小葉矮生型廣玉蘭嫩莖段離體培養(yǎng)方法

王水燕 陸錦明 朱天華 徐勁松 朱逸敏 （上海市閔行區(qū)苗圃 201109）

湯桂鈞 （上海市閔行區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心 201101） 殷麗青 （上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院 201403）

小葉矮生型廣玉蘭嫩莖段離體培養(yǎng)方法

王水燕 陸錦明 朱天華 徐勁松 朱逸敏 （上海市閔行區(qū)苗圃 201109）

湯桂鈞 （上海市閔行區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心 201101） 殷麗青 （上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院 201403）

小葉矮生型廣玉蘭是近年來上海市從國外引進(jìn)的一種集觀賞、綠化、環(huán)保與藥用為一體的廣玉蘭新品種。為解決該品種常規(guī)繁殖難且慢的問題，研究探索了用組織培養(yǎng)中的“嫩莖段離體培養(yǎng)方法”來培育試管苗，且著重介紹了廣玉蘭嫩莖段誘導(dǎo)發(fā)生、繼代增殖、生根培養(yǎng)及試管苗煉苗馴化的全過程。

小葉矮生型廣玉蘭；嫩莖段；誘導(dǎo)發(fā)生；繼代增殖；生根；煉苗馴化

廣玉蘭是一種集觀賞、綠化、環(huán)保和藥用為一體的多用途植物品種，屬我國南方地區(qū)（包括長江流域）廣泛種植的主要喬木類優(yōu)良品種。而小葉矮生型廣玉蘭是近年來上海市從國外引進(jìn)的新品種，屬廣玉蘭中的變種與名貴品種，特別適合作盆栽或在住宅小區(qū)、綠地、單位、公園等栽植。該品種葉片小、樹體矮生緊湊，樹姿優(yōu)美，具有與常規(guī)廣玉蘭相同的生物學(xué)特性與適應(yīng)性，是難得的寬葉型、常綠型小型喬木名貴品種。該品種引入上海已有3年多，表現(xiàn)優(yōu)異，但其靠扦插繁殖速度慢且生根存活率低，一般只有50%左右，制約了其在盆栽觀賞及綠化中的應(yīng)用。近年來，筆者嘗試以嫩莖段為外植體，應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖生產(chǎn)小葉矮生型廣玉蘭種苗，并取得成功?，F(xiàn)著重介紹了小葉矮生型廣玉蘭嫩莖段誘導(dǎo)發(fā)生、繼代增殖、生根培養(yǎng)及試管苗煉苗馴化的全過程。

1 誘導(dǎo)發(fā)生培養(yǎng)

1.1 外植體材料選擇

外植體誘導(dǎo)發(fā)生培養(yǎng)采用“嫩莖段離體培養(yǎng)法”，由于木本植物枝條每張葉片的葉腋中都有腋芽，節(jié)間有豐富的分生組織，應(yīng)用此法可通過刺激腋芽萌發(fā)新芽從而再生植株，獲得無菌系，進(jìn)而獲得試管苗。外植體材料采用二、三年生幼樹的中上部健壯枝條上當(dāng)年新抽生的半木質(zhì)化嫩枝，其采集標(biāo)準(zhǔn)為枝條柔軟尚有彈性、葉片展開后展現(xiàn)淡綠色。將半木質(zhì)化嫩枝自基部剪下，剪去葉片，剪成長10 cm左右的莖段，用洗潔精清洗2次后用紗布包扎，并在自來水龍頭下沖洗3 h后瀝干待用。

1.2 嫩莖段消毒殺菌

消毒在接種室超凈工作臺上進(jìn)行，先用75%酒精消毒1 min，再用新潔爾敏50倍液消毒15 min，最后用0.1%氯化汞溶液加5～6滴吐溫80消毒10 min（防褐化及輔助殺菌），最后用無菌水沖洗3次后瀝干待用。

1.3 接種及無菌系誘導(dǎo)發(fā)生培養(yǎng)

將消毒后的嫩枝切成長1 cm左右的莖段（剔除嫩枝頂端幼嫩部分及基部老熟部分），每段帶1～2個(gè)莖節(jié)，接種至誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每瓶接種1個(gè)。誘導(dǎo)發(fā)生培養(yǎng)基為1/2MS+ZT 3 mg+NAA 0.2 mg/L。培養(yǎng)基中加入0.7%PVP（聚乙烯聚吡氯烷酮）進(jìn)行脫醛基處理，以防材料在初培養(yǎng)時(shí)褐化死亡。培養(yǎng)室溫度為22～24 ℃，光照強(qiáng)度為3 000 Lx左右（但初始培養(yǎng)前1周不加光為暗培養(yǎng)）,光照時(shí)間為12 h/d。培養(yǎng)15 d左右后，嫩莖段腋芽開始萌發(fā)，平均發(fā)生率最高達(dá)92%。注意，外植體成熟度的不同對萌芽有直接影響，在相同的消毒方法、培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境下，太過幼嫩柔軟的枝條和基本呈木質(zhì)化的成熟枝條誘導(dǎo)發(fā)生率均較低，一般在30%以下甚至不萌芽，大多褐化死亡。

