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    高溫沖擊對家蠶抗性相關(guān)性狀的影響

    2017-02-05 15:11:16秦鳳石涼童曉琪張彥黃德輝
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年10期
    關(guān)鍵詞:家蠶高溫

    秦鳳++石涼++童曉琪++張彥++黃德輝

    doi:10.15889/j.issn.1002-1302.2016.10.083

    摘要:高溫是影響家蠶生命活動的重要因素,直接影響家蠶體內(nèi)保護(hù)酶系統(tǒng)中相關(guān)酶活及其經(jīng)濟(jì)性狀的高低。對常溫下家蠶經(jīng)濟(jì)性狀進(jìn)行分析,并研究高溫沖擊后家蠶血液中的保護(hù)酶(SOD、POD、CAT)活性。結(jié)果表明,常溫下皖廣三號的經(jīng)濟(jì)性狀高于對照品種薪杭×白云,高溫沖擊后皖廣三號的抗性相關(guān)性狀均高于對照種。皖廣三號體質(zhì)強(qiáng)健、抗逆性強(qiáng),對高溫、多濕環(huán)境具有較好的適應(yīng)性,是適于長江流域夏、秋季飼養(yǎng)的優(yōu)良家蠶品種。

    關(guān)鍵詞:高溫;家蠶;保護(hù)酶;皖廣三號;抗性育種

    中圖分類號: S882.12文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A文章編號:1002-1302(2016)10-0293-02

    收稿日期:2015-10-19

    基金項目:安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院院長青年創(chuàng)新基金(編號:14B0637);現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(編號:CARS-22);安徽省長三角科技聯(lián)合攻關(guān)項目(編號:1301c063013);安徽省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系蠶桑專項(編號:皖農(nóng)科[2011]6號);安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新團(tuán)隊項目(編號:12C0602)。

    作者簡介:秦鳳(1982—),女,安徽全椒人,碩士研究生,助理研究員,主要從事家蠶遺傳育種研究。Tel:(0551)62826576;E-mail:melissaqin@163.com。

    通信作者:黃德輝,研究員,主要從事家蠶遺傳育種研究。E-mail:Huangdehui@163.com。家蠶既是繭絲產(chǎn)業(yè)的生物基礎(chǔ),又是鱗翅目昆蟲研究的典型模式種類[1],同時也是開發(fā)新一代生物反應(yīng)器和新型昆蟲產(chǎn)業(yè)的材料[2-3]。家蠶血液中存在很多酶,其中超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、過氧化物酶(POD)組成了生物體內(nèi)的保護(hù)酶體系[4-5]。已有研究表明,這3種酶均與家蠶的免疫能力、抗逆性有關(guān)[6-7]。

    為明確家蠶機(jī)體在高溫、多濕等環(huán)境中的生理反應(yīng),調(diào)查高溫飼育環(huán)境中家蠶的生命力和產(chǎn)繭量性狀成績,并對筆者所在研究所保育家蠶品種的SOD、CAT、POD活性進(jìn)行研究。分析家蠶5齡幼蟲血淋巴中3種酶在不同溫度下的活力差異,及其與家蠶生命力和產(chǎn)繭量性狀的相關(guān)性,通過測定5齡幼蟲血淋巴中保護(hù)酶系統(tǒng)中酶的活力,從而選擇抗性家蠶品種育種材料。

    1材料與方法

    1.1家蠶幼蟲血淋巴樣品制備

    供試家蠶品種為皖廣三號,對照品種為薪杭×白云,二化性,正常飼養(yǎng)至5齡起蠶。正常食桑1 d后,將上述品種各取100頭,在溫度為32 ℃及35 ℃、RH 95%的環(huán)境下飼養(yǎng)24、48、72 h,剪掉腹足,每個樣品收集5頭幼蟲的血淋巴,每個品種取3個重復(fù)獨立樣品,收集幼蟲血淋巴。從高溫處理開始,每隔24 h記錄家蠶的死亡頭數(shù)。

    1.2家蠶血液抗氧化酶活性測定

    1.2.1酶液制備將家蠶血液加入預(yù)冷的0.1 mol/L磷酸緩沖液(pH值為7.0),在冰浴中勻漿,于4 ℃下10 000 g離心10 min,取上清液供酶活性測定用。

    1.2.2酶活性測定酶活性測定均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的測定試劑盒。

    SOD活性(U/mL)=[(D1 550 nm-D2 550 nm)/D1 550 nm]/50%×反應(yīng)體系的稀釋倍數(shù)×樣本測試前的稀釋倍數(shù)。式中,D1 550 nm為對照管的吸光值,D2 550 nm為測定管的吸光值。

    CAT活力(U/mL)=(D1 405 nm-D2 405 nm)×271/(60×取樣量)×樣本測試前的稀釋倍數(shù)。式中,D1 405 nm為對照管的吸光值,D2 405 nm為測定管的吸光值,271為斜率的倒數(shù)。

    POD活力(U/mL)=(D2 420 nm-D1 420 nm)/(12×比色直徑)×反應(yīng)液總體積/樣本量(mL)/反應(yīng)時間×樣本測試前的稀釋倍數(shù)×1 000。式中,D1 550 nm為對照管的吸光值,D2 550 nm為測定管的吸光值,比色直徑為1.0 cm,反應(yīng)時間為30 min。

