黃顙魚(yú)與瓦氏黃顙魚(yú)的規(guī)模化雜交繁殖

唐忠林++周國(guó)勤++茆健強(qiáng)++郭麗蕓++劉煒++尹紹武++張國(guó)松

doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2016.10.087

摘要：在應(yīng)用精子保存方法的基礎(chǔ)上，采用濕法人工授精技術(shù)開(kāi)展黃顙魚(yú)（♀）×瓦氏黃顙魚(yú)（♂）雜交及黃顙魚(yú)自交的繁苗生產(chǎn)試驗(yàn)。結(jié)果顯示：當(dāng)雌雄配組比例分別為300 ∶1、600 ∶1時(shí)，雜交組與自交組的受精率不存在顯著差異（P>0.05），表明黃顙魚(yú)（♀）與瓦氏黃顙魚(yú)（♂）親本配合力較好、授精效率高；雜交繁殖的受精率隨著雌雄配組比例的升高而降低，在本試驗(yàn)條件下，適于規(guī)模化雜交繁苗生產(chǎn)的雌雄配組比例為（300～600） ∶1?？偨Y(jié)繁殖技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，開(kāi)展規(guī)模雜交繁苗，采用161.6 kg黃顙魚(yú)雌魚(yú)及4尾瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)可成功雜交繁苗207.9萬(wàn)尾，平均受精率為 79.8%，平均出苗率為82.5%；單尾瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)配組黃顙魚(yú)雌魚(yú)量達(dá)40.4 kg，繁苗量達(dá)51.9萬(wàn)尾，實(shí)現(xiàn)了黃顙魚(yú)（♀）與瓦氏黃顙魚(yú)（♂）的規(guī)?；s交繁殖生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞：黃顙魚(yú)；瓦氏黃顙魚(yú)；雜交繁殖；規(guī)模化；受精率；出苗率

中圖分類號(hào)： S961.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2016）10-0303-02

收稿日期：2016-04-12

基金項(xiàng)目：江蘇省水產(chǎn)三新工程項(xiàng)目（編號(hào)：D2013-2-1、Y2015-24）。

作者簡(jiǎn)介：唐忠林（1982—），男，湖南郴州人，碩士研究生，工程師，主要從事水產(chǎn)動(dòng)物育種研究。Tel：（025）86566708；E-mail：77439753@qq.com。黃顙魚(yú)（Pelteobagrus fuIvidraco）和瓦氏黃顙魚(yú)（Pelteobaggrus vachelli）均屬鲇形目鲿科黃顙魚(yú)屬，為底棲經(jīng)濟(jì)魚(yú)類，廣泛分布于我國(guó)各大水系。目前，黃顙魚(yú)雜交繁殖模式已取得一定技術(shù)突破，包括黃顙魚(yú)與瓦氏黃顙魚(yú)、黃顙魚(yú)與烏蘇里擬鲿、黃顙魚(yú)與粗唇等雜交繁殖技術(shù)，但均以試驗(yàn)性研究為主，其規(guī)模性生產(chǎn)技術(shù)尚不成熟[1-5]。黃顙魚(yú)（♀）與瓦氏黃顙魚(yú)（♂）的雜交屬于不同品種之間的近緣雜交，其規(guī)?；敝臣夹g(shù)研究較少，生產(chǎn)效率有待提高。

通過(guò)開(kāi)展黃顙魚(yú)（♀）與瓦氏黃顙魚(yú)（♂）的雜交生產(chǎn)試驗(yàn)，確定催產(chǎn)、授精、孵化等技術(shù)參數(shù)，以提高黃顙魚(yú)規(guī)?；s交繁苗生產(chǎn)效率，實(shí)施黃顙魚(yú)（♀）與瓦氏黃顙魚(yú)（♂）的規(guī)?；s交繁苗。

1材料與方法

1.1材料

黃顙魚(yú)由南京市水產(chǎn)科學(xué)研究所黃橋?yàn)┟绶N繁育場(chǎng)自行培育，雌魚(yú)、雄魚(yú)的規(guī)格分別達(dá)0.1、0.2 kg。瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)購(gòu)自江蘇省溧陽(yáng)市前馬塘陳強(qiáng)特種水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，規(guī)格達(dá) 0.45 kg，親魚(yú)體表無(wú)傷無(wú)病，發(fā)育情況良好。試驗(yàn)采用電子秤、移液槍、催產(chǎn)劑以及著卵網(wǎng)片、微孔增氧等孵化設(shè)施。