2 繼代增殖培養(yǎng)

成功誘導(dǎo)發(fā)生后，進(jìn)入繼代增殖培養(yǎng)階段，以不斷擴(kuò)大繁殖系數(shù)。繼代增殖培養(yǎng)基配方為1/2 MS+BA 1 mg+NAA 0.1 mg/L（配方每1 L中加蔗糖30g、瓊脂粉6g，pH5.8）。培養(yǎng)室溫度為23～24 ℃（24 h恒溫），光照強(qiáng)度為3 000 Lx，光照時(shí)間為12 h/d。經(jīng)14 d培養(yǎng)后，葉色深綠，葉片無黃化、無“玻璃苗”現(xiàn)象，平均增殖率在3～3.5。值得注意的是，在繼代增殖培養(yǎng)中，培養(yǎng)室的溫度控制是一個(gè)重要因素，適宜溫度在23 ℃左右，溫度太低，瓶苗生長緩慢，增殖率下降；溫度過高，會造成葉片黃化，生長勢迅速衰退。

3 生根培養(yǎng)

在繼代增殖培養(yǎng)至一定數(shù)量后，切取生長健壯的枝條轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)(須切成單株)，長2 cm左右，筆直淺插入培養(yǎng)基上，深0.5 cm左右。生根培養(yǎng)基配方為1/2 MS+IBA 0.5 mg/L（配方每1 L中加蔗糖20g、瓊脂粉6g，pH5.8）。培養(yǎng)室光照強(qiáng)度為3 000 Lx，溫度為22℃(24 h恒溫)，光照時(shí)間為12 h/d。經(jīng)過7 d左右培養(yǎng)，枝條基部開始膨大，愈傷組織長出，10 d后長出根原基，生根20 d左右幼根完全長成，一般有3～5條，呈雞爪狀，長1 cm左右。

將瓶苗移出培養(yǎng)室至室內(nèi)常溫下煉苗24 h，以適應(yīng)室外氣候環(huán)境，再用鑷子輕取出幼苗，置清水中漂凈根系所沾瓊脂，以防移入苗床煉苗培養(yǎng)時(shí)滋生病菌爛根死苗。至此，試管苗成功育成。

4 試管苗煉苗馴化

4.1 煉苗基質(zhì)選擇與試管苗移栽

生根后，試管苗移入塑料溫室大棚進(jìn)行煉苗馴化。育苗基質(zhì)采用泥炭+椰糠+珍珠巖（比例為1∶1∶1），平鋪于苗床上，厚度8～10 cm。將試管苗淺栽入基質(zhì)中，栽后澆足水，并用塑料薄膜小環(huán)棚覆蓋，以防失水萎焉，如遇晴天，還需覆蓋75%遮光率的黑色遮陽網(wǎng)。掌握好煉苗季節(jié)煉苗是成活率高低的關(guān)鍵因素，在2～5月及9～12月煉苗，成活率均高達(dá)95%以上，而在夏秋高溫季節(jié)煉苗成活率極低，故煉苗時(shí)需避開6～8月的盛夏高溫季節(jié)。煉苗45～60 d時(shí)，將幼苗移栽至穴盤（72孔）或營養(yǎng)缽中，以培育成穴盤苗或營養(yǎng)袋苗，其基質(zhì)為泥炭+珍珠巖（比例為3∶1），再經(jīng)2個(gè)月左右的養(yǎng)護(hù)就可移栽至大田或上盆，成活率可達(dá)100%。

4.2 栽后管理措施

栽后7 d內(nèi)，每天葉面噴水3～5次，7 d后揭開塑料薄膜煉苗，每天葉面噴水2～3次，切忌向基質(zhì)內(nèi)澆水，以防水分過多而爛苗。30 d后，用0.1%硝酸銨+0.1%磷酸二氫鉀+0.1%硫酸鎂的混合液根部追肥或葉面噴灑，每月噴灑1～2次，以提高試管苗成活率，促其健壯生長。

2016-11-08