    1.3家蠶幼蟲生命力與繭層率調(diào)查

    該項調(diào)查與血淋巴總SOD活力檢測同時進(jìn)行。上述各供試家蠶品種自4齡起蠶后進(jìn)行分區(qū),每區(qū)400頭,在正常條件下飼養(yǎng)至上蔟結(jié)繭,并對每區(qū)的幼蟲死亡率(幼蟲期死亡頭數(shù)/飼養(yǎng)總數(shù)×100%)、蟲蛹率(活蛹數(shù)/飼養(yǎng)總數(shù)×100%)、繭層率(繭層量/全繭量×100%,分別為25頭雄蠶和25頭雌蠶的均值)進(jìn)行統(tǒng)計調(diào)查。

    2結(jié)果與分析

    2.1高溫沖擊對家蠶血液中SOD活性的影響

    不同高溫脅迫下,試驗品種皖廣三號32、35 ℃(簡稱為WG32、WG35)及對照品種薪杭×白云32、35 ℃(簡稱為XH32、XH35)的變化幅度情況見表1。結(jié)果表明,在相同溫度(32 ℃或35 ℃)脅迫下,試驗品種和對照品種體內(nèi)SOD的濃度基本相同,SOD活性隨高溫脅迫時間的延長表現(xiàn)為先降低、后升高。

    2.2高溫沖擊對家蠶血液中CAT活性的影響

    由表2可知,隨著高溫脅迫時間的延長,對高溫抵抗力較弱的品種其CAT變化幅度較小,對高溫抵抗力較強(qiáng)的品種其CAT變化幅度較大。32 ℃時,WG的CAT活性變化幅度大于2.3高溫沖擊對家蠶血液中POD活性的影響

    由表3可知,32 ℃時,試驗品種在3個時間段的POD活性均高于對照品種;35 ℃時,隨著高溫脅迫時間的延長,試驗品種的POD活性先明顯增加、后維持不變,而對照品種的POD活性先增加、后明顯低于試驗品種。72 h后,32、35 ℃下WG的POD活性均高于XH。

    2.4高溫沖擊對家蠶生命率的影響

    高溫沖擊對家蠶生命率的影響見表4。高溫脅迫24 h后,32、35 ℃下皖廣三號和薪杭×白云品種均無死蠶。高溫脅迫48 h后,32 ℃下皖廣三號和薪杭×白云均無死蠶,35 ℃下皖廣三號、薪杭×白云的死蠶數(shù)分別為1、3條。高溫脅迫72 h后,32 ℃下皖廣三號、薪杭×白云的死蠶數(shù)分別為2、4條,35 ℃下皖廣三號、薪杭×白云的死蠶數(shù)分別為3、7條。結(jié)果表明,皖廣三號的死籠率低于薪杭×白云。

    3結(jié)論與討論

    高溫沖擊對家蠶的生長發(fā)育有很大影響,可導(dǎo)致家蠶抗病能力和抗逆性下降,并直接造成經(jīng)濟(jì)損失。研究家蠶的抗高溫機(jī)理,培育出強(qiáng)健好養(yǎng)的抗性品種是蠶桑產(chǎn)業(yè)的迫切需求。皖廣三號是2014年12月通過安徽省家蠶品種審定的新品種。本研究結(jié)果表明,皖廣三號體內(nèi)保護(hù)酶系統(tǒng)的酶活性均高于對照品種薪杭×白云,且其飼養(yǎng)成績、經(jīng)濟(jì)性狀均優(yōu)于對照品種。皖廣三號體質(zhì)強(qiáng)健,抗逆性強(qiáng),對高溫及多濕環(huán)境、粗放型飼養(yǎng)具有較好的適應(yīng)性,是適于長江流域夏、秋季飼養(yǎng)的優(yōu)良品種。

    參考文獻(xiàn):

    [1]莊蘭芳. 家蠶轉(zhuǎn)基因載體元件的結(jié)構(gòu)優(yōu)化及在基因功能分析中

    的應(yīng)用研究[J]. 杭州:浙江大學(xué),2011.

    [2]吳小鋒,徐俊良,崔為正. 家蠶血液過氧化氫酶活力及其與蠶體抗逆性的關(guān)系[J]. 昆蟲學(xué)報,1998,41(2):124-129.

    [3]陳萍,朱勇,魯成. 家蠶血液過氧化氫酶遺傳性及其與經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)性研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,1999,21(6):263-265.

    [4]韓益飛,徐世清,張愛萍,等. 高溫對家蠶血液和腸液幾種酶活性的影響[C]. 中國蠶學(xué)會第七次全國代表大會論文集,2003:117-119.

    [5]柴連琴,宋敏,張麗. 高溫誘導(dǎo)對家蠶血淋巴的影響[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,35(19):9000-9001,9008.

    [6]鄭茜,李慶榮,肖陽,等. 家蠶耐熱機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 廣東蠶業(yè),2012,46(1):40-43.

    [7]袁燕萍,趙林川,魏廣衛(wèi),等. 家蠶品種7532和大造在高溫沖擊下中腸抗氧化酶活性的變化[J]. 蠶業(yè)科學(xué),2010,36(4):692-696.

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