1.2催產(chǎn)

于人工授精前24 h對(duì)黃顙魚(yú)注射漁用催產(chǎn)劑，包括促黃體素釋放激素A2（LHRH-A2）、人絨毛膜促性腺激素（HCG）、馬來(lái)酸地歐酮（DOM）3種藥物，以促使其卵子成熟。藥物濃度分別為L(zhǎng)HRH-A2 50 μg/kg、HCG 2 000 U/kg、DOM 5 mg/kg。采用1針及2針注射方式，比較催產(chǎn)24 h前后時(shí)間段的雌魚(yú)成熟情況。1針注射：將全部藥物配制后一次性注射完畢。2針注射：第1針注射30 μg/kg LHRH-A2，第2針注射剩余藥物劑量；背部肌肉兩側(cè)各注射1針，時(shí)間間隔為12 h。于采精前12 h對(duì)黃顙魚(yú)雄魚(yú)及瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)背部肌肉各注射1針，劑量為雌魚(yú)的50%。

1.3精子采集與低溫保存[6]

于人工授精前2 h人工采集黃顙魚(yú)及瓦氏黃顙魚(yú)的精子。剖開(kāi)雄魚(yú)腹腔，用鑷子取出精巢（2～5 mg/尾），去除血絲，在培養(yǎng)皿中剪碎，紗網(wǎng)過(guò)濾，將雄魚(yú)的精液收集到精子保存液中，每尾魚(yú)使用30 mL保存液。黃顙魚(yú)精子保存液配方為NaCl 7.68 g、KCl 0.22 g、NaHCO3 0.25 g、Na2CO3 0.21 g、葡萄糖2 g、蒸餾水1 L。整個(gè)取精過(guò)程要快速完成，并避免精子與水接觸，于低溫下避光保存待用。

1.4擠卵與濕法授精

待95%以上的雌魚(yú)卵子成熟后進(jìn)行濕法人工授精，雜交組將黃顙魚(yú)雌魚(yú)卵與瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)精子混合授精，自交組將黃顙魚(yú)雄魚(yú)、雌魚(yú)的精卵混合授精。具體操作方法為：擠壓雌魚(yú)腹部，使魚(yú)卵排入無(wú)水的不銹鋼盆中，避免魚(yú)卵與水接觸；采用移液槍吸取保存的精液，加入到0.3%的鹽水激活后，迅速倒入卵盆中，人工攪拌均勻，使卵子和精子充分結(jié)合授精，準(zhǔn)備孵化。

取1 mL保存液精子，分別與10、20、30尾雌魚(yú)卵混合授精，比較雜交組與自交組在不同雌雄配組比例（300 ∶1、600 ∶1、900 ∶1）條件下的授精效果。

1.5孵化

將進(jìn)行人工授精后的魚(yú)卵均勻布置在著卵網(wǎng)片上，在充氣及流水條件下孵化，于10 h后觀察并計(jì)數(shù)受精卵，統(tǒng)計(jì)其受精率。檢查不同布卵密度下的受精卵發(fā)霉情況，統(tǒng)計(jì)出苗率。

1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

隨機(jī)抽取雜交組與自交組布卵網(wǎng)片各9片，每個(gè)雌雄比例組3片，每片隨機(jī)抽取3個(gè)面積約為12 cm2的區(qū)域，統(tǒng)計(jì)其受精率并計(jì)算各組平均值，采用SigmaPlot軟件分析各組數(shù)據(jù)的差異性。在黃顙魚(yú)（♀）與瓦氏黃顙魚(yú)（♂）規(guī)?；s交繁苗過(guò)程中，統(tǒng)計(jì)平均受精率、總卵數(shù)、平游魚(yú)苗數(shù)，計(jì)算平均出苗率。

