法制備的CTS-GA接枝率低于均相方法，HRP的最適pH 6.0左右，因此采用HRP催化反應(yīng)時(shí)適宜采用非均相方法，但非均相制備得到的衍生物溶解度并不理想。有研究表明，CTS在均相條件下脫乙酰，當(dāng)CTS的自由氨基脫去50%左右時(shí)，產(chǎn)物具有良好的水溶性，但如果反應(yīng)在非均相的條件下進(jìn)行，不論其脫乙酰度如何，都不溶于水[18-19]。本實(shí)驗(yàn)中酶種類和合成方法對(duì)接枝率和溶解度的影響差異顯著，因此，該實(shí)驗(yàn)采用均相方法來(lái)合成CTS-GA，使用漆酶來(lái)催化該反應(yīng)。

2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 反應(yīng)pH值對(duì)接枝率的影響

圖1 pH值對(duì)衍生物接枝率的影響Fig. 1 Influence of initial reaction pH on grafting ratio of derivatives

從圖1可以看出，pH值小于3.0時(shí)，CTS-GA的接枝率小于40%，隨著酸性的逐漸減弱，CTS-GA接枝率逐漸升高，當(dāng)pH值在3.7～4.5范圍內(nèi)，接枝率保持穩(wěn)定，維持在50%～55%之間，無(wú)顯著性差異。隨著pH值的增大，CTS溶解度下降。當(dāng)pH值在3.7～4.5范圍內(nèi)時(shí)，可使CTS-GA獲得較高的接枝率，這與漆酶在pH 4.5附近具有較高活性的性質(zhì)是一致的[20]。綜合考慮接枝率與漆酶最適pH值范圍，后續(xù)正交試驗(yàn)中并不把pH值作為考察因素，直接選用4.5為最佳反應(yīng)pH值。

2.2.2 反應(yīng)溫度對(duì)接枝率的影響

圖2 溫度對(duì)衍生物接枝率的影響Fig. 2 Influence of reaction temperature on grafting ratio of derivatives

漆酶的最適反應(yīng)溫度較低，一般在25～50 ℃之間，從圖2可以看出，在室溫（25 ℃）條件下，CTS-GA的接枝率為58%，隨著溫度的逐漸升高，接枝率隨之升高，在30 ℃時(shí)達(dá)到最高值（63.5%），但當(dāng)溫度繼續(xù)升高時(shí)，接枝率出現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，這可能是由于溫度升高，漆酶催化活性提高，等量漆酶能催化更多GA產(chǎn)生自由基，并增加GA上酚氧自由基與CTS鏈的接觸幾率，所以溫度升高有利于提高接枝率。但溫度過(guò)高，影響漆酶活力，接枝率降低。同時(shí)由于CTS的接枝反應(yīng)是加成和解聚反應(yīng)的可逆過(guò)程，當(dāng)溫度達(dá)到30 ℃時(shí)，由于加成反應(yīng)速率小于解聚反應(yīng)速率，接枝率反而有所下降。因此，30 ℃是漆酶催化CTS與GA反應(yīng)的最適溫度。

2.2.3 漆酶用量對(duì)接枝率的影響

圖3 漆酶用量對(duì)衍生物接枝率的影響Fig. 3 Influence of enzyme dosage on grafting ratio of derivatives

從圖3可以看出，隨著漆酶用量的增加，接枝率呈先上升后下降的趨勢(shì)，當(dāng)漆酶用量達(dá)到4 U后，CTS-GA的接枝率逐漸下降，這可能是由于催化氧化GA的反應(yīng)速率加快，反應(yīng)中間產(chǎn)物還未充分與CTS上氨基反應(yīng)完全就自身發(fā)生聚合反應(yīng)引起接枝率下降。在該反應(yīng)體系中，當(dāng)漆酶用量為4 U時(shí)，可使CTS-GA的接枝率達(dá)到最高（60.3%）。

2.2.4 反應(yīng)時(shí)間對(duì)接枝率的影響

圖4 反應(yīng)時(shí)間對(duì)衍生物接枝率的影響Fig. 4 Influence of reaction time on grafting ratio of derivatives

從圖4可以看出，隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，CTSGA接枝率呈先上升后下降的趨勢(shì)，在4 h達(dá)到最高值（63.4%），隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，接枝率逐漸降低。反應(yīng)前期，隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，CTS-GA的接枝率逐漸增加，CTS-GA達(dá)到一定濃度后，會(huì)抑制正反應(yīng)的進(jìn)行，使逆反應(yīng)的速率增加，最終反應(yīng)逐漸趨于平衡。