受精率=（受精卵總數(shù)÷總卵數(shù)）×100%；

出苗率=（平游魚(yú)苗數(shù)÷受精卵總數(shù)）×100%。

2結(jié)果與分析

2.1不同雌雄配組比例的授精效果比較

雌雄配組比例、精子保存及人工授精的方式均會(huì)直接影響人工繁殖的受精率。在雜交繁殖過(guò)程中，雌魚(yú)與雄魚(yú)親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近程度將直接影響人工繁殖受精率的高低，是決定雜交繁殖能否成功的關(guān)鍵因素[7]。由表1可知，當(dāng)黃顙魚(yú)親本雌雄配組比例為300 ∶1及600 ∶1時(shí)，雜交組與自交組之間的受精率差異均不顯著（P>0.05），表明黃顙魚(yú)（♀）與瓦氏黃顙魚(yú)（♂）親本之間配合力較好?？梢?jiàn)，在控制雌雄比例的條件下，江黃顙魚(yú)雄魚(yú)與黃顙魚(yú)雌魚(yú)可進(jìn)行正常且高效的授精過(guò)程，進(jìn)而開(kāi)展規(guī)?；s交繁苗生產(chǎn)。當(dāng)親本雌雄配組比例為900 ∶1時(shí)，雜交組的人工繁殖受精率顯著低于自交組（P<0.01），可能的原因?yàn)楸驹囼?yàn)采用的精子保存液對(duì)瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)精子的保存能力相對(duì)較弱。

應(yīng)用精子保存方法，雜交組的受精率隨著雌雄配組比例的升高而降低，當(dāng)雌雄比為900 ∶1時(shí)，雜交繁殖的受精率僅為50.2%，下降極為明顯。在本試驗(yàn)條件下，雜交繁苗生產(chǎn)的雌雄配組比例宜控制在（300～600） ∶1之間。

2.2黃顙魚(yú)（♀）與瓦氏黃顙魚(yú)（♂）規(guī)模化雜交繁殖結(jié)果

生產(chǎn)性試驗(yàn)結(jié)果表明，通過(guò)應(yīng)用精子保存方法進(jìn)行人工授精，可實(shí)現(xiàn)黃顙魚(yú)（♀）與瓦氏黃顙魚(yú)（♂）大規(guī)?；s交繁殖生產(chǎn)。統(tǒng)計(jì)生產(chǎn)試驗(yàn)中的繁苗數(shù)據(jù)，結(jié)果（表2）顯示，人工催產(chǎn)161.6 kg黃顙魚(yú)雌魚(yú)，共使用4條瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)，共繁殖出207.9萬(wàn)尾雜交水花苗，平均受精率為79.8%，平均出苗率為82.5%；單尾瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)配組黃顙魚(yú)雌魚(yú)量達(dá)40.4 kg，單組繁苗量達(dá)51.9萬(wàn)尾。在黃顙魚(yú)（♀）與瓦氏黃顙魚(yú)（♂）規(guī)模化雜交繁苗過(guò)程中，瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)規(guī)格差別較大，精巢大小不一，質(zhì)量為2.4～6.0 g，單尾瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)可利用的精子數(shù)量差異較大，因此雜交繁苗的雄魚(yú)使用數(shù)量應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。

3結(jié)論與討論

3.1瓦氏黃顙魚(yú)（♂）對(duì)黃顙魚(yú)（♀）的親本配合力

近緣雜交即種內(nèi)雜交，指同一物種的生物相互交配，包括同一品種內(nèi)不同個(gè)體之間的品種內(nèi)雜交以及同一物種內(nèi)不同品種之間的品種間雜交。由于親緣相近，近緣雜交一般不會(huì)出現(xiàn)不可交配性及雜種不育性[8]，本試驗(yàn)結(jié)果與之相符。王衛(wèi)民等研究表明，黃顙魚(yú)（♀）與瓦氏黃顙魚(yú)（♂）雜交組的受精率高于黃顙魚(yú)自交組，黃顙魚(yú)（♀）與瓦氏黃顙魚(yú)（♂）進(jìn)行雜交不存在繁殖障礙或繁殖障礙較小[5]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)雌雄配組比例為300 ∶1時(shí)，雜交組的受精率高于自交組，而當(dāng)雌雄配組比例為600 ∶1及900 ∶1時(shí)，雜交組的受精率低于自交組；當(dāng)黃顙魚(yú)親本雌雄配組比例為300 ∶1及600 ∶1時(shí)，雜交組與自交組之間的受精率差異均不顯著。與黃顙魚(yú)自交組相比，瓦氏黃顙魚(yú)（♂）對(duì)黃顙魚(yú)（♀）的親本配合力相對(duì)較好，兩者無(wú)顯著授精障礙。