2.2.5 GA/CTS對(duì)接枝率的影響

從圖5可以看出，當(dāng)GA/CTS為3∶1時(shí)，接枝率最大。當(dāng)GA的質(zhì)量濃度較低時(shí)，CTS分子中的氨基位點(diǎn)多于GA分子的數(shù)量，使得CTS并不能全部參與反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致CTS-GA接枝率降低。隨著反應(yīng)體系中GA質(zhì)量濃度的不斷增加，有利于GA酚氧自由基的生成，但由于CTS接枝位點(diǎn)數(shù)量有限，GA/CTS大于3∶1時(shí)，接枝率趨于平衡。當(dāng)GA質(zhì)量濃度繼續(xù)增加時(shí)，過(guò)量的GA使漆酶催化氧化GA速率加快，反應(yīng)中間產(chǎn)物未充分與CTS上的氨基反應(yīng)完全就自身發(fā)生聚合反應(yīng)引起接枝率下降。因此，當(dāng)GA/CTS為3∶1時(shí)，可達(dá)到最高接枝率。

圖5 GA 5 GA/CTS對(duì)衍生物接枝率的影響Fig. 5 Influence of GA-to-CTS ratio on grafting ratio of derivatives

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果及數(shù)據(jù)分析

表4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table4 Orthogonal array design with experimental results

如表4所示，在所選試驗(yàn)范圍內(nèi)，各因素對(duì)接枝率的影響主次為C（反應(yīng)時(shí)間）＞B（漆酶用量）＞D（GA/CTS）＞A（反應(yīng)溫度）。由正交試驗(yàn)結(jié)果得出，反應(yīng)溫度25 ℃、漆酶用量4 U、反應(yīng)時(shí)間5 h、GA/CTS 3∶1是合成CTS-GA的最適條件。

2.4 CTS-GA抗氧化活性

2.4.1 清除DPPH自由基的能力

如圖6所示，CTS對(duì)DPPH自由基的清除率最高不超過(guò)30%，原因是CTS給電子能力較弱，屬于次級(jí)抗氧化劑，以及CTS分子間和分子內(nèi)氫鍵抑制了對(duì)自由基的清除，而CTS-GA在很小質(zhì)量濃度變化范圍內(nèi)對(duì)DPPH自由基清除作用顯著提高，6.5 μg/mL時(shí)對(duì)DPPH自由基的清除率高達(dá)90%。CTS-GA和GA對(duì)DPPH自由基清除率的IC50值分別為1.45 μg/mL和1.39 μg/mL，二者IC50值顯著低于未改性CTS，并且CTS-GA對(duì)DPPH自由基的清除效果優(yōu)于GA，這可能是由于改性后的CTS-GA活性羥基增多，能提供更多質(zhì)子與DPPH自由基結(jié)合生成穩(wěn)態(tài)的DPPH2

[21]，進(jìn)而有效地清除了DPPH自由基，因此，通過(guò)GA改性CTS制備的CTS-GA抗氧化能力得到顯著提高。

圖6 CTS、GA和衍生物清除DPPH自由基能力Fig. 6 DPPH scavenging capacity of CTS, GA and CTS-GA

2.4.2 清除·OH能力

圖7 CTS、GA和衍生物清除?OH能力Fig. 7 Hydroxyl radical scavenging capacity of CTS, GA and CTS-GA

由圖7可以看出，CTS由于自身結(jié)構(gòu)等原因具備極低的清除·OH的能力，在質(zhì)量濃度為250 μg/mL時(shí)，CTS對(duì)?OH的清除率僅為19.1%，而GA和CTS-GA對(duì)?OH的清除率分別高達(dá)54.5%和78.6%。各樣品對(duì)?OH的清除能力隨質(zhì)量濃度的增大而增加，其中CTS-GA最為明顯。CTS-GA之所以具備較高的清除?OH能力，可能是由于CTS-GA含有較多的羥基（一部分是CTS本身存在的羥基，另一部分是經(jīng)GA改性后新引入的羥基），羥基的氫原子可以與?OH發(fā)生奪氫反應(yīng)從而起到清除?OH的作用[22]。

CTS中存在伯、仲羥基、—NH2，可與·發(fā)生反應(yīng)，清除·，由于高分子CTS含較多氫鍵，結(jié)構(gòu)緊密，使得CTS中的活性官能團(tuán)與·作用的幾率降低[23]。而CTS與GA反應(yīng)生成CTS-GA后，雖然相應(yīng)的—NH2位點(diǎn)減少，但由于GA的加入引入了更多的—OH，更易與充分作用，因此，清除·能力增強(qiáng)。從圖8可以看出，CTS-GA清除·效果顯著優(yōu)于CTS，但與GA相比，差異不顯著，GA已被證實(shí)在體外具有較強(qiáng)的抗氧化作用，因此，CTS-GA也可作為一種有效的抗氧化劑[24]。