3.2精子保存技術(shù)在雜交繁殖中的應(yīng)用

瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)精巢呈樹(shù)枝狀結(jié)構(gòu)，催產(chǎn)后仍很難擠出精液，須殺雄魚(yú)采精液以進(jìn)行人工授精。大規(guī)模生產(chǎn)過(guò)程中，雌魚(yú)、雄魚(yú)的發(fā)情時(shí)間很難控制同步，如果直接研碎精巢后進(jìn)行干法授精，則造成受精率較低、雄魚(yú)使用量大、勞動(dòng)量大等問(wèn)題[8]。已有研究表明，在4 ℃條件下應(yīng)用精子保存技術(shù)，120 h內(nèi)黃顙魚(yú)精子可保持80%以上活力，壽命持續(xù) 168 h[9]。開(kāi)發(fā)應(yīng)用精子保存技術(shù)有助于提高瓦氏黃顙魚(yú)精子利用率、減少雄親魚(yú)宰殺量、穩(wěn)定苗種繁育量，從而提高經(jīng)濟(jì)效益[10]。本研究應(yīng)用了精子保存技術(shù)及濕法人工授精技術(shù)，結(jié)果表明，在瓦氏黃顙魚(yú)（♂）對(duì)黃顙魚(yú)（♀）雜交繁殖時(shí)，通過(guò)應(yīng)用精子保存技術(shù)，單尾瓦氏黃顙魚(yú)與配組黃顙魚(yú)雌魚(yú)的適宜數(shù)量為300～600尾，與常規(guī)授精方法[雌雄比為（20～50） ∶1]相比，大幅提高了雜交繁殖中瓦氏黃顙魚(yú)的使用效率，極大降低了雄魚(yú)的使用數(shù)量，在規(guī)模雜交繁苗中可廣泛應(yīng)用本項(xiàng)精子保存技術(shù)。雜交繁殖的受精率隨著雌雄配組比例的升高而降低，當(dāng)雌雄比為900 ∶1時(shí)，雜交繁殖的受精率僅為50.2%。分析認(rèn)為，通過(guò)優(yōu)化保存液配方、提高保存能力，可進(jìn)一步提升雄魚(yú)的使用效率，這有待后續(xù)深入研究。

3.3提高規(guī)模化雜交繁殖效率的措施

在分析本試驗(yàn)數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，總結(jié)催產(chǎn)、授精、布卵、增氧孵化等技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，得出以下可提高黃顙魚(yú)規(guī)模化雜交繁殖效率的措施。（1）應(yīng)用精子保存技術(shù)，并進(jìn)一步優(yōu)化瓦氏黃顙魚(yú)精子保存液配方，可提升精子保存效率，提高雌雄配組比例，減少雄魚(yú)使用數(shù)量，提高受精率。（2）布卵均勻，將布卵密度控制在低于10粒/cm2， 提高孵化率及出苗率。（3）將2

針催產(chǎn)方式改為1針催產(chǎn)，減少勞動(dòng)量、提高效率，并根據(jù)條件將催產(chǎn)前、中、后期的親魚(yú)分池，按先后順序進(jìn)行擠卵授精。（4）選用優(yōu)質(zhì)親本，瓦氏黃顙魚(yú)規(guī)格達(dá)0.6 kg/尾，精巢達(dá)4 g；黃顙魚(yú)規(guī)格達(dá)0.1 kg/尾，單尾懷卵量達(dá)2 000粒。（5）及時(shí)去除死卵，采用亞甲基藍(lán)預(yù)防水霉病的發(fā)生。（6）孵化過(guò)程中氣量要充足，保證溶氧量，出苗后及時(shí)減小氣量。

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