圖8 CTS、GA和衍生物清除?能力Fig. 8 Superoxide anion radical scavenging capacity of CTS, GA and CTS-GA

2.5 細(xì)胞毒性檢驗(yàn)結(jié)果

表5 CTS、GA和CTS-GA細(xì)胞毒性結(jié)果Table5 Cytotoxicity of CTS, GA and CTS-GA

MTT比色法檢測(cè)CTS-GA細(xì)胞毒性結(jié)果見(jiàn)表5。在低質(zhì)量濃度（10 μg/mL）時(shí)CTS、GA和CTS-GA細(xì)胞增殖率均大于100%，毒性級(jí)別為0級(jí)，當(dāng)質(zhì)量濃度范圍在500～1 000 μg/mL時(shí)，CTS-GA毒性級(jí)別顯著低于CTS。這一結(jié)果表明，采用GA對(duì)CTS進(jìn)行適當(dāng)改性后，CTSGA細(xì)胞毒性明顯降低，CTS-GA有可能成為一類用途更為廣泛、安全無(wú)毒的抗氧化劑。

3 結(jié) 論

采用均相方法合成CTS-GA，最適反應(yīng)條件為pH 4.5、反應(yīng)溫度25 ℃、漆酶用量4 U、反應(yīng)時(shí)間5 h，GA/CTS 3∶1，此條件下CTS-GA的接枝率為65.2%。CTS經(jīng)過(guò)GA改性生成CTS-GA后，抗氧化能力明顯提高；在500～1 000 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，CTS-GA的毒性明顯低于CTS，屬安全范圍。

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Optimization of Enzymatic Reaction between Chitosan and Gallic Acid for Enhanced Antioxidative Activity and Reduced Cytotoxicity

WU Hao, WANG Yiying, ZHEN Tianyuan, LUO Dan, ZHANG Xiao, YANG Shaolan, WANG Chengrong*
(College of Food Science and Engineering, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China)

In this paper, chitosan (CTS) grafted copolymer with gallic acid (GA) was synthesized by laccase and horse radish peroxidase to enhance the antioxidant activity of chitosan. The effects of enzyme type and dosage, initial reaction pH, temperature, reaction time, and enzyme-to-substrate ratio on the grafting ratio were studied. The maximum grafting ratio (65.2%) was obtained when the reaction took place at 25 ℃ for 5 h in 100 mL of acetate buffer solution (100 mmol/L) at pH 4.5 with a mass ratio of GA to CTS of 3 in the presence of 4 U of laccase under constant stirring. At the same dosage, the CTSGA copolymer showed signif cantly higher antioxidant activity than chitosan and had no cytotoxicity.

enzyme; derivative from chitosan and gallic acid; antioxidant; cytotoxicity

10.7506/spkx1002-6630-201702036

TS202.3

A

1002-6630（2017）02-0227-06

吳昊, 王藝穎, 甄天元, 等. 殼聚糖沒(méi)食子酸衍生物酶法催化條件優(yōu)化及抗氧化活性和細(xì)胞毒性[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(2): 227-232. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201702036. http://www.spkx.net.cn

WU Hao, WANG Yiying, ZHEN Tianyuan, et al. Optimization of enzymatic reaction between chitosan and gallic acid for enhanced antioxidative activity and reduced cytotoxicity[J]. Food Science, 2017, 38(2): 227-232. (in Chinese with English abstract)

10.7506/spkx1002-6630-201702036. http://www.spkx.net.cn

2016-05-20

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（蔬菜）產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)項(xiàng)目（SDAIT-05-21）；山東省農(nóng)業(yè)重大應(yīng)用技術(shù)創(chuàng)新項(xiàng)目（SDNYCX-2015-ZD06-02）；國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（31401549）；山東省高等學(xué)?？萍加?jì)劃項(xiàng)目（J14LE11）；青島市科技計(jì)劃項(xiàng)目（14-2-4-71-jch）；青島農(nóng)業(yè)大學(xué)高層次人才科研基金項(xiàng)目（1207）

吳昊（1981—），女，副教授，博士，研究方向?yàn)槭称房茖W(xué)。E-mail：wuhaoqau@163.com

*通信作者：王成榮（1958—），男，教授，碩士，研究方向?yàn)檗r(nóng)產(chǎn)品貯藏與加工、食品科學(xué)。E-mail：qauwcr@126.com